胶原蛋白的提取、结构以及分子量测量
胶原蛋白提取工艺流程
胶原蛋白提取工艺流程
胶原蛋白是一种重要的结构蛋白，广泛应用于医药、食品、化妆品等领域。
其提取工艺流程一般包括以下几个步骤：
1. 原料准备：选择适宜的动物组织（如鱼皮、猪皮、牛皮等）作为原料，并进行清洗和消毒处理。
2. 组织切割：将原料动物组织切割成小块，以便后续的酶解和提取操作。
3. 酶解处理：将切割好的组织加入酶解液中，常用的酶有胃蛋白酶、蛋白酶等。
酶解过程中，可通过调节温度、pH值、酶的浓度和酶解时间等参数来控制胶原蛋白的酶解程度。
4. 溶液分离：将酶解后的溶液过滤离心，分离出胶原蛋白溶液。
5. 清洁和浓缩：采用冷沉淀或盐析等方法去除杂质，并对胶原蛋白溶液进行浓缩处理。
6. 精制和除杂：通过离子交换、凝胶过滤等技术对胶原蛋白进行精制和去除杂质。
7. 除菌和冷冻：对提取得到的胶原蛋白进行除菌处理，并将其冷冻保存以保持
其活性和稳定性。
8. 干燥和粉碎：将冷冻的胶原蛋白进行干燥处理，通常采用冷冻干燥或喷雾干燥等方法，然后进行粉碎或研磨，得到胶原蛋白粉末。
以上是一般胶原蛋白提取的工艺流程，具体流程和操作会根据不同的提取目的和要求有所不同。
提取胶原蛋白的工艺也在不断改进和发展，以提高胶原蛋白的纯度和产量。
collagen i 分子量
Collagen I（胶原蛋白I）是一种常见的胶原蛋白类型，在哺乳动物体内存在丰富。
它是组成皮肤、骨骼、韧带、肌腱和牙齿等组织的重要结构蛋白。
Collagen I的分子量因来源和制备方式不同而有所差异。
在人体中，Collagen I的理论分子量为286kDa。
然而，它的实际分子量会受到多种因素的影响，例如在提取或制备过程中的处理方法、交联状态和修饰等。
因此，根据不同来源和制备方式，Collagen I的分子量可能会有很大的变化范围。
一般来说，市售的Collagen I产品分子量较大，通常在100 kDa以上。
在实验室中，科学家一般使用聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他技术来确定其实际分子量。
胶原蛋白的制作流程
胶原蛋白的制作流程胶原蛋白（Collagen）是一种重要的结构蛋白质，存在于动物组织中，具有构建和维持组织结构的功能。
胶原蛋白的制作流程一般包括以下几个主要步骤：1.原料收集和处理：胶原蛋白的原料一般来自动物组织，如牛皮、鱼鳞等。
首先需要收集原料并进行清洁和处理，以去除杂质和污染。
2.浸泡和提取：经过处理的原料通常会被浸泡在适当浓度的酸性溶液中，以便提取胶原蛋白。
酸性条件有助于胶原蛋白的溶解和分离，并且可以去除其他非胶原蛋白质的组织成分。
3.脱色和净化：提取的溶液中通常会含有一些杂质，如色素和脂肪等。
为了使胶原蛋白的纯度更高，需要进行脱色和净化步骤。
脱色可以通过将溶液暴露在氧气或过氧化氢中来实现。
净化过程一般包括过滤、离心、浓缩和冷冻等步骤。
4.酸解和去除杂质：胶原蛋白的提取通常包括将其酸解（如使用酸性水解酶或酸性溶液），以分解较高分子量的胶原链并减少其粘度。
酸解的条件需要得当，以避免对胶原蛋白的结构和性质造成不可修复的损伤。
之后，通过中和和洗涤等步骤，去除酸性溶液和杂质，以获得相对纯净的溶液。
5.过滤和浓缩：通过使用适当的膜过滤器，对溶液进行过滤，以去除残余的固体颗粒和大分子物质。
接下来，可以通过浓缩胶原蛋白溶液，以便将其浓度提高到所需的水平。
6.杀菌和灭活：为了确保制备的胶原蛋白溶液具有良好的微生物安全性，通常会进行杀菌和灭活处理。
