微生物检验之沙门氏菌的检验
沙门氏菌
商品化的成套生化试剂盒
API 生化鉴定系统 是法国梅里埃生物公司出品的微生 物生化检测系列产品，原理是利用 细菌对于各类化学物质（碳水化合 物、氨基酸及蛋白质、无机盐类等） 的代谢能力以及酶类的存在与否等 生化特性来鉴定细菌的一种方法， 当反应能够导致反应体系的PH值变化或产生显色物质， 加入合适的酸碱指示剂或显色剂就可以反映出来。
目的：迅速及迟缓分解乳糖的细菌阳性，而不发酵乳糖
的沙门氏菌为阴性。
原理：细菌迅速分解乳糖是有β-半乳糖苷渗透酶和β-半
乳糖苷酶，ONPG分子与乳糖相似所有乳糖快速发酵和 迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-β-D-半乳糖苷
结果：呈现黄色为阳性反应，
通常20-30min内显色
注意：为提高阳性反应速度，
沙门氏菌检测
致病菌的食品卫生学意义
食品卫生标准规定任何食品中不得检出致病菌 致病菌对人体健康的威胁是直接的和肯定的 根据不同食品被污染的特点重点检验某些细菌
如蛋禽肉主检沙门氏菌，罐头检肉毒梭菌等 微生物毒素也是重点，如金葡的肠毒素、黄曲霉毒 素等
微生物与食物中毒
概念：指摄入了含有生物性、化学性有害 物质的食品或把有毒有害物质当作食品摄 入后出现得非传染性的急性、亚急性疾病。
血清学实验原理
什么是抗体？
机体受外来抗原物质刺激
后，产生的一种与该抗原
发生特异性结合的免疫球
蛋白(Ig) 被分为G，A，M,
E, D等
最典型的抗体是IgG, 有
Y型三维结构, 包含两
套重链和轻链。
抗体攻击抗原（居中者）
血清学实验原理
何谓凝集反应？ 颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗
新实施：GB 4789.4-2024沙门氏菌——的预增菌变化
新实施：GB 4789.4-2024沙门氏菌——的预增菌变化G B4789.420242024年3月，国家卫健委、市场监管总局联合发布了47项食品安全国家标准和6项修改单，其中包含《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》（G B 4789.4-2024）检验方法标准。
这一新标准对实验设备、材料和试剂、检验程序与操作步骤进行了修改，并将于2024年8月8日实施。
本文就该标准主要修订内容、操作注意事项进行解读。
主要变化及原因分析变化1：在“预增菌”步骤中新增了在检验乳粉样品时，须将样品倒入225m L B P W 培养基表面，静置60m i n后再进行预增菌。
乳粉类样品经过高温喷雾干燥，其中的沙门氏菌大多处于受损状态；乳粉相对干燥且水活度低，其中受损的沙门氏菌适应了干燥的环境。
在这种情况下，如果受损的沙门氏菌在B P W中快速混匀水化，受损的沙门氏菌会出现渗透压休克；采用浸泡法在室温条件下静置一段时间后再进行预增菌，可以促进受损沙门氏菌的复苏，提高检出率。
变化2：选择性增菌培养基由氯化镁孔雀绿大豆胨（R V S）增菌液代替亚硒酸盐胱氨酸（S C）增菌液，并且B P W接种量改为0.1m L到10m L R V S中，选择性增菌温度为42℃±1℃。
S C增菌液主要适用于伤寒沙门氏菌的选择性增菌，但通过近几年疾病监测发现，我国伤寒、副伤寒沙门氏菌的发病率从10例/10万下降到0.8例/10万左右，而非伤寒沙门氏菌近年来发病率达到560例/10万，在微生物引发的食源性疾病中排前2位。
从培养基成分上看，R V S中含有孔雀绿，能够抑制非沙门氏菌的生长，大豆蛋白胨有利于沙门氏菌的复苏；S C增菌液配置需要的亚硒酸氢钠具有一定毒性，在健康环保方面也存在安全风险，且原料不稳定，过度加热培养基容易变性导致功能失效。
变化3：T T B四硫磺酸钠煌绿增菌液（T T B）选择性增菌改为：低背景菌培养温度为36℃±1℃，高背景菌培养温度为42℃±1℃。
沙门氏菌的检验
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载沙门氏菌的检验地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容沙门氏菌的检验食品学院 14食品质量与安全1班刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君201430520115 201430520116 201430520121 201430520122摘要：本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。
通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。
