液相色谱注意事项及处理PPT课件
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怎样用好液相色谱ppt课件
•泵和检测器之间的管道连接
–管道通常用PEEK™聚合体或不锈钢材料制造，尺寸为： 1/16” OD x .010” ID 或稍小。 –将管道连接至系统部件上的接头通常为10-32 螺纹，锥形 几何形状。
•检测器之后的管道连接
–管道通常用Teflon®材料制造，尺寸为1/16” OD
选择正确接头和管道的一般准则
接头要素
液 相 色 谱 仪 的 使 用
液相色谱仪的正确连接
•关于液相色谱仪中的管道，以下 三个要素必须考虑：
–管道的正确型号
–管道的最有效尺寸
–切割管道的合适工具
•如果想获取最好的色谱法效果， 必须考虑这三个方面！
管道要素
液 相 色 谱 仪 的 使 用
液相色谱仪的正确连接
•如果您想选择适合应用需要的管道类型，请考虑以下问题： –管道在系统中的使用位置 –哪种管道材料能够实现最好的兼容性
必须做!
溶剂和水的前处理：脱气
• 设备和材料：超声波清洗机 • 脱气的目的：除去流动相中溶解或因混合而产生 的气泡 • 气泡对测定的影响： 1）柱流量不准 2）检测器基线波动 • 脱气注意点： 1）每天脱气(无在线脱气器时） 2）混合溶剂脱气时间不能过长
流动相过滤头产生的问题
故障特征 “鬼峰”(由已被污染的过滤头造成)
液相色谱仪的正确连接
•通用端口有以下特征：
–螺纹
–管道尺寸
–内部几何形状
…但并非所有的接头都 是通用的!
接头要素
液 相 色 谱 仪 的 使 用
液相色谱仪的正确连接
•管套的深度并非通用!
•即使是最好的接头，如果不正确使用也会 产生许多问题。为什么会出现问题？
接头要素
液 相 色 谱 仪 的 使 用
液相色谱注意事项及处理
速度快-通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高-紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 柱子可反复使用-用一根色谱柱可分 离不同的化合物。
样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
• 色谱柱：分离开待测组分和其他干扰组分，有利于分别定性、定量
• 进样器：是在色谱系统中，能定量地将分析试样送入色谱柱的装置。其原理是计量泵定量将 样品吸入定量环，通过一个切换阀转入高压流路，另外一个切换阀连接清洗溶液和清洗口， 根据设置完成对计量泵内的清洗，清洗口是用来清洗针头，进样口连接高压阀，液相进样器 的针头插在进样口处，为防止样品交叉污染，通常针头和进样口保持最小的接触面积（不是 插入），同时两个斜面通过弹簧力压紧密封，防止高压流路在此处流出。 • 检测器：将色谱柱分离的化学物质作为信号源并将其转化为电压信号或电流信号，并将信号 放大输出，以便记录，再通过工作站或处理机或手工处理得出分析数据。
液相色谱法
• 使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定 相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。 分离过程是一个分配平衡过程。 涂布式固定相应具有良好的惰性；流动 相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不 同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使 样品的分离和收集复杂化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已 很少采用。现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱 和苯基柱。 液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法 (NPC)和反相色谱法(RPC)。
液相色谱注意事项
液相色谱（HPLC）是一种广泛应用的分离和定量分析技术，用于检测复杂混合物中的各种化合物。
以下是进行液相色谱实验时需要注意的一些事项：
1. 流动相选择：
- 选择合适的流动相对于实验结果至关重要。
要根据待测物质的性质、固定相类型以及所需保留时间来确定。
- 流动相需要过滤脱气，以去除其中的微粒和气体，确保系统稳定。
2. 样品处理：
- 样品必须充分溶解，并且尽量减少杂质的引入。
- 对于不稳定的化合物，可能需要添加保护剂或在低温下操作。
3. 色谱柱使用：
- 色谱柱应妥善保存，避免长时间暴露在空气中或光照条件下。
- 使用前确保色谱柱平衡至所需的流动相条件。
4. 进样：
- 进样量应适当，过大的进样量可能导致峰形变差或拖尾现象。
- 注意保持进样器清洁，定期清洗和维护。
5. 压力控制：
- 操作过程中要注意系统的压力变化，过高或过低的压力都可能是问题的信号。
- 如遇到异常情况，应立即停机检查。
6. 梯度洗脱：
- 如果使用梯度洗脱，要确保程序设置正确，并对梯度曲线进行测试。
- 在梯度结束时，要有一个适当的平衡段，以便色谱柱回到初始条件。
7. 数据处理：
- 确保采集到的数据是准确可靠的，并及时进行处理和解读。
- 记录所有的实验参数，包括仪器设置、流动相组成等，便于后续分析和重现实验。
8. 安全措施：
- 注意化学品的安全操作，遵守实验室安全规定。
- 对于有毒有害的溶剂和样品，要采取相应的防护措施。
【课件】液相色谱ppt
HPLC—3万塔板/m(固定相)
• 高灵敏度：UV；AFS
HPLC与GC差别
相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别
1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚 物的样品不可检测 占有机物的20%
一、液相色谱固定相
stationary phase of HPLC
Hmin小一个数量级 柱外展宽：柱前峰展宽；柱后展宽
连接管的体积和 检测器的死体积 应尽可能小。
3-2
பைடு நூலகம்
主要类型与分离原理
basic principle and main separating types
一、液-液分配色谱
liquid- liquid partition chromatogra
二、液-固吸附色谱
HPLC：溶解后能制成溶液的样品， 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子
型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80%
2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
流动的流动相传质阻力
Hsm = Csmdp2 / Dm
滞留的流动相传质阻力 （传质过程中主要作用）
H=
2λdp + CdDm / + Csdf2 / Ds + Cmdp2 / Dm + Csmdp2 / Dm
AB
C
主要因素：传质相 C 提高柱效有效途径：减小粒度
试样注入到填料中 心之内1～2mm 处， 减少柱前扩散；
• 高灵敏度：UV；AFS
HPLC与GC差别
相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别
1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚 物的样品不可检测 占有机物的20%
一、液相色谱固定相
stationary phase of HPLC
Hmin小一个数量级 柱外展宽：柱前峰展宽；柱后展宽
连接管的体积和 检测器的死体积 应尽可能小。
3-2
பைடு நூலகம்
主要类型与分离原理
basic principle and main separating types
一、液-液分配色谱
liquid- liquid partition chromatogra
二、液-固吸附色谱
HPLC：溶解后能制成溶液的样品， 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子