这可以通过加热、紫外线辐射或化学物质来实现，以摧毁或抑制潜在的微生物污染。
7.冷冻干燥和包装：将制备好的胶原蛋白溶液进行冷冻干燥（冻干）处理，以便减少水分含量，并使其更加稳定和易于储存。
冷冻干燥通常使用专用的设备和工艺进行。
最后，将冷冻干燥的胶原蛋白粉末包装并密封，以保护其品质和稳定性。
总结起来，胶原蛋白的制作流程包括原料处理、浸泡和提取、脱色和净化、酸解和去除杂质、过滤和浓缩、杀菌和灭活，最后进行冷冻干燥和包装。
这些步骤在制备过程中都需要严格的操作和控制，以确保制备得到具有高纯度和优良性质的胶原蛋白产品。
胶原蛋白 分子量
胶原蛋白分子量
胶原蛋白是一种体内含量极丰富的蛋白质，主要分布在组织间隙、骨骼、皮肤、筋膜、肌肉、血管、肠壁等处。
它具有维持组织结构、保持细胞形态、提供机械支撑等功能，并参与多种生物过程。
胶原蛋白的分子量很大，通常在100 kDa至300 kDa之间，其中最常见的是200 kDa左右的类型。
它由三个α螺旋肽链缠绕而成，每个螺旋肽链含有约1000个氨基酸残基，其中约三分之一是甘氨酸。
胶原蛋白的分子量对其在体内的功能有很大的影响。
分子量较大的胶原蛋白通常具有更好的机械强度和稳定性，因此在骨骼、肌肉等处的分布较多。
而分子量较小的胶原蛋白则更容易被分解和转化，因此在皮肤、肠壁等处的分布较多。
此外，胶原蛋白的分子量还可以通过不同的加工方式进行调节。
比如，酶解胶原蛋白可以得到分子量较小的胶原肽，这些胶原肽具有更好的溶解性和渗透性，可以更容易地被吸收和利用。
因此，胶原蛋白的分子量不仅对其功能有影响，还对其应用领域和加工方式有一定的指导意义。
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胶原蛋白肽 分子量
胶原蛋白肽分子量摘要：1.胶原蛋白肽的概念与作用2.胶原蛋白肽与分子量的关系3.胶原蛋白肽分子量的测定方法4.不同分子量胶原蛋白肽的应用领域5.选择合适分子量胶原蛋白肽的注意事项正文：胶原蛋白肽是胶原蛋白经过酶解或酸碱处理后，形成的具有生物活性的小分子多肽。
它在人体内有多种重要作用，如促进皮肤弹性、维持关节健康、促进骨骼生长等。
胶原蛋白肽的分子量分布广泛，不同分子量的胶原蛋白肽具有不同的生理活性和应用领域。
胶原蛋白肽的分子量与它的生物活性密切相关。
一般来说，分子量在1000道尔顿以下的胶原蛋白肽具有较好的溶解性和生物利用度，更易被人体吸收。
分子量在1000-5000道尔顿的胶原蛋白肽具有较强的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等活性。
而分子量大于5000道尔顿的胶原蛋白肽，其生物活性相对较低，但具有较强的修复和补充作用。
测定胶原蛋白肽的分子量有多种方法，如高效液相色谱法、激光光散射法、凝胶过滤法等。
这些方法可以帮助研究人员和生产厂家精确地了解产品的分子量分布，从而优化生产工艺和产品性能。
在实际应用中，不同分子量的胶原蛋白肽有着不同的作用领域。
例如，用于美容护肤产品时，分子量在1000道尔顿以下的胶原蛋白肽更容易渗透皮肤，提高皮肤弹性；而在骨关节疾病治疗中，分子量大于5000道尔顿的胶原蛋白肽更具修复和补充作用。
在面对市面上众多胶原蛋白肽产品时，如何选择合适的分子量成为消费者关心的问题。
以下几点注意事项可供参考：1.了解自己的需求：根据自己的身体状况和需求，选择具有相应功能的胶原蛋白肽产品。
2.关注产品分子量：购买时注意产品的分子量分布，确保其符合自身需求。
3.产品质量：选择正规厂家生产的产品，并查看产品的生产日期、保质期等信息。
