腌菜酱菜等食品中亚硝酸盐的测定
酱菜中亚硝酸盐含量的测定及其对人体健康的影响
酱菜中亚硝酸盐含量的测定及其对人体健康的影响□徐迪齐齐哈尔医学院附属第二医院科技文苑■摘要：亚硝酸盐是一种特征污染物，广泛存在于水体、土壤和食品中，可在人体内与仲胺、叔胺和氨基化合物反应 形成强致癌物一亚硝胺化合物，所以对亚硝酸的检测是十分必要的。
亚硝酸盐的测定方法很多，本文利用重氮偶合比色法 测定酱莱中亚硝酸盐的含量，酱菜均采购于超市，利用分光光度计测定样品的吸光度。
根据G B-18406.1-2001《农产品安 全质量无公害蔬菜安全要求》及世界卫生组织和联合国粮农组织有关规定，检测样品中亚硝酸盐含量是否超标，并分析亚 硝酸盐对人体健康的影响。
关键词：亚硝酸盐；比色法；检测1亚硝酸盐概述1.1亚硝酸盐简介绿叶蔬菜含有多种维生素和矿物质，可增强人体免疫力，但是大家所 不知道的是：亚硝酸盐以微量形式普 遍存在于这些蔬菜中。
现已证实，人 体摄入的硝酸盐与亚硝酸盐70%~80% 来自于蔬菜[1]。
部分中国人对腌制食 物的热爱，让中国人的亚硝酸盐摄入 量超a世界平均水平。
当亚酸盐摄入 人体内被硝酸还原酶还原为亚硝酸盐，而亚硝酸盐在人体内积累到达一定程 度时，会引起人体缺氧中毒反应，患 高铁血红蛋白症[2]，使血液失去携氧 功能，引起组织缺氧中毒，呼吸中枢 麻痹。
亚硝酸盐还可与食品中的次级 胺结合，生成强致癌物质亚硝胺，可 诱发消化系统癌变[35]。
榨菜、水晶蒜等小酱菜爽口开胃，但这类食品本身含有少量亚硝酸盐，同时腌制工艺上促进亚硝酸盐的生成, 以上因素结合，使酱菜成为亚硝酸盐 最容易超标的食品。
对酱菜类食品进 行亚硝酸盐监测，不仅能够对市场进 行监督、对食品加工企业进行监管，更是对人民生命健康的负责。
因此，本文采用重氮偶合比色法检测，速度 快，误差率小，且成本低廉极易操作，尤其适合基层食品药品监管工作。
1.2亚硝酸盐的危害硝酸盐可以在多种菌类和化学活性物的作用下生成亚硝酸盐，只要有 适合的温度或介质，硝酸盐可以在自 然状态下转换为亚硝酸盐[6]。
实验6泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定_图文
实验材料：
〔1〕配制溶液
看书配制了哪些溶液？ 具体做法是什么？
氯化铵缓冲液：调整PH。
硫酸锌溶液：可使蛋白质沉淀，防止蛋白质 影响光密度值的准确测定。
氢氧化钠溶液：中和乳酸。
亚硝酸钠标准溶液：取250mg亚硝酸钠，参加 200ml蒸馏水和100ml氯化铵缓冲液混合，再转 移至500ml容量瓶，用水稀释，冰箱避光保存。
3、为什么泡菜坛内有时会长一层白膜，这层白膜 是怎么形成的？
形成白膜是由于产膜酵母的繁殖。酵母菌是兼 性厌氧微生物，泡菜发酵液营养丰富，其外表氧气 含量也很丰富，适合酵母菌的繁殖。
4、为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜，不吃存放 时间过长、变质的蔬菜？
有些蔬菜，如小白菜和萝卜等含有丰富的硝酸 盐。当这些蔬菜放置过久时发生变质〔发黄、腐烂〕 或者煮熟后存放太久时，蔬菜中的硝酸盐会被微生 物复原成亚硝酸盐，危害人体健康。
〔10mlV2滤液,氯化铵,乙酸,显色液,比色杯,空白对照〕
3.标准溶液测定光密度值，并作标准曲线
〔0和不同浓度的亚硝酸钠标准溶液，氯化铵， 乙酸，显色液，比色杯〕
4.计算 X1=(m2×V1)/(m1×V2)
比色
观察样品颜色 的变化，并与 标准显色液比
例题：泡菜是人们较喜欢 的一种食品，但是其中却 含有亚硝酸盐。当人体摄 入总量到达～时，会中毒； 超过3g时，会引起死亡。 我国卫生标准规定，亚硝
起作用的主要菌种：假丝酵母和乳酸菌
乳酸菌
凡可使糖类发酵产生乳酸的细菌，都称乳酸 菌，包括乳酸杆菌、嗜乳链球菌、酵母等。
泡菜制作原理
乳酸菌在无氧的条件下，利用牛奶或蔬菜
中的糖和其他营养物质进行厌氧呼吸发酵，产
生乳酸或醇类等物质。
制作泡菜并检测亚硝酸盐含量
反应条件
检测方法
重铬酸钾 品尝、 与其反应 pH试纸 呈灰绿色 检测
为什么含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶？ 因为酸奶的制作依靠的是乳酸菌的发酵 作用。抗生素能够杀死或抑制乳酸菌的生 长，因此含有抗生素的牛奶不能发酵成酸 奶 • 为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜，不吃