型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80%
2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
流动的流动相传质阻力
Hsm = Csmdp2 / Dm
滞留的流动相传质阻力 （传质过程中主要作用）
H=
2λdp + CdDm / + Csdf2 / Ds + Cmdp2 / Dm + Csmdp2 / Dm
AB
C
主要因素：传质相 C 提高柱效有效途径：减小粒度
试样注入到填料中 心之内1～2mm 处， 减少柱前扩散；
安捷伦1260高效液相色谱培训课件
C、一般情况下色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱 可以反冲时，才可以反冲除去柱内杂质，否则反冲会 迅速降低柱效。
D、选择使用适宜的流动相（尤其是PH值），以避免固 定相被破坏。有时候可以在进样器前面连接一预柱， 分析柱是键合硅胶，预柱为硅胶，可是流动相在进入 分析柱之前预先被硅胶饱和，避免分析柱中的硅胶基 质被溶解。
概述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年 代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技 术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极 为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经 典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论， 在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏 度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度 高、操作自动化的特点。
•9 •安捷伦1260高效液相色谱培训
E、避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接进入柱内， 需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一 个保护柱，保护柱一般是填有固定相的短柱，保护柱可以 经常更换。 F、经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质 G、保存色谱柱时应将色谱柱中充满乙腈或甲醇，柱接
•4 •安捷伦1260高效液相色谱培训
2、输液泵的使用和维护注意事项 A、防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其他任何杂质 微粒都能磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先 除去流动相中的任何固体微粒； B、流动相不应含有任何腐性物质含有缓冲液的流动相不应 保留在柱内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如 果含有缓冲溶液的流动相在柱内，由于蒸发或泄漏，甚至 由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体。这些晶粒将 损坏密封环和柱塞等。因此，仪器在关机前必须将泵清洗 干净，再换成适合色谱柱保存的和有利于泵维护的溶剂。 C、泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空 泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。 D、输液泵的最高压力不要超过规定的最高压力值，否则会 使高压密封环变形。 E、流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的 稳定。
D、选择使用适宜的流动相（尤其是PH值），以避免固 定相被破坏。有时候可以在进样器前面连接一预柱， 分析柱是键合硅胶，预柱为硅胶，可是流动相在进入 分析柱之前预先被硅胶饱和，避免分析柱中的硅胶基 质被溶解。
概述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年 代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技 术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极 为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经 典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论， 在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏 度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度 高、操作自动化的特点。
•9 •安捷伦1260高效液相色谱培训
E、避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接进入柱内， 需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一 个保护柱，保护柱一般是填有固定相的短柱，保护柱可以 经常更换。 F、经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质 G、保存色谱柱时应将色谱柱中充满乙腈或甲醇，柱接
•4 •安捷伦1260高效液相色谱培训
2、输液泵的使用和维护注意事项 A、防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其他任何杂质 微粒都能磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先 除去流动相中的任何固体微粒； B、流动相不应含有任何腐性物质含有缓冲液的流动相不应 保留在柱内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如 果含有缓冲溶液的流动相在柱内，由于蒸发或泄漏，甚至 由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体。这些晶粒将 损坏密封环和柱塞等。因此，仪器在关机前必须将泵清洗 干净，再换成适合色谱柱保存的和有利于泵维护的溶剂。 C、泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空 泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。 D、输液泵的最高压力不要超过规定的最高压力值，否则会 使高压密封环变形。 E、流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的 稳定。
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4
液相色谱仪注意事项
• 1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um 或更细的膜过滤)。
• 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 • 3.正常情况下，仪器首先用甲醇或柱洗液冲洗10-20分钟，然后再用流动相冲洗20-30分钟，
6
液相色谱法
