植物脱毒快繁技术
甘薯脱毒与快繁技术_孙光泽
甘薯脱毒与快繁技术孙光泽1杨春玲2孙克威2(1.营口农科所,辽宁营口115000; 2.辽宁农业职业技术学院,辽宁营口115214) =摘要>本文介绍了甘薯脱毒与种薯快繁技术,从而为甘薯脱毒快繁技术的推广应用提供参考。
=关键词>甘薯;脱毒技术;种薯快繁中图分类号:S531文献标识码:C甘薯(Ipomoea batatas L1La m)为旋花科1年生植物,是我国四大粮食作物之一,长期营养繁殖病毒病蔓延,在世界上已发现10种以上,我国发现5种,目前比较普遍的有甘薯羽状斑驳病毒和潜隐病毒两种。
受病毒侵染的甘薯主要表现为:叶片皱缩,花叶,卷叶,叶片黄化,叶片有羽状斑驳或环驳,茎蔓生长势弱,结薯小,结薯少,薯皮色淡、粗糙有龟裂,严重影响甘薯的产量和品质导致产量锐减,影响农民的经济收入。
甘薯脱毒快繁技术就是通过育种选种,选出当地最适用的品种,用种薯催芽、消毒,无菌条件解剖镜下切取1~2个叶原基的茎尖分生组织进行脱毒培养;通过病毒检测证实是无毒苗,再通过生产鉴定是优良品种的无毒苗,用无毒苗工厂化切段快繁;通过炼苗和室外防传毒快繁原原种和原种生产,进而扩繁出一级生产种,其繁殖速度快,并脱去苗中的甘薯病毒,避免病毒再侵染,继代繁殖成活率高且不受季节、气候和空间限制,可以进行工厂化生产。
脱毒甘薯种植后表现生理代谢旺盛,缓苗快、长势旺、可充分发挥品种原有的增产潜力,块根膨大早、膨大快,脱毒甘薯单株块根数增多,茎节上产生不定根少,且易膨大形成100克以上的薯块,须根、柴根很少,成薯率提高,薯块分布集中,增重明显,薯块两端纤维明显减少,表皮光滑平整,颜色鲜艳,无黑斑和龟裂,出干率增加,加工品质提高,比未脱毒甘薯增产20%~50%,有的甚至成倍增产。
1品种选择甘薯优良品种很多,而且经过脱毒后都能不同程度地提高产量、改善品质。
但甘薯品种都有一定的区域适应性和生产实用性,在进行甘薯脱毒时一定要根据本地区气候、土壤和栽培条件,选用适合本地区大面积栽培的高产优质品种或具有特殊用途的品种。
马铃薯脱毒与快繁技术听课课件
一、马铃薯脱毒技术的概念
1、脱毒的概念 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞
中的病毒，生产健康的繁殖材料。
2、马铃薯脱毒技术
采用茎尖脱毒技术可以将种薯内的病毒（PLRV、 PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW）去掉，得到一定 良种繁殖体系，恢复马铃薯品种本身的生理功能和 生产特性，使之达到育种家培育品种本身的商品性 状和产量，生产优质种薯。
茎尖或几十微米的茎尖进行的培养。特点：可获无 病毒苗，操作困难，成苗时间长。
普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的
茎尖、芽尖及侧芽的培养。特点：操作技术简单、 易成活、成苗时间短、繁殖速度快。
2、脱毒技术原理
• 植株体内病原菌，越靠近茎尖的感染程度越低， 生长点几乎不含或含病毒很少；（PVX和PSTVd感
光照 光质 自然光最好，日光灯其次，白炽灯最差。
光周期
采取规律的光周期，生长最好的的周期是 16h光照，8h黑暗培养。
(3) 驯化与移栽
★ 目的：为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力， 进行光、温锻炼。
★ 炼苗期温度：白天23～27℃，夜间不低于14℃。
★ 方法：移植前7d左右，将长有3～5片叶、高2～3cm 的试管苗，不开瓶口，从培养室移至温室排好。
★ 苗高6—8cm培蛭石防绿薯，1-2cm厚，约35-40d 出现气生薯，不断盖蛭石。
微型薯
微薯
四、无病毒苗的保存与繁殖
1、隔离保存
将无病毒原原种苗种植于防虫网室中，以 300目的网纱为好，可防止介体昆虫进入。
适宜的高寒冷山地，气候凉爽、虫害少，有 利于无病毒材料的繁殖；定期检测有无病毒感染， 及时将再感植株淘汰。
成2～3cm小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。
石榴脱毒苗木繁育技术规程
石榴脱毒苗木繁育技术规程Pomegranate virus - free seedling propagation techniques oforder1 范围本文件规定了石榴种苗组培生产过程的环境要求、组培技术和管理。
