6、大肠杆菌菌浓的测定及发酵罐实验的了解
总大肠菌群多管发酵法测定步骤
总大肠菌群多管发酵法测定步骤# 总大肠菌群多管发酵法测定步骤的理论研究大家好，我是这个领域的一名专家。
今天我要和大家分享一下关于总大肠菌群多管发酵法测定步骤的一些理论问题。
我们要知道什么是总大肠菌群。
简单来说，总大肠菌群就是肠道里的一种微生物群落，它们的数量可以反映出一个人是否健康。
而测定总大肠菌群的方法有很多种，其中最常用也最准确的一种是多管发酵法。
那么，多管发酵法是怎么测定总大肠菌群的呢？简单来说，就是将待测样品中的总大肠菌群接种到不同的培养基上进行培养，然后通过观察不同培养基上的菌落生长情况来判断总大肠菌群的数量。
在实际操作中，我们需要准备几个不同的培养基，每个培养基上都涂上一层薄薄的液体。
然后将待测样品中的总大肠菌群接种到这些培养基上，再将这些培养基放入恒温箱中进行培养。
在这个过程中，我们需要注意一些细节。
比如，培养的时间需要控制好，不能太长也不能太短；培养的温度也需要控制好，不能太高也不能太低；还有，培养基的选择也很重要，要选择适合总大肠菌群生长的培养基。
经过一段时间的培养后，我们就可以观察各个培养基上的菌落生长情况了。
一般来说，如果某个培养基上的菌落数量较多，就说明在这个样品中总大肠菌群的数量较多；反之，如果某个培养基上的菌落数量较少，就说明在这个样品中总大肠菌群的数量较少。
我们就可以根据各个培养基上的菌落生长情况来计算出总大肠菌群的数量了。
这就是多管发酵法测定总大肠菌群的基本步骤。
总的来说，多管发酵法是一种非常准确、可靠的测定总大肠菌群的方法。
它的操作过程虽然复杂了一些，但是只要我们掌握了正确的方法和技巧，就能够准确地测定出样品中总大肠菌群的数量。
这对于我们了解肠道微生物群落的情况、预防肠道疾病等方面都有着重要的意义。
_水中总大肠菌群的测定―多管发酵法(精选.)
水中总大肠菌群的测定—多管发酵法一．原理总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。
试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN 表示。
三．仪器(1)高压蒸气灭菌器。
(2)恒温培养箱、冰箱。
(3)生物显微镜、载玻片。
(4)酒精灯、3mm接种环。
(5)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯（200、500、2000mL）、锥形瓶（500、1000mL）、采样瓶、移液枪。
四．培养基及染色剂的制备1．乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g 氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
2．三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。
除蒸馏水外，各组份用量增加至三倍。
3．伊红美蓝培养基：①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中，先将20g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解。
再加2.0g邻酸二氢钾及10g蛋白胨，混合使之溶解，用蒸馏水补充至1000mL，调节溶液pH值为7.2～7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g乳糖，混匀后定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，于121℃高压灭菌15min，贮于冷暗处备用。
②平皿培养基的制备：将上述制备的贮备培养基融化。
根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液（0.4g伊红溶于20mL水中）和一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液（0.065g美蓝溶于13mL水中），加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用。
5.水中大肠杆菌的检测（多管发酵法）
5.水中大肠杆菌的检测（多管发酵法）第一篇：5.水中大肠杆菌的检测(多管发酵法)水中大肠杆菌群书的监测（发酵法）一、试验目的：1.了解和学习水中大肠杆菌的测定原理和测定意义。
2.学习和掌握水中大肠杆菌的监测方法。
二、试验原理：水的微生物学的检验，特别是大肠杆菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水的标准规定饮用水中大肠杆菌群书每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。
水中大肠杆菌的检验方法，常用多管发酵发和滤膜法。
多管发酵发可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅用于自来水和深井水。
操作简洁快速，但不适用于杂质较多，易于阻塞滤孔的水样。
三、试验材料：1.培养基：乳糖蛋白胨培养基，伊红美蓝培养基2.器材：灭菌三角瓶、无菌平皿、无菌吸管、无菌试管等。
四、试验内容第一天：1.水样的采集自来水洗将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，在开放水龙头取水流5ｍｈ，以灭菌山角瓶接水取样以备分析。