关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定前言沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。
沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。
虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界范围内的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。
因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。
国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。
材料与方法1.1实验材料1.1.1仪器设备均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度或微量移液器及吸头电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，上海申安医疗器械厂1.1.2试剂药品鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI生化鉴定卡1.1.3培养基蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基1.2 实验方法1.2.1培养基的制备1.2.1.1培养基的配制步骤蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约 10 min，煮沸溶解，调节 pH，高压灭菌121 ℃，15 min。
食品卫生七沙门氏菌检验三
四、实验步骤
1、在玻片一端加一滴沙门氏菌多价O血清，另一端加 一滴生理盐水。
2、用接种环自沙门氏菌可疑斜面上挑取少许细菌混入 生理盐水内，并搅匀；同法挑取少许细菌混入血清内， 搅匀。
3、将玻片略为摆动后静置室温中，1~3min后观察结果。
注：如果A-F多价O血清不凝集，应考虑是否有Vi抗原 阻止了O凝集反应，将待检菌液加热后（挑取菌苔于 1ml生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯上煮沸），再进 行A-F多价O血清凝集试验。
阴性：液体仍然混浊，无凝集块出现。
间接凝集反应：将可溶性抗原或抗体先吸 附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载 体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原 结合，在适量的电解质存在下，出现特异 性凝集现象，称为间接凝集反应。
三、器材
沙门氏菌A-F多价O血清 沙门氏菌可疑斜面培养物（TSI） 生理盐水、玻片、接种环、酒精灯等。
由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中 仍被广泛应用。
直接凝集反应：细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当 最高稀释度仍有凝集现象者，为血清的效价，也称滴度，以表示血清中抗体的相对含量。
凝集反应是一种定性的检测方法，也可以进行半定量检测。
检42样℃匀1液电8h2～5m2L解4h＋M质M 参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称
注意：取细菌培养物时不宜过多，与免疫血清混合时，必须将
细菌涂散、涂均匀，但不宜将面积涂得过大，以免很快干涸而影
响结果观察
五、结果观察
阳性：液体变清，并有乳白色凝集块出现。 阴性：液体仍然混浊，无凝集块出现。 记录结果之后，将玻片放入指定容器内，切勿任意放置或
冲洗。
中华人民共和国国家标准
加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察 掌握玻片凝集反应的原理和应用；
欧盟沙门氏菌检验标准
沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的食源性病原菌，可以导致食物中毒。
为了确保食品安全，许多国家和地区都有相关的食品和饲料中沙门氏菌的检验标准。
欧盟是全球食品安全监管最为严格的地区之一，其对于沙门氏菌的检验标准非常严格。
以下是欧盟对于食品和饲料中沙门氏菌的一般检验标准：
1. 检测方法:欧盟推荐使用ISO 6579:2002、ISO 6579:2007或ISO 6579:2017等国际标准进行沙门氏菌的检测。
2. 样品数量:每个食品或饲料样品的检测数量至少为25克。
