叶绿体的分离
叶绿体的分离
叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验报告一、实验目的1、通过植物细胞叶绿体的分离与纯化,了解细胞器分离与纯化的原理和方法.2、熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和间接荧光。
二、实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。
一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关.通过控制离心力和离心时间等因素，不同的细胞器可以通过阶梯离心的方式得到分离。
在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速度不同。
依次增加离心力和离心时间,就能够使非均一悬浮中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部．分批收集即可获得各种亚细胞组分。
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
叶绿体的分离应在等渗溶液(0。
35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
将匀浆液在1000r/min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。
然后,3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核)。
分离过程最好在0—5℃的条件下进行：如果在室温下,要迅速分离和观察。
荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察的一种技术。
某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时,就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光）,这种光就称为荧光．若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光),如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光,这种荧光称为次生荧光(或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
叶绿素吸收的光能主要用于光合作用.多余的能量可能以热的形式散发，也可能以激发光的形式散发。
叶绿体分离色素方法
叶绿体分离色素方法
叶绿体是植物细胞中非常重要的细胞器，其中含有大量的叶绿素色素。
为了研究叶绿体的结构和生理功能，需要将叶绿体从细胞中分离出来进行研究。
以下是分离叶绿体色素的方法：
1. 摇床分离法：先将植物细胞研磨后，借助离心机分离出细胞的液态基质，再用摇床将其中的叶绿体色素分离提取。
2. 差速离心法：类似于摇床分离法，但运用的离心机设备更高级，可以根据叶绿体在不同离心力下的沉降差异，更快速有效地分离出叶绿体。
3. 渗透法：将破碎后的细胞用高浓度糖溶液浸泡，使细胞内受到渗透压的作用，碎液中的叶绿体色素通过渗透压差异被分离出来。
4. 离心浮游法：将植物细胞碎液经过多次离心，可以使叶绿体通过不同的重力区分而浮游到离心管的不同层次，从而实现叶绿体的分离提取。
以上是分离叶绿体色素的常用方法，具体的选择应根据实验的需求和条件而定。
实验五叶绿体的分离与观察
实验五叶绿体的分离与观察引言：叶绿体是植物和一些藻类细胞中的一种重要细胞器，其内含有叶绿素，参与光合作用，并且能够进行自我复制。
叶绿体的分离与观察可以帮助我们更好地理解叶绿体的结构和功能。
本实验旨在通过破碎叶绿体细胞壁和最后沉淀纯化，获得高纯度的叶绿体样品，并观察其形态和颜色。
材料与方法：1.植物叶片（如菠菜等）2.磨砂棒3.0.5MEDTA（乙二胺四乙酸二钠，含有金属离子螯合剂，可帮助破环细胞壁）4.磷酸盐缓冲液（PH=7.2）5.叶绿体离心管6.离心机7.色谱柱8.吲哚素（荧光指示剂）9.显微镜实验步骤：1.将大约10g的菠菜叶片放入研钵中，加入足够的磷酸盐缓冲液，用磨砂棒研磨，直至叶片完全破碎。
2.将研磨的混合物过筛，将过筛的悬浊液取出置于离心管中。
3.加入适量的0.5MEDTA溶液，溶液中EDTA的浓度约为0.3M，为了破坏细胞壁脱落细胞质中的叶绿体。
4. 将离心管放入离心机中，离心10分钟，以3000 rpm离心速度。
5.将上清液倒入新的离心管中。
6. 用磷酸盐缓冲液把上出来的树珪胶稀释为1 ml，用来测定叶绿素a含量，以叶绿素a含量/体积的值判断叶绿体的提纯程度。
7. 用离心机再一下离心10分钟，以5000 rpm离心速度，取出离心管，倒出上清液。
8.取少量草绿后的混合悬浊液加入色谱柱中，过滤，用于进行吲哚素荧光指示剂的观察和检测。
结果与讨论：通过实验操作，我们成功将叶绿体从菠菜叶片中分离出来，并获得了纯化程度较高的叶绿体样品。
