酶联免疫吸附试验的干扰因素和对策
酶联免疫吸附试验中常见问题的产生原因及解决办法
２ ． ３ 实验 室环境温度控制 实验室温度过高或者
过低 都会 使 吸光值 偏差 。试 剂盒 使用 前后 没有 达到 规 定温 度 、 孵 育和 避光 显色温 度 时 间不达标 ， 实验 室 避 光条 件不 具备 ， 都会 导致 试验 误差 。
３ ． ３ 实验 室环境温度控制 良好
３ ５ ３ ０ ０ ０
用 酶标 记物 进行 免疫 学检 测 的方法称 为酶 联 免 疫 吸 附试 验 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ） 。该技 术 诞 生于 ２ ０世 纪 ７ ０年 代初 ， 可进 行 定 性 或定 量 分 析 ， 主要有间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ、 阻断 Ｅ ＵＳ Ａ、 双 抗 体夹 心 Ｅ ｕＳ Ａ三 种 方法 。 目前 该 技术 在 猪瘟 、 口蹄 疫 、 高 致病 性 猪 蓝耳 病 、 猪 伪 狂 犬 病、 猪 乙型脑 炎 、 猪链 球 菌病 、 猪 圆环病 毒病 、 猪传 染
不规 范 的操作 环节 都会 对试 验结 果产 生影 响 ，出现
错 误 的结果 。 １ 常 见 问题
操作， 要 求血 清清 亮 、 无溶血， 避 免 使用 严 重 溶 血 的 血 清样 品 。 当血清 中有 凝块 时 ， 要 特 别小心 不 要吸 到 任 何凝 结 的材料 或者 血球 。被检 血清 保存 时 间不 能 太久 ， 冻 结 血清 解 冻后 ， 应 该 充 分混 匀 ， 稀 释 后 的血 清 样 品在添 加到 包被 板之 前也 要混 合均匀 。解冻 后 血清标 本争 取一 次性 检测 完成 ，血清 标本 如 需保 存 作多 次检 测 ， 宜 少量 分装 冷 冻保 存 。
检 测板 吸光 值偏 高及 出现假 阳性 ；检 测板 吸光 值 偏 低 及 出现 假 阴 性 ； Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检 测 板 避 光 显 色 后颜
酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素评价
酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素评价发布时间：2022-08-23T13:46:05.087Z 来源：《医师在线》2022年4月8期作者：冯霞[导读]酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素评价冯霞（黔南州人民医院；贵州黔南州558000）【摘要】目的：评价酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素，探讨应对措施。
方法：180份经酶联免疫吸附法检测乙肝五项的血液样本均由黔南州人民医院检验科提供，并在2020年7月-2022年3月的时间范围内收集样本，其中给予抗凝处理的90份设定为实验组，未给予抗凝处理的90份设定为对照组，两组比较检测结果存在的差异。
结果：实验组血液样本阳性率与对照组相比更高，且两组的差异得到P＜0.05，即具备统计学意义。
结论：乙肝五项检测采用酶联免疫吸附法进行时血清状态会影响检测结果，检测前采取正确处理措施有利于保证临床检验质量。
【关键词】检测结果；影响因素；乙肝五项；酶联免疫吸附法乙肝是临床对乙型病毒性肝炎的简称，主要是由乙型肝炎病毒（HBV）感染而引起的可传染性肝炎。
乙肝发病隐匿性较强，初期诊断难度较大，但随着病情发展，患者开始有恶心、肝部肿大、腹胀、肝脏疼痛、乏力等症状表现，临床方面主要选择乙肝五项检测对患者病情严重与否、传染力强弱与否进行判断。
酶联免疫吸附法的特点和优势在于灵敏度、特异性高，由于操作过程具有一定的复杂性，再加上繁琐的操作步骤，因此很多环节会因为外界因素或人为因素导致最后的检测结果出现误差，并有假阴性、假阳性的情况[1]。