3. 检测频率:对于某些高风险食品，如生肉、家禽、蛋类和蛋制品，欧盟推荐在生产、加工、储存和销售过程中进行定期检测。
4. 阳性判定:如果在一个样品中检测到沙门氏菌，那么这个样品必须被视为阳性。
5. 报告:如果在一个食品或饲料样品中检测到沙门氏菌，那么必须立即报告给相关的监管机构。
6. 处理:如果在一个食品或饲料样品中检测到沙门氏菌，那么这个样品必须被销毁，并且相关的生产或加工设备必须进行清洁和消毒。
需要注意的是，具体的欧盟沙门氏菌检验标准可能会根据食品的种类、来源、加工方法等因素有所不同。
沙门氏菌的检验原理
沙门氏菌的检验原理沙门氏菌是一类广泛存在于自然界中的革兰氏阴性杆菌，它是现代医学和食品安全领域中一个备受关注的细菌。
沙门氏菌感染会引起人体的食物中毒和肠道感染等疾病，严重时甚至会危及生命。
因此，沙门氏菌的快速检测和准确诊断显得尤为重要。
沙门氏菌的检验原理主要是通过分离菌株和检测其特异性抗原来进行的。
首先，从样品中分离出可疑的沙门氏菌菌株。
这一步骤通常通过将样品接种在含有沙门氏菌生长所需的富营养培养基上来实现。
沙门氏菌在这种培养基上生长迅速，菌落呈灰白色，有时带有红色或黑色。
接下来，对分离出的沙门氏菌菌株进行鉴定和鉴别。
这一步骤通常使用传统的生化试验和分子生物学技术。
传统的生化试验包括对菌株进行氧化-发酵试验、葡萄糖发酵试验、亚硝酸盐还原试验等。
这些试验通过检测菌株对不同营养物质的利用和代谢产物的生成来确定其是否为沙门氏菌。
分子生物学技术也被广泛应用于沙门氏菌的检验中。
其中最常用的技术是聚合酶链反应（PCR），它可以通过扩增沙门氏菌特异基因片段来识别和检测沙门氏菌。
PCR技术具有高度特异性和敏感性，可以在短时间内检测到沙门氏菌的存在。
除了分离和鉴定菌株外，还可以通过检测沙门氏菌的特异性抗原来进行沙门氏菌的检验。
沙门氏菌的特异性抗原主要包括菌壁脂多糖（LPS）和外膜蛋白等。
通过将样品与特异性抗体结合，然后通过免疫反应来检测是否存在沙门氏菌。
常用的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫层析试验（ICA）等。
沙门氏菌的检验原理是基于沙门氏菌的特征和特异性抗原来进行的。
通过分离菌株、鉴定和鉴别以及检测特异性抗原，可以快速准确地诊断沙门氏菌感染。
这对于食品安全和公共卫生至关重要，有助于及时采取措施防止沙门氏菌的传播和感染。
沙门氏菌的检验原理是通过分离菌株和检测其特异性抗原来进行的。
这一检验方法结合了传统的生化试验和分子生物学技术，可以快速准确地诊断沙门氏菌感染，为食品安全和公共卫生提供了重要的支持。
然而，需要注意的是，沙门氏菌的检验方法在实际应用中仍然面临一些挑战，如样品处理和检测灵敏度等方面的问题。
沙门氏菌检验实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过实验室操作，掌握沙门氏菌的检验方法，了解沙门氏菌的基本生物学特性，提高对食品微生物检测技能的掌握，为食品安全保障提供技术支持。
二、实训时间2023年X月X日三、实训地点XX大学食品学院微生物实验室四、实训器材与试剂1. 器材：显微镜、培养箱、无菌操作台、移液器、试管、吸管、接种环、酒精灯、高压灭菌器等。
2. 试剂：缓冲蛋白胨水（BPW）、选择性增菌培养基（SC、TTB）、选择性平板（SS琼脂）、生化试剂（甘露醇、山梨醇、乳糖等）、血清等。
五、实训步骤1. 样品处理与预增菌- 无菌操作取25g样品加入225mL BPW中，均质后置于36℃培养箱中培养8-18小时。
2. 选择性增菌- 分别取1mL BPW增菌液加入10mL SC和TTB培养基中，SC置于36℃培养箱中培养18-24小时，TTB置于42℃培养箱中培养18-24小时。
3. 选择性平板分离- 将增菌后的SC和TTB培养基分别涂布于SS琼脂平板上，置于36℃培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。
4. 生化试验- 挑取可疑菌落进行生化试验，包括乳糖发酵试验、硫化氢试验、动力试验、尿素酶试验等。
5. 血清学鉴定- 对生化试验结果阳性的菌株进行血清学鉴定，使用O、H血清进行玻片凝集试验。
六、结果与分析1. 样品处理与预增菌- 样品经过均质后，预增菌培养成功，为后续实验提供了基础。
2. 选择性增菌- SC和TTB培养基中均观察到菌落生长，表明样品中可能存在沙门氏菌。
3. 选择性平板分离- SS琼脂平板上观察到灰白色、光滑、湿润、中等大小的菌落，符合沙门氏菌的典型特征。
4. 生化试验- 可疑菌落进行生化试验，结果显示乳糖不发酵、硫化氢阳性、动力阳性、尿素酶阴性，符合沙门氏菌的生化特征。
5. 血清学鉴定- 玻片凝集试验结果显示，菌株与沙门氏菌O血清和H血清发生凝集，确定为沙门氏菌。
七、实训总结通过本次实训，我掌握了沙门氏菌的检验方法，了解了沙门氏菌的基本生物学特性。
