呼肠孤病毒草鱼肾脏的病理变化观察
草鱼呼肠孤病毒RT—LAMP检测方法的建立
向反应液 中加入 １ Ｌ Ｙ Ｒ Ｇ ｅｎ Ｉ染料 ，颜色 由橙 色 Ｓ Ｂ ｒｅ
变为绿 色 ， 而阴性对 照仍为橙色。
４ 讨 论
随着科学技术 的发展 ， 近年来 ， 有多种 分子生物学方 法 如 Ｒ －Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ等 已应用 于草鱼呼肠孤病毒的检测 。 但这些方法 比较耗 时 ， 且需要 昂贵的仪器设 备和专业 的操作 人员 ， 不适
本次试 验反应时 间分别设计在 ３ 、 、 、２ｍｎ ０６ ９ １０ ｉ，经过反复 ０ ０ 试验 ， 选定最佳反应 时间 ６ ｉ。 ０ｒｎ ａ ２ ＿ 体系建立 ．３ ３ Ｒ —Ａ Ｐ Ｔ Ｌ Ｍ 反应体 系为 ２ Ｌ外 引物 Ｆ 、 ５ ： ３
Ｂ ３各 ０２ ． ｍｏＬ，内 引物 ＦＰ和 ＢＰ各 １ ＩｍｏＬ，Ｎ Ｐ ｌ ／ Ｉ Ｉ ．Ｘ ｌ ｄ Ｔ ６ ／ １ ｍｍ ｌ Ｂ ｔＤ Ａ 聚 合 酶 ８ ． ｏＬ，ｓ Ｎ ４ ／ ｕ，反 转 录 酶 ５ １ ｓ ｕ，０ＸＢｔ
果， 故在每次检测过程都应设置阴性对照 。 参考文献
【 Ｆ ｎ ｅ ＬＣ ａａｔｒａ ｏ ｆ ｔｕ ｒｃ ｓｏ ｇ ｓ １ ａｇＱ ｔ ｈ ｒ ｅ ｚｔｎｏ ｉｅ ｉ ｓａ ｉｅ ｒ ｓ ］ ａ ｃ ｉ ｉ ｆｎ ｃｏ ｔｌ ｆ ａ ｃｒ ｅｖ ｕ ｙｔ ａｍ ｎ ｗｔ ｐｏ ａｅ［． ｒｈｖｓｏ ａｐ ｒ ｉ ｓｂ ｅｔ ｅｔ ｉ ｒｔ ｓｓ ］ Ａ ｃｉｅ ｆ ｏｒ ｒ ｈ ｅ Ｊ
剂 盒抽提说 明书进行 。
２３ ＫＴ Ｉ ＭＰ 反应体系的建立 ． —＾
２３１ 反应 温度 的优化 ．．
温度影 响 Ｄ Ａ聚合酶 的作用 ， Ｎ 本
试 验 中分 别将温度 设定在 ５ 、９６ 、３ ６ ℃，经 过反复试 ７ ５ 、１ ６ 、５
草鱼感染GCRV后血液中淋巴细胞变化及BCL10表达分析
草鱼感染GCRV后血液中淋巴细胞变化及BCL10表达分析姜祝祥;郭早枣;郑国栋;邹曙明
【期刊名称】《水生生物学报》
【年(卷),期】2022(46)4
【摘要】为了研究草鱼BCL10基因在草鱼出血病中的应答机制,文章克隆了BCL10基因,并利用生物信息学、荧光定量和血涂片等技术对其进行了分析。
生物信息学结果显示,BCL10基因开放阅读框为738 bp,编码245个氨基酸。
实时荧光定量PCR结果显示,感染病毒后草鱼体内BCL10表达量持续上调,在肝胰腺和中肾中第4天达到峰值,第7天表达量开始下调。
血涂片显微镜观察发现了血液中淋巴细胞在感染病毒后第1到第4天下降,第7天时上升。
肾脏的组织病理学观察也发现中肾中肾小管上皮细胞第1到第7天逐渐空泡化,脱落坏死。
以上结果表
明,BCL10基因参与了草鱼应对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)入侵的免疫应答。
【总页数】7页(P514-520)
【作者】姜祝祥;郭早枣;郑国栋;邹曙明
【作者单位】上海海洋大学农业农村部团头鲂遗传育种中心;农业农村部淡水水产种质资源重点实验室;上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心
【正文语种】中文
【中图分类】S941.4
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3.草鱼jam-a分子在胚胎幼鱼期及受GCRV感染PSF细胞的表达分析