本文选择黔南州人民医院检验科经酶联免疫吸附法检测乙肝五项的血液样本180份进行分组研究，详见如下报告：1 资料与方法1.1一般资料收集血液样本时间：2020年7月-2022年3月；血液样本来源：黔南州人民医院检验科。
180份经酶联免疫吸附法检测乙肝五项的血液样本中90例实验组予以抗凝处理，48例为男性，42例为女性，最小年龄26岁，最大年龄58岁，年龄平均值（43.8±2.6）岁；90例对照组未予以抗凝处理，47例为男性，43例为女性，最小年龄27岁，最大年龄59岁，年龄平均值（43.6±2.5）岁。
酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析
酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析摘要]目的：探讨酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果中的常见影响因素。
方法：随机选择2014年5月至2015年6月来我院门诊或者病房进行乙肝五项检测的患者160名，将所有患者的血标本分为4个组，抗凝组与不抗凝组，静置水浴时间20分钟组与静置水浴时间40分钟组，每组各40个标本，都对其进行酶联免疫吸附法和胶体金标法检测，比较各组标本的检测结果。
结果：抗凝组与不抗凝组比较，不抗凝组的阳性率低于抗凝组，且差异明显，具有统计学意义（P<0.05），静置水浴40分钟组的阳性率明显低于静置水浴20分钟组，且差异明显，具有统计学意义（P<0.05）。
结论：标本的血清状态及静置时间的长短可以影响酶联免疫吸附法检测乙肝五项的结果，检测过程应严格按照标准步骤进行，以保证检测结果的准确性。
关键词:酶联免疫吸附法；乙肝五项；影响因素【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0430-02 乙肝五项是医院常做的检测项目，其表面抗原HbsAg是患者感染乙肝病毒的标志物，是最常用的感染指标[1-2]。
ELISA（酶联免疫吸附法）是临床实验室常用的检测手段，常用于检测血标本，具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点[3-4]。
但是在检测过程中，由于工作人员自身或外界原因，容易在加样、孵育、洗板、显色、终止等各个环节的细节出现问题，从而导致最后检测结果的假阳性，影响结果的准确性[5]。
因此分析其影响因素并采取相应的处理措施显得十分必要。
本文就标本的血清状态及静置时间两个方面在ELISA检测乙肝五项中的影响进行分析，旨在总结经验避免再次出现问题，内容如下。
1资料与方法1.1一般资料选择2014年5月至2015年6月来我院门诊或者病房进行乙肝五项检测的患者160名，其中男性89名，女性71名，平均年龄在30.17±4.95岁。
所有标本在检测前的一般情况无明显差异，无统计学意义（P>0.05），可以进行研究。
酶联免疫吸附试验(ELISA)测定错误结果的原因分析
ELISA测定错误结果的原因分析ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。
Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。
但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。
引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。
本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
