凝胶渗透色谱净化-高效液相色谱法测定鱼肉中的5种激素类药物残留
凝胶色谱净化气相色谱法测定鳗鱼中多种有机磷农药残留量
凝胶色谱净化气相色谱法测定鳗鱼中多种有机磷农药残留量现代食品科技Modern Food S cience and Technology2012, Vol.28, No.10凝胶色谱净化 /气相色谱法测定鳗鱼中多种有机磷农药残留量段建发，林隆强，林文华，史佳虹，林超（汕头出入境检验检疫局，广东汕头 515031）摘要：建立了凝胶色谱技术（GPC）净化，用气相色谱法测定水产品鳗鱼中11种有机磷农药残留量的方法。
样品用乙酸乙酯/环己烷溶液（1+1，V/V）超声提取，GPC净化，收集所需流分,浓缩近干后用乙酸乙酯溶解定容，气相色谱分析。
方法检测限（LOQ ）为0.01~0.02 mg/kg，方法回收率为76.3%~106.8%，相对标准偏差（RSD）为2.3%~15.8%。
结果表明，该方法操作简便快速、灵敏度高，符合实际应用需要。
关键词：有机磷农药；凝胶色谱；气相色谱；鳗鱼文章篇号：1673-9078(2012)10-1400-1402Determination of Organophosphorus Pesticide Multi-residues in Eel by Gas Chromatography with Gel Permeation Chromatography Clean-upDUAN Jian-fa, LIN Long-qiang, LIN Wen-hua, SHI Jia-hong, LIN Chao (Shantou Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Shantou 515031, China)Abstract: A method was developed for determining of 11 organophosphorus pesticide residues in eel by Gas Chromatography (GC) with Gel Permeation Chromatography (GPC) clean-up. The samples were extracted using the solution of ethyl acetate and cyclohexane (1+1, V/V) with ultrasonic machine and then cleaned up by GPC. The elution needed was ccollected and concentrated to nearly dryness. The residue was dissolved with ethyl acetate for determination by GC-FPD. The limit ofquantification (LOQ) was 0.01~0.02 mg/kg. The recovery ranges were 76.3%~106.8% when the added levels were from 0.02 mg/kg to 1.0 mg/kg. The relative standard deviations (RSD) were 2.6%~13.8%. The method was simple, sensitive and suitable for the analysis of pesticide residues. Key words: organohposphorus pesticide; GPC; gas chromatography; eel有机磷农药作为一种高效、广谱的杀虫剂，在蔬菜水果中得到广泛应用，但其急性毒性强，在蔬莱水果中的残留易引起食物中毒[1~2]，此外农药还可以通过环境迁移和食物链富集在鱼、禽、畜等动物体内，使农药污染更为严重，并对人类健康造成潜在威胁。
高效液相色谱法测定肉类中克伦特罗等激素类生长促进剂残留量