存放时间过长、变质的蔬菜？
有些蔬菜，如小白菜和萝卜等，含有丰 富的硝酸盐。当这些蔬菜放置过久发生变 质（发黄、腐烂）或者煮熟后存放太久时， 蔬菜中的硝酸盐会被微生物还原成亚硝酸 盐，危害人体健康。
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果酒
果醋
腐乳
泡菜
醋酸菌， 酵母菌，真 微生物 菌，兼性厌 细菌，好 类型 氧菌 氧 无氧呼吸 有氧呼吸 原理 产生酒精 产生醋酸
20℃ 无氧 30~35℃ 通入氧气
毛霉，真 乳酸菌，细 菌，兼性 菌，厌氧菌 厌氧 毛霉产生 蛋白酶和 无氧呼吸 产生乳酸 脂肪酶
2、亚硝酸盐 1）性质：为白色粉末，易溶于水。
2）作用： 食品添加剂
时会中毒， 3）影响：一般不危害健康 总量达0.3～0.5g
达 3g
酱腌菜中不超过
时会死亡
4）标准： 残留在肉制品中不得超过 30mg/kg
20mg/kg 婴儿奶粉中不得超过 2mg/kg
5）代谢：绝大多数亚硝酸盐随尿排出，但在 特定条件下会转变成致癌物质——亚硝胺。
二、制作泡菜实验流程示意图
原料加工
加盐 修整、洗涤、晾 晒、切分成条状 或片状 盐水 冷却 泡菜 盐水 成品
加调味 料装坛
发酵
测亚硝酸盐含量
三、制作泡菜实验 1、材料 作用：灭菌；渗出蔬菜中水分；调味。 （ 1） 各种蔬菜均可 注意：盐含量过多，抑制乳酸菌自身繁殖；过少， 杂菌滋生繁殖 （2） 添加的调味品，如花椒、八角等。
潮州酱腌菜中硝酸盐及亚硝酸盐含量的测定
1.440
3.000
4.701 109.0 0.020
贡菜
1.706
3.000
4.634 98.0 0.076
萝卜干 0.675
3.000
3.836 105.0 0.177
表５ 酱腌菜中硝酸盐回收率的测定（mg/kg）
样品 酱橄榄
样品硝酸 盐的含量 /(mg/kg)
173.90
硝酸盐标准 液的加入量
准确吸取 4.00 mL 的亚硝酸钠标准使用液，分别 置于 25 mL 的具塞比色管中，加入 1.00 mL 的对氨基 苯磺酸溶液，密塞混匀，放置 4 min，加 1.00 mL N-1萘基乙二胺盐酸盐溶液，密塞混匀，定容，放置 15 min 后在波长 538-551 nm 处用 1 cm 的比色皿，以水为参 比，测量吸光度。从图 1 可见最大吸收波长是 539 nm。
萝卜干 257.51
40.00
2295.76 96.0 0.038
2.2 讨论 2.2.1 从表知盐酸乙二胺法测定酱菜中的亚硝酸盐， 其回收率：98 %~109 %；RSD：0.0198 %~0.177 %。 而紫外分光光度法测定酱菜中的硝酸盐，其回收率： 96 %~110 %；RSD：0.027 %~0.041 %。说明这两种方 法准确度、灵敏度高，都是可行的。
关键词：酱腌菜；亚硝酸盐；硝酸盐；测定 中图分类号：TS255.53；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2007)07-0086-03
Determination of Nitrite and Nitrate in Chaozhou Pickles and
Sauerkrauts
HAO Gui-xia, YANG Xiao-bin (Chemistry Department, Hanshan Teachers' College, Chaozhou 521041, China)
腌制咸菜中亚硝酸盐含量测定
腌制咸菜中亚硝酸盐含量的测定摘要:目的：建立测定腌制蔬菜中亚硝酸盐含量的方法。
方法：在弱酸性溶液中亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反响生成的重氮化合物,重氮化合物再与盐酸萘乙二胺偶联生成紫红色的偶氮染料,用分光光度法测定。
结果：经过校正,亚硝酸盐含量x (μg) 与吸光度A 之间在λmax = 533nm 处,具有良好的线性关系。
利用此方法所测定的腌制蔬菜中亚硝酸盐的含量随时间有一定变化规律。
结论：用分光光度法测定腌制咸菜中亚硝酸盐的含量,方法简单、方便、快捷、实用,可对食品中亚硝酸盐含量的测定中推广应用。