4.价格合理性：了解市场价格，对比同类产品，避免盲目追求低价。
5.口碑评价：查阅网络评价和用户反馈，了解产品的实际效果。
总之，胶原蛋白肽作为一种具有广泛生物活性的小分子多肽，其分子量对其生理活性和应用领域具有重要影响。
鸡软骨Ⅱ型胶原蛋白的提纯与鉴定
鸡软骨Ⅱ型胶原蛋白的提纯与鉴定目的探讨可溶性Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)的提纯方法。
方法以雏鸡胸软骨为原材料,酸性条件下经胃蛋白酶消化,离心后,应用DEAE-Sephadex A-50进行离子交换层析,透析,盐析,得到纯化的CⅡ。
结果自提的CⅡ样品与CⅡ标准品采用SDS-PAGE电泳显示条带一致。
结论本法提纯CⅡ具有材料丰富,操作简便,重复性好等优点。
标签：Ⅱ型胶原蛋白提取纯化胶原蛋白是结缔组织的重要成分之一,分20余种,其中CⅡ主要存在于软骨基质,占软骨干重的一半以上,研究表明类风湿关节炎(RA)的发病与CⅡ的自身免疫反应有关,国内外均于口服CⅡ诱导免疫耐受治疗RA的相关报道[1～3],该方法有可能成为安全、简便、有效的新型治疗方法。
因此,CⅡ的提纯是我们研究此方法的重要前提,目前国内外文献的报道中多采用盐酸胍来粗提胶原蛋白[4～5],盐酸胍是一种蛋白质变性剂且有一定的毒性,如果在提纯的过程中不能被完全清除,在一定程度上会限制CⅡ的临床应用。
本试验参照Trentham[6]及Miller[7]等方法,用胃蛋白酶法提取,操作简便,重复性好,且提取的CⅡ安全性大。
1临床资料1.1一般资料鸡胸软骨:取材于孵化场17d的雏鸡。
CⅡ:Sigma公司(来源于鸡),5mg/瓶。
1.2主要仪器离心机(日立高速冷冻离心机);层析柜(LKB2023,BROMMA minicoldlab)。
1.3主要试剂胃蛋白酶(Sigma 5g/瓶);DEAE-Sephadex A 50(Amersham);Tris(sigma 100g/瓶)。
1.4CⅡ的粗提将新鲜干净的鸡胸软骨捣碎成糊状,用缓冲液和蒸馏水分别洗涤2遍,然后将其悬浮于0.5mol/L的醋酸中(调pH为2.5),加入胃蛋白酶,4℃下消化72h,低温离心,取上清液-20℃保存。
沉淀物再次悬浮于0.5mol/L醋酸中,同样条件下胃蛋白酶重复消化,离心2次。
将3次上清液混匀,用pH7.6,0.05mol/L Tris-Hcl,0.2mol/LNaCl 溶液充分透析。
胶原蛋白的提取
胶原蛋白的提取实验原料：猪皮，氯仿，乙醇，乙酸，0.05mol/L Tris-HCl缓冲液，NaCl，NaOH，胃蛋白酶，蒸馏水。
实验器材：搅拌机，低温离心机，控温磁力搅拌器，电子天平，透析设备，PH试纸，烧杯，玻璃棒，小刀，研钵。
实验需配药品：A:氯仿/乙醇（2:1）约需400ml，B:0.5mol/L乙酸约3000ml，C:6mol/L NaOH溶液约40ml,D:质量分数0.1％、0.01％的乙酸（透析用），E:含4.5mol/LNaCl的0.05mol/LTris-HCl缓冲液约需200ml。
实验步骤：1,猪皮的前处理：（1）称取猪皮50g，用氯仿/乙醇（2:1，A）溶液对其进行脱脂后切除皮下脂肪，去毛并细切；（2）将组织小块用乙醇和蒸馏水洗涤多次；（3）将洗涤后的组织放入搅拌机中搅拌成糊状，用含4.5mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH 7.5，E）充分洗涤（2h）以去除脂质及血清等成分，低温离心（8000r/min，30min，4℃）取沉淀。