在观察纯化后的叶绿体样品时，我们可以看到其呈现出绿色或草绿色。
这是因为叶绿体内含有大量的叶绿素，而叶绿素能够吸收光线中的蓝光和红光，反射绿光，因此使得叶绿体呈现出绿色。
此外，利用吲哚素荧光指示剂对叶绿体样品进行观察和检测，可以进一步确认我们所提取的物质是否为叶绿体。
吲哚素是一种常用的荧光指示剂，当其与叶绿体内的一些化合物结合时，会发出绿色荧光。
因此，如果我们在观察过程中观察到绿色荧光的出现，就可以确认叶绿体的存在。
论述叶绿体分离的原理及注意事项
论述叶绿体分离的原理及注意事项好的，以下是为您生成的一篇关于“论述叶绿体分离的原理及注意事项”的文章：嘿，朋友们！今天咱们来聊聊叶绿体分离这档子事儿。
这叶绿体分离啊，就像是在一堆五彩斑斓的糖果中，精准地挑出绿色的那几颗，可不是件容易的活儿，但只要掌握了原理和注意事项，就能让这个过程变得像吃蛋糕一样轻松愉快。
咱们先来说说原理。
叶绿体分离的核心原理就像是一场“速度与激情”的竞赛。
简单来讲，就是利用差速离心法，根据不同细胞成分的大小、密度和沉降速度的差异，把叶绿体从细胞的大杂烩中分离出来。
想象一下，细胞就像是一个热闹的菜市场，各种细胞器就像不同的摊位，而我们要做的就是把叶绿体这个“绿色蔬菜摊位”单独拎出来。
在这个过程中，有一些注意事项可千万不能马虎。
首先，材料的选择那可是相当重要，这就好比选食材做饭，得挑新鲜水灵的。
咱们得选鲜嫩、健康、叶绿体含量丰富的植物组织，不然就像用了不新鲜的菜，做出来的“菜”可就不美味啦。
然后是操作环境，这就像是给一位娇贵的公主准备寝宫，得小心翼翼，保持低温、弱光，温度太高或者光线太强，叶绿体就像是被暴晒的花朵，会蔫儿掉的。
还有研磨这一步，力度得拿捏好，不能太粗暴，不然叶绿体就被你“揍”得支离破碎了。
这就好像揉面团，太用力面团就粘手，太轻又揉不均匀。
再说说离心的速度和时间，这可不能随心所欲。
速度太快或时间太长，叶绿体可能会被甩得晕头转向，找不着北；速度太慢或时间太短，叶绿体又和其他成分“纠缠不清”，就像两个吵架的人怎么也分不开。
另外，试剂的使用也得规范，就像做菜放盐要适量，试剂加得不对或者量不合适，那实验结果可就“变味儿”了。
最后，整个操作过程都要保持清洁卫生，不能让杂质混进去，不然就像一锅好汤掉进了一粒老鼠屎，全毁了。
总之，叶绿体分离这事儿，虽然有点复杂，但只要我们牢记原理，注意这些小细节，就一定能成功地把叶绿体这个“绿色小精灵”从细胞的大“迷宫”中分离出来。
就像孙悟空在花果山能精准地找出自己的猴子猴孙一样，咱们也能在细胞世界里游刃有余。
叶绿体的分离
• • • • •
三、实验用品 1、材料 、 新鲜菠菜或其它植物嫩叶。 新鲜菠菜或其它植物嫩叶。 2、器材 、 普通离心机、组织捣碎机、天平、 普通离心机、组织捣碎机、天平、光学显 微镜、 微镜、烧杯 、 量筒 、滴管 、离心管 纱布 若干、载玻片和盖玻片。 若干、载玻片和盖玻片。 • 3 试剂 • 0.35mol/L NaCl 溶液。 溶液。
ห้องสมุดไป่ตู้
• 五、注意事项 • 植物组织匀浆后要悬浮在等渗介质中进行 差速离心；同时叶绿体的分离最好在0～ 差速离心；同时叶绿体的分离最好在 ～ 4℃ 的条件下进行。 ℃ 的条件下进行。 • 六、作业 • 1.分离细胞组分时，为什么要加入 分离细胞组分时， 分离细胞组分时 0.35mol/L NaCl ？ • 2. 操作过程中应注意什么？ 操作过程中应注意什么？
• 四、实验步骤： 实验步骤： • 1.选取新鲜的菠菜嫩叶，洗擦干后去除叶梗及粗脉，称30g 选取新鲜的菠菜嫩叶，洗擦干后去除叶梗及粗脉， 选取新鲜的菠菜嫩叶 氯化钠溶液150ml中置 组织捣碎机或研钵中。 于0.35mol/L氯化钠溶液 氯化钠溶液 中置 组织捣碎机或研钵中。 • 2.利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆，3~5min，或研 利用组织捣碎机低速（ 利用组织捣碎机低速 ）匀浆， ， 磨成匀浆。 磨成匀浆。 • 3.用6层纱布过滤，滤液盛于烧杯中。 用 层纱布过滤 滤液盛于烧杯中。 层纱布过滤， • 4.取滤液 取滤液4ml在1000r/min下离心 下离心2min，弃去沉淀。 取滤液 在 下离心 ，弃去沉淀。 • 5. 将上清液在 将上清液在3000r/min下离心 下离心5min，弃去上清液，沉淀即 下离心 ，弃去上清液， 为叶绿体（混有部分细胞核）。 为叶绿体（混有部分细胞核）。 • 6.沉淀用 沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮。 氯化钠溶液悬浮。 沉淀用 氯化钠溶液悬浮 • 7.取叶绿体悬液 滴置于载玻片上，加盖玻片后用普通光学 取叶绿体悬液1滴置于载玻片上 取叶绿体悬液 滴置于载玻片上， 显微镜观察。 显微镜观察。
叶绿体色素的提取与分离实验
3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽旳一 条色素带旳颜色是（ ） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能旳色素和构造