• 使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定 相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。 分离过程是一个分配平衡过程。 涂布式固定相应具有良好的惰性；流动 相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不 同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使 样品的分离和收集复杂化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已 很少采用。现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱 和苯基柱。 液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法 (NPC)和反相色谱法(RPC)。
液相色谱注意事项及处理
1
液相色谱仪原理及构 成
液相色谱仪的储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入 流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不 同的分配系数，因此在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分 配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱 内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图
仪器方可稳定，最重要的是仪器基线走后，方可进样测试。 • 4.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 • 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用
有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉 • 6.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 • 7.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更
谱形式打印出来。 高效液相色谱仪(HPLC)是由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测 器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的 特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便 利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱
• 正相色谱法与反相色谱法比较表
•
• 从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。
9
• 3、液固色谱法 • 使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分
离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。适用于分离 分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异 构体。
• 泵：由于色谱柱很细，填充剂粒度小，因此阻力很大，为达到快速、高效分离，必须有很高 的柱前压力，以获得高速的液流。
• 色谱柱：分离开待测组分和其他干扰组分，有利于分别定性、定量 • 进样器：是在色谱系统中，能定量地将分析试样送入色谱柱的装置。其原理是计量泵定量将
样品吸入定量环，通过一个切换阀转入高压流路，另外一个切换阀连接清洗溶液和清洗口， 根据设置完成对计量泵内的清洗，清洗口是用来清洗针头，进样口连接高压阀，液相进样器 的针头插在进样口处，为防止样品交叉污染，通常针头和进样口保持最小的接触面积（不是 插入），同时两个斜面通过弹簧力压紧密封，防止高压流路在此处流出。 • 检测器：将色谱柱分离的化学物质作为信号源并将其转化为电压信号或电流信号，并将信号 放大输出，以便记录，再通过工作站或处理机或手工处理得出分析数据。 • 数据系统：将检测器得出的分析数据记录保存下来。
7
• 1、正相色谱法 • 采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相)；流动相为相对非极性的
疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、 三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化 合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。 • 2、反相色谱法 • 一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、 乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。 适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广 泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右
换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
5
HPLC的特点和优点
HPLC有以下特点： 高压-压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。 高速-流速为0.1~10.0 ml/min。 高效-可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点： 速度快-通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。 分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高-紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 柱子可反复使用-用一根色谱柱可分 离不同的化合物。 样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备相色谱仪的工作流程
3
• 固定相：在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。用来分离被测组分的物质，目的 是把样品里面的成分留下，固定住；
• 流动相：载体，与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一相。是将物质带到固定相 里并通过固定相的流体，在气相里就是载气，在液相里就是液体。
8
• 随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于 某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离，常用缓 冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为 2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱 落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。
液相色谱仪注意事项
• 1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um 或更细的膜过滤)。
• 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 • 3.正常情况下，仪器首先用甲醇或柱洗液冲洗10-20分钟，然后再用流动相冲洗20-30分钟，
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液相色谱法