4.草鱼jam-a分子在胚胎幼鱼期及受GCRV感染PSF细胞的表达分析
5.HIV感染者血液T淋巴细胞亚群表达水平的变化及其临床意义
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草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型在不同鱼类细胞中的增殖情况
草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型在不同鱼类细胞中的增殖情况李贤;曾伟伟;王庆;王英英;李莹莹;宋新建;黄琦雯;石存斌;吴淑勤【摘要】草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型(GCRVⅡ)是当前导致草鱼出血病流行和暴发的主要基因型,本研究拟通过分析GCRVⅡ代表株HZ08在不同鱼类细胞中的增殖情况来筛选GCRVⅡ的敏感细胞系.首先以不同浓度的HZ08株接种草鱼吻端成纤维细胞(PSF)和草鱼鳔细胞(GSB),以确定病毒接种的最佳浓度;然后以最佳接种浓度同时感染PSF、GSB、草鱼肝细胞(L8824)、草鱼卵巢细胞(CO)等10种鱼类细胞,接毒后每天观察细胞状态,用荧光定量PCR(qPCR)方法定量分析HZ08在各种细胞系中的增殖量,并在感染5d后用间接免疫荧光定性分析病毒在各种细胞中的增殖情况.结果显示,HZ08感染细胞的最佳接种浓度为1.0×104拷贝/μL,该毒株接种的10种鱼类细胞均无明显的细胞病变效应(CPE);qPCR分析病毒感染5～8 d后的结果显示,HZ08在GSB、L8824、PSF、草鱼鳍条细胞(CF)、CO、草鱼脑细胞(CIB)、锦鲤吻端细胞(KS)7种细胞中均能增殖,其中在GSB、L8824和PSF细胞中的增殖量较大,最大分别为1.14×107、5.90×106和6.30×104拷贝/μL.而在鲤上皮细胞(EPC)、锦鲤脑细胞(KB)、鲫脑细胞(CcB)中不增殖,免疫荧光定性检测结果与荧光定量检测结果相吻合,在GSB、L8824和PSF中的荧光信号较多、较强,其他细胞中则较弱或没有荧光信号.研究表明,GSB、L8824和PSF是GCRVⅡ较为敏感的细胞系,该研究结果对今后Ⅱ型GCRV的研究和防控产品开发具有重要意义.【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2016(040)008【总页数】9页(P1249-1257)【关键词】草鱼;呼肠孤病毒;基因Ⅱ型;细胞系;增殖情况【作者】李贤;曾伟伟;王庆;王英英;李莹莹;宋新建;黄琦雯;石存斌;吴淑勤【作者单位】中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380;上海海洋大学水产与生命学院,上海201306;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380【正文语种】中文【中图分类】S941.41草鱼（Ctenopharymgodon iedlla）呼肠孤病毒（grass carp reovirus，GCRV）是目前已知毒力最强的呼肠孤病毒，主要引起1龄和2龄草鱼发生出血病，死亡率一般为 30%～50%，最高可达 60%～90%，而且还能感染青鱼（Mylopharyngodon piceus）、麦穗鱼（Pseudorasbora parva）、稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）、鲢（Hypophthalmichthys molitrix）等［1-2］，在中国、越南、缅甸等亚洲国家都有报道。