（一）捕获光能旳色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占1/4
吸收可见 旳太阳光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素旳提取和分离试验中在滤纸条上扩散速度 最快旳色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色旳溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表达加，“—”表达不加。
处理
二氧化硅（少许） 碳酸钙（少许）
95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（1）A处理得到旳溶液颜色是 黄绿色 ，原因是__叶__绿__素_被__破__坏__________
（6）色素分离旳成果：相邻色素带间距最宽旳是 他们旳颜色是 橙黄色 和 黄色 ，主要吸收 蓝紫
胡萝卜素 和 叶黄素 ， 光。
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
叶绿体分离的注意事项
叶绿体分离的注意事项叶绿体分离是一种常见的实验操作，用于从植物细胞中分离出叶绿体，以便进行后续的研究和应用。
在进行叶绿体分离时，有一些注意事项需要特别注意，以确保实验顺利进行并获得准确可靠的结果。
选择合适的植物材料至关重要。
通常情况下，新鲜、健康的叶片是进行叶绿体分离的最佳选择。
叶片应该避免受到病虫害等外界因素的影响，以确保叶绿体的纯度和活性。
在进行叶绿体分离前，需要提前准备好所需的试剂和设备。
常用的叶绿体分离试剂包括缓冲液、融解液和离心管等。
确保试剂的质量和配制的准确性对于分离出高质量的叶绿体至关重要。
在进行叶绿体分离的过程中，需要注意操作的细节。
操作时要注意避免受到外界因素的干扰，尽量在无菌条件下进行操作，以避免叶绿体的污染。
操作时要轻柔并迅速，以避免叶绿体的破坏和损伤。
叶绿体的分离过程通常包括细胞破碎、离心和分离等步骤。
在进行细胞破碎时，需要选择合适的破碎方法，如搅拌破碎或超声波破碎等，以确保细胞完全破碎并释放出叶绿体。
离心过程中要注意控制离心速度和时间，以确保叶绿体能够被有效地分离出来。
在获得分离出的叶绿体后，需要及时进行保存和处理。
叶绿体应该保存在低温环境中，避免受到光照和氧化等因素的影响。
分离出的叶绿体可以用于进行进一步的实验研究，如蛋白质提取、光合作用研究等。
总的来说，叶绿体分离是一项复杂而重要的实验操作，需要仔细操作并严格遵守实验步骤和注意事项。
通过正确的操作方法和注意事项，可以获得高质量的叶绿体样品，为后续的研究工作提供可靠的基础。
希望本文提供的注意事项能够帮助读者顺利进行叶绿体分离实验，取得理想的实验结果。
叶绿体分离的实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿体的基本结构和功能。
2. 掌握叶绿体分离的方法和原理。
3. 通过实验观察叶绿体的形态和大小，分析其生理活性。
二、实验原理叶绿体是植物细胞中进行光合作用的重要细胞器，其主要功能是吸收光能，将光能转化为化学能，并储存于有机物中。
叶绿体呈椭球形或球形，具有双层膜结构，内部含有类囊体和基质。
本实验采用差速离心法分离叶绿体，通过调整离心速度和离心时间，使不同大小的叶绿体分别沉淀下来。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶片2. 仪器：高速离心机、研钵、移液器、显微镜、载玻片、盖玻片、滤纸、吸水纸、蒸馏水、无水乙醇、丙酮、碳酸钙、碘液四、实验步骤1. 叶绿体提取（1）取新鲜菠菜叶片，用蒸馏水洗净，晾干。
（2）将叶片剪碎，放入研钵中，加入少量碳酸钙粉末和适量蒸馏水。
（3）研磨叶片，直至叶片完全破碎。
（4）用纱布过滤提取液，收集滤液。
2. 叶绿体分离（1）将滤液转移至离心管中，用无水乙醇和丙酮混合液（体积比1:1）调整滤液pH值至7.0。
（2）将离心管置于高速离心机中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
（3）将上清液转移至另一离心管中，以5000r/min离心15分钟，收集沉淀。
（4）将沉淀用少量蒸馏水重悬，再次以5000r/min离心15分钟，收集沉淀。
3. 叶绿体观察（1）将收集到的叶绿体沉淀用载玻片覆盖，滴加碘液，轻轻压平。
（2）用显微镜观察叶绿体的形态和大小。
五、实验结果与分析1. 叶绿体形态和大小通过显微镜观察，发现分离得到的叶绿体呈椭球形或球形，大小不一，直径约2-5微米。
2. 叶绿体生理活性通过观察叶绿体在碘液中的颜色变化，发现叶绿体呈绿色，说明其具有光合作用的相关生理活性。
六、实验讨论1. 本实验中，叶绿体分离过程中可能会受到细胞碎片和杂质的影响，影响实验结果的准确性。
因此，在实验过程中应尽量减少细胞碎片和杂质的产生。
2. 叶绿体分离过程中，离心速度和离心时间的选择对实验结果有一定影响。
叶绿体的分离、纯化和鉴定.pdf