高效液相色谱法测定肉类中克伦特罗等激素类生长促进剂残留量刘军;刘清;李志强;刘钰;李小龙【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2005(041)007【摘要】肉类样品用乙醇提取,经C18固相萃取柱,甲醇(10+90)2 mL淋洗,甲醇2 mL洗脱.采用Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μtm),甲醇-磷酸(1+99)为流动相(75:25),流速1 mL·min-1,柱温26℃,紫外检测波长240 nm测定.克伦特罗、多巴胺、己烯雌酚、睾丸素、黄体酮五种激素类生长促进剂成分可同时测定,检出限分别为0.4,2.4,0.3,0.5,0.4 μg·g-1,平均回收率分别为99.0%,98.0%,100.7%,97.5%,94.0%,RSD分别为2.7%,1.2%,2.3%,2.3%,3.5%.检测方法简便快速、可靠准确.【总页数】3页(P504-506)【作者】刘军;刘清;李志强;刘钰;李小龙【作者单位】兰州市疾病预防控制中心,兰州,730030;兰州市疾病预防控制中心,兰州,730030;兰州市疾病预防控制中心,兰州,730030;兰州市疾病预防控制中心,兰州,730030;兰州市疾病预防控制中心,兰州,730030【正文语种】中文【中图分类】O657.17【相关文献】1.高效液相色谱法测定猪肉及血清中盐酸克伦特罗残留量 [J], 李娜;刘佩佩;李桂芝;刘永明2.固相萃取-高效液相色谱法测定蜂蜜中克伦特罗残留量及条件优化 [J], 王韦岗3.高效液相色谱法测定猪尿中克伦特罗对映异构体残留量 [J], 吴银良;杨挺;单吉浩;皇甫伟国4.固相萃取-反相高效液相色谱法测定鲜肉中盐酸克伦特罗残留量的条件优化 [J], 张群;刘烨5.高效液相色谱法测定肉与肉制品中盐酸克伦特罗残留量 [J], 林奕芝;刘奋;戴京晶;梁伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
动物源食品雌激素检测的样品前处理技术进展
动物源食品雌激素检测的样品前处理技术进展陈荷莲，张晓慧（江汉大学化学与环境工程学院，湖北武汉430056）摘要：检测动物源食品中的残留雌性激素，样品前处理必不可少且非常重要。
本文从提取、净化浓缩、衍生化等方面综述了近年来从动物源食品中检测雌性激素的样品前处理技术，旨在为从事动物源食品中性激素检测者及相关领域的研究者提供一定的参考。
关键词：雌性激素；样品前处理；技术中图分类号：S-3文献标志码：A文章编号：1674-9324（2014）35-0119-02[2][德]哈贝马斯.合法性危机.刘北成等译[M].上海人民出版社，2000.[3]B·盖伊·彼得斯.政府未来的治理模式[M].北京：中国人民大学出版社，2001.[4]王锡锌，章永乐.“参与式治理”的兴起：经验模式、理论框架和制度分析[A]//中国———瑞士“权力的纵向配置与地方治理”国际学术研讨会论文集[C].2009.[5]孙爱芳.我国食品安全现状及对策研究[J].河南科学，2012，（09）.广东省省级创新训练计划项目：公民参与政府治理的有效性探析———以广东食品安全举报电话为例（编号：1056412039）。
通讯作者：武玉坤，男，副教授，研究方向为公共预算与财政管理、公共政策。
雌性激素是一类由动物性腺分泌或人工合成的低分子量、强亲脂性、具有较高稳定性的类固醇类物质，具有控制动物繁育、促生长等作用。
残留于动物源食品中的雌性激素通过食物链被人体摄入后，对人体固有激素系统的正常工作构成严重干扰，尤其对胎儿、儿童的生殖系统、神经系统、免疫系统的正常发育威胁极大。
为防止性激素污染食品被人食用，危害身体健康，必须对食品中性激素残留进行检测和分析。
要有效地分析出动物源食品中残留的性激素，除了有比较灵敏的检测仪器和科学的检测技术，样品前处理必不可少且非常重要。
样品的前处理就是通过一定的程序和方法，将雌性激素从动物源食品的基体中分离出来，将样品转换为仪器可检测的形式。
凝胶渗透色谱-高效液相色谱法测定食用菌中呋喃丹农药残留
凝胶渗透色谱-高效液相色谱法测定食用菌中呋喃丹农药残留冯晓青;汪怡;王芹;王露;宋鑫;徐瑞;杭学宇【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2016(000)005【摘要】建立了凝胶渗透色谱净化高效液相色谱法检测食用菌类中呋喃丹农药残留量的方法。