沙门氏菌及检验
沙门氏菌及检验人沙门氏菌病有四类综合症：沙门氏菌病；伤寒；非伤寒型沙门氏菌败血症和无症状带菌者。
沙门氏菌胃肠炎是由除伤寒沙门氏菌外任何一型沙门氏菌而所致，通常表现为轻度，长久性腹泻。
伤寒实际上是由伤寒沙门氏菌所致。
未接受过治疗的病人致死率可超过10%，而对经过适当医疗的病人其致死率低于1%，幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
这些无症状携带者不显示发病症状仍能将微生物传染给其他人(传统的例子就是玛丽伤寒)。
非伤寒型沙门氏菌败血症可由各型沙门氏菌感染所致，能影响全部器官，有时还引起死亡。
幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
一、致病性沙门氏菌胃肠炎，埋伏期一般6-72小时，主要症状为恶心、呕吐、腹绞痛、腹泻、发热寒颤头痛。
病程一般1-2天或更长。
感染剂量为15-20个菌，死亡率达1-4%。
最易感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。
污染源主要是人和家畜的粪便，沙门氏菌常存在于动物中，特殊是禽类和猪。
在很多环境中也有存在。
从水，土壤，昆虫中，从工厂和厨房设施的表面和动物粪便中已发觉该类细菌。
它们可以存在于多类食品中，包括生肉，禽，奶制品和蛋，鱼，虾和田鸡腿，酵母，椰子，酱油和沙拉调料，蛋糕粉，奶油夹心甜点，顶端配料，干明胶，花生露，橙汁，可可和巧克力。
沙门氏菌属也是嗜温性细菌，在中等温度，中性pH，低盐和高水活度条件下生长最佳。
生长最低水活度为0.94。
兼性厌氧，对中等加热敏感。
同样，该菌属能适应酸性环境。
通过卫生以防止二次污染；蒸煮；巴氏消毒等掌握。
正常家庭烹调，个人卫生可以防止煮熟食品的二次污染，以及掌握时间和温度一般都能充分防止沙门氏菌病的发生。
二、检验因沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体，因此在本节中重点介绍沙门氏菌的检验。
沙门氏菌是食物传播病原菌中讨论最活跃的细菌。
从食品中分别和鉴定沙门氏菌，当前通用的方法学分5个步骤：1.前增菌-第一步使食物样品在含有养分的非选择性培育基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
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微生物检验之沙门氏菌的检验人沙门氏菌病有四类综合症：沙门氏菌病；伤寒；非伤寒型沙门氏菌败血症和无症状带菌者。
沙门氏菌胃肠炎是由除伤寒沙门氏菌外任何一型沙门氏菌而所致，通常表现为轻度，持久性腹泻。
伤寒实际上是由伤寒沙门氏菌所致。
未接受过治疗的病人致死率可超过10%，而对经过适当医疗的病人其致死率低于1%，幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
这些无症状携带者不显示发病症状仍能将微生物传染给其他人(传统的例子就是玛丽伤寒)。
非伤寒型沙门氏菌败血症可由各型沙门氏菌感染所致，能影响所有器官，有时还引起死亡。
幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
一、致病性沙门氏菌胃肠炎，潜伏期一般6-72小时，主要症状为恶心、呕吐、腹绞痛、腹泻、发热寒颤头痛。
病程一般1-2天或更长。
感染剂量为15-20个菌，死亡率达1-4%。
最易感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。
污染源主要是人和家畜的粪便，沙门氏菌常存在于动物中，特别是禽类和猪。
在许多环境中也有存在。
从水，土壤，昆虫中，从工厂和厨房设施的表面和动物粪便中已发现该类细菌。
它们可以存在于多类食品中，包括生肉，禽，奶制品和蛋，鱼，虾和田鸡腿，酵母，椰子，酱油和沙拉调料，蛋糕粉，奶油夹心甜点，顶端配料，干明胶，花生露，橙汁，可可和巧克力。
沙门氏菌属也是嗜温性细菌，在中等温度，中性pH，低盐和高水活度条件下生长最佳。
生长最低水活度为0.94。
兼性厌氧，对中等加热敏感。
同样，该菌属能适应酸性环境。
通过卫生以防止二次污染；蒸煮；巴氏消毒等控制。
正常家庭烹调，个人卫生可以防止煮熟食品的二次污染，以及控制时间和温度一般都能充分防止沙门氏菌病的发生。
二、检验因沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体，因此在本节中重点介绍沙门氏菌的检验。
沙门氏菌是食物传播病原菌中研究最活跃的细菌。
从食品中分离和鉴定沙门氏菌，当前通用的方法学分5个步骤：1.前增菌-第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