2,提取胶原蛋白：（1）进行前处理后，在沉淀中加入500ml含胃蛋白酶250mg的0.5mol/L冰醋酸（B），搅拌并维持在4℃，提取48h；（2）高速冷冻离心机离心（4000r/min）吸取上清液。
在上清液中加入NaCl至4.4mol/L （NaCl2.2mol）搅拌过夜；（3）低温离心，将沉淀溶于0.5mol/L冰醋酸中，再逐级用2.4mol/L（NaCl1.2mol，以500ml 冰醋酸计），1.7mol/L（NaCl0.85mol）及1.0mol/L（NaCl0.5mol）的NaCl反复盐析、酸溶。
最后得到的上清液即为胶原粗提液。
3,胶原蛋白提纯:（1）在粗提胶原蛋白溶液缓慢加入6 mol/L NaOH溶液（C）调节pH值到7，冷冻离心除掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化钠固体研细粉末，缓慢搅拌，4 ℃静置过夜保存；（2）离心取沉淀，用稀醋酸再次溶解，将溶解液装入透析袋中，用质量分数分别为0.1%、0.01%的乙酸溶液（D）透析1 d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液两次，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液；（3）将纯化的胶原蛋白水溶液采用低温冷冻干燥法制备成纯胶原蛋白样品，备用。
胶原蛋白肽的制备
胶原蛋白肽的制备胶原蛋白是人体中最重要的蛋白质成分之一，具有多种生理功能，如维持身体组织的结构、固定细胞和组织、调节细胞活动等。
胶原蛋白肽是一种特殊的胶原蛋白水解产物，通过胶原蛋白的水解反应制备而成，具有良好的生物可利用性和吸收性。
因此，在医药、保健品、化妆品等领域都有广泛的应用。
胶原蛋白肽的制备主要包括以下几个步骤：1. 胶原蛋白的提取和分离提取胶原蛋白的原料可以来自动物的骨骼、皮肤、软骨、鳞片等组织，也可以使用海洋源的胶原蛋白。
一般来说，骨骼和皮肤是制备胶原蛋白肽的主要来源。
提取胶原蛋白的方法很多，目前比较常用的是酸解法和酶解法。
酸解法采用稀盐酸或稀硫酸将胶原蛋白原料加热，使其部分水解，然后过滤、沉淀和洗涤，最终得到胶原蛋白。
酶解法则是采用特定的酶对胶原蛋白原料进行酶解，水解产物中含有胶原蛋白肽的成分。
2. 胶原蛋白的水解反应经过水解反应后得到的溶液中含有大量的胶原蛋白肽、氨基酸、糖、脂质等杂质，需要进行分离和纯化。
一般来说，可以采用超滤、逆渗透、离子交换等分离纯化手段。
其中，超滤是将胶原蛋白肽溶液通过超滤膜，去除分子量较大的杂质，得到较为纯净的胶原蛋白肽。
4. 胶原蛋白肽的浓缩和干燥经过分离和纯化后得到的胶原蛋白肽溶液体积较大，需要进行浓缩和干燥。
常用的方法有喷雾干燥、真空干燥、冷冻干燥等。
最终得到稳定的胶原蛋白肽粉末。
5. 胶原蛋白肽的性质和质量检测对制备的胶原蛋白肽样品进行性质和质量检测是十分重要的。
胶原蛋白肽的性质包括分子量、种类、特殊结构和理化性质等，可以采用质谱、色谱和光谱等多种手段进行检测。
胶原蛋白肽的质量检测包括纯度、溶解度、微生物限度、重金属含量等方面，需要严格按照国家标准进行检测。
总之，胶原蛋白肽的制备是一个复杂的工艺过程，需要科学的设计和合理的控制条件，才能得到具有良好品质和稳定性的胶原蛋白肽制品。