样品经乙腈提取,氮气吹干,环己烷-乙酸乙酯(1∶1,V/V)溶液溶解后,凝胶渗透色谱进行净化,C18反相高效液相色谱柱分离后,采用液相色谱荧光检测器进行测定,外标法定量。
呋喃丹在0.2~5.0 ng/mL 质量浓度范围内呈良好线性关系,相关系数 r 大于0.999,测定低限为0.01 mg/kg。
对空白食用菌样品进行3个浓度水平0.5、1.0和2.0 mg/kg 的加标回收试验,呋喃丹的加标回收率为78.3%~97.6%,相对标准偏差(RSD)为3.26%~11.69%。
本实验所建立的方法简单,灵敏度高,适用于食用菌样品中的呋喃丹农药残留的分析检测。
【总页数】4页(P6-9)【作者】冯晓青;汪怡;王芹;王露;宋鑫;徐瑞;杭学宇【作者单位】淮安市疾病预防控制中心，淮安223001;淮安市疾病预防控制中心，淮安223001;淮安市疾病预防控制中心，淮安223001;淮安市疾病预防控制中心，淮安223001;淮安市疾病预防控制中心，淮安223001;淮安市疾病预防控制中心，淮安 223001;淮安市疾病预防控制中心，淮安 223001【正文语种】中文【相关文献】1.凝胶渗透色谱-高效液相色谱-串联质谱法测定烟草中50种农药残留量 [J], 廖雅桦;周冀衡;穆小丽;盛志佳;钟科军;胡念念2.凝胶渗透色谱-高效液相色谱-线性离子阱质谱法测定膳食样品中的氨基甲酸酯类农药残留 [J], 杨欣;李鹏;苗虹;赵云峰;吴永宁3.凝胶渗透色谱净化高效液相色谱－串联质谱法检测辛辣蔬菜中咪鲜胺等7种农药残留 [J], 丁葵英;高彦;于金玲;孙军;赵晗;李凯;4.凝胶渗透色谱净化高效液相色谱-串联质谱法检测辛辣蔬菜中咪鲜胺等7种农药残留 [J], 丁葵英;高彦;于金玲;孙军;赵晗;李凯5.高效液相色谱法测定农作物中呋喃丹农药残留量 [J], 祝永英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
农药残留检测的前处理方法
种植与环境誄近年来，由于农业生产过程中忽视农药的正确、合理使用，农药污染问题经常发生，农药残留量超标现象相当严重，并呈现逐年加剧的趋势。
为保障人民的身体健康、有效控制农药在农产品生产中的使用和对其残留量进行监控，大力开展农药残留检测技术特别是相关的前处理技术的研究是非常必要的。
农药残留测定之前要有适合于各种样品的理化性质的萃取、净化、浓缩等前处理步骤，这些前处理过程往往对农药残留分析的准确性、精确程度有重要影响。
由于农药残留检测技术涉及的样品种类繁多、样品组成及其浓度复杂多变、样品物理形态范围广泛，对农药残留测定构成的干扰因素特别多，所以需要选择有效的处理方法。
大部分农药残留检测实验室中用于农药残留检测样品前处理过程的时间约占整个分析时间的2/3。
为了提高分析测定效率，改善和优化农药残留检测样品制备的方法是重要问题。
在现代农药残留分析中，有些提取方法已经能够达到部分净化或完全净化的效果。
这些新方法的共同特点是节省时间，减轻劳动强度，节省溶剂，减少样品用量，提高提取或净化效率以及自动化水平。
目前，得到广泛应用的新方法主要有以下几种。
1超临界流体萃取（SFE）超临界流体（SCF）是指处于临界温度和临界压力的非凝缩性的高密度流体。
这种流体介于气体和液体之间，兼具2者的优点。
SFE是指利用处于超临界状态的流体为溶剂对样品中待测组分的萃取方法。
应用SFE方法检测蔬菜中五氯硝基苯残留，样品无需进一步净化即可通过气质联机（GC-M S）检测。
为提高SFE的萃取效果，常在超临界流体二氧化碳中加入少量的极性溶剂。
可在洋葱、胡萝卜前处理过程中加入甲醇，有效地提高了被检农药的回收率。
SFE技术的优点是可进行选择性萃取，萃取物不会改变原来的性质，萃取过程简单易于调节；缺点是萃取装置较昂贵，不适于分析水样和极性较强的物质。
2固相微萃取（SPME）SPM E的原理是利用待测物在基体和萃取相之间的非均相平衡，使待测组分扩散吸附到石英纤维表面的固定相涂层，待吸附平衡后，再以气相色谱或高效液相色谱分离和测定待测组分。
超高效液相色谱-串联质谱法分析测定鱼肉中性激素多残留的研究