本文件适用于石榴种苗组培繁育。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 8321（所有部分）农药合理使用准则LY/T 1893 石榴苗木培育技术规程NY/T 357-2007 香蕉组培苗DB34/T 3410 石榴生产技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
石榴组培苗plantlets of pomegranates根据植物细胞具有全能性的理论，利用石榴茎尖作为外植体，在无菌条件下通过人工培育出完整石榴植株。
脱毒苗 virus-free seedlings脱毒苗是指不含有该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的苗木，植物体内除去病毒常用方法有热处理法和茎尖脱毒法，其中茎尖脱毒法更适用于石榴组培苗的生产。
茎尖脱毒 virus-free technology of plant shoot tip病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此采用茎尖接种的离体培养方式，可以达到脱除植物病毒的目的，该方式也是木本植物组织培养最常用的脱毒方式。
褐化 browning由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，而使细胞内的酚类化合物聚合成暗黑色的大分子物质，在后期培养中，这种变色物质会使培养物褐化，影响培养物的生长和分化，甚至造成培养物死亡。
4 环境要求准备室用于组培药品配置、器具洗涤及灭菌等，面积≥15 m2，温度为20-28℃。
缓冲室室外与接种室或组培室的隔离缓冲区间，应具备换衣区、鞋区、风淋区，面积≥2 m2。
任务七：植物脱毒技术
What are the key steps in tissue culture?
Example: 刺梨的培养
如兰花、牡丹、香石 竹、唐菖蒲、无籽西 瓜、菠萝、桉树以及 扦插难以成活的菊花 的名贵品种。 香蕉、葡萄等工厂化 育苗基地的建立，每 年可生产上万株种苗 ，节省了土地资源和 能源消耗。
柑橘的试管微芽 嫁接脱毒 （Macrograft and Micrograft)
草莓病毒在我国危害严重
病毒对无 性繁殖的草莓危 害严重，我国 90%以上的草莓 植株感染有病毒 ，严重影响了草 莓的产量和质量 。
草莓脱毒苗显著增产、提高繁殖系数
增产30%以上
草莓脱毒原种苗繁苗能力 比普通匍匐茎苗高50%以
上
目前国内大部分甜樱桃树都带病毒
病毒导致甜樱桃果实变小、品质变劣 、产量下降、树体衰弱甚至死亡
草莓可以接种 0.2～0.5mm微茎 尖，而甜樱桃的 微茎尖很难成活， 通常为1mm。
草莓微茎尖分化成芽
快速增殖的三种方式：
腋芽萌发、形成不定芽
情境一：植物脱毒意义及方法 情境二：脱毒苗的鉴定与保存
Inoculation(微生物）
Inoculation cont’（微生物）
植物的接种
小结：组织培养的基本过程简 图 脱分化和
外植体
消毒 再分化
胚状体途径
接种
培养基配制
灭菌
器官发生途径
脱分化和 再分化
甘薯脱毒苗快繁技术
作物栽培现代农村科技2021年第2期甘薯脱毒苗快繁技术刘洋陶春来崔绍玉石颖靳国旺曹立娜高君慧张丹杜德玉(廊坊市农林科学院河北廊坊065000)甘薯属于无性繁殖作物，在种植过程中容易受到病毒侵染，造成产量降低、品质变差，近年来发现的甘薯复合病毒病(SPVD)更成为甘薯的毁灭性病害，对产量影响巨大，减产幅度高达50%~90%冋?。
1脱毒培养1.1茎尖剥离。
选取生长健硕、茎尖饱满的甘薯植株，取顶芽2cm,用水冲洗2~3遍备用。
于无菌环境中，将幼芽用75%的酒精浸泡30s后，再用2%的次氯酸溶液消毒5min,浸泡于无菌水中备用。
将茎尖置于解剖镜下，用手术刀将茎段上可见叶片剥离，切取0.1~0.3mm的茎尖分生组织，接种到分化培养基(MS培养基+1.0mg/L6BA+ 0.5mg/LIAA)上。
于27°C±1°C、光强3000lx、每天13h光照处理条件下培养，诱导芽的形成。
1.2成苗。
在分化培养基中培养20d,待茎尖膨大变绿后，将其转入MS培养基上培养成苗，30d后将小苗转入MS培养基中继代培养。
1.3病毒检测。
组培苗扩繁后，长至5~6片叶时进行病毒检测。
采用RT-PCR检测［3］或甘薯病毒芯片快速检测方法，针对甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)、甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯潜隐病毒(SPLV)、甘薯曲叶病毒(SPLCV)及甘薯病毒G(SPVG)等甘薯主要病毒进行检测。
1.4组培苗扩繁。