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胶原蛋白的提取、结构以及分子量测量胶原蛋白的提取、结构以及分子量测量综述一、前言胶原蛋白(collagen)是与各组织、器官机能有关的功能性蛋白，约占人体总蛋白的三分[1]之一,存在于细胞外间质，是具有三股螺旋结构的蛋白质家族。
胶原是人体重要的细胞外基质成分,在细胞生物学中有重要应用价值。
胶原是一个大的蛋白家族，至少有15个型别，各[2]型胶原都具有一定的分子构型和组织分布特点，其中以?型胶原分布最广，含量最多。
胶原蛋白(或称胶原)是按是否形成有周期性横纹的胶原原纤维(collagenous fibril)可将其分为原纤维胶原蛋白(fibrillar or fibril-forming collagen)和非原纤维收原蛋白(nonfibrillar or non,fibril,forming collagen)两大类。
目前己发现的胶原蛋白类型己不下19种，原纤维胶原蛋白包括I、II、III、V、XI 型胶原，在体内以胶原纤维的形式存在。
胶原纤维是骨骼、肌腱、骨间膜、皮肤、软骨、韧带等器官的基本结构物质，使这些器官具有很高的抗张强度。
胶原纤维与组织器官的生物力学特性密切相夫原纤维胶原蛋白包括I、II、III、V、和XI型胶原，其余均属于非原纤维胶原蛋白。
非原纤维胶原蛋白具有胶原蛋白的基本特征，即三股螺旋结构，但其结构、分布和功能更具有多样性、非原纤维胶原蛋白按其,,27超分了结构可进一步分类。
(l)结合于胶原原纤维表面的胶原蛋白(fibril associatedcollagens with interrupted triple helice FACIT) 包括IX XII XIV XVI X XI型胶原。
(2)形成网状结构的胶原蛋白包括IV VIII X型胶原。
(3)形成串珠状纤维(beaded filament)的胶原蛋白有VI型胶原。
(4)形成固着原纤维(anchoring fibril)的胶原蛋白，有VII型胶原。
(5)有跨膜区的胶原蛋白，有XIII和 XVII型胶原。
(6)结构尚未明确的胶原蛋白包括XV和XVIII型胶原等。
胶原不仅作为组织的支持物，而且对细胞、组织乃至器官行使正常功能及伤口愈合都有重大影响。
胶原作为医用生物材料比以往应用的金属、陶瓷或化学材料具有更大的优越性，因此近20年来已被广泛用于临床(近年来，世界各国已将胶原制品广泛应用于临床修复软组织缺损，覆盖烧伤创面、整形、牙周引导组织再生、口腔种植体、牙槽嵴再建及颌骨空腔修复。
二、胶原蛋白的提取胶原多从牛皮、肌腱、鼠尾等部位提取，由于胶原是一个大的蛋白家族，是细胞外间质的四大组分之一，几乎分布于所有的组织中。
到目前为止已发现脊椎动物的胶原类型达十多种之多，各型作用不一。
胶原的异常改变涉及许多纤维化疾病，在肿瘤的发生与转移中，胶原的分布和类型也发生改受。
因此在提取时常将各型分别提取。
目前从组织提取胶原多采用分级盐析的方法，在酸性条件下，I型和Ill 型胶原沉淀的盐浓度临界点相近;在中性条件下，III型和IV型胶原沉淀的盐浓度临界点又很接近。
因此提取时难度较大，程序复杂，需过柱纯化，而且花费时间长，易发生胶原变性。
主要的提取方法分述如下:I型和II型胶原主要分布于细胞，组织之间及结缔组织间质中，属于间质胶原，在脏器纤维化病理过程中， I型和II型胶原起着重要作用。
I型胶原是结缔组织间质中最主要的成分，一般制品多以I型胶原为材料(文献上I型胶原的提取一般采用多次超速高心的办法。
[3]李成章、樊明文从人胚骨中提取了I型胶原，用于胶原制品的制作。
