酸性染料比色法
酸性染料比色法原理
酸性染料比色法原理
酸性染料比色法是一种常用的化学分析方法，用于测定物质溶液中的浓度。
其原理基于酸性染料在酸性条件下与分析溶液中的特定成分发生可逆反应，形成一种带有颜色的配合物。
实验中通常选择合适的酸性染料，例如甲基橙、苏丹红等，这些染料在酸性条件下与所分析物质发生化学反应，生成具有颜色的配合物。
反应的程度与所分析物质的浓度成正比，通过测定配合物的吸光度，可以推算出样品中目标物质的浓度。
具体实验步骤如下：首先，将待测溶液与适量的酸性染料混合，并加入适量的酸性试剂，制备酸性条件；然后，以纯溶剂或标准物质制备一系列不同浓度的标准溶液；接下来，将样品和各个标准溶液分别与酸性染料混合，生成配合物；最后，使用分光光度计测量各个配合物的吸光度，并绘制标准曲线。
通过比较待测溶液与标准曲线上的吸光度数值，可以确定待测溶液中目标物质的浓度。
酸性染料比色法可以应用于各种化学分析，如测定水中的硬度、分析食品中的某些成分、检测环境水样中的污染物等。
总之，酸性染料比色法利用酸性染料与分析溶液中目标物质发生可逆反应，生成具有颜色的配合物，并通过测量配合物的吸光度来确定目标物质的浓度。
这种分析方法简单、灵敏且具有广泛的应用范围。
酸性染料比色法的实验条件
酸性染料比色法的实验条件
1.蒸馏水：用于稀释染料溶液。
2.酸性染料：用于比色法实验，常用的有罗丹明B，罗丹明6G，汞酚红等。
3.碱性溶液：用于稀释酸性染料溶液。
4.比色杯：用于容纳酸性染料溶液，以及比色测定。
5.精密称量瓶：用于称取酸性染料溶液。
6.精密称量秤：用于称取精确量的酸性染料溶液。
7.精密量杯：用于称取精确量的酸性染料溶液。
8.精密分析天平：用于称取精确量的酸性染料溶液。
9.精密分析瓶：用于称取精确量的酸性染料溶液。
10.精密滴定管：用于精确滴定酸性染料溶液。
酸性染料比色法原理
酸性染料比色法原理
酸性染料比色法是一种常用的分析化学方法，它主要用于测定物质中的酸性染
料成分。
该方法基于酸性染料在特定条件下与其他物质发生显色反应的原理，通过比色测定来确定物质中酸性染料的含量。
下面将详细介绍酸性染料比色法的原理。
首先，酸性染料比色法的原理基于酸性染料分子结构中含有苯环和杂环的特性。
在酸性条件下，酸性染料分子中的苯环和杂环结构会与酸性物质发生酸碱中和反应，形成显色化合物。
这些显色化合物具有特定的吸收波长和光谱特征，可以通过比色测定来确定酸性染料的含量。
其次，酸性染料比色法的原理还涉及到酸性染料与其他物质之间的化学反应。
在特定的酸性条件下，酸性染料分子中的官能团会与其他物质发生化学反应，形成显色产物。
这些显色产物可以通过比色测定来确定酸性染料的含量。
另外，酸性染料比色法的原理还包括了光谱分析的原理。
酸性染料显色产物具
有特定的吸收波长和光谱特征，可以通过光谱仪器进行测定。
利用光谱分析可以准确地测定酸性染料的含量，提高了测定的准确性和精密度。
总的来说，酸性染料比色法的原理是基于酸性染料分子结构和化学反应特性，
通过比色测定和光谱分析来确定酸性染料的含量。
这种方法简单、快速、准确，广泛应用于纺织品、食品、化妆品等领域的酸性染料含量测定。
通过了解酸性染料比色法的原理，可以更好地理解和应用这一分析方法，为相关领域的研究和生产提供技术支持。
酸性染料比色法原理及影响因素
酸性染料比色法原理及影响因素
酸性染料比色法是一种经常用于测定大量生物分子含量的分析方法。
该法使用含有具有酸性染料的标记试剂，能够有效提取和定量检
测生物分子，如蛋白质和核酸等，广泛应用于生物分子检测。
酸性染料比色法的原理主要是根据标记试剂中染料的色度变化，
来直接检测分子的浓度。
首先，选定要检测的生物分子，然后添加染
料标记试剂，当试剂和检测分子结合时，染料会变色，染色的强度和
活性分子的浓度成正比。
因此，根据标记染料的色度变化判断出检测
物质的含量，实现定量检测。