血清是最常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：1．内源性物质有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。
常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
（1）类风湿因子人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。
ELISA试验中常出现的问题及解决方法
ELISA试验中常出现的问题及解决方法作者：吴召坤，巩雪英，刘粉红来源：《兽医导刊》 2016年第8期吴召坤巩雪英刘粉红/陕西省丹凤县畜牧兽医中心ELISA试验，即酶联免疫吸附试验，具有敏感性高的特点，兽医实验实常用ELISA试验检测样品的抗原或抗体，ELISA试验中很多因素都会影响试验的结果，试验中常出现的有显色淡，灵敏度偏低、样品重复试验差异大、假阳性和假阴性等。
这些都会使我们对样品的真实结果做出误判，现就ELISA试验中非正常检测结果产生的原因进行分析，寻讨其解决的办法，以提高检测的准确性。
一、显色淡，灵敏度低1.查看试剂盒是否在有效期内，是否按照保存温度保存。
试剂盒过期或保存温度过高（正常保存温度2℃～8℃）都会影响显色。
2.试剂盒从2℃～8℃冰箱取出后在室温平衡至少20～30min。
3.温育时间不足或培养箱温度不足37℃，在ELISA试验中一定要注意温育时间和温度的重要性，在温育的过程中尽量不要打开温箱，僻免温度忽上忽下。
温育时间不足，温度过低都会影响显色。
4.严格按照试剂说明书要求的洗涤方法洗涤，洗涤时加洗涤液不能冲击过大，浸泡时间过长，要按照说明书上要求的洗涤次数洗涤。
5.加样不足，加样时要按照加样量调整好移液器的刻度，使用配套，内壁光滑清洁的吸头，吸头不能交叉使用，同时要对移液器进行校准，僻免加样不足使显色不足。
6.配制洗涤液的水要用纯水机过滤的水，水质应清洁无异常，不能用酸性过大或碱性过大的水，最好用新鲜合格的蒸馏水。
二、样品重复试验差异较大在检测过程中有时同一样品两次检测结果不一样，差异较大，这种情况可能存在以下几种原因。
1.两次检测样品数量可能不同，加样时间长短不一，反应时间长短不一，所以重复检测某一样品时，尽量与第一次加样时间一致。
2.加样量不一致，样品稀释倍数要准确，充分混匀，两次加样要使用同一个移液器。
3.温育时间和温度不一致，洗涤及操作人员不一致。
重复检测样品，操作条件，人员等检测过程应与上次保持一致。
酶联免疫吸附试验(ELISA)操作注意事项
（2）温育温度的选择。 在有的ELISA试剂盒的说明书中，指出温育温 度可有两种，例如，一种是37℃下1小时，另一 种则为43℃下45分钟。从免疫测定抗原抗体反 应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时 间最为完全，产物最稳定。如2－8℃下反应24 小时。较高的反应温度，由于分子运动的加快， 反应时间缩短，这一点对分子含量较多的强阳 性样本测定没有问题，但对分子含量少的弱阳 性样本则有漏检的可能。因此，如须选择反应 条件，建议在临床ELISA测定中尽量使用较低 温度较长反应时间的条件。
而将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着 水面，可使温度迅速平衡。让反应板飘浮在水面 上。就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可 提高测定的重复性。
洗涤在ELISA虽不是一个反应步骤，但也决定着实 验的成败。ELISA就是靠洗涤清除残留在板孔中没 能与固相抗体（抗原）结合的物质，以及在反应过 程中非特异性的吸附于固相载体的干扰物质，以保 证ELISA测定的特异性。 洗涤液为非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯 载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂 既含疏水基团，也含亲水基团，使蛋白质回复到水 溶液状态，从而脱离固相载体。 在实验室中，ELISA测定的洗板一般有两种方式， 即手工和洗板机洗板。为保证微孔板的均一性使结 果准确可靠，最好选用洗板机洗板。若手工洗板， 要注意浸泡时间和孔间洗液最好不要互相流动。流 水冲洗法让水流冲击板孔表面，简便、快速，洗涤 效果较好。