2.用发酵法检查大肠杆菌（1）生活饮用水的检验①初步发酵试验：在2个各装有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培养液的三角瓶中，以无菌操作各自加水样10ｍｈ。
摇匀后，37℃培养24ｈ第二天：②平板分离：经24ｈ培养后。
特产酸产气及只产酸的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板（EMD培养基上），37℃培养18～24ｈ。
大肠杆菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略带或不带有金属光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。
第三天：③复发酵试验：将革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同一类型菌群1～3个，37℃培养24ｈ，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。
第四天：④报告：根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管，查附录1或2，报告每升水样品中大肠菌群数（MPN）五、思考题记录试验结果，并对所测样品作出评价。
大肠菌群的测定(精)
大肠菌群的测定
－－注意事项
如何避免放小倒管时产生气泡（大肠菌群检测）？ 客户要求大肠菌群＜３／ml(g),请问如何检测和报 告？ 伊红美蓝是鉴别培养基，请问鉴别的原理是什么？
大肠菌群的测定
－－快速检测方法 LTSE快速检测法： 纸片快速法 TTC（氯化三苯四氮唑）显色快速法 DC（去氧胆酸钠）半固体试管快速法
大肠菌群的测定
大肠菌群的测定
－－基本概念
大肠菌群指一群37℃、24h能发酵乳糖，产酸，产气，需氧和兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，以此作为粪便污染指标来评价 食品的卫生质量。 大肠菌群包括大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴 沟肠杆菌等。大肠菌群的来源分粪便来源和非粪便来源，在44.5℃仍能生长的 大肠菌群，称为粪大肠菌群，粪大肠菌群又叫耐热大肠菌群，在人和动物粪便 中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。因此，粪大肠菌群对粪便污染的 指示作用更为直接和贴切，主要就是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属，正是 由于包括了克雷伯氏菌属，使其与粪便污染的相关性受到了影响。 大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌这三个指标在实际工作中都在应用，但用途 有所不同，一般认为大肠菌群是水源的卫生指标和食品加工卫生状况的通用指 标，粪大肠菌群主要用于贝类和贝类养殖用水的卫生指标，大肠杆菌用于指示 食品受到近期粪便污染或不卫生加工。 大肠菌群表示方法：MPN（ most probable number） /100mL 。
大肠菌群的测定
－－乳糖发酵法（国标）
检验稀释 取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同。 乳糖发酵试验 根据食品卫生要求或对检样污染程度的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳 糖胆盐发酵管。接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳 糖胆盐发酵管。置36±1℃温箱内,培养24±2小时,如所有发酵管都不产气,则可报告为大 肠菌群阴性,如有产气者,则与对照的混合菌种一起按下列程序进行。 分离培养 将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂（EMB琼脂）平板上划线分离。然后置 36±1℃温箱内，培养18～24小时后取出, 观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实试验。 证实试验 在上述平板上,挑取可疑大肠菌落1～2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃ 温箱培养24±2小时,观察产气情况,凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可 报告为大肠菌群阳性. 报告 根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 结果
实验八 水中大肠杆菌的测定
（三）多管发酵法检测大肠菌群
1.取5支装有3倍浓乳糖蛋白胨培养基的初发酵管，每支分别 加入水样10mL。另取5支装有乳糖蛋白胨培养基的初发酵 管，每支分别加入水样1mL。再取5支装有乳糖蛋白胨培养 基的初发酵管，每支分别加入按1：10稀释的水样1mL，均 贴好标签。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
三、实验材料和用具
1、培养基 复红亚硫酸钠培养基、乳 糖蛋白胨半固体培养基、乳糖蛋白胨 培养液、3倍浓乳糖蛋白胨培养液、伊 红美兰培养基。
2、仪器及用具 微孔滤膜（0.45um）、 滤器（500mL）、抽气设备、镊子、 发酵用试管、杜氏小管、培养皿、刻 度吸管或移液管、接种环、酒精灯。