对于酸性染料比色法，影响检测结果的因素很多，其中最主要的
有染料的稳定性、灵敏度和定量范围等。
如果染料的稳定性不好，则
检测结果将受到影响；如果灵敏度较低，就会影响浓度检测的精确性；而定量范围合适则决定了该法能够应用在检测多大浓度范围内的分子。
另外，为了保证测得准确的数据，还需要保证实验条件的恒定性，如
温度和湿度等。
酸性染料比色法是一种灵敏、可靠、有效的方法，能够快速准确
地定量检测生物分子含量，广泛应用于分子生物学的研究和实际应用。
但是，为了获得准确的定量检测结果，必须考虑对实验条件的恒定性
和对染料的稳定性、灵敏度和定量范围的要求。
简述酸性染料比色法的基本原理
简述酸性染料比色法的基本原理酸性染料比色法是一种分析技术，其基本原理是：当溶质中含有不同浓度的染料时，浓度越高的染料吸收的光谱线越强，可给出溶质中染料浓度的分析结果。
通过改变溶液的酸度，可以改变溶液中染料吸收光谱线的强弱，从而确定染料的浓度。
酸性染料比色法的基本原理是：溶液的酸度影响着染料的颜色，在不同的酸度环境下，染料吸收光谱线的强弱发生变化，由此可以比较染料在溶液中的浓度大小。
通过测量染料的颜色，可以判断出该溶质含有的染料的浓度。
酸性染料比色法的核心是基因工程技术，在分析和检测中，酸性染料比色法仅使用一种染料，即具有良好表观特性的酸性染料。
一般情况下，酸性染料比色法使用的染料是一种具有特殊量子效应的染料，如荧光素衍生物等。
在酸性染料比色法的检测过程中，采用的染料是一种有定容性的染料，也就是说，它的比色效果取决于溶液中染料的浓度。
此外，这种染料也有一定的吸光性，可以吸收定量的光线，进而发生光谱变化，特别是在紫外线或可见光线范围内，可以得到一种适宜酸性环境下的特定比色效果，从而达到识别染料浓度的目的。
此外，酸性染料比色法还有另一个特点，就是染料的活性取决于酸度的变化，在不同的酸度环境下，染料的吸收光谱线的强弱也会发生变化，从而影响酸性染料比色法的结果。
在实际操作中，酸性染料比色法使用的染料的颜色和吸收光谱线，将一定浓度的染料配液加入反应容器中，然后加入不同浓度的酸性溶液，并在适当的紫外线或可见光范围内测量染料吸收光谱线的强弱，从而识别染料浓度。
总之，酸性染料比色法是一种非常实用的分析技术，它可以帮助科学家快速准确地测定染料浓度。
它基于溶液中染料吸收光谱线变化的原理，可以根据染料的活性变化，通过改变溶液的酸度来比较染料的浓度，从而达到分析的目的。
生物碱类药物分析 酸性染料比色法
02
影响因素
1、最佳PH值的选择
能使有机碱全部以盐的形式存在，酸性 染料能够解离成离子，以便它们定量地结合成 离子对而转溶于有机相，且又能将剩余的染料 完全保留在水相。
02
影响因素
2、酸性染料的选择
溴麝香草酚蓝
甲基橙
溴甲酚绿
增加染料的浓度可提高测定灵敏度
02
影响因素
3 有机溶剂的选择
常用的有机溶剂有三 氯甲烷、二氯甲烷、 二氯乙烷、苯、甲苯、 四氯化碳等。
4 水分的影响
测定时用脱水剂或干燥 滤纸过滤
5 有色杂质的影响
测定时缓冲液与酸性染料 混合液先用有机溶剂提取
03
小结
01
酸性染料比色法的原理
02
常用的酸性染料
03
影响因素
04
思考题
常用的酸性染料有哪些？
酸性染料比色法
目录
01 02 03
基本原理 常用酸性染料
影响因素
01
基本原理
BH+ + In
[BH+·In-]
水相 有机相
[BH性染料
磺酞类指示剂
溴麝香草酚蓝(BTB)
pH 6.0-7.6（黄-蓝）
溴甲酚绿(BCG)
pH 3.6-5.2（黄-蓝）
溴酚蓝(BPB)
pH 3.8-4.6（黄-紫）
酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱的含量 (1)
酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱的含量一、目的要求掌握酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱含量的原理和方法。