选取脱毒成功长至5~7片叶的脱毒苗，在无菌环境中截取2cm左右茎段，每茎段须有2~3个节，转入MS培养基上，于温度27C 土1C、光强30001x、每天光照13h条件下培养，每30~40d扩繁1次。
2移栽驯化选择地势高燥、通风向阳、土壤肥沃疏松，并且3年以上没有种过甘薯且无根腐病、黑斑病、茎线虫病等土传病害的温室进行脱毒苗移栽驯化。
温室上下通风口及入口须安装60目的防虫网，入口要设2道防虫纱门。
马铃薯组织培养脱毒快繁
马铃薯组织培养脱毒快繁植物组织培养（Plant tissue culture）是指在无菌的条件下，将离体的植物（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。
由于培养物是脱离植物母体，在玻璃瓶中进行培养，所以也叫做离体培养。
在有些情况下，再分化也可不经愈伤组织阶段，而直接发生于脱分化的细胞。
[1]植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物，脱除病毒得到无毒苗株，继而在大田快速繁殖的技术。
脱毒及离体快繁，这是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。
主要是进行茎尖培养脱除病毒。
对于脱毒苗、新育成、新引进、稀缺良种、优良单株、濒危植物和基因工程植株等可通过离体快速繁殖，同时可不受地区和气候的影响，比传统的繁殖方法快数万倍。
植物组织培养已发展成为一门富有生命力的学科。
[2]植物组织技术在农业上的应用有很多方面，其中植物脱毒和离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个领域。
通过植物生物技术改良作物是以后农业科学领域最重要的发展之一。
首先用茎尖脱毒获得无病毒植株成功的是法国人莫勒尔,他们用大丽花为原料,在1952 年试验产生了无病毒植株。
在1955 年以马铃薯为材料产生了无病毒植株。
农业生产中，许多农作物都带有病毒，无性繁殖方式植物如马铃薯、甘薯、大蒜等尤为严重，但是感病植株并非每个部位都带有病毒。
[3]一、国内外研究动态（一）研究背景栽培种的马铃薯(Solanurn tuberosurn)是双子叶种子植物, 属茄科(Solanceae)茄属(Solanum)的一年生草本植物,生产上绝大多数是利用块茎进行无性繁殖。
[4]马铃薯用块茎繁殖，植株长势逐年削弱、矮化，分枝变小，结薯变小，产量逐年下降，甚至绝产，这种现象叫做种性退化。
葡萄的脱毒与快繁植物组织培养常用文档
5、试管苗的驯化与移栽
• 试管苗长出5~7片新叶时，把瓶子移入温室 中，即时可打开培养瓶，历时7d。把苗从 培养瓶中取出，洗净培养基，栽于经过干 热灭菌处理的蛭石内，盘上塑料薄膜罩严 ，置于阳光下，20 ℃，自然条件下锻炼 15d。移入土中。
小结：
形态特征和生物学习性
葡
选材接种
萄 的
葡萄的组织培养
培养基 苗分化
脱
根分化
毒 与
热处理脱毒
快
脱毒 茎尖培养脱毒
繁
无病毒苗的鉴定
脱毒与快繁
材料与消毒
培养条件
快繁 生长与分化
生根培养
试管苗的驯化与移栽
08生物教育 张磊蕾
3mm茎尖进行立体培养，即可获得脱毒苗。
MS+IAA 0.4mg/L+NAA 0.05mg/L
培养基中进行生根。
三、脱毒与快繁
（一）脱毒
葡萄受到26种病毒的危害,主要有卷叶 病毒、栓皮病毒、扇叶病毒、黄脉病毒和 斑点病毒等。由于病毒的危害，葡萄的长 势减弱，产量降低，果实的糖分含量减少， 风味变劣。
• 1、材料与消毒 • 取经过脱毒的枝条稍1~2cm，用5%的次
氯酸钠aq消毒2~3min，用无菌水冲洗3次， 再在0.1%升汞aq中浸泡2min，用无菌水冲 洗4次。把芽放在解剖镜下，无菌条件下， 去除幼叶和叶原基，使生长点暴露。用刀 切下含有1~2个叶原基，大小为0.2~0.3mm 的生长点接种于培养基上。
2、培养基：MS培养基，再添加6-BA 葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地上部分的茎细。
光照：1000lx，16小时
1～2mg/L
节6%上，具而有B卷5培须养，基可，愈向伤上N组攀织援A化。严A重，0茎.0尖生1长m不好g。 /L，LH100mg/L，蔗糖2%，琼
马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程