不同日龄呼肠孤病毒番鸭脾脏病理变化的动态观察
不同日龄呼肠孤病毒番鸭脾脏病理变化的动态观察陆英杰;梁文柱;麦景华【期刊名称】《佛山科学技术学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(028)004【摘要】目的检测不同日龄呼肠孤病毒番鸭脾脏的动态病理变化.方法常规病理组织染色方法,对感染呼肠孤病毒3、5、7日龄的番鸭进行脾脏病理学观察,同时应用免疫组织化学方法对不同日龄中脾脏病变严重的进行Fas凋亡基因初步检测.结果感染呼肠孤病毒的不同日龄番鸭脾脏与正常组相比均有不同程度的变性、坏死,7日龄更重且Fas基因有表达与正常组相比表达数量增多.结论随着呼肠孤病毒感染番鸭日龄的增长,脾脏淋巴细胞坏死数量越多,7日龄脾脏Fas基因表达与正常组比数量增多,显示呼肠孤病毒对番鸭细胞免疫的破坏.【总页数】3页(P15-17)【作者】陆英杰;梁文柱;麦景华【作者单位】佛山科学技术学院,动物医学系,广东,佛山,528231;佛山科学技术学院,动物医学系,广东,佛山,528231;佛山科学技术学院,动物医学系,广东,佛山,528231【正文语种】中文【中图分类】S858.32【相关文献】1.禽(番鸭)呼肠孤病毒诱导脾脏单核-巨噬细胞和淋巴细胞凋亡的超微观察 [J], 姚金水;吴宝成;陈文列;陈家祥;吴异键2.感染新型鸭呼肠孤病毒雏番鸭和健康雏番鸭的肝蛋白质组学的差异 [J], 朱果真;黄梅清;陈仕龙;郑敏;程晓霞;陈少莺3.不同毒力番鸭呼肠孤病毒在番鸭免疫器官的分布和排毒 [J], 程晓霞;朱小丽;林锋强;陈仕龙;陈少莺;王劭;李兆龙4.番鸭呼肠孤病毒和H9亚型禽流感病毒共感染对番鸭法氏囊和抗体产生的影响[J], 林锋强;赵佳荣;陈少莺;朱小丽;程晓霞;王劭;陈仕龙;蔡羲;李兆龙;马春全5.鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒及番鸭呼肠孤病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与临床应用 [J], 谢守玉;吴双燕;刘惠心;尹彦文;施开创;屈素洁;陆文俊;黄小武;廖东安;王露霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
草鱼头肾免疫细胞组成和数量变化的研究
草鱼头肾免疫细胞组成和数量变化的研究头肾：某些圆口类及少数硬骨鱼在成体时，仍保留残存的前肾,称为头肾，其位置相当于全肾的前部，具有免疫功能。
头肾含有大量的免疫细胞．其中淋巴细胞约占62．2％，粒细胞约占36．6％，单棱细胞和巨噬细胞约占1．2％。
本研究检测不同生长发育期的草鱼头肾器官重量及其免疫细胞数量。
材料：试验鱼：取自本所养殖场养殖的正常草鱼。
有当年、I龄、Ⅱ龄、Ⅲ龄、Iv龄和Ⅵ龄草鱼，分析天平，无菌剪刀，不锈钢筛，无菌Hanks液，l00目的尼龙网，血细胞计数板，(Giemsa染色液，Bouins液，石蜡，HE染液-光镜标本制作)，（3％的戊二醛卡可酸钠缓冲，1％的锇酸，，酒精，，树脂-电镜标本制作）.步骤：1，头肾重量测定：试验鱼先称体重然后断尾放血，用无菌操作进行解剖，取出垒部头肾组织，分析天平称重,2，免疫细胞总数的测定：再取一定量的头肾组织，用无菌剪刀剪碎，过不锈钢筛，无菌Hanks液洗下l00目的尼龙网过滤，翩成一定浓度的细胞悬液，立即采用血细胞计数板计数，（免疫细胞总数包括全部淋巴细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞等所有白细胞。
