维生素D_3联合高脂饲料建立大鼠动脉粥样硬化模型重点
丹皮酚的临床应用
丹皮酚的临床应用作者：黄昕玥龙凯花来源：《科技视界》2017年第22期【摘要】目的：为丹皮酚（Pae）的临床应用提供参考。
方法：通过查阅近几年的丹皮酚相关文献，对其临床常见应用进行总结与概述。
结果与讨论：丹皮酚对治疗冠状动脉硬化、缺血再灌注损伤、血栓等疾病均有显著的临床作用。
阐述并了解丹皮酚的临床作用，有助于指导临床合理用药，也可促进丹皮酚新型给药系统的深入研究。
【关键词】丹皮酚；研究进展；临床应用丹皮酚（Paeonol，Pae）又称牡丹酚，为中药毛茛科植物牡丹、芍药和萝摩科植物徐长卿中提取分离出来的药效成分[1]。
现代研究表明，Pae具有抗炎、抗过敏、抗氧化、抗肿瘤等广泛的药理作用[2]，目前临床主要用于抗血栓、抗冠状动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤等。
Pae 的药理作用广泛、毒副作用小，近年来其临床应用范围也日趋扩大。
1 药理作用1.1 对心血管系统的作用1.1.1 抗动脉粥样硬化孙慧萍[3]采用高脂饲料喂养和维生素D3腹腔注射的方法建立大鼠AS模型，将大鼠随机分为正常组、模型组、丹皮酚高、低剂量组，ELISA法测定TNF-α和IL-6水平；免疫组化法检测MCP-1和ICAM-1的表达。
结果表明，丹皮酚高剂量组（20mg﹒kg-1）能改善AS大鼠的主动脉病变，可明显降低血清TNF-α和 IL-6水平，可显著下调主动脉MCP-1和 ICAM-1的表达。
1.1.2 心肌梗死时召平[4]采用左冠状前降支（LAD）结扎法制作在体大鼠急性心肌梗死模型，在心电图评价的基础上，将造模成功的大鼠随机分为模型组、丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组，另有只穿线不结扎的假手术组，测定各组大鼠心脏质量指数及梗死面积，采用实时荧光定量RT-qPCR技术检测各组心肌组织 Smad2，Smad3，Smad7 mRNA 的表达水平。
结果表明，与模型组比较，丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组大鼠心肌梗死面积明显减少，心脏质量指数降低；模型组 Smad2，Smad3 mRNA的表达水平均明显高于假手术组，Smad7 的表达低于假手术组；丹皮酚各剂量干预组Smad2，Smad3 mRNA的表达明显低于模型组，Smad7 mRNA 的表达则明显强于模型组。
叶酸对冠心病大鼠血清同型半胱氨酸和血管内皮生长因子的影响
叶酸对冠心病大鼠血清同型半胱氨酸和血管内皮生长因子的影响吕风华;高建芝;崔佳佳;张素荣【摘要】目的观察叶酸、维生素B12对冠心病大鼠模型血清同型半胱氨酸(HCY)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法将健康4周龄雄性SD大鼠60只(体重110±10g)随机分为正常对照组、高脂饮食组、叶酸组、维生紊B12组、叶酸及维生素B12组.正常对照组给予普通饲料喂养;余各组给予高脂饲料喂养,第12周末测定各组大鼠血清血脂、HCY、VEGF含量;光镜、电镜查看腹主动脉组织学改变;利用Western blot检测各组大鼠腹主动脉中VEGF的表达.结果用药12周后,单独应用叶酸或联合维生索B12都能有效地降低冠心病模型大鼠血清HCY水平(P＜0.01),升高血清和血管中VEGF水平(P＜0.05),同时能改变VEGF的蛋白表达(P＜0.05).结论高脂饮食可以影响血清和血管中HCY、VEGF的水平,而应用叶酸或联合维生索B12可以改善或减轻高脂状态所造成的血管内皮损伤.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2011(032)004【总页数】4页(P449-452)【关键词】冠心病;大鼠;血清同型半胱氨酸;血管内皮生长因子;叶酸【作者】吕风华;高建芝;崔佳佳;张素荣【作者单位】郑州大学第一附属医院心血管内科,河南郑州450000;新乡医学院第一附属医院心血管内一科,河南卫辉453100;新乡医学院基础医学院,河南新乡453003;新乡医学院在读研究生,河南新乡453003;新乡医学院第一附属医院心血管内一科,河南卫辉453100【正文语种】中文【中图分类】R543.3冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)是严重危害人类健康的常见病,是人类死亡的常见原因之一,而动脉粥样硬化是冠心病发生的主要的病理基础。
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种复杂的慢性炎症性病变,以动脉内皮细胞功能障碍为起点,进而发展到众多炎性细胞因子参与,损坏内皮屏障的因素如血脂代谢异常、高同型半胱氨酸血症[1-3](homocysteine,HCY)等,都与动脉粥样硬化密切相关。
维生素D3联合尼古丁诱导的血管钙化亚慢性模型的建立