2.选择性增菌-在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。
此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。
3.选择性平板分离-这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。
4.生物化学筛选-排除大多数非沙门氏菌。
也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。
5.血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。
这五个步骤代表理想状况。
不过一个有经验的检验员，可能在一个或几个步骤中看出特性和差别。
目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。
三、从食品中分离沙门氏菌样品的制备下面的方法是以25g样品为检测单位，样品：肉汤为1∶9的比例。
除非另有说明，根据混合程度，加足够的肉汤保持1∶9的比例。
对不需准确称量检测的样品，例如：田鸡腿，可参看特定方法说明。
1、干蛋黄、干蛋白、干全蛋、液奶（去脂牛奶，含2%脂肪牛奶，全脂奶，和脱脂奶）、粉状调制食品（蛋糕，甜饼，炸面圈，饼干和面包）、婴儿食品、口食或软管进食含蛋的食品：检验前的冷冻样品最好不要解冻。
如果冷冻样品必须软化以获取待检测部分，则尽可能迅速的解冻所需部分，使竞争菌数少增加或降低沙门氏菌的可能损伤。
解冻需在45℃以下，有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在225℃，18小时内解冻。
无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500mL）或其他合适的容器内。
非粉状的样品，加入225mL灭菌乳糖肉汤。
如果制品是粉状，加入约15mL灭菌乳糖肉汤，用灭菌玻璃棒，匙或灭菌压舌器搅拌，使成均匀悬液。
再加3份乳糖肉汤10mL，10mL，190mL，使总量为225mL。
充分搅拌，直到样品完全悬浮没有团块为止。
盖紧瓶盖在室温静置60min。
振摇使充分混匀，用试纸测定pH值。
必要时用灭菌的1NNaOH或1NHcl调节pH至6.8±0.2。
在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。
然后将瓶盖旋松约1/4圈，置35℃培养24±2小时。
以下步骤按四，1-10进行。
2、蛋类：A、含壳蛋：用硬刷子在水流下刷洗蛋。
把蛋在含0.1%十二烷酸磺酸钠（SDS）的200ppm 氯离子溶液中浸泡30min。
加8mL 5.25%次氯酸钠到含1g SDS的992mL蒸馏水中，制备200ppm cl-/0.1%SDS溶液。
这种消毒剂需在使用前临时制备。
无菌操作打开蛋，使用灭菌的蛋分离器，弃去蛋白。
无菌操作称取25g蛋黄到灭菌的500mL锥型瓶或其他合适容器内。
加225mL胰胳胨（胰化物）大豆肉汤（TSB），并振荡充分混匀。
在室温下静置60分钟。
振摇使其充分混匀，用试纸测定pH值。
必要时调节pH值至6.8±0.2，置35℃培养24±2小时，以下步骤按四，1-10继续。
B、液全蛋（均状）：无菌操作称25g置于无菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中。
加225mLTSB并振荡充分混匀。
按上面所述继续。
C、煮硬的蛋（鸡蛋，鸭蛋或其他蛋类）：目前，不知道蛋白中的沙门氏菌抑制因子是否具有热稳定性。
因此，无菌操作分离蛋白和蛋黄。
称取25g粉状蛋黄固体到无菌500mL 锥型瓶或其他合适容器中。
加225mLTSB并旋转充分混匀。
按上面所述继续。
3、脱脂乳粉A、速溶：无菌操作称取25g样品，加入灭菌烧杯（250mL）或其它合适容器内。
经灭菌玻璃或纸质（用带卷好以备高压灭菌）漏斗，往灭菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中（装有225mL煌绿水），缓缓倾注25g检测单位，使其覆盖在煌绿水表面。
也可将多份25g检验单位按比例倒入相应份数的煌绿水表面。
按每1000mL灭菌蒸馏水中加1%煌绿溶液2mL配置煌绿水。
将盛有样品3前增菌培养基的容器静置60±5分钟。
松松地盖上容器盖，不需要混合或调节pH值，于35℃培养24±2小时，以下步骤按四，1-10继续。
B、非速溶：按上述A脱脂乳粉的方法进行，只不过不允许将多份检验单位按比例合并检验。
4、全脂奶粉：无菌操作称取25g样品，加入无菌的，带螺旋帽的广口瓶中（500mL）或其他合适的容器内。