超高效液相色谱-串联质谱法分析测定鱼肉中性激素多残留的研究曾文灿;关文瑜;林应椿【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2013(025)008【摘要】目的建立鱼肉中微量雄激素、孕激素和雌激素的超高效液相色谱串联质谱分析技术.方法以草鱼为代表,考察鱼肉中性激素在HLB固相萃取柱的提取净化效果,建立超高效液相色谱-串联质谱分析技术,在正/负电喷雾离子化多反应监测模式下分别测定雄激素、孕激素和雌激素.结果在最优条件下,鱼肉中14种性激素实现了快速、灵敏的分离检测,定量限(S/N≥10)为0.4～2μg·kg-1;应用于不同加标浓度的草鱼肉样品分析,回收率为60%～117%,RSD为6.7%～18.9%,符合国际公职分析化学家联合会(AOAC)要求.结论该方法检测灵敏度高,准确度和重现性好,在鱼肉中性激素多残留分析中效果良好.【总页数】5页(P51-55)【作者】曾文灿;关文瑜;林应椿【作者单位】福建省测试技术研究所,福州,350003;福建省测试技术研究所,福州,350003;福建省测试技术研究所,福州,350003【正文语种】中文【中图分类】R927.11【相关文献】1.超高效液相色谱-串联质谱法测定食用菌中农药多残留研究 [J], 孙涛;刘圣红;赵子刚;古丽斯坦;赵多勇;王成2.高效液相色谱-串联质谱法检测羊奶中乙酰孕激素多残留研究 [J], 方秋华;黄显会;郭春娜;杨刚;孔祥凯3.新型QuEChERS方法结合高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法快速测定鱼肉中14种激素 [J], 李诗言;王扬;周凡;郑重莺;柯庆青;王鼎南;贝亦江4.高效液相色谱-串联质谱法快速分析鱼肉中的类固醇激素残留 [J], 卢巧梅;童萍;蔡惠坚;张兰5.EMR固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定虾肉中性激素残留的方法建立[J], 辛丽娜;莫东淑;蒋定之;曾坚;梁飞燕;蒙初曦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定淡水鱼中抗生素残留量
高效液相色谱法测定淡水鱼中抗生素残留量王玉春;赵星洁;刘英华;杨晓华【期刊名称】《河北科技大学学报》【年(卷),期】2007(28)3【摘要】抗生素富集于鱼体内,通过食物链对人类健康构成危害.通过对高效液相色谱仪的检测波长、流动相及流速、提取方法等几方面的优化,使用Spherisorb C18 柱,以V(乙腈)∶V(磷酸二氢钠)(EDTA的浓度为0.001 mol/L)=28∶72作为流动相,在355 nm的检测波长下,成功地进行了人工饲养淡水鱼体内的四环素、金霉素、土霉素等残留物的定量检测,平均回收率约为98.0%,平均相对标准偏差约为4.63%.【总页数】3页(P215-217)【作者】王玉春;赵星洁;刘英华;杨晓华【作者单位】河北科技大学河北省分析测试研究中心,河北石家庄,050018;河北科技大学河北省分析测试研究中心,河北石家庄,050018;河北科技大学河北省分析测试研究中心,河北石家庄,050018;河北科技大学河北省分析测试研究中心,河北石家庄,050018【正文语种】中文【中图分类】TQ465【相关文献】1.豆芽中6种喹诺酮类抗生素药物残留量的同时测定高效液相色谱-串联质谱法测定 [J], 陶志成;朱丹倩;骆灿;孔玉婷2.超高效液相色谱-串联质谱法测定貉子肉中30种抗生素残留量 [J], 张嘉楠;李宏娟;李曼;杜顺丰3.溶剂萃取分离-高效液相色谱-串联质谱法测定对虾中12种抗生素的残留量 [J], 李飞鹏;黄炯;王明珠;陈玲;陶红4.固相萃取—高效液相色谱—串联质谱法测定动物源食品中万古霉素类抗生素残留量 [J], 林津;范小龙;江丰;彭青枝;周陶鸿5.超声提取-凝胶渗透色谱法净化-超高效液相色谱-串联质谱法测定鸭肠及其制品中6种常见抗生素的残留量 [J], 宁方尧;温韬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中8类38种兽药残留
高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中8类38种兽药残留摘要：在养殖过程中，滥用抗生素、大量使用合成等药物的现象越来越严重，兽药具有致癌、至畸、至突变等不良效用，危害人类健康。
近年来由于滥用兽药引起的食品安全问题频发已逐渐成为人们普遍关注的一个社会热点问题。