目录1 茎尖脱毒技术操作规程 (1)1.1 设备条件 (1)1.1.1 试剂配置室 (1)1.1.2 洗涤及灭菌室 (2)1.1.3 无菌室 (2)1.1.4 培养室 (2)1.2 材料的选择 (2)1.3 类病毒和病毒的检测 (2)1.3. 1 类病毒的检测 (2)1.3.2 病毒检测 (9)1.3.3 脱毒材料热处理 (13)1.4 培养基的制备 (13)1.4.1 培养基母液配制 (13)1.4.2 培养基配制 (15)1.5 外植体灭菌 (17)1.6 茎尖剥离前消毒 (17)1.7 茎尖剥离与接种 (17)1.8 培养 (17)1.9病毒检测筛选脱毒苗 (17)1.10 品种典型性鉴定 (18)2 脱毒苗快繁技术操作规程 (18)2.1 茎切段培养基繁殖 (19)2.1.1 扩繁前的准备工作 (19)2.1.2 茎切段和接种 (19)2.1.3 培养 (19)2.2 扦插苗扩繁 (21)2.2.1 培养基础苗 (21)2.2.2 基础苗移栽 (21)2.2.3 基础苗剪切 (21)2.2.4 基础苗切段后的管理 (22)2.2.5 扦插苗 (22)2.2.6 扦插苗管理 (23)马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程1 马铃薯茎尖脱毒技术操作规程马铃薯健康种薯的生产方法主要有利用茎尖脱毒快繁技术生产无病毒种薯、田间系选生产良种和实生种子生产无毒实生薯等，其中植物茎尖分生组织培养脱毒技术（即茎尖脱毒）在实际的农业生产中应用最为广泛并取得了巨大成功。
茎尖脱毒技术是根据病毒在植物体内分布不均和茎尖分生组织带毒少的原理，结合使用钝化病毒的热处理方法，通过剥离茎尖分生组织进行培养获得脱毒植株。
这一技术具有周期短、效率高、能与组织培养快速繁殖相结合等特点。
目前除一些类病毒外，绝大多数植株病毒都可以通过茎尖脱毒技术进行脱除。
经茎尖分生组织培养获得的植株经病毒检测并确认其不带病毒后可进一步利用，对仍带有病毒的株系进行淘汰或再脱毒。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术
马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯脱毒试管苗快繁技术是近年来在马铃薯生产中得到广泛应用的一项先进技术，通过试管苗快速繁殖可以大幅提高马铃薯的繁殖效率和质量，有效地避免了病毒和病菌的传播，提高了马铃薯的产量和品质。
本文将从马铃薯脱毒试管苗原理、技术流程、应用前景等方面进行介绍。
一、马铃薯脱毒试管苗原理马铃薯脱毒试管苗技术是通过将健康的组织培养在无菌的培养基中，通过适宜的营养和生长条件，使其快速生长和分化为幼苗，然后继续培养和繁殖，最终获得大量无病害的苗种。
其原理主要包括以下几点：1. 选择健康组织：选择健康的马铃薯组织，如叶片、茎芽等，进行无菌处理，去除表面的病菌和病毒。
2. 建立培养基：根据马铃薯生长的特点和营养需求，配置适宜的无菌培养基，提供充足的营养和生长因子。
3. 培养和繁殖：将经过无菌处理的马铃薯组织培养在无菌培养基中，控制适宜的温度、光照和湿度，促进组织的生长和分化为幼苗，然后进行继代培养和繁殖。
通过以上原理，可以有效地实现马铃薯的脱毒繁殖，得到大量无病害的试管苗，为马铃薯生产提供了可靠的种苗资源。
马铃薯脱毒试管苗技术的流程主要包括组织培养、无菌处理、培养基配置、培养和繁殖等步骤，下面将对其具体流程进行介绍。
2. 无菌处理：将经过消毒处理的组织放入无菌工作台中，进行进一步的无菌处理，包括盆栽、割取等操作，确保组织的无菌状态。
3. 培养基配置：按照配方将无菌培养基配置好，包括营养盐、植物生长激素、碳源等成分，确保提供足够的营养和生长因子。
马铃薯脱毒试管苗技术在马铃薯生产中具有广阔的应用前景，主要体现在以下几个方面：1. 提高繁殖效率：传统的马铃薯繁殖方式存在生长周期长、繁殖效率低的问题，而通过试管苗快速繁殖技术可以大大提高繁殖效率，节约时间和成本。
2. 避免病毒传播：马铃薯作为病毒携带者，传统繁殖方式易导致病毒的传播，而试管苗繁殖可以避免病毒的传播，有效保证马铃薯的健康和质量。
3. 提高产量和品质：无病害的试管苗具有较高的生长力和抗逆性，可以提高马铃薯的产量和品质，为种植户带来更好的经济效益。
植物脱毒方法
植物脱毒方法
1、茎尖培养脱毒:病毒在植物体内的分布并不均匀,越靠近茎端的病毒的感染深度越低,生长点则几乎不含或含病毒很少。
2、愈伤组织培养脱毒法:通过植物的器官和组织的培养,脱分化诱导产生愈伤组织,然后从愈伤组织再分化产生芽,长成小植株,可以得到无病毒苗。
3、珠心胚培养脱毒:病毒一般不通过种子传播,由珠心细胞发育成的胚再生的植株是无毒的,并具有与母本相同的遗传特性。
4、茎尖微体嫁接:将实生苗砧木在人工培养基上种植培育,再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖,在砧木上进行试管微体嫁接,以获得无病毒幼苗。