关键词:腌制咸菜；亚硝酸盐测定；分光光度法The determination of the nitrite content of pickled vegetables Rongyanjun(Major biotechnique,grade 2007,Ocean University of China)Aim To establish a method for determining the content of the nitrite in pickledvegetables .Methods Nitrite react with 4-aminobenzenesulfonic acid inweak acidic media to produce 4-sulfobenzenediazonium , which reacted with N′-( napht halen-1-yl) eth-ane-1 ,2-diamine hydrochloride to produce a red diazene pound , the red pound was detected byspect rop hotometer . Results The calibration graph for aqueous procedure was obtained by plotting ab-sorbance values at 533 nm against nit rite concent ration. The content level of nitrite in the pickled vegetables we used has some disciplines. Conclusion The met hod is accurate , rapid , simple , can be applied indetermining the nit rite content of the pickledvegetables.Keywords:pickled vegetables; nitrite determination; spect rop hotometer1引言腌制蔬菜是利用食盐的高渗透压作用、微生物的发酵作用、蛋白质的分解作用及其它一系列的生化作用，抑制有害微生物的活动和增加产品的色、香、味的加工过程。
酱腌菜中亚硝酸盐含量的测定
分析检测酱腌菜中亚硝酸盐含量的测定丁世杰，王秀丽，王 妙（威海市食品药品检验检测研究院，山东威海 264200）摘 要：依据GB 5009.33—2016，采用盐酸萘乙二胺法对9种市售酱腌菜亚硝酸盐含量进行测定，该法可操作性强、成本低，适合大批次样品的检测。
通过分析不同种类酱腌菜中亚硝酸盐含量，对市售酱腌菜安全性进行评估，为开发绿色、健康的酱腌菜产品提供理论指导。
关键词：酱腌菜；亚硝酸盐；盐酸萘乙二胺法亚硝酸盐广泛存在于各种食品中，如酱腌菜、酱卤肉、隔夜炒菜等。
它在肉制品中可以起到增色、防腐保鲜、抗菌的作用，在肉制品的加工过程中会加入适量亚硝酸盐来增加产品风味[1]。
据研究表明，新鲜蔬菜在成长过程中并不会生成大量亚硝酸盐，但会富集硝酸盐，硝酸根受到硝酸盐还原酶、亚硝酸盐还原酶、亚硝酸盐氧化酶等一系列酶和细菌的影响，逐渐生成大量的亚硝酸根、铵根及氮气，人体短时间内摄入大量亚硝酸盐，可能会引起中毒，严重者会诱发癌症[2]。
酱腌菜中亚硝酸盐的含量受多种因素影响，所选蔬菜的种类不同，富集的硝酸盐含量也不同，直接影响后期酱腌菜中亚硝酸盐的含量[3]。
酱腌菜制作过程中，盐浓度高低影响乳酸菌等菌种的活性，影响酱腌菜中亚硝酸盐的浓度。
酱腌菜储藏过程中温度及腌制过程中各种配料的添加，都会对酱腌菜中亚硝酸盐的含量有影响[4]。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂紫外-可见分光光度计（株式会社岛津制作所 UV-2600）；电子天平（赛利多斯 SQPQUINTIX224-1CN）；GB 5009.33—2016[5]中所规定的试剂，并按要求配制，试剂均为分析纯，水为一级水。
1.2 实验方法从超市购入9种酱腌菜带回实验室，并对9中酱腌菜进行编号，分别是1号酸豇豆、2号凉拌菜、3号泡辣椒、4号开胃菜、5号大头菜、6号腌萝卜、7号风味榨菜、8号脆萝卜和9号腌制雪菜。
将每份样品用粉样机粉碎后，均称取3个平行样，每份样品质量约在5 g，并按GB 5009.33—2016 中第二法规定的处理方试将样品进行前处理，得到滤液。
腌制食品中亚硝酸盐测定结果分析报告
腌制食品中亚硝酸盐测定结果分析报告亚硝酸盐广泛存在于自然界环境中，人体摄入的亚硝酸盐主要来源于蔬菜、肉制品、腌制品等原料中以及食品中所含的硝酸盐转化而来。