一些化学合成药物在畜牧水产养殖业中使用较多，随便使用这些药物是很容易使水产品受到污染的。
在这种情况下，人们吃了这种受到污染的肉类食物，就会使得这些毒素在人体内积累，会使人体产生一定的抗药性。
随着兽药在我国实际生产中的广泛应用，人们对其危害有了更多的认识，这些肉类食品中所残留的兽药也是目前食品安全中所关注的重要内容。
因此，对畜牧水产养殖业的相关产品进行严格的检测，能够保证肉类食品的质量。
本文建立了高效液相色谱-串联质谱HPLC-MS/MS同时测定水产品中喹诺酮类、大环内酯类、磺胺类、磺胺增效剂、林可胺类、硝基咪唑类、类和多肽类8类共38种限用兽药残留的检测方法。
关键词：高效液相色谱；串联质谱；兽药残留本试验同时测定鳗鱼、鳙鱼和小龙虾中的类药物残留，在检测的过程中，检测的药物种类虽多，但前处理方法简单并不需要特殊的实验装置来辅助实验，检测周期短且成本低，从而为水产品的大量检测，提供了更加简便的方法。
一、实验部分1.1实验所用的仪器和试剂实验仪器：质谱仪、高效液相色谱仪、Waters C3色谱柱、IKAT25数显型高速分散机、低温高速离心机和氮吹浓缩仪。
实验试剂：甲醇、正已烷、甲酸、冰乙酸、无水硫酸钠，以上试剂均为分析纯，乙腈、甲酸为色谱纯。
1.2样品前处理样品的提取及净化：称5.00g样品置于50mL聚丙烯离心管中，加入约5g无水硫酸钠及15mL1%的乙酸乙腈溶液，用高速分散机进行提取，离心（5000r/min，5min），收集上清液。
沉淀再用20mL1%的乙酸乙腈溶液按照上述步骤重复提取一次，离心，合并上清液，用提取液将其定容到25mL，混合均匀，将其放到-80℃的冷冻机中冷冻1小时。
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凝胶渗透色谱净化-高效液相色谱法测定鱼肉中的5种激素类药物残留谢维平;欧阳燕玲;黄盈煜;陈春祝【摘要】建立了凝胶渗透色谱净化-高效液相色谱法测定鱼肉中己烯雌酚、雌二醇、炔雌醇、炔诺酮、炔诺孕酮5种激素类药物残留的方法.样品用乙酸乙酯-甲醇(8:2,v/v)溶液提取,提取液经Pharmadex LH-20凝胶柱(450 mm×15 mm)净化,并用甲醇-乙酸乙酯-乙酸(800:200:2,v/v/v)溶液洗脱.采用Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)分离净化后的样品,用乙腈-水(45:55,v/v)溶液洗脱,流速为1.2 mL/min,双检测波长为245 nm和222 nm.5种激素类药物在0.05～2.5 mg/L 范围内有良好的线性关系(r ＞0.999),检出限为10～24 μg/kg,平均加标回收率为60.1% ～89.0%,相对标准偏差为2.0% ～7.4%.该方法快速、简单,可应用于鱼肉中激素类药物残留量的检测.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2010(028)004【总页数】5页(P388-392)【关键词】凝胶渗透色谱;高效液相色谱;激素类药物;残留;鱼肉【作者】谢维平;欧阳燕玲;黄盈煜;陈春祝【作者单位】泉州市疾病预防控制中心理化检验科,福建,泉州,362000;泉州市疾病预防控制中心理化检验科,福建,泉州,362000;泉州市疾病预防控制中心理化检验科,福建,泉州,362000;泉州市疾病预防控制中心理化检验科,福建,泉州,362000【正文语种】中文【中图分类】O658激素类兽药广泛应用在动物养殖业中,其主要功能有缩短动物饲养周期、促进产品产量增长等。
然而由于激素类药物的不当使用或滥用,会导致其在动物源性产品中残留,残留的激素类药物通过食物链进入人体会产生一系列与内分泌相关的诸如生长发育障碍、出生缺陷和生育缺陷等非健康效应。
各国相继制定了相应的法律限制或禁止激素类药物在动物饲养中应用[1]。
为此,开展动物源性食品中激素类药物残留分析具有重要意义。
目前有关激素类兽药残留的检测方法主要有气相色谱-质谱法(GC-MS)[1,2]、高效液相色谱法 (HPLC)[3-5]、液相色谱-质谱法 (LC-MS)[6-8]等。
由于动物源性食品基质复杂,所以在进行残留分析时通常需要对样品提取液进行净化,目前报道的净化技术主要有固相萃取[1,2,5-7]、液-液萃取[4,8]等方法。