5、花药培养脱毒。
6、热处理脱毒:一些病毒对热不稳定,在高于常温的温度下(35-40°C),即钝化失活。
7、化学处理:抑制或杀死病毒。
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依据病毒对高温的敏感，寄主耐高温。利
用这一差异，选择适当的温度和处理时间，进 行高温处理，就能使寄主体内病毒浓度降低， 传递速度减慢或失去活性，而寄主细胞仍然存 活，并加快分裂和生长。
2、热处理脱毒方法
(1)温汤浸渍处理 (2)热空气处理
（1）温水浸渍处理
适用于休眠器官，在50℃左右的温水中浸渍 10min至数小时，方法简便易行，但易使材料受 伤。
官的培养相同。
茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代 稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最
重要的一个途径。
4、影响微茎尖成活及脱毒的因素 （1）母体材料病毒侵染程度
被单一病毒感染的植株脱毒较容易，复合感染的较难。
（2）外植体大小
在最适培养条件下，外植体的大小决定茎尖的存 活率，外植体越大，产生再生植株的机会也就越多。
目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药 物处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效 药。种子一般不带病毒(豆类植物除外)，种子繁 殖可得无毒植株。但对于无性繁殖植物，必须采 取一些特殊方法脱除病毒。
脱毒快繁的一般过程
1、诊断：首先了解供试材料感染病毒的种类 2、茎尖培养脱毒或结合热处理
3、鉴定
4、繁殖 5、驯化移植
植物离体脱毒快繁技术
一、病毒危害
多数栽培植物，尤其无性繁殖植物，都易受 到一种或几种，甚至几十种病毒的侵染。例如， 草莓染60多种病毒。并且随着培养时间的推移， 侵染病毒的种类越来越多。
植物病毒病原体可通过维管束传导。因此， 对无性繁殖的植物来说，一旦感染上病毒之后， 就会代代相传越趋严重。 受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大 幅度下降，品质变劣，甚至完全丧失商品价值。
• 3、能量竞争。当植物细胞分裂DNA复制 时，病毒DNA随着复制。因此，植物细 胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。 在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很 高，正常核蛋白合成占优势，使病毒无 法进行复制。
• 4、抑制因子存在。在植物体内存在有一 种“病毒钝化系统”（抑制因子假说）， 在分生组织中的活性最高，因而使分生 组织不受侵染。
除了外植体的大小之外，叶原基的存在与否也影响分
生组织形成植株的能力，一般认为，叶原基能向分生
组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。
（2）培养条件
在茎尖培养中，光下培养的效果通常比暗培养效果
好，如马铃薯茎尖培养时，当茎已长到1cm高时，光
照强度便增加到4000lx。
（3）外植体的生理状态
茎尖最好要由活跃生长的芽上切取。 取芽的时间也很重要，一般选萌动期较好。否则 采用适当的处理，打破休眠才能进行。
几乎不含或含病毒很少。
茎尖分生组织不带病毒，可能有4方面的原因： 1、传导抑制。植物体病毒的移动主要靠2条途 径：一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成 维管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒 移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖细胞不断分 裂和活跃的生长速度。 2、酶缺乏。茎尖中缺乏病毒合成所需的酶系， 存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。
不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效 果更好。
（二）茎尖培养脱毒
植物的去病毒技术，实质上就是采取不含
病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm
带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁 殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm）
2、培养基
一般以White、MS为基本培养基，提高钾盐 和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎 尖时，有些离子浓度过高应稀释。
在双子叶植物中，激素可能在第2对叶原基中 合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给， 必须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在 生长素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D， 宜用NAA或IBA；细胞分裂素用KT或BA；GA3对 某些植物茎尖培养有用。
二、脱毒方法 (一) 热处理脱毒 1、热处理脱毒原理：
①病毒进入植物细胞后，随植物细胞DNA一起 复制。热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒的 活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止， 而失去病毒的侵染能力。 ②热处理是一种物理效应，可加速植物细胞 分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优 势，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因 此加速分生组织细胞的分裂，能够获得无病毒植 株。
一个半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀
片将带1-2个叶原基的分生组织切下，接到培养基上。
将接种的茎尖置于22℃左右温度下。 2000-3000lx
16h/d 光照下培养。由于在低温和短日照下，茎尖有可能 进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。
微茎尖需数月才能成功。
茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器
（2）热空气处理
热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好。将生 长的盆栽植株移入温热治疗箱内，一般35-40℃。 处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数
月。
热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊
花等植物。如：葡萄置于38 ℃可去除扇叶病毒。 热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹
果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病毒
切取茎除去病毒，所以茎 尖大小要合适。
离体茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响
茎尖长 叶原基数 小植株数 脱毒植株 （ｍｍ） 数 0.12 1 50 24 脱毒率 （％） 48
0.27 0.6
2 4
42 64
18 0
42.9 0
剥取茎尖过程: 解剖镜下用解剖针将叶片剥掉，解剖针要常消毒。当
3、茎尖的培养方法
材料选择、消毒
微茎尖的剥取
接种
3、茎尖的培养方法
需要一台解剖镜（8-40倍）。 剥离茎尖要迅速并尽快接种，或在一个衬有 无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，以防茎尖变干。 茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严 密保护，只要仔细解剖，(无须表面消毒)就可得 到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的 污染率。 即：叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只 须75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽， 如香石竹、马铃薯等，则要用0.1%次氯酸钠表 面消毒10min。