二、基本原理在适当的介质中，生物碱（B ）可与氢离子（H +）结合成阳离子（BH +），一些酸性染料，如溴百里酚蓝、溴酚蓝、溴甲酚紫或溴甲酚绿等，在此条件下可解离成阴离子（In -）。
上述阳离子与阴离子定量地结合成有色配位物（BH +In -）离子对，可以定量地溶于某些有机溶剂，在一定波长处测定该溶液有色离子对的吸光度，即可计算出生物碱含量。
++−→←+BH H B-++−→←In H HIn有机相水相)()(__In BH In BH In BH ⋅−→←⋅−→←+++-+三、实验方法对照品溶液的配制 取延胡索乙素对照品约2mg ，精密称定，置25ml 量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的配制 取延胡索粉末约0.5g ，精密称定，置50ml 具塞锥形瓶中，加少量氨水湿润（约20滴），密塞放置15分钟，精密加乙醚-三氯甲烷-甲醇（25：8：2.5）混合溶剂25ml ，轻轻摇匀，称重，冷浸一周，称重，补足重量，滤过，精密吸取续滤液10ml ，置25ml 具塞锥形瓶中，水浴加热挥干溶剂，精密加入三氯甲烷10ml ，使完全溶解，摇匀，即得。
测定法 精密量取对照品溶液和供试品溶液1ml ，分别置分液漏斗中，各精密加三氯甲烷9ml ，再分别加溴甲酚绿溶液5ml ，振摇3分钟后，静置使分层；同法制备空白溶液。
分取上述三种溶液的三氯甲烷液，在410nm 的波长处测定吸光度，按下式计算，即得。
%100%)1(25(%)⨯-⨯⨯=水分含量样对对样W C A A式中 A 样与A 对分别为供试品溶液与对照品溶液吸光度；C 对为对照品溶液中延胡索浓度，g/ml ；W 样为取样量，g 。
四、思考题1．酸性染料比色法的影响因素有哪些？2．本法中使用的溶剂均有挥发性，操作中应注意哪些事项？。
酸性染料比色法原理
盐酸硫利达嗪 显蓝色
—
—
2. 与钯离子络合显色反应
利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络 合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。
N 2S
N
O
N
O [CH2]8 CH3
CF3
+ PdCl2
N S
N
O
N
O [CH2]8 CH3
CF3
2+
Pd
CF3
S N
+ 2Cl-
N
O
N
O [CH2]8 CH3
4. 碱性
二、鉴别试验
（一）UV和IR
UV：奋乃静 ChP（2005） [鉴别]取本品，加无水乙醇制成每1ml 中含 7g 的溶液， 照分光光度法（附录ⅣA）测定，在 258nm 的波长处 有最大吸收，吸收度约为0.65。
IR：本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致
（二）显色反应
1. 与氧化剂的显色反应
本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下， 显
不同颜色的荧光。例如：
地西泮
黄绿色
黄色
氯氮卓
黄色
紫色
艾司唑仑 + H2SO4 亮绿色 + 稀硫酸
硝西泮
淡蓝色
蓝绿色
奥沙西泮
淡黄绿色
天蓝色
4. 含卤素 C X 氧 瓶 燃烧法 破 坏 X
（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱 （三）色谱法
共性: (1)杂环类药物是合成药物中所占比例最多 的一大类药物. (2)多为五元环或六元环,单环或并合环. (3)杂环结构较稳定,不易开环,其性质受杂 原子种类、数目、位置影响. (4)杂环上取代基性质较活泼,常用于分析. (5)含氮杂环,其碱性的强弱往往用于分析.