）。
3，头肾免疫细胞分类计数：采用头肾印迹片，Giemsa染色，按印迹片自然分布计数l000—,2000个免疫细胞，进行分类统计。
4，光镜组织标本制作：采用Bouins液固定，常规石蜡包埋，4—5 m 厚切片，HE染色。
,头肾印迹片采用Giemsa染色。
4，电镜组织标本制作：用3％的戊二醛卡可酸钠缓冲液作前固定，1％的锇酸作后固定，酒精系列脱水，树脂包埋，超薄切片，电子染色后用透射电镜观察。
结果1，草鱼头肾及其免疫细胞分布A:草鱼头肾位于胸腔内咽退缩肌上方两侧，围绕心腹隔膜前面的食道背面和两倒J分布。
头肾呈扁平状，分左右两叶，两叶头肾在基部相连。
B:在第1种静脉及其窦状隙周围，HE染色显示蓝紫色（由于淋巴细胞聚集）C:在第2种静脉及其血窦周围，HE染色显示较淡的颜色（粒细胞聚集）2，头肾免疫细胞种类组成头肾的细胞分类计数见表。
呼肠孤病毒简介
ห้องสมุดไป่ตู้
・５ ・ ０
Ａｎｍａ ＜ｅ ｃ ｒ ａ ｌＳ－ ｎ ｅＡｂ ｏ ｄ Ｊ ｉ
Ｆ ｂ ２ ０ Ｖｏ ． ９ ｅ． ０２ １２ Ｎｏ １
呼 肠 孤 病 毒 简 介
Ｌ ｕｓＶ ｎｄ ｒＨｅｄ ｏ ｉ ａ ｅ ｉｅ著
ｌ５ ９ ７年 ， 弗 吉 尼 亚 大 学 的 Ｄ ． ＇ ｒｌｎ 西 ｒ ？ｏｎａ ￣
刘 文 波 摘译
柴 同 杰校
型 ．ａ ｕ等 报 道 有 ４个 ． ｅｈ ｋ Ｓｈ Ｄ ｓ ｍｕ ｈ等 人 则 认 为 具 ２个不 同的血 清型 。作 者调 查发现 所有从 美 国 分离 的 毒株 尽管 并 不 完全 被 ｓ ｌ ３ 血 请 中和 ， Ｉ３ 抗 但其 血 清型还是 相近 的 。 而 ， 然 在欧 洲和 以色列分 离 的一些 病毒根本 不被 ｓ １ ３的抗血清 中和 １３
感 Ｋｅｒ等还 发现 这种 病原 体 只对青 年 鸡致 病 ． ｒ
而 这 个 Ｅ龄 的鸡 对 支 原 体 也 很 易 感 。 随 后 ． ｓ ｎ ｌ Ｏｌ ｏ
Ｄ ｓ ｍｕ ｈ等通 过控制环境等 因素 ． １ ｅｈ ｋ 第 次证 明 了该病毒 可经卵垂直传播 。 ｏ Ｗｏ ｄ等 人则对 从美
和他 的 同事 确认 这种 病 原 体是 １ 病 毒 ， 们 称 种 他 之 为“ 病毒性 关节 炎病原 ” 由于它具 有双股 核酸 ． 所 以第 １次 被 误 诊 为 痘 病毒 。随 后这 种 病毒 被 Ｗａ ｅ ｌ ｒ等人通 过 电镜 观察 定名 为呼肠孤 病毒 ｋ 给鸡 试 验感 染 这种 呼 腑孤病 毒 后 ． 引发 关 能 节 炎和腱鞘 炎 不久 ， 国的其它 地方 也报道 分离 美 出了呼 肠 孤病 毒 。 而且 不 全是 从 发生腱 鞘 炎 的病
草鱼出血病
草鱼出血病草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒感染引起，以鱼体多部位充血和出血为主要临床症状的一种急性传染病，主要感染草鱼、青鱼。
据不完全统计，我国每年因该病造成的经济损失超过10亿元人民币，给水产养殖业造成严重经济损失。
病原学草鱼出血病于20世纪50年代发现于我国，也是我国分离的第一种鱼类病毒。
1991年，国际病毒分类委员会正式命名为草鱼呼肠孤病毒，英文简称GCRV。
草鱼呼肠孤病毒属于呼肠孤病毒科，刺突呼肠孤病毒亚科，水生呼肠孤病毒属。