3 加样本及反应试剂
4 温育
温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个 因素。 ELISA属于固相免疫测定，要使液相中的抗原或抗 体与固相上的特异性抗体或抗原完全结合，必须在 一定温度条件下反应一定的时间。一般温育所需时 间与温度成反比，即温度越高，所需时间相对较短。 最为常用的温度有37℃和室温(20－25℃)，其次是 43℃和2－8℃，目前国内ELISA商品试剂盒的反应 温育时间通常为37℃30－60分钟。 关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：
常见酶联免疫吸附试验及注意事项
常见酶联免疫吸附试验及注意事项在医学诊断领域中，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种非常常见的技术方法，用于检测体液中的特定物质，如抗体、抗原、蛋白质等。
ELISA技术的广泛应用使得它成为了医学研究和临床诊断中不可或缺的工具。
本文将探讨ELISA技术的原理、分类、应用、优缺点及在实验中的注意事项。
一、ELISA的原理ELISA技术通过酶标记的抗体、抗原或其他蛋白质与待检测物质发生特异性反应，然后通过酶底物的变色反应来定量检测待检测物质的浓度。
根据不同的酶标记物，ELISA技术可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA等不同类型。
每种类型的ELISA 技术都有其特定的优点和适用范围，研究者需要根据具体的实验目的来选择合适的ELISA技术。
二、ELISA的分类1.直接ELISA直接ELISA是最简单的一种ELISA技术，它利用酶标记的抗体直接与待检测物发生特异性反应。
直接ELISA通常用来检测抗原或抗体，用于病原微生物和病原体的检测及特异性抗体的筛查。
2.间接ELISA间接ELISA利用待测抗体与被测物特异性结合后再加入酶标记的第二抗体结合，从而达到信号放大的目的，常用于病毒感染、免疫球蛋白筛查等领域。
3.竞争ELISA竞争ELISA通常用于检测浓度较低的抗原，其原理是待检测抗原与固定在板上的特异性抗体争夺酶标记抗体结合位点，由于酶标记的抗体数量一定，可根据酶底物底物的变色反应来计算出待检测抗原的浓度。
4.间接竞争ELISA间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的原理，可以用于检测抗体和病原微生物。
三、ELISA的应用ELISA技术在医学检验中具有广泛的应用，可以用于各种疾病的诊断、病原微生物的检测、血清学调查、感染性疾病的筛查等。
ELISA技术也被应用于生物医药领域，用于药物检测、蛋白质定量和特异性蛋白质筛查等。
四、ELISA的优缺点ELISA技术具有操作简便、灵敏度高、特异性强、多重自动化等优点，但也存在一些缺点，如试剂价格昂贵、结果受外界因素干扰、样本处理过程中易受污染等。
酶联免疫吸附试验的基本原理及影响因素
酶联免疫吸附试验的基本原理及影响因素酶联免疫吸附试验的基本原理及影响因素中文名称：酶联免疫吸附试验英文名称： enzyme-linked immunoadsordent assay;ELISA定义：一种酶联免疫技术。
用于检测包被于固相板孔中的待测抗原(或抗体)。
即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。