采用胚胎骨组织来提取胶原(一般认为骨组织仅含有I型胶原，选用骨组织作为提取原料可省去分型、过柱纯化等烦杂工序，简便经济，易获得纯度较高的I型胶原(他们的方法为将脱钙骨粉浸入0.5mol/LHAc24,48h，取上清缓慢加入研磨精细的NaCl(终浓度为4mol/L)，搅拌过夜离1心35 000×g，20min(下同)，去上清，其沉淀物加入0.5 mol/L HAc透析溶解，离心，取上清依次加入0.lmol/LTris,HCI(终浓度为0.01mol/L)，5mol/LNaOH(调pH至7.4)，NaCl(终浓度为4mol/L)，搅拌过夜，离心，去上清(沉淀以4 mol/L NaCI(0.05 mol,L Tris,HCI洗一次，再加0.5mol/LHAC透析溶解，离心去沉淀，上清装入透析袋内，对NaCl溶府透析(平衡后NaCl浓度为1O,)离心去上清，沉淀物用0.5mol,LHAC透析去盐溶解，离心去沉淀，上清浓缩冻干以上所有液体及操作温度均为4?。
为提高抽提纯度，骨粉应越细越好，脱钙必须完全(采用EDTA脱钙，可使一些非胶原蛋白，如骨连接蛋白[4](osteonectin)随之溶去，有利于提高胶原的纯度(抽提的次数不应太少，否则纯度不够，抽提次数太多则易发生胶原变性(他们所用抽提次数为3,4次，结果表明，所提胶原具有较高纯度，可用于胶原制品的制作。
[5]首都医科大学宣武医院普外实验室的孙海晨、李铎、刘爽、孙家邦对以往的I型胶原蛋白的提取作了一些改进，只进行了2次超速离心减少了步骤。
一般文献中在I型胶原的-1 提取过程中要不断使用不同浓度的NaCI,0.05mol?LTris-HCI缓冲液反复进行离心、抽提。
他们实验将其改为在3,醋酸的酸性条件下，直接加入 40mL30,浓盐水，不仅减少了步骤还节省了试剂和时间。
他们的方法为:取鼠尾浸入75,酒精消毒 30min移入PBS液中洗2次，去皮、抽取鼠尾腱，放入PBS液中洗2次，高速组织粉碎机粉碎后放入 3,醋酸(每尾 200 mL)，48h，1.2万克离心2h。
吸取上清加入30,浓盐水40 mL盐析。
离心4 000g，30min。
将沉淀溶入50mL0.1,醋酸内，置透析袋内与500 mL1mol,L的HCI透析48h，其间换水5次。
这样可得到透明清亮的胶原溶液。
加入0.15mL氯仿，敞开瓶口，用无菌纱布包住，置无菌工作台48h使氯仿挥发。
取5 mL溶液经SEXTRYTM冷冻干燥机冷冻干燥，[6]定量胶原浓度为3.5g/L。
王凯慧、李雅杰等从猪囊尾蚴中提取胶原蛋白，用紫外分光仪、SDS,PAGE、透射电镜和ELISA等方法对猪囊尾蚴胶原蛋白作了初步分析。
表明:(I)猪囊尾拗中含有一定量的胶原蛋白;(2)胶原蛋白主要以I型为主，分子量在80kDa,130kDa之间;(3)通过酶联免疫吸附实验，检测其抗原性，证明其对人具有很强的免疫性。
[7]刘德莉、徐蓉等从鸡趾肌腱中提取了I型和II型胶原。
方法为:在9mL细胞培养液中，加入1mL蛋白酶抑制剂(0.1mol/LTris,HCI、pH7.4、0.4mol/L NaCl、0.25mol/LEDTA、20mmol/L PMSF及10mmoL/LNEM)0.33mL乙酸溶液(0.5mol/L)及胃蛋白酶溶液(10g/L)，混匀后，于4?温和搅拌6h在4?离心(16 000 r/min)30min。
留上清液，缓慢加入410mg氯化钠粉末，边搅拌边混匀溶解，于4?冰箱盐析过夜。
第2天取出，高速低温离心(l6 000 r/min)30min，取沉淀物，冷冻干燥2h，即为培养液中的胶原提取物。
将组织标本称重后，以PBS洗净，剪碎至lmm大小，置10mL0.5mol/L乙酸溶液膨胀过夜。