病毒无囊膜，具有双层衣壳，病毒粒子，呈正二十面体对称球形颗粒。
草鱼呼肠孤病毒的毒株大致可分成三个基因型。
目前在我国流行的毒株类型以II型为主，英文简称GCRV—II。
分布情况根据近年在我国开展的流行病学调查结果，草鱼出血病在我国草鱼主养区广泛存在，对华南华、中西南等地区草鱼养殖危害较大。
流行病学自然情况下，草鱼呼肠孤病毒可感染养殖草鱼、青鱼，死亡率最高可达70%-80%，水温在20℃~30℃时易发病，25℃至28℃为流行高峰。
临床症状草鱼出血病的临床症状大致可分为三个类型：一、红肌肉型，多见于5~10cm的小草鱼种。
二、红鳍红鳃盖型，多见于10cm以上的较大草鱼种。
三、肠炎型，在各种规格的草鱼种中均可见到。
鱼体感染草鱼呼肠孤病毒后，各组织出现血管扩张、充血、细胞变性和局灶性坏死等。
诊断方法针对草鱼呼肠孤病毒，目前已经建立了电竞观察法、免疫学方法、核酸扩增技术等多种实验室检测方法。
其中核酸扩增技术是目前应用最为广泛的分子检测技术，灵敏性高，特异性强。
预防目前疫苗接种是预防草鱼出血病的最有效方法。
上世纪60年代末，使用的土法疫苗曾在预防发病中发挥了重要作用。
弱毒疫苗于2011年获得生产批准文号，是我国第一个商业化应用的水产疫苗。
另外，近年来，国内多家科研机构不断探索研究亚单位疫苗、DNA疫苗等新型疫苗，并在实验室条件下取得了较好的效果。
草鱼呼肠孤病毒出血病及疫苗注射方法
体在养殖池内麻醉清醒的时间，清醒时间过长应及时调整麻醉环节的时间。
初始注射期间随机抽取10尾已接种的鱼，解剖观察注射部位是否正确，是否出现出血症状，内脏是否有损伤，观察疫苗在腹腔内的分布。
注射部位如果出现错误应及时对相关操作人员进行修正，注射部位如果出现出血、内脏出现损伤等症状，应及时更换注射针头和修正相关人员注射操作。
三、疫苗接种后疫苗接种后因应激反应，鱼的行为与摄食会受到一定的影响，出现不聚群、摄食状态差等症状，为了降低应激反应，疫苗注射后应停食两天，开始投喂后饵料中应添加多维素等抗应激药物，正常摄食一般在两周后可恢复。
枫叶鲑在疫苗注射后每隔1个月，抽取10尾解剖检测疫苗在腹腔中的残留状态和粘连状态，并抽取血液样本检测抗体效价。
四、讨论所用疫苗必须是使用成熟工艺制备而成，才能保证疫苗对受体起到理想的保护效果。
疫苗注射过程中麻醉时间不能过长，本次疫苗注射死亡的142尾全部因麻醉时间过长致死，麻醉受体的时间和每次麻醉箱内受体的数量要把握适当，才能使疫苗注射操作快而稳地进行。
疫苗注射的剂量通常大于受体所需产生免疫的剂量，每尾每针定在0.1毫升，以满足受体所需剂量。
疫苗注射的速度主要跟注射人员的技术、集鱼速度和麻醉速度有关，一个有经验的技术人员每尾注射所需的平均时间约2.5秒，即约1500尾/时，综合集鱼、麻醉与注射各环节的衔接，接种疫苗个人平均速度约为600尾/时。
受体注射疫苗后自身可产生相应的免疫力，当有相应的病原体入侵受体时会自动免疫，对受体产生很强的保护。
本次注射枫叶鲑3万尾左右，未注射疫苗7000尾左右，从养殖至销售完毕16个月，产出成品鱼2.7万尾左右，注射疫苗组死亡3000尾左右，未发现因杀鲑气单胞菌致死病体，未注射疫苗组全体死亡，其中因杀鲑气单胞菌致死为5500尾左右，致死率为78.6%。
可以看出，疫苗在保护枫叶鲑对杀鲑气单胞菌的免疫防治过程中起到很理想的免疫效果。
济宁市是我国北方重要的淡水渔业大市，各类宜渔水利资源非常丰富，渔业经济在全市农业经济中占有较高比重，而其中草鱼作为一种优质大宗淡水鱼类品种，在我市渔业生产中占有举足轻重的地位。