维生素D3联合尼古丁诱导的血管钙化亚慢性模型的建立王茜倩;闫惠;安春娜;蒲小平【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2009(25)1【摘要】目的建立维生素D,(vitamin D,)联合尼古丁(nico-fine)诱导的大鼠血管钙化亚慢性动物模型.方法采用维生素D3(300 kIU·kg-1)肌注和尼古丁(25 mg·kg-1,5 ml·kg-1)灌胃制备大鼠血管钙化亚慢性模型,定期测定大鼠体重和尾动脉血压;在造模的第8周、第16周,分别测定大鼠心脏系数、血浆钙、磷含量、血管钙含量、血管碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和血管钙沉积等与血管钙化相关的指标,对胸主动脉进行Von Kossa染色.结果第3～8周,VDN(vitamin D3and nicotine)大鼠尾动脉压持续增加,与对照组相比差异均有显著性(P均<0.05).第9周后,仍然维持在较高水平.与对照组相比,VDN组大鼠第8周心脏系数升高8.4%(P<0.01);血钙、血磷分别升高3.2%(P<0.01)和12.0%(P<0.05);血管组织钙含量升高27.0%(P<0.01);血管ALP活性与血管钙沉积分别高151.8%和68.8%(P均<0.01).与对照组相比,第16周VDN组大鼠心脏系数升高7.7%(P<0.01),血钙升高3.2%(P<0.05),血磷降低1.4%;血管组织钙含量升高51.0%(P<0.01);血管ALP活性与血管钙沉积分别高87.2%(P.001),31.6%(P<0.05).Von Kossa 染色结果显示第8周和第16周VDN 组大鼠胸主动脉中膜均有大量深色颗粒沉积.结论维生素D3和尼古丁诱导的16wk大鼠血管钙化亚慢性模型可作为药物筛选和机制研究的疾病模型.【总页数】4页(P129-132)【作者】王茜倩;闫惠;安春娜;蒲小平【作者单位】北京大学药学院分子与细胞药理学系;北京大学药学院分子与细胞药理学系;北京大学药学院分子与细胞药理学系;北京大学药学院分子与细胞药理学系;天然药物及仿生药物国家重点实验室,北京,100083【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.121【相关文献】1.白藜芦醇对维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化的抑制作用 [J], 刘国栋;白静;李瑞生;刘秀华;王禹2.应用高脂饮食联合维生素D3建立慢性系膜增殖性肾炎血管病变大鼠模型 [J], 张承英;张建荣;耿燕秋;丁韬3.Ghrelin在维生素D3和尼古丁诱导大鼠血管钙化中的作用 [J], 马涛; 王倩; 程治源; 叶挺; 张宸铭; 盛瑛; 宗刚军4.姜黄素对维生素D3和尼古丁诱导血管钙化大鼠血管中组织蛋白酶D表达的影响[J], 付尧;吴冬冬;李晓东5.睾酮对维生素D3和尼古丁诱导的主动脉血管钙化的影响 [J], 王倩;马涛;程治源;叶挺;凌秋洋;吴婷;宗刚军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
动物实验期末重点整理
动物实验期末重点整理实验动物学期末重点题型：选择、判断、填空、名词解释第⼀章绪论1.实验动物的基本概念是什么？指的是⼈⼯饲养，对其携带的微⽣物实⾏控制，遗传背景明确或者来源清楚的，⽤于科学研究、教学、⽣产、检定及其它科学实验的动物。
2.实验动物的四个标准化包括哪些？它包括实验动物的：（1）遗传学控制标准、（2）微⽣物学和寄⽣⾍学控制标准、（3）设施环境控制标准、（4）饲料营养质量控制标准。
3.⽣命科学研究所必需的四个基本条件是什么？AEIRAnimal 实验动物Equipment 仪器设备Information 信息Reagent 试剂4.什么是动物福利？动物福利是指动物在整个⽣命过程中应得到⼈类的保护，其基本原则是要善待动物，保证动物的健康和快乐。
5.国际上对动物实验伦理有哪些要求？1.动物居住空间应符合标准，注意⽇常饲养管理，不使动物陷⼊饥饿、缺⽔和患病。
2.尽可能的采⽤替代法最少地使⽤和牺牲动物。
3.在必须使⽤⽝、猫和猴时，在实验前应进⾏训练，尽可能地减少动物的恐惧和不安。
4.实验结束和动物不可能恢复时，应采取安乐死。
5.要爱护动物和对由于试验死亡的动物应持有怜悯和感激之情。
6.什么是动物实验的“3R原则”？Replacement 替代：尽可能⽤低等实验动物替代⾼等实验动物，⽤离体培养的细胞、组织、器官代替动物个体，⽤微⽣物代替动物，并能获得相同试验效果的科学⽅法。
Reduction 减少：把使⽤动物的数量降低到实现科研⽬的最⼩量Refinement 优化：改善动物设施、饲养管理和实验条件，精选实验动物、技术路线和实验⼿段，优化实验设计和实验操作技术，熟练掌握动物实验技术，减少对动物的损伤，减轻动物的痛苦和应激反应。
第⼆章实验动物的遗传学控制1. 请说出实验动物种、品种、品系的概念。
（1）种（Species）：是⽣物分类学上的基本单位，由⾃然选择形成。
（2）品种（stock）：是种以下的⾮⾃然分类单位，是⼈们根据不同需要⽽对动物进⾏改良、选择、定向培育，具有某种特定外形和⽣物学特性的动物群体，其特性能较稳定遗传。
绞股蓝总甙片联合辛伐他汀治疗高脂血症作用研究
绞股蓝总甙片联合辛伐他汀治疗高脂血症作用研究发表时间：2015-12-10T10:49:06.387Z 来源：《中医学报》2015年8月作者：张永昕1 李莎恩1 俞发1 彭红波2[导读] 解放军458医院药剂科广东广州番禺区何贤纪念医院检验科随着经济发展，我国国民饮食结构由以粮食和蔬菜为主转变成高脂肪、高蛋白、高热量的三高饮食。
张永昕1 李莎恩1 俞发1 彭红波21.解放军458医院药剂科广东广州 510602；2.广东广州番禺区何贤纪念医院检验科广东广州 510602【摘要】目的：探讨绞股蓝总甙片与辛伐他汀联合治疗高脂血症的作用。
方法：SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、绞股蓝总甙组（18mg/kg）、辛伐他汀组（4mg/kg）、联合治疗组（绞股蓝总甙18mg/kg、辛伐他汀4mg/kg），每组10只。
采用维生素D3腹腔注射加高脂饲料饲喂法建立高脂血症大鼠模型，各组造模同时给药，观察大鼠一般情况及体重变化，给药10周后麻醉取血，ELISA法测定大鼠血脂、脂联素（ADP）、瘦素（LEP）的含量。
结果：与模型组比较，绞股蓝总甙片与辛伐他汀联合治疗可显著降低大鼠血清TC、TG、LDL-C水平（P<0.01），显著升高HDL-C水平（P<0.01）；同时联合治疗可显著升高大鼠血清脂联素（P<0.01）和显著降低瘦素水平（P<0.01），且其对血清脂联素水平的升高作用优于绞股蓝总甙片或辛伐他汀单用组。