四、操作步骤
（一）水样的采集
1.自来水 将自来水龙头用火焰灼烧3min灭菌， 在拧开水龙头流水5min，以排除管道内积存的死 水，随后用已灭菌的三角瓶接取水样。
2.池水、河水、或湖水 将无菌的带玻璃塞的小口 瓶侵入距水面10~15cm深的水层中，瓶口朝上， 除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取 出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超 过24h。
（二）滤膜法检测大肠菌群
1.无菌滤膜 无菌镊子 滤器膜承受器，过滤杯——滤膜承 受器，旋紧。真空泵——抽气口
2.水100mL滤杯，启动抽真空系统，使水从下端流出。 3.有细胞的滤膜 无菌镊子 平贴于复红亚硫酸钠固体培养
基上（紧贴，无气泡），37℃培养16~18h。挑选红色或紫 红色、带有或不带有金属光泽的菌落，或淡红色、中心颜 色较深的菌落进行涂片和革兰氏染色观察。 4.经染色证实为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，接种到乳糖蛋白 胨半固体培养基上， 37℃培养6~8h后观察，产气者为阳 性（观察要及时，以免气泡消失） 5.结果计算
多管发酵法检测水中的大肠菌群的实验报告
学院：环境科学与工程学院班级：11级环境科学（2）班姓名：李宝携学号：3111007398实验3 多管发酵法检测水中的大肠菌群一、实验目的（1）了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。
（2）学习检测水中大肠菌群的方法。
二、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
当发酵产酸时，溴甲酚紫可由紫色变为黄色，乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
三、实验材料1、水样中心湖湖水2、试剂三倍浓缩乳酸蛋白胨培养液3、仪器及其他用品试管、发酵管、烧杯、量筒、移液枪、高压灭菌锅四、操作过程1、取16支发酵管，其中5支加入5mL三倍乳糖蛋白胨培养液。
取35mL三倍乳糖蛋白胨培养液于烧杯中，量取70mL水进行稀释，将三倍乳糖蛋白胨培养液稀释成一倍的乳酸蛋白胨培养液，分别取10mL一倍的乳酸蛋白胨培养液与10支试管中，最后，1支加入9ml自来水。
2、完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。
3、灭菌完毕，冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样。
取1mL的水样于装有9mL自来水的试管中，混合摇匀，并分别移1mL于另外的5支10mL的试管中。
4、将各试管充分混均，包装完成，将其置于37℃恒温箱中培养24h。
5、取出培养液，观察试管的颜色及其中的气泡数并记录数据。
6、观察完毕，清洗仪器并整理数据。
五、实验结果实验现象：有些试管的颜色变成黄色，并且有些试管中的发酵管的底部存在气泡，说明存在产酸产气的大肠杆菌。
实验一 食品中大肠菌群的测定
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载实验一食品中大肠菌群的测定地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容大肠菌群(M.R.N.)的测定一、实验目的：（1）了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义（2）学习并掌握大肠菌群的检验原理和方法，以判别食品的卫生质量二、实验原理：大肠菌群系指一群能在37℃经24h能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。
它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。
食品中大肠菌群数系以每100g（或ml）检样内大肠菌群最近似数（the most probable number-简称MPN）表示。
最近似数（most probable number-简称MPN）法是一种将样品“多次（管）稀释至无菌”的计数方法。
将3个稀释梯度的检样稀释液接种于9支或15支试管培养基中，每个稀释度接种3支或5支。
经培养后，根据结果查阅MPN检索表，就可得到原样品中微生物的估计数量。
MPN测定方法尤其适用于带菌量极少、其他方法不能检测的食品。
如水、乳制品及其他食品中大肠菌群的计数。
三、材料1、样品乳、肉、禽蛋制品、饮料、糕点、发酵调味品或其他食品。
2、菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）产气肠杆菌（Enterobacteria aerogenes）3、培养基及试剂单料乳糖胆盐发酵管、双料乳糖胆盐发酵管、乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂（EMB）、革兰氏染色液、蛋白陈水、靛基质试剂、麦康凯(MA)4、其它设备和材料温箱(36土1)℃、水浴锅(44土0.5)℃、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针。
大肠菌群实验报告
一、实验目的1. 了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义。
2. 学习并掌握大肠菌群的检验原理和方法。