草鱼出血病（值得一阅）
草鱼出血病（值得一阅）草鱼出血病的防治随着目前各地区温度的不断上升，草鱼出血病也随之显现出来，草鱼出血病流行广、危害大、死亡率高、发病季节时间长等特点。
病原该病病原为草鱼呼肠孤病毒，又称草鱼出血病病毒，为双链RNA病毒。
病毒颗粒呈二十四面体的球形，直径70-80nm，具有双层衣壳，无囊膜。
流行情况该病流行范围广在湖南、湖北、广东、江西、福建、四川、江苏、东北等各地区均有发生，主要危害草鱼与青鱼，尤其是7-10cm的当年鱼种。
该病流行季节通常在6-9月为流行高峰期，一般发病水温在23-33℃，最适水温为27-30℃，20℃以下病鱼呈隐性感染。
潜伏期一般为3-10天，死亡率为70%-80%。
症状病鱼会呈现出体色发黑，尤为头部最明显。
有的鱼会出现食欲减退，而有的鱼会呈现出吃食正常，但是每天都会出现死亡。
我们根据鱼所表现的临床症状及病变，一般分为三种类型：1“红鳍红鳃盖型”以体表出血为主，口腔、下颚、鳃盖、眼眶四周以及鳍条基部明显充血和出血。
2“红肌肉型”主要以肌肉出血为主，与此同时鳃瓣因严重失血，呈“白鳃状”而体表会出现“赤皮”现象。
3“肠炎型”主要以肠道出血为主，肠道、肠系膜、肝、肾、脂肪、脾脏颜色变淡，局部呈鲜红色。
在以上三种类型在实际养殖过程中可能单独出现，也可能会相互混杂出现。
诊断根据配合以上症状的表现，包括病理变化、临床诊断及流行情况进行初步诊断，但需要注意与细菌性肠炎病的区别；活检时草鱼出血病时肠道弹性较好，肠道粘液较少，严重时肠腔内有大量红细胞及成片脱落的上皮细胞；而细菌性肠炎肠壁弹性差，肠腔内粘液较多，严重时肠腔有大量渗出液和坏死脱落的上皮细胞，红细胞较少。
防治对于目前尚无特别有效的治疗方法，主要是预防:1、进行灭活疫苗注射，2、鱼种下塘前用可以使用聚维酮碘等消毒液浸浴之后再下塘。
3、加强饲养管理，创造良好的生存环境，因为肠炎型出血一般都伴随着水质恶化出现。
进行生态防病定期加注清水，泼洒生石灰。
草鱼出血病毒
诊断
诊断
1、根据症状及流行情况进行初步诊断
进行初步诊断时，必须注意以下区别：
（1）以肠出血为主的草鱼出血病和细菌性肠炎病的区别。活检时，前者的肠壁弹性较好，肠腔内黏液较少； 病情严重时，肠腔内有大量红细胞及成片脱落的上皮细胞，而后者的肠壁弹性较差，肠腔内黏液较多；病情严重 时，肠腔内有大量黏液和坏死脱落的上皮细胞，红细胞较少。
谢谢观看
（2）根据病理变化可做出进一步诊断如患出血病的鱼，小血管壁广泛受损，形成疑血栓，同时引起脏器组 织梗死样病变；在肝细胞等到胞浆内可以看到嗜酸性包涵体；超薄切片用透射电镜观察，在胞浆内可以看到球形 病毒颗粒；血液中红细胞数、血红蛋白量及白细胞数均非常显著地低于健康鱼；白细胞血式小，淋巴细胞百分率 十分显著地低于健康鱼，单核细胞百分率则非常显著地高于健康鱼；血消谷丙转氨酶、异柠檬酸脱氧酶、乳酸脱 氧酶活性增高；血浆总蛋白、血消白蛋白、尿素氨、胆固醇均降低等。
病原体
病原体
病原体是隶属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）的呼肠孤病毒 （Re-ovirus），定名为草鱼呼肠孤病毒 （GrassCarp Reovirus，简称GCRV） （陈燕新，1984）。病毒颗粒呈球形或六边形，平均直径70nm，无囊膜构 造，具两层衣壳结构。外层衣壳可见有外周子粒20个，外层衣壳可被糜蛋白酶消化除去，免疫电镜观察到病毒颗 粒与其相应的抗体结合成免疫复合物并聚集成团。病毒对酸（pH3）和氯仿不敏感，对热 （56℃）稳定，其复制 不受氧尿核苷酸抑制。