结论：绞股蓝总甙片联合辛伐他汀对高脂血症具有明显的治疗作用。
【关键词】绞股蓝总甙片；辛伐他汀；高脂血症；联合治疗【中图分类号】R453 【文献标识码】B 【文章编号】1674-8999（2015）8-0408-02Effect of Gynostemma pentaphyllum of total glucoside Tablets Combined with simvastatin on hyperlipidemia in treating hyperlipemia 【Abstract】Objective：To observe the effect of Gynostemma pentaphyllum of total glucoside combined with western medicine on hyperlipidemia in treating hyperlipemia. Method：SD male rats were randomly divided into normal group、the control group、Gynostemma pentaphyllum of total glucoside Tablets group（18mg/kg）、simvastatin group（4mg/kg）、the combination group，ten rats for each group. The high-lipid diet rat models were made by intraperitoneal injection of all Vitamin D3 at once on high-lipid diet rats. At the same time , each mouse was administrated drug respectively. Observeing their growing situation and weight changes during the time. Ten weeks later, the rats were drawed blood after anesthesia, then rats serum bloodlipid (TC、TG、LDL-C、HDL-C) and serum adiponnectin, leptin were measurated adopting the ELISA method. Results：Compared with the control group, the combination group could markedly discrease the serum TC、TG、LDL-C（P<0.01）, increase the the serum HDL-C（P<0.01）; at the same time, the combination group could enhanced the serum adiponnectin （P<0.01）, and reduce serum leptin markedly（P<0.01）. In addition, the rising role of the combination group on serum adiponnectin was signficiantly better than Gynostemma pentaphyllum of total glucoside group or simvastatin group solely. Conclusion：The therapeutics of Gynostemma pentaphyllum of total glucoside combined with western medicine has a dramatical role in treating hyperlipemia.【Keywords】Gynostemma pentaphyllum of total glucoside Tablets；simvastatin；Hyperlipemia；Combination therapy 随着经济发展，我国国民饮食结构由以粮食和蔬菜为主转变成高脂肪、高蛋白、高热量的三高饮食，高脂血症成为常见病，由此导致的冠心病、动脉粥样硬化以及脑血栓等心脑血管疾病也已成为严重威胁人类健康的主要疾病。
高脂血症大鼠模型几种造模方法的比较
高脂血症大鼠模型几种造模方法的比较孙赫;李文雄【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2014(000)003【摘要】通过4种具有代表性的造模方法诱导高脂血症大鼠模型，筛选出理想的高脂血症造模方法。
将健康SPF级雄性SD大鼠50只随机平均分为空白组、模型组Ⅰ～Ⅳ。
空白组正常基础饲料喂养；各模型组分别采用高脂饲料喂养和高脂乳剂灌胃法诱导造模，模型组Ⅰ：基础饲料59％＋食用油15％＋蛋黄粉10％＋蔗糖10％＋胆固醇6％；模型组Ⅱ：基础饲料56．8％＋食用油15％＋蛋黄粉10％＋蔗糖10％＋胆固醇6％＋胆酸钠2％＋丙基硫氧嘧啶0．2％；模型组Ⅲ：正常饲料喂养配合高脂乳剂灌胃（高脂乳剂配方：吐温60％＋食用油15％＋胆固醇6％＋胆酸钠2％＋丙基硫氧嘧啶0．2％）；模型组Ⅳ：一次性腹腔注射维生素D360万单位/kg后，饲养与灌胃方法同模型组Ⅲ。
在造模10、20、40 d时经大鼠眼眶静脉丛取血，提取血清，检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）并计算肝指数水平。
其中模型组Ⅱ、模型组Ⅲ和模型组Ⅳ均出现血脂代谢紊乱，肝指数明显升高（P ＜0．05），提示高脂血症模型构建成功，且模型组Ⅳ造模周期明显较模型组Ⅱ、Ⅲ缩短。