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第一节 生物碱类成分分析
三、定性鉴别
讨论：如何改进？
2、薄层色谱法 ①吸附剂：硅胶、氧化铝；
②展开剂：多以氯仿、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展
开剂的极性；
③由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成
盐，使Rf值很小或拖尾、形成复斑等。 ④显色剂：常用改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂之后
四、含量测定
（一）总生物碱的含量测定 1、化学分析法 ①主要使用酸碱滴定法。 ②强碱滴定生物碱盐时，在70%~90%的乙醇介质中终点比在水中
明显，因此常将生物碱盐溶于90%乙醇，再用标准碱乙醇液滴 定。 ③若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行 ④要求：总生物碱的纯度较高，用于药味少成分简单制剂的测定
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
四、含量测定
（一）总生物碱的含量测定 2、分光光度法 （1）直接测定法 ①不经过化学反应、利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色
测定的方法。 ②一般用于药味较少、干扰小的中药制剂中总生物碱的含量测定。
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
四、含量测定
（一）总生物碱的含量测定 （2）酸性染料比色法（例题P101） 原理： BH++ In- → BH+·In-（水相）→ BH+·In-（有机相） 关键：
❖ 酸性染料的选择：甲基橙、溴麝香草酚兰（BTB）和溴甲酚绿等； ❖ pH值的选择：与生物碱和酸性染料的性质有关。 ❖ 有机溶剂的选择：一般用氯仿、二氯甲烷 ❖ 水分的干扰及消除
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
四、含量测定
（一）总生物碱的含量测定 （3）雷氏盐比色法
原理： BH++ [Cr(NH3)2(SCN)4]-→ BH [Cr(NH3)2(SCN)4]
2马、钱含子生物新 马碱乌 钱成头 子分碱 碱的、番常木用鳖中碱药：黄 连
黄碱、甲基麻黄碱 小檗碱、巴马丁、药根碱、
（士的宁）、伪马钱子
黄连碱
碱、伪番木鳖碱
黄柏
小檗碱、药根碱、木兰花碱
延胡索 延胡索乙素、延胡索甲 防 己
粉防己碱、防己诺林碱、轮
素、原阿片碱、黄连碱
环藤酚碱、木兰碱
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
测定方法：
（复盐沉淀）
复盐沉淀→溶于丙酮（或甲醇）→直接比色测定
样品＋定量过量的雷氏盐→过滤→滤液→比色测定λmax=520nm （4）异羟肟酸铁比色法
用于含有酯键结构的生物碱的测定
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
四、含量测定
（二）单体生物碱成分含量测定 1、TLCS ①生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定； ②选用的吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似； ③使用改良碘化铋钾等作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤
二、理化性质
1、溶解性
大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮
及苯等有机溶剂；
与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性
有差异；
季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水
液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于
有机溶剂；
含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛
性碱液。
第五章 中药制剂中各类化学成分分析
药物分析 学科
【目的要求】
➢掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成 分的定性、定量原理与方法。 ➢熟悉中药制剂中挥发性成分、木质素类成分的定性、 定量原理与方法。 ➢了解其他成分（有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、 单萜及二萜类、多糖类）的分析方法。
药物分析学科
再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更加清晰。如有荧光，不用显色
⑤ 亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
三、定性鉴别
3、纸色谱法 ➢ 可用于生物碱盐或游离碱的鉴别 4、HPLC： ➢ 保留时间定性 5、GC： ➢ 可用于小分子生物碱的鉴别
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
其在碱性环境下展开的）才可喷洒，否则背景深、反差小，影响 测定。
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
四、含量测定
（二）单体生物碱成分含量测定
2、HPLC(例题P105) ①以反相高效液相色谱应用较多；
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
二、理化性质
2、沉淀反应
➢ 大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于
水的复盐或分子复合物。
➢ 生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸
马钱子散中生物碱成分的鉴别 取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时， 滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋 钾试液1~2滴，即生成黄棕色沉淀。
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
二、理化性质
3、显色反应 ➢ 生物碱在一定pH条件下可与一些酸性染料（多为磺酸肽
类）生成有色络合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出 ➢ 结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与异羟肟酸铁试剂反
应产生紫红色； 这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析
药物分析学科
第节 生物碱类成分分析
二、理化性质
4、紫外光谱特性 ➢ 结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外吸收 ➢ 结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，
其吸收峰位置与测定时溶剂的pH有关。
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
三、定性鉴别
1、一般理化鉴别 ➢ 沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在
酸性水溶液中进行 ➢ 制备样品供试液时必须净化处理，防止假阳性结果
第五章 中药制剂中各类化学成分分析
学习方法 结构 性质
分析方法
✓ 结构：母核、官能团、分子量等 ✓ 物理化学性质：溶解性、酸碱性、挥发性、氧化还原性、
旋光性、光谱特性等 ✓ 分析方法： 总类成分：化学分析法、分光光度法 单一成分：各种色谱法（GC、HPLC、HPCE、TLCS、SFC等）
药物分析学科
第一节 生物碱类成分分析
一、概述
1中、药概名念称：生物主要碱生是物生碱物成分界除生中物药体名必称需的含氮主化要生合物物碱（成分如
氨山基豆根酸、蛋苦白参质碱、和氧B化族苦维参生碱、素等苦）参之外的苦所参有碱含、氮槐定有碱机、化槐合果碱、
槐果碱、金雀花碱
氧化苦参碱
物制，川乌因其结乌构头中碱、氮次原乌子头上碱、的未共麻享黄电子对麻而黄大碱多、伪具麻有黄碱碱性、去。甲麻