(2)细胞破碎时，不必过细。用普通的家用食品 料理机匀浆2 min同样可以达到很好的效果。此 外，过滤时不要用力挤压，以避免对叶绿体被膜 的破碎。在用细胞器分离缓冲液悬浮叶绿体粗提 物时应轻缓，在冰上轻轻晃动使叶绿体分散开来。
心机配平)， 轻轻吸取上清液。 5. 在2.0ml离心管内依次加入50%蔗糖溶液0.9ml和15%蔗糖溶液 0.5ml（注意15%蔗糖溶液要缓缓沿离心管壁注入，不能搅动 50%蔗糖液面）。 6. 小心地沿离心管壁加入0.4ml上清液。 7. 离心8000r/min, 20 min。 8. 取出离心管，可见叶绿体在密度梯度 液中间形成带。
冲液 ph=7.4） 50%蔗糖溶液，15%蔗糖溶液，0.01%吖啶橙
Байду номын сангаас
实验步骤
1.选取菠菜叶片（选择嫩绿色的新鲜叶片），洗净擦干后去除 叶梗和粗脉，撕成小碎块（剪碎更宜碾磨），称2~3g放于玻 璃匀浆器中
2.加入预冷（放在冰上预冷）到0℃匀浆介质10ml，在冰上用研 钵研磨。
3.捣碎液用尼龙网过滤于50ml烧杯中。 4.将滤液平分到2个离心管中（2ml），1000r/min下离心1min(离
(4)加样时一定要小心，防止破坏梯度。为此，应采用宽口 吸头吸取叶绿体粗提物悬浮液，释放时，将枪头贴于管壁 接近15％蔗糖浓度处缓慢释放。
(5)离心时，为防止速度快速上升和快速下降对浓度梯度层 的破坏，离心机的加速一定要缓慢，而下降时也要缓慢停 下。此外，为防止高速离心过程中温度上升可能造成的由 于颗粒扩散而引起的梯度破坏，离心前一定要让离心机在 0℃或更低的温度下充分预冷【1】。
9.用吸管对准叶绿体那一层吸取一滴叶绿体悬液滴于载片上， 加盖片观察： 1）在普通光镜下观察；
实验七 叶绿体的分离与观察
叶绿体的分离与观察
பைடு நூலகம்
通过植物叶绿体的分离，了解细胞器 分离的一般原理； 观察叶绿体的形态特征。
叶绿体的分离与观察
１．仪器、用具 普通光学显微镜、普通离心机、组织捣碎机、粗 天平、大烧杯、量筒、滴管、刻度离心管、纱布 等 ２．材料 新鲜菠菜 ３．试剂 0.35mol/l氯化钠溶液
叶绿体的分离与观察
叶绿体的分离与观察
将组织匀浆后悬在等渗的介质中进行差速离心，是 分离细胞器的常用方法。在一给定的离心场中，同一时 间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增 加离心力和离心时间，分批收集就能获得各种亚细胞组 分。 叶绿体的分离应在等渗溶液中进行,以免渗透压的改 变使叶绿体受到伤害。将匀浆液在一定的条件下离心， 以去处其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。然 后，在相应的条件下进行再次离心，即可以获得沉淀的 叶绿体（混有部分细胞核）。分离过程最好在低温的条 件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。
菠菜叶手切片观察 1. 用刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削一斜面置于载玻 片上，滴加0.35mol/l氯化钠溶液，加盖片后轻 压。 2. 在普通光学显微镜下观察。要注意区分三种细 胞：表皮细胞、保卫细胞和叶肉细胞。
叶绿体的分离与观察
1. 选取新鲜的菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗和粗 脉，称40g于200ml0.35mol/l氯化钠溶液中，装 入组织捣碎机。（全班合用） 2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀浆3-5min。 3. 将匀浆用6层纱布过滤于烧杯中。 4. 取滤液1ml在台式高速冷冻离心机1000r/min下 离心5min，弃去沉淀。 5. 将上清液在台式高速冷冻离心机3000r/min下 离心5min，弃去上清液，沉淀即为叶绿体。 6. 将沉淀用少量0.35mol/l氯化钠溶液悬浮。 7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖片后在 普通光学显微镜下观察。叶绿体为绿色橄榄形， 在高倍镜下可以看到内部的深绿色的小基粒。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验报告
一、实验目的
1、通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原理和方法。
2、熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和间接荧光。
二、实验原理
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一
个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及
悬浮介质的粘度有关。通过控制离心力和离心时间等因素，不同的细胞器可以通
过阶梯离心的方式得到分离。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不