%To screenr an ideal method which can build hyperlipidemia rat model out of different modeling methods,we divided 50 rats stochastically as the blank group,the model groupⅠ,the modelgroupⅡ,the model groupⅢ and the model groupⅣ,10 rats in each group.Except the blank group,four different mod-eling methods were usedto build hyperlipidemia rat models.GroupⅠ:basal diet(5 9%)+ edible oil(1 5%)+ yolk powder(10%)+ sucrose (10%)+ cholesterol(6%);Group Ⅱ:basal diet(56.8%)+ edible oil (15%)+ yolk powder(10%)+ sucrose (10%)+ cholesterol(6%)+ sodium cholate(2%)+ propyl-thiouracil(0.2%);Group Ⅲ:normal diet respectively with intragastric administration of fat emulsion (fat emulsion formulation:Tween(60%)+ edible oil(15%)+ cholesterol(6%)+ sodium cholate(2%)+propylthiouracil(0.2%));Group Ⅳ:before in tragastric administration of fat emulsion-the same as model group Ⅲ,give an intraperitoneal injection of vitamin D3 60 000 U/kg.We took the orbital venous plexus blood of all the rats in 10 d,20 d and 40 d,isolated sera then detected the levels of TC,TG,HDL-C and LDL-C by ELISA,and detected the levels of body weights and the liver indexes of rats in each group.The results showed that rats became hyperlipoidemic in groups Ⅱ,ⅢandⅣ,and the hyperlipidemia model was formed pared with model group Ⅱ and group Ⅲ ,the modeling time of group Ⅳ was sig-nificantly reduced.【总页数】5页(P78-82)【作者】孙赫;李文雄【作者单位】广州中医药大学第三临床医学院，广东广州 510405;广州中医药大学第三临床医学院，广东广州 510405【正文语种】中文【中图分类】R332【相关文献】1.大鼠实验性高脂血症两种造模方法的比较 [J], 张智;闪增郁;向丽华;陈燕萍;李爽姿;张雪亮2.大鼠实验性高脂血症五种造模方法的比较 [J], 张东;武海军;陈士萍;应康;杨玉梅3.大鼠与家兔高脂血症模型造模方法及特点的比较 [J], 柳玉霞;王学林;李树良;杨旭丽4.高脂血症大鼠模型几种造模方法的筛选及优化 [J], 孙赫;梁桂洪;林勇凯;黄宇新5.高脂血症大鼠模型4种造模方法的筛选及优化 [J], 吴栩;韦伟标;刘少斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
芪乌调脂颗粒稳定大鼠动脉粥样硬化斑块的作用机制
芪乌调脂颗粒稳定大鼠动脉粥样硬化斑块的作用机制 于妍;杨阿妮 【摘 要】目的:观察芪乌调脂颗粒对动脉粥样硬化大鼠炎症介质、基质金属蛋白酶、血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探索芪乌调脂颗粒稳定动脉粥样硬化斑块的作用机制.方法:将Wistar大鼠80只随机分为空白组、模型组、芪乌调脂颗粒组、阿托伐他汀组、芪乌调脂颗粒+阿托伐他汀组,除空白组外均给予高脂饮食喂饲4周,病理提示造模成功后按组别分别给予芪乌调脂颗粒、阿托伐他汀钙,连续给药8周,测定超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,光镜下观察主动脉组织病理形态学改变,并利用免疫组织化学法观察VEGF及基质金属蛋白酶9(MMP-9)在主动脉的表达情况.结果:1)与空白组比较,模型组大鼠血清hs-CRP水平明显上升,主动脉组织中MMP-9、VEGF阳性表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01);2)与模型组相比,阿托伐他汀组、芪乌调脂颗粒+阿托伐他汀组hs-CRP、MMP-9阳性反应降低,芪乌调脂颗粒+阿托伐他汀组VEGF阳性表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);3)与阿托伐他汀组相比,芪乌调脂颗粒+阿托伐他汀组hs-CRP、MMP-9、VEGF降低差异有统计学意义(P＜0.05).结论:芪乌调脂颗粒协同阿托伐他汀钙可通过降低炎症介质、基质金属蛋白酶、血管内皮生长因子起到稳定动脉粥样斑块的作用.