• 使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定 相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。 分离过程是一个分配平衡过程。 涂布式固定相应具有良好的惰性；流动 相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不 同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使 样品的分离和收集复杂化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已 很少采用。现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱 和苯基柱。 液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法 (NPC)和反相色谱法(RPC)。
液相色谱注意事项及处理
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液相色谱仪原理及构 成
液相色谱仪的储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入 流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不 同的分配系数，因此在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分 配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱 内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图
仪器方可稳定，最重要的是仪器基线走后，方可进样测试。 • 4.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 • 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用
有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉 • 6.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 • 7.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更
谱形式打印出来。 高效液相色谱仪(HPLC)是由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测 器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的 特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便 利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱
• 正相色谱法与反相色谱法比较表
•
• 从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。
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• 3、液固色谱法 • 使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分
离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。适用于分离 分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异 构体。
• 泵：由于色谱柱很细，填充剂粒度小，因此阻力很大，为达到快速、高效分离，必须有很高 的柱前压力，以获得高速的液流。
• 色谱柱：分离开待测组分和其他干扰组分，有利于分别定性、定量 • 进样器：是在色谱系统中，能定量地将分析试样送入色谱柱的装置。其原理是计量泵定量将
样品吸入定量环，通过一个切换阀转入高压流路，另外一个切换阀连接清洗溶液和清洗口， 根据设置完成对计量泵内的清洗，清洗口是用来清洗针头，进样口连接高压阀，液相进样器 的针头插在进样口处，为防止样品交叉污染，通常针头和进样口保持最小的接触面积（不是 插入），同时两个斜面通过弹簧力压紧密封，防止高压流路在此处流出。 • 检测器：将色谱柱分离的化学物质作为信号源并将其转化为电压信号或电流信号，并将信号 放大输出，以便记录，再通过工作站或处理机或手工处理得出分析数据。 • 数据系统：将检测器得出的分析数据记录保存下来。
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• 1、正相色谱法 • 采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相)；流动相为相对非极性的
疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、 三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化 合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。 • 2、反相色谱法 • 一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、 乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。 适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广 泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右
换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
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HPLC的特点和优点
HPLC有以下特点： 高压-压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。 高速-流速为0.1~10.0 ml/min。 高效-可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点： 速度快-通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。 分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高-紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 柱子可反复使用-用一根色谱柱可分 离不同的化合物。 样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备相色谱仪的工作流程
3
• 固定相：在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。用来分离被测组分的物质，目的 是把样品里面的成分留下，固定住；
• 流动相：载体，与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一相。是将物质带到固定相 里并通过固定相的流体，在气相里就是载气，在液相里就是液体。
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• 随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于 某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离，常用缓 冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为 2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱 落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。