同的颗粒其沉降速度不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮中
的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部．分批收集即可获得各种亚细
胞组分。
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种
研究。叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进
行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。将匀浆液在1000r/min的条件下离心
2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。然后，3000r/min的
条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。分离过程最好在0
—5℃的条件下进行：如果在室温下，要迅速分离和观察。
荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察的一种技术。某些物
质在—定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基
态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就
称为荧光．若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后
直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和水质素的
黄色荧光等。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧
光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧
光。
叶绿素吸收的光能主要用于光合作用。多余的能量可能以热的形式散发，也可
能以激发光的形式散发。这种激发光就称为叶绿素荧光。叶绿素荧光检测技术作
为一种强大的工具，广泛应用于生态学和植物生理学研究。
利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、
光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。另外，在制
作荧光显微标本时最好使用无荧光载玻片，益玻片和无荧光油。
三、实验用品
1.试剂：0.35mol/L氯化钠溶液，0.01％吖啶橙
2.器具：粗天平、组织捣碎机、普通离心机、普通光学显微镜、荧光显微镜、
500ml 烧杯、量筒、滴管、10ml刻度离心管、纱布若干，试管架、无荧光载玻片
和盖玻片
3.材料：新鲜菠菜
四、实验步骤
1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗及粗脉，称30g于
150ml0.35mol/L NaCI溶液中，装入组织捣碎机；
2.利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆3-5min； 3.将匀浆液用6层纱布过
滤到500ml烧杯中；
4.取滤液4ml于离心管中，1000r /min下离心2min。弃去沉淀；
5.将上清液取出于另一只离心管中，3000r/min下离心5min，弃去上清液，沉
淀 即为叶绿体（混有部分细胞核）；
6.将最后一次的沉淀用2-3ml 0.35mol/L氯化钠等渗溶液悬浮； 7.取叶绿体悬液
一滴滴于载片上，加盖片后即可观察。 ①在普通光镜下观察。 ②在荧光
显微镜下观察。
8.另取叶绿体悬液一滴滴在载片上，再滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料，加盖
片 后即可以在荧光显微镜下观察。
五、实验结果
显微镜下的菠菜叶下表皮的气孔图像，气孔由两个保卫细胞构成
气孔
保卫细胞
荧光显微镜下观察菠菜叶下表皮气孔
气孔
光学显微镜下，叶绿体为椭圆形
叶绿体
荧光显微镜下，叶绿体自发荧光为火红色，呈斑状分布，其他部分为黑色
叶绿体
吖啶橙染色后荧光显微镜下，叶绿体可发出桔红色荧光，绿色荧光则为细胞核
碎片
叶绿体
细胞核碎片
六、分析与讨论
1、在离心时，转速不能过高或不能离心过长的时间，否则叶绿体也会破碎，
所以要控制好离心的速度和时间。
2、在使用荧光显微镜观察时，不能过早的用吖啶橙染色，在观察前染色，在
荧光观察时应抓紧时间，先拍照，再观察，因为激光照射部分的叶绿体会逐渐失
去荧光。
3、叶绿体经激发光波照射后，自发荧光呈现火红色。因叶绿体在其悬液中呈
现点状均匀分布，且悬液其他组分无自发荧光反应，故观察到斑状分布的火红色
荧光效果。
4、叶绿体次生荧光的来由，橘红色为叶绿体的荧光效果，叶绿体的悬液中混
有的细胞核碎片经吖啶橙染色荧光反应呈现绿色。