【期刊名称】《西部中医药》 【年(卷),期】2018(031)007 【总页数】5页(P17-21) 【关键词】动脉粥样硬化;高敏C反应蛋白;基质金属蛋白酶9;血管内皮生长因子;芪乌调脂颗粒 【作 者】于妍;杨阿妮 【作者单位】甘肃省中医院心血管病科,甘肃 兰州 730050;甘肃省中医院心血管病科,甘肃 兰州 730050
【正文语种】中 文 【中图分类】R541
目前动脉粥样硬化(AS)性疾病的发病率及死亡率逐年上升，并呈年轻化趋势［1］。AS不稳定斑块破裂所形成的急性血栓是心血管恶性事件发生的主要原因［2］。有研究［3］表明，炎性因子贯穿粥样斑块形成的开始、过程和最终破裂的全过程。C-反应蛋白(CRP)是一种重要的心血管炎性标志物，相关研究［4］发现，CRP在斑块破裂、不稳定型心绞痛的发生中发挥了重要作用。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是由炎症细胞分泌的可降解基质的蛋白酶，其具有促进粥样斑块纤维帽中基质成分降解的作用，从而加速斑块破裂。基质金属蛋白酶9(MMP-9)是MMPs家族中的重要成员,在粥样斑块处的血管重构、斑块的不稳定及其破裂中扮演着重要角色［5］。近年研究［6］发现，斑块内新生血管形成与As斑块的稳定性密切相关，As斑块内常出现病理性新生血管，它们可能促进粥样硬化病变的发展，甚至诱发斑块内出血和斑块破裂及其并发症的发生。 本研究“以方测证”，观察芪乌调脂颗粒对炎症因子、MMPs、VEGF的影响，及对维持斑块稳定性的作用，为中医药防治AS的作用环节和作用靶点提供新的实验依据。 1 材料与方法 1.1 实验药品 芪乌调脂颗粒(生黄芪、制首乌、泽泻、郁金、生山楂、决明子、片姜黄、水蛭等组成，每包含生药6 g，由甘肃省中医院制剂科制备，登记号：2013Y0228)；阿托伐他汀钙片(北京嘉林药业股份有限公司，批号：130127，10 mg/片)。 1.2 实验动物 健康SPF级Wistar大鼠80只，雌雄各半，体质量(200±20)g，由甘肃中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：医动字第0000852号。 1.3 实验试剂 胆固醇(上海伯奥生物科技有限公司，批号：20130122)；胆酸钠(上海源聚生物科技有限公司，批号：20131102)；丙基硫氧嘧啶(南通制药总厂，批号：130514)；超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒［尚柏生物医学技术(北京)有限公司，批号：20131207］；兔抗鼠 MMP-9(产品编号：AW0219，批号：20130324)，兔抗鼠 VEGF(产品编号：BA0407，批号：20130315)，二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(产品编号：AR1022，批号：20130223)，牛血清白蛋白(BSA)封闭液(产品编号：DS0619，批号：20130315)，均购自武汉博士德生物工程有限公司。 1.4 实验仪器 Tissue-Tek.VIPTM5Jr全封闭组织脱水机(日本，樱花检验仪器株式会社)；Tissue-Tek.TECTM5组织包埋机(日本，樱花)；AO型切片机(美国，赛默飞)；OLMPUSCHC-212型双目生物显微镜(日本，奥林巴斯)；ALCYON300全自动酶标仪(美国，雅培)；LD4-2A型高速台式冷冻离心机(中国，北京京立)；PYX-DHS-50×60型隔水恒温培养箱(中国，上海跃进)；WKY型 5-25 μL型微量移液器(中国，上海荣泰)；BI-2000型医学图像分析系统(中国，成都泰盟)。 1.5 实验方法 1.5.1 动物分组与给药 健康SPF级Wistar大鼠80只，雌雄各半，体质量(200±20)g，采用随机数字表法分为5组，每组16只，分别为：空白组(生理盐水)；模型组(生理盐水)；芪乌调脂颗粒组(芪乌调脂颗粒3 g/kg，相当于临床用量10倍)；阿托伐他汀组(阿托伐他汀1.7 mg/kg，相当于临床用量10倍)；芪乌调脂颗粒+阿托伐他汀组(芪乌调脂颗粒3 g/kg+阿托伐他汀1.7 mg/kg，相当于临床用量10倍)；造模成功后将上述药物按10 mL/kg灌胃给药，1次/d，连续8周。 1.5.2 模型制备及取材 适应性饲养1周后开始造模，模型组、芪乌调脂颗粒组、阿托伐他汀组、芪乌调脂颗粒+阿托伐他汀组(芪乌+阿托组)给予高脂饲料(81.3%基础饲料、10%猪油、5%白糖、3%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶)，同时腹腔注射维生素D3注射液60万U/kg，分3天完成；空白组给予基础饲料(麸皮25%、面粉20%、豆料20%、玉米 20%、米粉 10%、骨粉 3%、鱼粉 2%)，同时腹腔注射等容量生理盐水，分3天完成。4周后从模型组和空白组各取2只处死，用于检验造模是否成功。 末次给药后大鼠禁食不禁水，24小时后各组大鼠采静脉血2 mL，测定血脂各项。股动脉取血2 mL，全血在6 000 r/min条件下离心5分钟，取血清测定hs-CRP。将大鼠脱颈处死后取主动脉组织置于10%甲醛溶液中，待检。 1.6 指标检测 1.6.1 各项检测指标 采用酶法测定甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。 1.6.2 光镜检查主动脉病理形态切片 用10%甲醛固定主动脉血管，脱水，石蜡包埋；将石蜡包埋的组织用病理切片机切成厚5 μm石蜡切片；脱蜡、水化；HE染色。 