加入225mL灭菌蒸馏水并振荡充分混匀。
盖紧在室温下静置60分钟。
使其充分混匀，用试纸测定pH值。
必要时调节pH值至6.8±0.2。
在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。
然后加0.45mL1%的煌绿染液并充分混匀。
旋松瓶盖约1/4转后，置35℃培养24±2小时，以下步骤按四，1-10继续。
5、酪蛋白：无菌操作称取25g样品，加入无菌均质杯中，加225mL灭菌乳糖肉汤到样品中并匀质2分钟。
无菌操作，把已匀质的混合物转移到灭菌，带螺旋帽的500mL广口瓶或其他合适的容器内。
盖紧盖子在室温下静置60分钟。
振摇使充分混匀，用试纸测定pH值。
必要时调节pH 值至6.8±0.2。
在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。
旋松瓶盖约1/4圈后，置35℃培养24±2小时，以下步骤按四，1-10继续。
6、大豆粉：无菌操作称取25g样品，加入灭菌烧杯（250mL）或其它合适容器内。
用灭菌玻璃或纸质（用带卷好以备高压灭菌）漏斗，往装有225mL乳糖肉汤的灭菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中，缓缓倾注25g检测单位，使其覆盖在乳糖肉汤表面。
检测单位（25g）不可多份按比例混合检测。
容器静置60±5分钟。
松松地盖上容器盖，不需要混合或调节pH值，于35℃培养24±2小时，以下步骤按四，1-10继续。
7、含蛋制品（面条，蛋卷，通心粉，意大利面条）、干酪、生面团、调制色拉（火腿，蛋，鸡肉，金枪鱼，火鸡）、新鲜的、冷冻的、或干的水果和蔬菜、果仁、甲壳类动物（小虾，蟹，小龙虾，LANGOSTINOS，龙虾）和鱼：检测前冷冻样品最好不要解冻，如果冷冻样品必须软化以取其检测部分，则要在持续搅拌并带有自动调温器控制的45℃水浴内15分钟内解冻。
或者在255℃18小时内进行。
无菌操作称取25g样品，加入灭菌的均质器中。
加入225mL灭菌的乳糖肉汤并均质2分钟。
再无菌操作转移已均质的混合物到无菌的带螺旋帽的广口瓶中（500mL）或其他合适的容器内。
盖紧瓶盖，于在室温下静置60分钟。
振摇使其充分混匀，用试纸测定pH值。
必要时调节pH值至6.8±0.2。
充分混匀。
旋松瓶盖约1/4转后，置35℃培养24±2小时，以下步骤按四，1-10继续。
8、干酵母：无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500mL），或其他合适的容器内。
加入225mL灭菌胰酪胨（胰化）大豆肉汤，充分混匀使酵母形成均匀悬液。
盖紧瓶盖于在室温下静置60分钟。
振摇使其充分混匀，用试纸测定pH值。
必要时，调节pH 值至6.8±0.2，在测定最终pH前要混合充分。
旋松瓶盖约1/4转后，置35℃培养24±2小时。
非活性干酵母，以下步骤按D，1-11进行。
活性干酵母，混匀经培养过的样品，转种1mL到10mL月桂基蛋白（LST）中，另转种1mL到10mL四磺酸盐（TT）肉汤中。
将此两种选择性肉汤于35℃培养24±2小时。
充分地旋转混合经培养过的增菌肉汤，每种肉汤都要用3mm 接种环划线接种3个选择性平板（四，3和四，4），接下面的四，5510进行。
9、食品上霜和上顶用的混合物：无菌操作称取25g样品，放入灭菌，带螺旋帽的广口瓶或其他合适的容器中。
加入225mL 营养肉汤并充分混合。
盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。
振摇使其充分混匀，用试纸测定pH 值。
必要时，调节pH值至6.8±0.2。
旋松瓶盖约1/4转后，置35℃培养24±2小时。
以下步骤按四，1-10继续。
10、调味品：A、黑胡椒、白胡椒、芹菜籽或者干辣椒粉、小茴香、红辣椒、欧芹片、迷迷香、芝麻、麝香草、蔬菜片：无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口瓶或其他合适的容器中。
加入225mL灭菌胰酪胨大豆（TSB）肉汤，充分混匀，盖紧瓶盖于在室温下静置60分钟。
旋动混匀，用试纸测定pH值。
必要时，调节pH值至6.8±0.2。
旋松瓶盖约1/4转后，置35℃培养24±2小时。
以下步骤按四，1-10继续。
B、洋葱片、洋葱粉、大蒜片：无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口瓶或其他合适的容器中。
将样品于含K2SO3的TSB胰酪胨大豆肉汤（1000mLTSB加5g K2SO3使K2SO3的最终的浓度为0.5%）中进行前增菌。
添加K2SO3于肉汤中。
分装225mL于500mL 锥形瓶中，经121℃高压灭菌15分钟。