为双股RNA类型病毒。毛树坚等（1989）分离出 “呼肠孤病毒”和 “小RNA病毒”，简称 “大病毒”、“小病毒”。在发病草鱼中，发现由不同病毒所引起的出血病症状不完全相同。由呼肠孤病毒感染 致病的病鱼主要表现为肠道严重充血 （79.54%），极少数的肌肉充血 （2.47%）和一定数量的肠道肌肉混合充 血 （17.99%）；由小RNA病毒感染致病的病鱼主要表现为肌肉严重充血 （47.32%）和肠道肌肉混合充血 （40.18%），而肠道严重充血的较少 （12.50%）。这样一来，把草鱼出血病的症状表现为 “红肌肉型”、“红 鳍红鳃盖型”和 “肠炎型”的致病原因说明得更具体了，也就能更有利于辨别草鱼出血病的三者症状集中于一身 或两者症状集中于一身所表现的症状特征。
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收 稿 日期 ：０ ０１— １ ２ １－２２
作者简介 ： 陆英 杰 （ ９ ０ ） 男 ， １ ７ 一 ， 吉林 榆树 人 ， 山 科 学 技术 学 院讲 师 ， 士 。 佛 博 通讯作者 ： 于 辉 （ ９ ０ ） 男 ， 龙 江 大 庆 人 ， 山 科 学 技 术学 院 副 教授 。 １７ 一 ， 黑 佛
摘 要 ： 究 呼 肠 孤 病 毒 草 鱼 肾脏 感 染 后 肾脏 的 病 理 变 化 。用 常 规 （ 研 ＨＥ） 色 方 法 观 察 草 鱼在 感 染 呼肠 孤病 毒后 染
的 病 理 改 变 ， 射 电源自 观 察 感 染 呼 肠 孤 病 毒 的 草 鱼 肾脏 的 显 微 结 构 变 化 结 果 ， 透 临床 上感 染 后 的 草 鱼 出 现 严 重 出
草 鱼 呼 肠 孤 病 毒 中 的 意 义 ， 实 验 通 过 人 工 感 染 呼 肠 孤 病 毒 ， 究 呼 肠 孤 病 毒 草 鱼 肾 脏 的动 态 病 理 变 化 本 研
及显 微结 构变 化 ， 方面 为该 病 的病 理学 诊断提 供依 据 ， 一方 面为 进一 步确定 病毒 在鱼 体 内各器 官组 一 另 织 的分 布 ， 揭示 病毒 的发 生 、 感染 及 病理机 制 ， 为该病 的防 治提供 理论 依 据 。
血 变 化 ， ７ｄ出 现 死 亡 并 达 到 最 高 峰 ， 亡 率 为 ８ ， Ｅ染 色 发 现 肾小 管 上 皮 和 血 管 细 胞 严 重 变 性 、 死 ， 死 ５ Ｈ． 坏 肾
小 球 萎 缩 和 基 膜 的 间 隙增 大 ， 分 肾小 球 细 胞 固 缩 坏 死 ， 胞 脱 落 形 成 大 的空 洞 ； 射 电镜 下 ， 脏含 有 呼肠 孤 部 细 透 肾
驯 养 １周 后 进 行 试 验 。
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 草 鱼 呼 肠 孤 病 毒 的 感 染 ． ．
健 康 草鱼 ５ Ｏ尾 ， 每组 ２ ５尾 ， 随机 分组 ， 以分 别注 射 ０ ５ｍＬ 尾病 毒 细胞 培养 液 和 ０ ５ｍＬ 尾生 理 ． ／ ． ／
盐 水 设 置 一 个 试 验 组 和 一 个 对 照 组 ， 组 均 分 别 用 加 热 棒 维 持 水 温 在 ２ Ｃ 以 上 ，８。 以 下 ， 行 １ 两 ５。 ２ Ｃ 进 ５ｄ
第 ２ ９卷第 ２期
２１ ０ １年 ３月