凝胶渗透色谱 (GPC)方法作为一种通用的样品净化技术已经成功应用于农药的多残留分析,近年来也有应用于药物多残留分析的报道[9-11],但应用于激素类药物的残留分析报道很少。
GPC净化技术主要是基于分子大小的原理进行分离的,它具有重现性好、回收率高、适用于多残留分析等特点。
探索 GPC净化技术应用于药物残留分析对建立药物多残留分析平台具有重要的意义。
因此,我们建立了应用 GPC净化技术并结合 HPLC检测鱼肉中包括己烯雌酚、雌二醇、炔雌醇、炔诺酮、炔诺孕酮等5种药物残留分析的方法,取得了较为满意的结果。
1 实验部分1.1 仪器与试剂B eckm an125高效液相色谱仪,配二极管阵列检测器(DAD,美国Beckm an公司),Accup repp凝胶渗透色谱仪 (美国 J2Scientific公司)。
Sigm a2-5K离心机,组织匀浆机,超纯水系统,EYELA旋转蒸发仪(日本东京理化株式会社),中压玻璃柱(500 mm×15mm,上海楚柏实验设备公司),超声波清洗器,Pharm adex LH-20葡聚糖凝胶(18～111μm,美国 Am ersham B iosciences公司)。
甲醇、乙腈、乙酸乙酯 (HPLC级,美国 TED IA公司),无水硫酸钠为分析纯,水为超纯水。
药物对照品:己烯雌酚 (diethylstilbestrol,0033-9805)、雌二醇(estradiol,10182-0103)、炔雌醇 (ethinylestradiol,10052-0107)、炔诺酮(norethisterone,0053-9303)、炔诺孕酮 (norgestrel,10028-9907)购自中国药品生物制品检定所。
样品为购自市场的新鲜昌鱼、鲫鱼和草鱼。
1.2 凝胶渗透色谱柱称取 15g LH-20葡聚糖凝胶浸泡在 70mL乙酸乙酯-甲醇(2∶8,v/v)溶液中并过夜,吸胀后的凝胶仍保持在液面下。
将吸胀的凝胶转移至中压玻璃柱内,用乙酸乙酯-甲醇(2∶8,v/v)作淋洗剂,在重力作用下流经凝胶柱,填充高度为 450mm,稳定后两端压紧。
将制备的凝胶柱装于凝胶色谱仪上,用乙酸乙酯-甲醇(2∶8,v/v)溶液以2.0mL/m in流速冲洗凝胶柱 30m in,稳定后待用。
1.3 样品提取准确称取 5.00g经粉碎、混匀的鱼肉组织样品,加入盛有 5g左右无水硫酸钠的离心管中,搅匀,使样品成疏松状,再加入 35mL乙酸乙酯-甲醇(8∶2,v/v)溶液,置于组织匀浆机中,在 10 000 r/m in条件下匀浆 5m in后,于超声波清洗器中超声 10m in,然后在 3 500r/m in条件下离心 5m in,收集提取液;分离后的残渣再用 15mL乙酸乙酯-甲醇(8∶2,v/v)溶液提取一次;合并两次提取液,于旋转蒸发仪浓缩至干,蒸干的样品用 5.0mL GPC流动相溶解,经0.45μm微孔滤膜过滤,滤液待净化。
1.4 样品净化将上述滤液装入进样瓶,置于凝胶渗透色谱仪中。
凝胶色谱净化条件:色谱柱为自制的 LH-20凝胶色谱柱;流动相为乙酸乙酯-甲醇-乙酸(200∶800∶2,v/v/v),流速为2.0mL/m in;进样量为 2.5mL;检测波长为 254nm。
弃去前 20m in的洗脱液,收集20～35m in的洗脱液;将收集的洗脱液置于旋转蒸发仪浓缩至干后,用 2.0mL HPLC流动相溶解,经0.45μm微孔滤膜过滤,滤液供高效液相色谱分析。
1.5 HPLC条件色谱柱:Agilent TC-C18反相色谱柱(250mm× 4.6mm,5μm);流动相:水-乙腈(55∶45,v/v),流速 1.2mL/m in;柱温:30℃;扫描波长:200～360 nm;双紫外检测波长:222nm和 245nm;进样量: 100μL;外标法定量。
1.6 标准溶液及样品测定准确称取 10.0m g(精确至 0.1m g)5种药物标准品,用甲醇溶解并定容至 10.0mL,分别配制质量浓度为 1.00g/L的 5种激素类药物标准储备液。
取 5种激素类药物储备液各 1.00mL于 10mL容量瓶中,用甲醇定容,得到 5种激素类药物的混合标准溶液(100m g/L),再用流动相配制质量浓度分别为 0.05,0.10,0.50,1.0,2.5m g/L的系列混合标准溶液。