为正确掌握亚硝酸盐在这些食品中存在的情况，耿马县在2012年5月份分别对10份酱腌菜及10份腌肉制品进行了亚硝酸盐含量的测定。
以此分析耿马县市场上的腌制食品安全状况。
标签：酱腌菜;腌肉制品;亚硝酸盐;分光光度法Analysis Report of Measurement Results of Nitrite in the Pickled FoodLONG Gui-qinDisease Control and Prevention Center of Dai-Va Autonomous County of Gengma，Lincang，Yunnan Province，677500 China[Abstract] Nitrite，widely exists in the natural environment，and human intake nitrite mainly comes from raw materials of vegetables，meat product and pickled food and converted from the azotate in food，in order to accurately master the existence condition of nitrite in these foods，Gengma county measures the content of nitrite in 10 pieces of pickles and 10 pieces of dry-cured meat products in May 2012，Based on this analysis，the status of salted food safety in Gengma county is analyzed.[Key words] Pickles; Dry-cured meat product; Nitrite; Spectrophotography亚硝酸盐，俗称工业用盐，常见的亚硝酸盐有亚硝酸钾和亚硝酸钠，为一种白色或微黄色结晶，有的为颗粒状粉末，无臭、味微咸涩，易潮解，易溶于水。
泡菜制作和亚硝酸盐含量测定
泡菜制作和亚硝酸盐含量测定泡菜是一种利用盐水或醋水醃制蔬菜的传统发酵食品，具有独特的风味和丰富的营养成分。
在泡菜制作的过程中，亚硝酸盐是一个重要的指标，因为它与泡菜的品质和安全性密切相关。
本文将介绍泡菜的制作过程以及亚硝酸盐含量的测定方法。
一、泡菜制作过程泡菜的制作主要包括以下步骤：选择食材、腌制、发酵和封装。
下面将介绍每个步骤的具体内容。
1.选择食材：制作泡菜可以使用各种蔬菜，如白菜、黄瓜、萝卜等。
选择新鲜、干净的食材是制作高质量泡菜的关键。
2.腌制：腌制是泡菜制作的重要步骤。
首先，将食材切成适当大小的块状，然后在容器中加入适量的盐，搅拌均匀。
腌制的时间可以根据口味和气温调整，通常为几小时或一天。
3.发酵：腌制好的食材需要进行发酵，以产生泡菜的特有风味。
在发酵过程中，食材中的蔬菜糖分会被细菌发酵，生成有机酸和气体。
这个过程通常需要几天到几周的时间，取决于发酵条件和个人偏好。
4.封装：泡菜发酵完成后，可以将其装入密封的容器中，保存在冰箱中。
泡菜的储存时间可以根据个人口味和材料的新鲜程度而定，一般可以保存几周或几个月。
亚硝酸盐是一种化学物质，具有抑制细菌生长和延缓食物腐败的作用。
然而，高浓度的亚硝酸盐对人体健康有害，特别是亚硝酸盐与胃酸作用后会生成致癌物质亚硝胺。
为了保证泡菜的安全性和品质，需要测定其亚硝酸盐的含量。
下面将介绍两种常用的亚硝酸盐含量测定方法。
1.铁盐法：（1）取泡菜样品，加入适量的蒸馏水，制成均匀悬浮液。
（2）取100mL样品，并加入亚硝酸钠溶液，使溶液中亚硝酸盐的浓度为50mg/L。
（3）分别取1mL样品溶液和0.02mol/L HCl溶液，各加入两个试管中。
（4）在一试管中加入亚硝酸钠溶液，使溶液中亚硝酸盐的浓度为2.0mg/L，另一试管中加入蒸馏水作为空白对照。
（5）将两组试管中液体混合，并加入硫代硫酸铁溶液，出现红色的比色反应说明亚硝酸盐的含量高。
（6）利用光度计将比色反应的吸光度测定，根据标准曲线计算亚硝酸盐的含量。
泡菜的腌制和亚硝酸的测定
（3）白酒。
（4）食糖和盐。
4、步骤：
（1）各种菜洗净并切成3~4cm长的小块。