1.6.3 血清hs-CRP的测定 采用ELISA法测定大鼠血清中hs-CRP含量，用酶标仪在450 nm处测定OD值，根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。 1.6.4 SABC法检测主动脉组织切片中MMP-9、VEGF的表达 石蜡切片滴加3%H2O2，室温静置5～10分钟以消除内源性过氧化物酶的活性；热修复抗原：将切片浸入0.01 M枸橼酸盐缓冲溶液(pH 6.0)的容器中，并将此容器置于盛有一定数量自来水的大器皿中，电炉上加热煮沸15～20分钟，室温冷却 20～30 分钟，PBS(pH 7.2～7.6)液洗涤3分钟×3次；滴加5%BSA封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，不洗；滴加一抗(兔抗鼠MMP-9、兔抗鼠VEGF)，37℃1小时左右，PBS(pH 7.2～7.6)冲洗，3分钟×3次；滴加生物素二抗工作液，37℃孵育20分钟，PBS冲洗3分钟×3次；滴加试剂SABC，37℃孵育20分钟，PBS冲洗，5分钟×4次。DAB显色，苏木素轻度复染，自来水冲洗中止反应；逐级脱水、二甲苯透明、中性树胶封片；显微镜观察；计算机图像扫描半定量分析阳性信号的表达(VEGF，MMP-9以灰度值表示)。 1.7 统计学方法 应用SPSS 17.0统计学软件分析数据，计量资料以(±s)表示，采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 一般状况 各组大鼠入组时毛色白、顺滑有光泽，目红有神，对声、光、捕捉等刺激敏感。至实验结束时，空白组与入组时差别不大，体质量平均增长20%左右；模型组大鼠毛色暗黄，精神萎靡，饮食、活动少，对外界刺激反应差，平均体质量下降15%左右；芪乌调脂颗粒组、芪乌调脂颗粒+阿托伐他汀组、阿托伐他汀组大鼠较模型组毛色白，活动、饮食量增加，体质量较模型组略回升。 2.2 对血脂的影响 1)与空白组相比，模型组TC、TG、LDL-C水平上升，差异有统计学意义(P＜0.05)；2)与模型组相比，芪乌调脂颗粒组、芪乌调脂颗粒+阿托伐他汀组、阿托伐他汀组TC、TG、LDL-C水平降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。落，内皮下间隙增宽，内弹力层和中弹力板发生变性、断裂和崩解，内膜和中膜均出现大量斑块和炎细胞浸润；中膜明显增厚，且有钙化和泡沫细胞形成，SMC增殖明显，排列显著紊乱；外膜可见炎细胞浸润，见图1。 表1 各组大鼠TC、TG、LD L-C变化情况(±s) mg/dl注：＊表示与空白组比较，P＜0.05；△表示与模型组比较，P＜0.05组别 只数 TC TG LDL-C空白组 16 154.55±8.44 101.21±19.89 86.32±6.07模型组 16 178.91±13.41＊ 123.57±23.93＊ 111.14±10.72＊芪乌调脂颗粒组 16 148.24±15.22△ 106.76±20.92△ 81.57±9.28△芪乌+阿托组 16 145.05±13.65△ 102.09±23.39△ 80.33±6.58△阿托伐他汀组 16 146.32±14.82△ 104.13±21.22△ 82.40±7.62△ 2.3.3 芪乌调脂颗粒组 内膜增厚隆起厚薄不一，内皮细胞不完整，可见脱落细胞及迁移的SMC，但较模型组明显减轻；中膜SMC增殖，内见少量泡沫细胞，多灶性钙化，较对照组显著增厚，但较模型组略变薄；外膜可见少量炎细胞浸润，见图1。 2.3.4 芪乌调脂颗粒+阿托伐他汀钙组 主动脉壁层次尚清晰，内弹力板基本完整，内膜较薄，且较均匀，轻微隆起，未见脱落细胞，内膜下可见SMC增生，较模型组明显减轻，中膜层较对照组显著增厚，但较模型组明显减轻，结缔组织和平滑肌细胞内见少量泡沫细胞聚集，外膜为疏松结缔组织，见图1。 2.3.5 阿托伐他汀组 内膜厚薄不一，内皮细胞不完整，内皮下间隙增宽，可见迁移的SMC和泡沫细胞；中膜SMC增殖，有少量淋巴细胞和泡沫细胞，内皮下有少量坏死物，较模型组明显减轻；外膜可见少量炎细胞浸润，见图1。 2.3 对主动脉病理形态学的影响 2.3.1 空白组 大鼠主动脉壁各层结构正常，内膜、中膜和外膜分界清楚，内皮细胞完整，管腔内膜光滑无增生，厚薄均匀，中膜弹力纤维正常，SMC排列整齐规则无增殖迁移，外膜无炎性细胞浸润，见图1。 2.3.2 模型组 主动脉管腔变小，内膜薄厚不一，可见内皮细胞脱 图1 大鼠主动脉病理形态学表现(HE，10×40倍) 2.4 各组大鼠血清hs-CRP 1)与空白组相比，模型组大鼠血清hs-CRP水平显著上升，差异有统计学意义(P＜0.05)；2)与模型组相比，阿托伐他汀组、芪乌调脂颗
实验动物上岗证-动物实验类试题(附答案)
实验动物上岗证-动物实验类试题（附答案）1、下列器官或组织,大鼠没有的是 ______。
( )A、胆囊B、胰腺C、胸腺D、汗腺答案：A2、下列属于重组近交系命名的是______。
( )A、C57BL/6J-TgNCD8Ge23JwgB、CXB1C、A/Fa- +/cD、B10.129-H-12b答案：B3、家兔属于________动物。
( )A、哺乳纲B、食肉目C、偶蹄目D、爬行纲答案：A4、______红细胞有细胞核。
( )A、鸡B、犬C、鼠兔D、小型猪答案：A5、在生物医学研究中使用量最大的动物为______。
( )A、犬B、大鼠C、豚鼠D、小鼠答案：D6、猫的哺乳期为________天。