2 结果与讨论2.1 色谱条件优化由于激素类药物残留分析需要较高的灵敏度,因此我们采用大体积进样。
但是大体积进样在增加灵敏度的同时可能会带来分离度下降、峰扩展。
实验中通过优化流动相,在选定的色谱条件下,即使进样体积达到100μL,也可以使 5种激素类药物的峰形及分离良好。
用二极管阵列检测器采集各激素在200～360 nm范围内的光谱图,发现己烯雌酚、炔诺酮、炔诺孕酮的特征波长为 245nm,而雌二醇和炔雌醇在245nm下吸收弱,其特征波长为 222nm。
因此,采用双波长进行检测,即在 245nm波长下检测己烯雌酚、炔诺酮、炔诺孕酮,在 222nm波长下检测雌二醇和炔雌醇。
图1为混合标准溶液的色谱图。
图1 双检测波长下 5种激素类药物混合标准溶液(2.5m g/L)的色谱图F ig.1 C hrom a togram s of a m ixed standa rd so lu tion of 5horm one d rugs de tected a t doub le w ave lengths Peakidentifications:1.estradiol;2.ethinylestradiol;3.norethisterone;4.diethylstilbes trol;5.norgestrel.2.2 凝胶渗透色谱净化GPC净化技术广泛应用于动物源性食品中的农药、兽药残留分析,主要采用聚苯乙烯凝胶 (B io-Beads SX3)[9]及葡聚糖凝胶 (LH-20凝胶)[10,11]作为固定相。
由于LH-20凝胶是亲水亲脂性凝胶,能够使用甲醇等极性溶剂作为流动相,更适用于药物残留分析的净化。
在我们以前的实验[11]中,建立了LH-20凝胶净化 9种磺胺药物残留分析的方法,并比较了B io-B eads SX3与 LH-20的净化效果,结果发现当采用聚苯乙烯凝胶时,基质组分与药物组分不能有效分离,而采用 LH-20凝胶净化,基质组分与药物组分可以有效分离。
因此,在本实验中采用LH-20凝胶净化样品并探讨其在激素类药物残留分析中的净化条件。
在磺胺药物残留分析的净化方法[11]中,采用甲醇-二氯甲烷(1∶1,v/v)溶液作为洗脱溶剂,但是由于二氯甲烷的毒性较大,并且 GPC又需要消耗较多的溶剂,因此我们试验用乙酸乙酯替代二氯甲烷作为洗脱溶剂。
LH-20凝胶除了具有分子筛作用外,还具有吸附、离子交换作用,在洗脱溶剂中加入乙酸可以排除这些作用。
经过试验,我们选用甲醇-乙酸乙酯-乙酸(800∶200∶2,v/v/v)混合溶液作为 GPC的流动相。
以空白昌鱼作为试验对象,测定了 5种激素类药物及昌鱼提取物在 LH-20凝胶柱上的流出时间(见表1)。
表1结果表明了 5种激素类药物的流出时间在 18～30.5m in,而基质组分流出时间为 10～20m in,因此,在 GPC净化时选择收集 20～35m in的流出液,弃去其余部分。
图2为添加了 5种激素类药物混合标准溶液(每种激素类药物的质量浓度为 20m g/L)的空白昌鱼提取物的GPC分离色谱图。
从图2可以看出,空白昌鱼提取物中 5种激素类药物与鱼肉基质成分在 GPC上得到了良好的分离,从而达到了净化的效果。
表1 5种激素类药物及鱼肉基质组分在凝胶柱上的流出时间Table1 E lu tion tim es of horm one d rugs and fish m a trix on a LH-20ge l p e rm ea tion co lum n＊ tmax:the tim e w ith the m axim um signal of the drug.?图2 添加 5种激素类药物混合标准溶液(每种激素的质量浓度为 20m g/L)的空白昌鱼提取物的GPC分离谱图F ig.2 Ge l p e rm ea tion chrom a togram of the ex tract from b lank fish tissue sp iked w ith five ho rm one drugs(20m g/L fo r each ho rm one) Peaks:1.m atrix;2.five horm one m ixture.2.3 凝胶渗透色谱的净化效果动物源性食品中化学物残留分析的主要干扰物包括脂类、蛋白质、细胞色素等。