（2）将泡菜坛洗净，并用热水洗坛内壁两次。 （3）将各种蔬菜、盐水、糖及调味品放入坛， 混合均匀。如果希望发酵快些，可将蔬菜在开水 中浸1min后入坛，再加入一些白酒。 （4）将坛口用水封好，防止外界空气进入。 （5）泡菜发酵:
周。
（6） 切开发酵的泡菜， 放在盘子里。
6、思考与练习：
（1）加入白酒有什么作用？ 白酒可抑制泡菜表面杂菌的生长，它也 是一种调味剂，可增加醇香感。
（2）用水封闭坛口起什么作用？不封闭有什 么结果？ 水封闭坛口起着使坛内与坛外空气隔绝的 作用，空气中21％是氧气，这是最简易的造成 无氧环境的方法。这样，坛内可利用蔬菜中天 然存在的乳酸菌进行乳酸发酵。如不封闭，则 会有许多需氧菌生长，蔬菜会腐烂。
（2）亚硝酸盐的测定
在乙酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发 生重氮化反应，这一产物再与N-1－萘基乙二胺偶联,形 成紫红色产物,可用光电比色法定量。 酸化→重氮化→显色→比色
2、设备及用品
（1）匀浆机 （3）烧杯 （2）试管及试管架 （4）500ml、100ml、25ml容量瓶 （6）光电比色计
补充思考题
1、为什么泡菜坛内有时会长一层白膜，这 层白膜是怎么形成的？ 形成白膜是由于产膜酵母的繁殖。酵母菌是兼 性厌氧微生物，泡菜发酵液营养丰富，其表面 氧气含量也很丰富，适合酵母菌的繁殖。
2、为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜，不 吃存放时间过长、变质的蔬菜？ 有些蔬菜，如小白菜和萝卜等含有丰富的硝酸盐。 当这些蔬菜放置过久时发生变质（发黄、腐烂） 或者煮熟后存放太久时，蔬菜中的硝酸盐会被微 生物还原成亚硝酸盐，危害人体健康。同型乳酸发酵:发Fra bibliotek产物中只有乳酸
酱腌菜中亚硝酸盐含量的测定
酱腌菜中亚硝酸盐含量的测定由于肉制品生产企业在生产过程中乱加、 误加亚硝酸盐而引起食物中毒, 所以强制检验肉制品生产企业加入硝酸盐与亚硝酸盐的含量起到非常重要的作用。
肉类罐头与肉制品最大使用量不得超过 0.05克 /公斤。
除了肉类食品含有硝酸盐及亚硝酸盐, 果蔬制品、 酱腌菜中也含有亚硝酸盐。
：1.分光光度法在稀盐酸介质中，NO 2-与碱性品红发生重氮反应，用8—羟基喹啉作偶联剂，在弱碱性条件下，生成茶红色偶氮染料来定量测定NO 2-含量。
,最常用的方法是盐酸萘乙二胺法, 也就是用分光光度计测定样品吸光度, 分光光度法以其设备简单、操作快捷、灵敏度高、结果直观的优点, 深受欢迎。
本实验研究了以α - 萘胺为显色剂, 利用紫外可见分光光度计测定肉制品中的亚硝酸盐的含量的方法。
结果证明, 此方法简单、快捷、准确, 是一种食品检测的好方法。
【实验原理】自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与α-萘胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。
其颜色的深度与样液中亚硝酸含量成正比，可比色测定。
反应式如下： N H 2SO 3H N +N SO 3H NO 2-H +O H 2+++ NSO 3H N NH 2N +N SO 3H +NH 2肉制品中亚硝酸盐含量==50150040100010001⨯⨯⨯⨯m X （mg/kg ） 式中：X 为由测得的吸光度在标准曲线上对应的亚硝酸钠质量浓度（μg/mL ）；m为样品质量（g）。
【实验部分】一、主要试剂及仪器（1）亚铁氰化钾溶液：称取10.619克亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]溶于水，并稀释至100mL。
（2）乙酸锌溶液：称取22.0克乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]，加3mL冰醋酸溶于水，并稀释至100mL。
（3）饱和硼砂溶液：5.0克硼酸钠（Na2BO4·10H2O）溶于100mL热水中，冷却备用。
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食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定方法
1 格里斯试剂比色法(亚硝酸盐测定)
2 原理
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。
3 试剂