( )A、50B、60C、30D、40答案：B7、实验动物对某一病原体易感性的高低不仅与病原体的种类和毒力强弱有关,而且与实验动物特异的________有关。
( )A、饲养密度B、品种品系C、体形大小D、免疫状态答案：D8、下列标记法中,最简单、适用于小动物短期实验的是 ______。
( )A、染色法B、挂牌法C、烙印法D、耳缘剪孔法答案：A9、血清学方法是确诊鼠肝炎病毒感染的重要手段,酶联免疫实验法和________检测法比较敏感,可以作为特异性诊断。
( )A、间接血凝B、免疫组化C、血凝抑制D、免疫荧光答案：D10、实验动物中的小鼠、________、仓鼠、兔、猫和猕猴等均可患泰泽氏病。
( )A、地鼠B、犬C、豚鼠D、大鼠答案：D11、根据我国国家技术监督局发布的实验动物环境设施监测标准,犬、兔动物实验实施(使用型)普通环境指标中,(静态)换气次数和气流速度是______。
( )A、10~20次/h,0.2~0.3m/sB、8~10次/h,0.2~0.3m/sC、10~20次/h,0.1~0.2m/sD、8~10次/h,0.1~0.2m/s答案：D12、食用高胆固醇,高脂肪饲料后易形成动脉粥样硬化与高脂血症模型的动物是 ______。
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作者单位:130021长春市,吉林大学药学院实验药学与毒理学
教研室
通信作者:任立群
E-mail :renlq@jlu. edu. cn
维生素D 3联合高脂饲料建立大鼠动脉粥样硬化模型
赵娟
李相军孙波高海成任立群
摘
要
目的:探索维生素D 3(VD 3联合高脂饲料快速建立大鼠动脉粥样硬化模型的方法。方法:健康雄
1.1实验动物及试剂雄性Wistar大鼠,体重为180~200g ,由吉林大学白求恩医学部动物部提供。VD 3注射液购自上海通用药业股份有限公司。
1.2高脂饲料的配制基础饲料, 3.5%胆固醇, 10%猪油, 0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%胆酸钠, 5%白糖。
1.3
动物模型的建立健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为3组:(1对照组10只,饲以普通饲料。(2高脂组20只,饲以高脂饲料。(3模型组30只,实验开始时在饲以高脂饲料基础上,每只大鼠给予腹腔注射VD 370万U /㎏(分3次注射。所有实验动物均为单笼饲养,自由饮水,每周称取体重。实验周期为4周。1.4血清学检测及胸主动脉及肝脏标本的采集实验4周后,各组动物禁食过夜,大鼠用戊巴比妥(30mg /kg体重腹腔麻醉,分离胸主动脉,在肾动脉分叉处下方剪开胸主动脉,用5mL注射器采集动脉血,用3000r /min离心15min ,分离出血清。取1mL血清在吉林大学中日联谊医院用全自动生化分析仪检测Ca 2+、TG、TC、HDL-C、LDL-C。剪下主动脉(取胸主动脉约为1cm和肝脏,立即用10%甲醛固定,留做组织学检测之用。
表1
大鼠体重变化
±s , g
组别对照组高脂组模型组
实验前
189±8.69188±8.44188±8.53
1周194±6.1
243±10.30*226±14.04*2周233±7.22
252±10.08*236±15.95*3周261±11.71
227±6.98202±17.01*
4周302±10.27221±9.36*179±13.91
图2
肝脏形态学的改变
A
B
C
图1胸主动脉组织学改变
注:A为对照组; B为高脂组; C为模型组a ;图2同
B C
3570
实用医学杂志年第卷第期3讨论
AS是危害人类健康的一类疾病,人类死亡的头号杀手,因此AS发病机制和治疗对策的探究成了医学
研究的热点。传统的学说如脂质渗入学说、巨噬细胞受体缺失学说、血栓源学说、血流动力学学说、中层平滑肌细胞增生学说、内皮细胞损伤学说及损伤应答和炎症学说等,其中任意一种学说均不能全面解释AS的发生与发展。选择合适的动物成功建立动物模型是研究AS发病机制及探讨治疗措施的重要条件。大鼠虽具有较强的抗AS特性,但它作为实验动物,具有以下三点优点:(1饲养方便、成本低廉、获取容易、生存能力强、死亡率低,应用范围广泛;(2它属杂食类动物,生理解剖与人类相似;(3重要的是可用于实验研究的商用抗体种类丰富[7-8]。鉴于以上的三点优点,本实验把大鼠作为AS模型的实验动物。
在实验过程中还必须注意两点:(1胆固醇含量
过高可导致大鼠死亡,所以在实验中要不断调整高脂饲料中胆固醇的含量,增加动物存活率;(2大鼠有用爪子刨食浪费饲料的习惯,在给予饲料时采取每日少给多次。
综上所述,大鼠作为研究AS的模型动物已显露出独特的优势,用VD 3联合高脂饲料4周后可快速建立大鼠AS模型。但由于大鼠受环境、遗传等多方面因素的影响,使这个模型在血脂水平、病变形态、药物反应等方面都与人类AS发生、发展过程及病变形态存在着差别。随着人们对AS的发病机制认识不断加深, AS模型的建立方法也会不断改进,将来一定会在短时间内建立更精确模仿人类病理生理的AS模型。
4
参考文献
Corresponding author :REN Li-qun E-mail :renlq@jlu. edu. cn