应用学科：免疫学（一级学科）；应用免疫（二级学科）；免疫学检测和诊断（二级学科）酶联免疫吸附试验(以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。
其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体( 聚苯乙烯微量反应板) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
常用的ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
简介从Engvall和Perlman(1971）首次报道建立酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以来，由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用。
尽管早期的ELISA由于特异性不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程方法制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆抗体进行阻断ELISA试验，都大大提高了ELISA的特异性，加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便实用和标准化，从而使其成为最广泛应用的检测方法之一。
目前ELISA方法已被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。
在动物检疫方面，ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。
基本原理ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。
临床ELISA检测的常见问题与对策
临床ELISA检测的常见问题与对策就目前的情况来说，酶联免疫吸附法（ELISA）作为一种十分常用的感染性标志物的检测手段，其测定结果的准确性及可靠性将直接影响临床诊断及治疗的效果，在临床实际操作的过程中，经常会因为仪器、试剂、工作人员操作等方面地原因影响到酶联免疫吸附法（ELISA）的测定结果。
为了进一步提高ELISA 的测定结果，本文主要对临床ELISA的检测常见的问题进行分析，并提出了针对其相关原因采取的措施。
标签：ELISA测定；问题分析；对策措施前言ELISA测定的主要原理是利用抗原、抗体之间的特异反应通过某种或者是几种酶来连接测物，经过底物及酶的相互作用，将改变溶液的颜色，进而通过观察溶液的颜色，来判定测定的结果。
在医院检验科，ELISA是作为常用的，也是最为重要的一种感染性标志物的检测方法，本文主要对ELISA在临床测定实践中存在的常见问题及其发生原因进行分析。
一、临床ELISA检测的主要问题在进行临床ELISA测定过程中，常常会碰到整板显色、白板、无法检测出弱阳性质控样本以及测定重复性较差等问题。
1、整板显色主要表现在没有彻底清洁洗板，污染了洗液，进而导致显色液毁坏、变质，或者是加反酶结合物，通常这种问题主要存在于HBsAb、HBsAg 测定中。
2、白板主要是指整板无色，也将阳性对照包括在内，比如像洗液中存在酶抑制剂，酶结合物漏加，显色剂漏加A或B。
或者是将终止剂当做显色剂用。
3、无法检测出弱阳性质控样本。
比如显色时间不足，不能准确判定样本测定结果；或者是水浴温度没有达标，水育时间不足等。
4、测定重复性较差。
具体指标本处理方法不对，没有正确设置酶标仪，混合应用不同批号的试剂组，微板孔条受到污染，显色时间、洗板时间、水育时间不一，样本加错，样本量添加不准确。
二、临床ELISA试剂盒的选择及使用1、按照临床实际检测项目选择ELISA试剂盒从试剂盒的生产厂家宣传材料及说明书中，能够大概了解不同厂家试剂盒的地相同点及不同点，例如：固相材料的来源，包破抗体或者是抗原的性质、检测模式、色原底物、检测时间等，按照实验室的条件做出初步的选择意向。
酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒标志物的影响因素及存在问题
Ｄ ： ０ ３ ６ ／ ．ｓ ． ６ ２ ９ ５ ． ０ １ ０ ． ８ 文 献 标 志 码 ： 文 章 编 号 ： ６ ２９ ５ （ ０ １ ４ ５ ２ １ ． ２ ０ ６ ｓ Ｂ １ ７—４ ５ ２ １ ）２０ ５—２
３ ３ Ｃ Ｐ与 骨 关 节 疾 病 （ ） 助 鉴 别 诊 断 关 节 痛 、 痛 和 ． Ｒ １帮 肌 不 典 型 背 痛 ； ２ 可 用 于 风 湿 病 的处 理 ； ３ Ｃ Ｐ可 用 于 骨 关 节 （） （） Ｒ
ｍｅ ｓ ｒｍｅ ｔ ｆＣ ｒ ａ ｔ ｅ ｐｏ ｅ Ｃ Ｐ ［ ］ Ｂ ｎ ａ ｕ ｅ ｎ —ｅ ｃｉ ｒ ｔｉ Ｒ ） Ｊ ． ｒＪ Ｇｅ ｏ ｖ ｎ（
自２ 世 纪 ８ ０ ｏ年 代 以来 ， 酶联 免 疫 吸 附试 验 （ Ｌｓ 以 其 Ｅ ＩＡ） 灵 敏 度 较 高 、 异 性 较 好 、 格 低 廉 、 展条 件 要 求 不 高等 特 点 特 价 开 在 各 级 医学 实 验 室 得 到 了广 泛 应 用 ， 别 是 对 于 乙 型 肝 炎 病 毒 特 （ Ｖ） 志 物 （ Ｖ Ｍ） ＨＢ 标 ＨＢ 的检 测 ， 目前 国 内 大 多 数 实 验 室 均 采 用 Ｅ ＩＡ 一 步 法 ， 操 作 简 单 ， 其 检 测 结 果 的 准 确 性 容 易 受 ＬＳ 其 但 到多 种 因素 的 影 响 ， 已成 为各 级 医 院实 验 室 最 易 引起 纠纷 的 检 测 项 目 。本 文 结 合 临 床 工 作 对 Ｅ ＩＡ 检 测 ＨＢ — 的影 响 因 ＬＳ ＶＭ
ｎｏ ｔｃ ｃ ｕ ａ ｙ ｆ ｓ ｉ ａ ｃ ｒ ｃ ｏ ｂａ ｔ ｒａ ｐｈ ｒ ｇｉｉ ｂｙ ｃ ｅ ｉｌ ａ ｙ ｔｓ ｎｅ ｒ ａ ｉｎ ｓ ａ ｐ ｔｅ ｔ
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性。
１ ＬＳ Ｅ ＩＡ检测干扰 因素和对策
１１ 标本 因素 ．
１１ 内源性干扰物质 ．． １
１１ ． 类 风湿 因子 （ Ｆ ： ． １１ ． Ｒ ）患者体 内的 Ｒ Ｆ能显著干扰 Ｅ ＩＡ ＬＳ
检测 ，其 中 ＩＭ、ｇ ｇ ＩＧ型 Ｒ Ｆ可 以与 Ｅ ＩＡ检 测中的捕获抗体 ＬＳ 及标记二抗的 Ｆ 段直接结合 ， 而导致假 阳性或假 阴性检测 ｃ 从
１１ 外 源 性 干 扰 物质 ．． ２
为有用。急性感染 时 ， Ｍ抗体滴度通常很高 ， Ｆ滴度相对要 Ｉ ｇ Ｒ
低得多。因此 ， 在测定前对 标本进行稀释 ， 特异的 ＩＭ 因高滴 ｇ 度存在仍可检 出 ，而非 特异的 Ｒ Ｆ则会 因稀 释变成非 常低 的 滴度 ， 而能够减少 Ｒ 从 Ｆ的干扰 。 １ ．． 补体 ： ＬＳ ．１ １ ２ Ｅ ＩＡ试 验 固相 抗体 和酶标二 抗可 因其在 固 相吸附及标记 过程 中，抗体 分子发生变构 ，其 Ｆ 段 的补 体 ｃ
医技杂志 ２ １ 年 １ ０１ ２月第 １ ８卷第 １ 期 ２
Ｊｕｎ ｌ ｆ ｒｃ ｃｌ ｄｃｌ ｈ ｓ ｏ ｒａ ｏ Ｐａｔ ａ Ｍｅｉａ Ｔ ｃ ｇ ｅ ， ｉ
堕 堕 ２ ！ ！ ！ ： Ｑ ： ！ １
・
１ ３２１・
・
实验室管理 ・
酶联免疫吸附试验 的干扰因素和对策
１１１ 异 嗜性抗体 ： ．．． ３ 人血清 中含 有抗 啮齿 类动物（ 鼠、 、 如 马
羊等 ） 免疫球蛋 白（ｇ 的抗体 ， Ｉ） 即天然 的异 嗜性抗体 。其 主要 通过非竞争机制干扰 Ｅ ＩＡ检测 ， ＬＳ 异嗜性抗 体可与啮齿类 动
物 ＩＧ的 Ｆ 段结合 ，这样既可 与检 测系统 中的捕 获抗体结 ｇ ｃ 合、 又可和标 记抗体 结合 ， 造成 检测结 果假 阳性或假 阴性 升 高 解决办法 ： 可在标本稀释液或待检标本中加入过量 的动物 Ｉ， ｇ 封闭可能存在 的异嗜性抗体 ， 但加入量不足或亚型不 同时