实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。
3.1 氯化铵缓冲液：1L容量瓶中加入500mL水，准确加入20.0mL盐酸，振荡混匀，准确加入50mL氢氧化铵，用水稀释至刻度。
必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。
3.2 硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g硫酸锌(ZnSO
4·7H
2
O)，用水溶解，
并稀释至1000mL。
3.3 氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。
3.4 对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700mL水和300mL 冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
3.5 N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)：称取0.1gN－1－萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
3.6 显色剂：临用前将N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
3.7 亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加100mL氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。
此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。
3.8 亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。
4 仪器
4.1 小型粉碎机。
4.2 分光光度计。
5 操作方法
5.1 样品处理
称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL水和12mL氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH＝8，定量转移至200mL容量瓶中加10mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL氢氧化钠，混匀。
置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。
放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液备用。
5.2 测定
5.2.1 亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL 亚硝酸钠标准使用液(相当于0，2.5，5，10，15，20，25μg亚硝酸钠)，分别置于25mL带塞比色管中。
于标准管中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液，加2.5mL60%乙酸后立即加入5.0mL显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm 比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯)，以零管调节零点，于波长550nm处测吸光
度，绘制标准曲线。
低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0，2，4，6，8，10μg亚硝酸钠)。
5.2.2 样品测定：吸取10.0mL上述滤液(5.1)于25mL带塞比色管中，自5.2.1“于标准管中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液”起依法操作。
同时做试剂空白。
6 计算
——样品中亚硝酸盐的含量，mg/kg；
式中：X
1
——样品质量，g；
m
1
m
——测定用样液中亚硝酸盐的质量，μg；
2
——样品处理液总体积，mL；
V
1
V
——测定用样液体积，mL。
2
结果的表述：报告算术均值的二位有效数。