【Abstract】Objective To explore an efficient method to establish a rat model of atherosclerosis using vitamin D3and high-fat diet. Methods Sixty healthy Wistar rats were randomly divided into 3groups :control group , high-fat diet group and model group. Four weeks later , calciumion , triglyeride , total cholesterol , high-density lipoprotein and low-density lipoprotein in rat serum were detected , and the sections of thoracic aorta and liver tissue were prepared for morphology observation. Results The levels of serologic indexes in model group were obviously higher than those in control group and in high-fat diet group (P <0.05; Obvious calcification , smooth muscle cell proliferation and foam cells could be observed under aortic intima in model group. Lots of fat drop vacuoles were appeared in the liver cells in the model group , and the liver coefficient in model group was obviously higher than that in control group and in high-fat diet group (P <0.05 . Conclusion The rat model of atherosclerosis can be successfully established using vitamin D 3combined with high-fat diet.
16.26±2.58*HDL-C (mg /L 1.01±0.231.76±0.08
*
2.11±0.11*
LDL-C (mg /L
0.22±0.19
9.75±0.51*12.33±1.60*
±s
注:与对照组比较, *P <0.05
2.4
肝脏形态学及肝系数改变对照组肝脏形态规则,边缘锐利,色红有光泽, HE染色观察发现,肝细胞排列正常,细胞核大而圆、居中,胞浆中无脂肪滴,无炎症细胞浸润。高脂组和模型组大鼠肝脏体积增大,包膜紧张,边缘较钝,质地略软,切面均呈淡黄色而稍隆起,包膜外翻,触之油腻感。光镜下肝细胞排列紊乱,高脂组肝细胞内出现多少不等的小脂肪空泡,多分布在核的周围;模型组肝细胞内脂滴空泡大而多,散布在整个胞浆中,甚至融合成大空泡,将细胞核挤压至一边,肝细胞出现重度的脂肪变性和大量的炎症细胞浸润(图2。模型组的肝系数明显高于高脂组和正常组,组间差异比较有统计学意义(P﹤0.05,见图3。
注:与对照组比较, *P <0.05
表2
血脂、血钙浓度的变化
组别对照组高脂组模型组Ca 2+(mmol /L 2.45±0.122.63±0.01
*
3.77±0.37*TG (mg /L 0.41±0.090.74±0.06
*1.65±0.33*TC mg /L1.17±0.1412.22±0.59*
【Key words】Atherosclerosis ; Vitamin D 3; Model ; Rat
3569
实用医学杂志年第卷第期
在实验前体重无明显差异,对照组的大鼠体重随饲养时间的增加而增长。高脂组和模型组大鼠体重在1周和2周均增加,到第3周和第4周体重明显减少,模型组减少幅度大于高脂组(P﹤0.05。见表1。
1.5统计学分析数据用均值±标准差表示,以单因素方差分析LSD法(统计软件SPSS 10.0进行统计学检验。P <0.05为差异有显著性。2结果
2.1大鼠存活率及体重变化实验结束时,大鼠存活率对照组100%,高脂组85%,模型组78%。各组大鼠
基金项目:国家教育部留学归国人员启动基金资助课题(编号:
关键词
动脉粥样硬化;
VD 3;模型;大鼠
Establishment of a rat model of atherosclerosis using vitamin D3and high-fat diet ZHAO Juan , LI Xiang-jun , SUN Bo , GAO Hai-cheng , REN Li-qun. Department of Experimental Pharmacology and Toxicology , School of Pharmacy , Jilin University , Changchun 130021, China
2.2
血脂和血钙浓度的变化4周后,与对照组相比,其他两组动物血清Ca 2+、TG、TC、HDL-C、LDL-C均明显升高(P﹤0.05。模型组的动物血清Ca 2+、TC及LDL-C ,明显高于高脂组和对照组,组间比较有统计学意义(P﹤0.05。见表2。
2.3
胸主动脉组织学改变胸主动脉HE染色观察结果发现,对照组内膜、中膜和外膜分界清楚,血管内皮完整,中膜可见梭形平滑肌细胞,弹力纤维层结构清晰完整,呈环行排列,外膜为疏松结缔组织;高脂组可见内膜内皮向管腔突起;中膜平滑肌细胞增生,排列紊乱,外膜为薄层疏松结缔组织;模型组主动脉内膜下可见明显的钙化、炎细胞浸润、平滑肌细胞增生及泡沫样细胞,弹力纤维发生变性、断裂和崩解,中膜萎缩,出现典型动脉粥样硬化病理变化。见图1。