4?匀浆(l0 000r/min)5 min，加入胃蛋白酶(酶量与湿组织之mg比为1:100)，于4,冷室搅拌消化6h，加TriS至pH7.4中止酶解，再4?离心(16000 r/min)45min。
取上清液，精确称取氯化钠(0.7mol/L，于10mL上情液中加入410mg氯化钠)，在冰浴中，于上清液中边缓慢搅拌边加入氯化钠至彻底溶解，置4?冰箱盐析过夜，再4?离心(16000r,min)45min。
取沉淀物，冷冻干燥2h，即为组织中的胶原。
[8] 王新禾、张月娥等以限制性胃蛋白酶消化和分步盐析法从人胎盘中提取高纯I、III型胶原分别免疫家兔，经兔疫吸咐制备单一特异的抗人I、III型胶原抗血清。
他们的方法为取胎盘去除脐带和羊膜、捣碎、匀浆;限制性胃蛋白酶消化，4?20h(每20g湿重组织加入0.05%胃蛋白酶、0.5 mol/L醋酸100ml);消化上清液(酸性)中加NaCl至1.0mol/L，沉淀为胶原混合物:随后在中性条件下分别以1.5mol/L 、2.5mol/LNaCl盐析，反复数次分别得到I、III型胶原的初纯品;用DE,52柱层析去除酸性大分予，得到纯化的I、III型胶原。
II型胶原是关节软骨中主要细胞外间质之一，多种风湿性疾病的发生与II型胶原异常有关。
现己知类风湿关节炎发病与II型胶原自身免疫反应有关，用II型胶原免疫某些动物2可诱导出多关节炎，然而口服II型胶原可通过诱导免疫耐受来治疗类风湿关节炎。
梅焕平、[9]张源潮、李华研究了II型胶原的微量提取和纯化方法。
3方法见上表。
研究采用限制性胃蛋白酶降解法，去除部分伸直端尾肽，螺旋结构不受影响，故仍保持II型胶原分了完整性，抗原性基本不受影响。
微量提取法主要有如下技术改进:(l)使用合适浓度的氨基己酸可有效地抑制胶原酶活性，减少胶原蛋白破坏，提高II型胶原收率;(2)在中性条件下只用2.4M氯化钠盐析去除I 型胶原蛋白，再用4.0M氯化钠沉淀II型胶原，沉淀物经透析后使需干燥溶液体积减少80,，使低温真空干燥容旯完成,又减少了II型胶原丢失。
[10]秦定一、单英等参照Byers等方法并略作改良分别从家兔和胎儿2种不同皮肤中提纯[11]2了III型前胶原肽。
方法为:所有操作均在4?进行，将皮肤切成约lmm大小碎片，置于pH7.4，150 mmol,L Tris,HCI20mmol/LEDTA、10mmol,LPHCH2SO2F、10mmol/L PMB溶液中匀浆，在4?下提取 48h。
2 000 r,min离心10min，上清中加入。
W (硫酸铵)=20%。
离心15 000r/min 20min，用上述提取液重溶沉淀，加W(NaCl)=10,，30000r/min离心20min。
用pH7.6，200mmol/LNaCl、50mmol/L Tris-HCI溶液溶解沉淀即为III型胶原(Collagen Type III， C III)和III型前胶原(Procollagen Type III，PC III)粗提物。
将上粗提物充分透析后上 DEAE-32纤维素柱层析，用pH7.5，2mol/L脲、20mmol/LNaCl、30mmol/LTris-HCI溶液平衡。
洗脱,以去除酸性糖蛋白。
为分离CIII与PCIII,再次经DEAE-32纤维素柱层析，用pH7.0，2mol/L脲，0.02mol/L NaCl、0.05mol/LTris,HCI溶液平衡、洗脱,待穿过峰结束，用0.02,0.2mol/L NaCl梯度洗脱，分别收集CIII与PCIII。