乙型肝炎核心抗体 （ Ｂ ） Ｍ，Ｏ Ｃ 的 ＩＭ抗 体等检测尤 Ｈ ｃＩ Ｔ Ｒ Ｈ ｇ ｇ
质。这类交叉反应物质在用 多克 隆抗体测定抗原时对测定结 果影 响不大 ， 但在用单克隆抗体测定抗原时 ， 如果交叉抗原决 定簇正好是所用单克隆抗体相对应 的靶抗原决定簇时 ，会 出
现假 阳性结果目 。
溶血 。
１１ ． 标本被细菌污染 ：标本的污染菌体可能含有 内源性 ．．２ ２ ＨＲ ， Ｐ 可使试验出现非特异性显色。 因此 ， ＬＳ Ｅ ＩＡ检测宜采用 无菌试管采集新鲜标本 ， 可防止污染 。 １１ ． 标 本保 存不当 ：在冰箱中保存过久的标本 ，血清 中 ．．３ ２
处理标本 ， 灭活补体 ； ５ ② ６℃加热血清 ３ ｉ 使 ｃ ｑ ０ｍ ｎ １ 灭活 。
的结合 ， 闭抗体 的抗原表位结合能力 ， 封 而引起假 阴性结果或 使定量测定结果偏低 。解决办法 ： ①用终浓 度 １～ ０ｍ ｌ ０ ４ ｍｏ Ｌ ／
红蛋 白浓度较高 ， 则容易在温育过程 中吸附于固相 ， 而与后 从
面加入 的 ＨＲ Ｐ底物反应显色１ ３ １ 以在采集血液时严防标本 。所
１１ ． 标本溶血 ： ．． １ ２ 各种原 因引起 的标本溶血 ， 均可 因红细胞
破坏 释放 出大量具有过氧化物酶活性 的血红蛋 白，在以辣 根
过氧化物 酶（ Ｒ ） Ｈ Ｐ 为标 志的 Ｅ ＩＡ测定 中， ＬＳ 如血清样本 中血
ｃ ｑ分子 结合位 点被暴 露 出来 ，使 ｃ ｑ可以将二 者连接 起 １ １ 来， 从而造成假 阳性 。另一方面 ， 固相抗体也会 因为活化补体
报告如下 。
断不相符 Ｉ ｌ 】 。双位点免疫分பைடு நூலகம்析法更易受到人血清中 Ｈ Ａ ｓ Ａ Ａ 的 干扰 ， Ｈ Ａ ｓ 连捕 获抗 体和标记抗体形成 “ 当 Ａ Ａ桥 双夹 心” 则 ，
出现假 阳性或异常高值 ；当 Ｈ Ａ ｓ Ａ Ａ 分别与捕获抗体 和标 记 抗体 或仅 与其 中一个连接阻断了分析物桥连捕获抗体和标记
昆明医学院 附属延安 医ｇ ６ ０ ５ ） ￣（５ ０ １
酶 联 免 疫 吸 附试 验 （ｎｙ —ｉｅ ｍｕ ｏｏｂ ｎ ａｓｙ ｅａｍｅ ｌ ｄｉ ｎ ｓｒｅ ｔ ｓ ， ｋ ｍ ａ
曹向红
董玉琳
徐
敏
降低 ， 甚至 出现假阳性 或假 阴性 ， 使实验室检测结果与临床诊
Ｅ ＩＡ） 特定 情况下其特异性和准确性会受 到一定干扰 ， ＬＳ 在 可 对试验产生影 响 ， 甚至出现错误 的结果 。为保证检测 结果 的 准确性和可靠性 ， 为疾病 的诊断 、 情进展 的评估 和治疗提供 病 可靠依据 ， 应对 Ｅ ＩＡ试验 的干扰 因素有 比较充分 的掌握和 ＬＳ 了解 ， 为此 ， 者分 析 了标 本 、 笔 试剂 、 作 和仪 器 等 因素 对 操 Ｅ ＩＡ检测结果 的干扰 ， ＬＳ 并对相应 的解决方法进行 了探讨 ， 现
抗体 ， 出现假阴性和异常低值 。 则 解决办法 ： 预防 ： ① 在患者接
受 动 物源 性 抗 体 治 疗 前 、 和后 期 ， 中 给予 免 疫 抑 制 剂 即 可 阻 止
ＨＡｓ Ａ Ａ 大量产生 ； ②抗体 的处理 ： 获抗体 和标 记抗体使 用 捕 Ｆ ａ ２ 切 除 Ｆ 段 ， （ｂ ） ， ｃ 替代完整 的 ＩＧ； ｇ ③阻断剂 的使用 ： 阻 将 断剂加入稀释液或预处理的样品中 ，通过与干扰物的结合 达 到减少 干扰 ； ④更改动物种类抗体 ， 鼠抗体试剂更改为羊抗 如
１１１ 交叉反应物质 ： 检标 本中存 在类地高辛 、 甲胎 蛋 ．．． ５ 待 类 白（ Ｆ ） 物质等 ， Ａ Ｐ样 是一些 与检测 的靶 抗原有交 叉反应 的物
结果 。解决 的办法 ： ①在使用 Ｒ Ｆ吸附剂后再检测 ， 可有效纠 正错误 结果 ； 稀释 标本 ： ② 对抗 甲型 肝炎病 毒（ Ａ ＩＭ， Ｈ Ｖ） ｇ 抗