3. 判别食品的卫生质量。
二、实验原理大肠菌群系指一群能在37℃经24小时能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。
它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。
食品中大肠菌群数系以每100g检样内大肠菌群最近似数表示。
最近似数法是一种将样品多次稀释至无菌的计数方法。
将3个稀释梯度的检样稀释液接种于9支或15支试管培养基中，每个稀释度接种3支或5支。
经培养后，根据结果查阅MPN检索表，就可得到原样品中微生物的估计数量。
MPN测定方法尤其适用于带菌量极少、其他方法不能检测的食品，如水、乳制品及其他食品中大肠菌群的计数。
三、实验材料与仪器1. 样品：乳、肉、禽蛋制品、饮料、糕点、发酵调味品或其他食品。
2. 菌种：大肠埃希氏菌、产气肠杆菌。
3. 培养基及试剂：单料乳糖胆盐发酵管、双料乳糖胆盐发酵管、乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、革兰氏染色液、蛋白陈水、靛基质试剂、麦康凯(MA)。
4. 其他设备和材料：培养箱、移液管、锥形瓶、试管、试管架、平皿、烧杯、电子天平、纱布、脱脂棉、灭菌锅、PH计或PH试纸、电炉、石棉网、铁架台、量筒、橡皮手套、超净台。
四、实验步骤1. 样品处理：取适量样品，用无菌生理盐水进行10倍系列稀释。
2. 稀释液接种：取不同稀释度的稀释液，分别接种于乳糖胆盐发酵管中。
3. 培养：将接种后的乳糖胆盐发酵管置于37℃培养箱中培养24小时。
4. 观察结果：观察乳糖胆盐发酵管中是否出现红色沉淀，判断是否存在大肠菌群。
5. 验证：对疑似大肠菌群进行革兰氏染色和生化试验，以确定其种类。
6. 计算结果：根据MPN检索表，计算样品中大肠菌群的最近似数。
五、实验结果与分析1. 样品处理：将样品进行10倍系列稀释，得到不同稀释度的稀释液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
通用发酵罐的基本结构
在你所见到的实 验室发酵罐上是 否找到对应功能 的部件？
发酵罐实物图
控制主机 罐体 通气系统
空压机、通气管、流量计… 电机、搅拌桨、挡板… 升温、降温 pH、温度、溶氧、泡沫…
搅拌系统
控温系统
传感器
补料系统 消泡系统 取样口、接种口
发酵实验的一般操作过程
准备菌种（大肠杆菌） 准备培养基 校准电极（pH、溶氧…） 发酵罐（含培养基）灭菌 接种 发酵及取样分析（~24h） 下罐
发酵取样记录表格
标号 发酵时间(h) 取样体积(ml) 稀释倍数 OD600 菌浓 (g/l)
实验报告内容
OD600与菌体干重的关系曲线 画出实验室发酵罐的示意图（包括主机、
实 验 六
大肠杆菌菌浓的测定 及发酵罐实验的了解
目的要求
学习比浊法测量细菌数量的方法； 学习空气浴摇床的使用方法； 学习分光光度计和离心机的使用方法； 掌握菌浓和菌体干重关系曲线的测定方法； 了解通用发酵罐的基本结构。 了解发酵罐实验的一般流程及注意事项。
微生物生长曲线的测定
心效果与转速、时间的关系
【实验内容】
1. 离心管称重
将一干净15ml 离心管，用分析天平准确称重并记录。
2. 菌液离心
将老师准备好的大肠杆菌摇瓶，准确吸取菌液10ml加至已称 重的离心管内(取液前将培养液振荡，使细胞均匀分布) 。与 另一加水的相同离心管进行配平。8000rpm离心5min，弃去 上清，加去10ml离子水重悬菌体，离心。再重复上述洗涤操 作 1次。弃去水溶液，将带有菌体的离心管在 80℃ 烘干至恒 重。准确称重并记录。
比浊法 干重法 菌落计数法 血球计数板计数法 …
菌浓OD600与菌干重的对应关系
将大肠杆菌用LB培养基进行培养，在快速生长中期取样，分别用 去离子水（新鲜LB培养基）稀释至不同浓度，分别测定 OD600值。 同时取10mL菌液，8000rpm离心5min后，弃菌液，并用无菌水重 悬洗涤、离心2次， 80℃下烘干至恒重后，测得干重。 菌浓与OD600的对应关系如下图所示。 经数据拟合，线性良好。
仪器和其它物品： 722 型分光光度计，空气浴振荡摇床，离心机，比色皿， 试管，移液器、枪头、离心管等。 上次灭菌的肉膏蛋白胨液体培养基。 发酵罐
发酵培养基 发酵菌种 火圈…
实验内容分配
每4人一组 每组建立一个菌浓和OD600关系曲线。
分光光度计的实验
空白对照 吸光度和透光度 吸光度值的适用范围
离心管空重（g） 离心管+菌 重量（g） 编号 样品浓度（g/L） OD600
1.2
Dry cell weight (g/L)
0.9 0.6 0.3 0.0 0 1 2 3
大肠杆菌菌浓OD600与菌干重的关系曲线
OD600
实验材料
菌种： 大肠杆菌。（老师提前准备菌种和用于菌体干重测定 的菌液）
罐体、通气系统、搅拌系统、控温系统、传感 器等）
思考题
1.
2.
除了比浊法，还有其他什么常用方法可以测量 细菌数量，各有什么优缺点？ 通用发酵罐主要用于好氧微生物的大量培养， 发酵罐中那些部件与促进氧气的供给有关？
实验六 结束
请交报告！
【实验内容】
3. 菌液稀释
将老师准备好的大肠杆菌摇瓶，吸取一定体积的菌液至试管 中，在不同试管中按不同比例进行稀释。（至少5个水平）
4. 测定吸光度
用未接种的肉膏蛋白胨液体培养基作空白对照，选用600nm 波长进行光电比浊测定。最好使其光密度值在 0.1~0.7 之内 (测定OD值前，将待测定的样品液振荡，使细胞均匀分布)。 做一个以去离子水稀释的对比试验（以去离子水做空白对 照），看肉膏蛋白胨培养基对OD600吸光度的影响。