佛 山科学 技术 学院学 报 （ 自然 科 学 版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｏ ｈ ｎ Ｕ ｎ ｖ ｒ ｉ （ ｔ ｒ ｌＳ ｉ ｎ ｅ Ｅｄ ｔｏ ｏ ｒ ａ ｆＦ ｓ ａ ｉ ｅ ｓｔ Ｎａ ｕ ａ ｃｅ ｃ ｉｉ ｎ） ｙ
Ｖｏ ． ９Ｎｏ ２ １２ ．
病毒粒子 ， 肾脏 血 管 上 皮 细 胞 内线 粒 体 严 重 肿 胀 ， 断 裂 ， 至溶 解 成 囊 泡 状 ； 脏 中 有 嗜 中性 白细 胞 大 量 聚 嵴 甚 肾 集 。 结 论 ： 鱼 肾脏 是 呼 肠 孤 病 毒 易 感 染 的器 官 也是 该病 毒 的靶 器 官 。 草
关键词 ： 肠孤病毒 ； 鱼 ； 呼 草 肾脏 ； 理 变化 病 中图 分 类 号 ： ９ １ ￥ ４ 文 献 标 志码 ： Ａ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
草鱼 ’ 肾细胞 （ Ｉ ， 自武 汉 典 型培 养物 保 藏 中心 。Ｇ ＲＶ 病 毒 ， 自武汉 典 型 培养 物 保 藏 中心 Ｃ Ｋ） 购 Ｃ 购
（ ９ ７年保 存 的 ＧＣ Ｖ８ ３ 。试验草 鱼 ， １９ Ｒ ７） 当年生健 康草 鱼鱼种 ， 尾体 重 ６ ±１ ， 自大 邑县某 渔场 ， 每 Ｏ ０ｇ 购
Ｍ ａ ． ２ １１ ｒ ０
文 章 编 号 ： ０ ８ ０ ７ （ ０ １ ０ — ０ １０ １ ０ — １ １ ２ １ ） ２０ ４ — ４
呼肠 孤 病 毒 草 鱼 肾 脏 的 病 理 变 化 观 察
陆 英杰 颜其 贵 李 华 于 辉 。 ， ， ，
（ ． 山科 学技 术 学 院 动 物 医学 系，广 东 南 海 ５ ８ ３ ； ． 川 农 业 大 学 ， 川 雅 安 ６ ５ １ ） １佛 ２２１２四 四 ２０ ４
发 生 出血 病 ， 亡 率 可 高 达 ９ 以 上 。 此 外 ， 也 危 害 青 鱼 、 鱼 等 ， 起 的 疾 病 为 一 种 高 度 传 染 性 、 死 Ｏ 它 鲢 引 致
死性 的病 毒性传 染病 ［ ］对 养 鱼业造 成很 大 的经 济损失 。 病毒 对草 鱼各 器官 损伤严 重 ， １ ， 该 为明确 肾脏 在
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佛 山科 学技 术学院 学报 （ 自然科 学版 ）
第２ ９卷
１ ２ ２ 呼 肠 孤 病 毒 草 鱼 肾 脏 常规 的 病 理 变 化 ．．
取造 病 １ ５ｄ的呼肠 孤病毒 肾脏 ， 即潜伏期 第 ３ ４ ７天及 ７ｄ以上 高 峰期 的 肾脏进行 中性 甲醛 固定 、、 后， 进行 石蜡包埋 制作石 蜡 切片后 常用常规 Ｈ Ｅ染色 方法进行 ’ 常规动 态病理 学变化 ［ 。 肾脏 ３ ］
的造病 试验 。 取样 分别 设置 在 以下 ４个 阶段 ： 潜伏期 第 ３ 剖杀 实验 组鱼 ， 时剖杀对 照组 ； 第 ４天 在 天 同 在
发病 初 期 剖杀试 验组 和对 照组 鱼 ； 在第 ７ 死亡 高 峰期 剖杀 实验 组 和对 照组 鱼 ； 天 在第 １ 耐过 期剖 杀 ０天
实验 组 和对照 组鱼 。对 每个 阶段 剖杀 的鱼进行 解剖 和病理 组织 学观 察 ， 验期 为 １ 。 试 ５ｄ
草鱼 呼肠 孤病毒 亦称 草鱼 出血病 病毒 （ ｒｓ Ｃ ｒ ｅ ｒｈ ｇ ｉｕ ， ＨＶ） 我 国分离 的第 １株 Ｇ ａｓ ａｐ ｈｍｏｒ ａ ｅｖｒ ｓＧＣ 是
鱼类 病毒 ， 它属 于 呼肠 孤 病毒科 ， 是水 生 呼肠孤病 毒属 的一 个新 成员 。该病 毒 主要引 起草 鱼在鱼种 阶段