胶回收原理及注意事项
凝胶回收
AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中回收多至8μg DNA（70bp-10Kb），回收率为60-85%。
琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中熔化，其中的保护剂能防止线状DNA 在高温下降解，然后在DE-B 溶液的作用下使DNA 选择性结合到膜上。
纯化的DNA 纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR 扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性2ml离心管1.5ml离心管说明书Buffer DE-A：凝胶熔化剂，含DNA 保护剂，防止DNA 在高温下降解。
室温密闭贮存。
Buffer DE-B：结合液（促使大于70bp 的DNA 片段选择性结合到DNA 制备膜上）。
室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液，使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗脱液，室温密闭贮存。
二、注意事项1. Buffer DE-A(含有β-巯基乙醇)、Buffer DE-B 和Buffer W1 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
2. 在步骤1 中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间（线型DNA 长时间暴露在高温条件下易于水解），从而提高回收率。
勿将含DNA 的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。
3. 在步骤2 中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA 回收率。
4. 将Eluent 或去离子水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。
5. DNA 分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 7.0-8.5 洗脱液中保存。
三、实验准备1. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
dna凝胶回收原理
dna凝胶回收原理
DNA凝胶回收是一种将DNA物质从凝胶中提取出来的技术，其原理主要涉及DNA凝胶的消化、电泳分离和提取等步骤。
首先，需要将含有DNA样品的凝胶切割成小片或小块。
这可以通过将凝胶放在紫外线灯下照射，使其出现亮蓝色荧光，并用刀、剪刀或专用切割工具进行切割。
然后，将DNA凝胶片放入一个离心管或离心管盒中，并加入几倍体积的溶剂（例如Tris-HCl缓冲液）。
随后，将离心管置于37°C的温水浴中，使凝胶片中的DNA溶解。
接下来，通过离心将溶解后的DNA凝胶物质与溶剂分离。
在离心过程中，DNA分子被推到溶剂中，而凝胶片被离心力推到离心管的底部。
最后，将上清液转移到一个新的离心管中，这个上清液即为含有DNA物质的溶液。
这样，DNA物质就从凝胶中回收提取出来了。
需要注意的是，在DNA凝胶回收的过程中，凝胶溶解液的选取和温度控制非常关键。
溶解液的成分和浓度应该适合DNA 的溶解，同时温度的控制也要符合DNA的稳定性，以避免DNA的降解或损伤。
实验十 DNA 片段从凝胶中回收
DNA浓缩，去盐及去除杂质 浓缩， 浓缩
加入3倍量的碘化钠溶液于样品DNA溶液中（若 DNA为固态，则先将之溶于适量水或TE中，再加 3倍体积的碘化钠溶液）。 加20ul或更多的“基因纯”试剂（每ul该试剂可 20ul ul 吸附0.3ugDNA，操作者可根据这一指标自行决 定“基因纯”试剂的用量，但不应少于10ul）。 以下步骤与“从琼脂糖凝胶中分离纯化DNA片段” 中步骤d到j相同。
从凝胶中分离回收ＤＮＡ的方法
现在常用的技术有： 电洗脱法 低熔点琼脂糖凝胶法 ＤＥＡＥ滤膜插片法等 其中电洗脱法，经济节省，操作方便， 对Ｄ ＮＡ的回收效果好。
低熔点琼脂糖凝胶法
65oC琼脂糖凝胶熔点 低熔点琼脂糖凝胶 37oC 液体
ＤＥＡＥ滤膜插片法
High efficient DNA high quality for microinjection <5kb fragment 100ng DNA fragment 10mmol/L EDTA(pH8.0) 5 minutes 0.5 mol/L NaOH 5 minutes 低盐缓冲液50mM/LTris .Cl 0.15M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0) 高盐缓冲液50mM/LTris .Cl 1M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0)
１３．12000g，4℃下离心１０分钟，得ＤＮＡ沉 淀。 １４．弃上清，加入７０％乙醇洗涤２次后弃干乙 醇。 １５．加入５０µl ＴＥ溶解ＤＮＡ。 １６．取１０µl ＤＮＡ溶液加入2µl Loading buffer 于０．８％琼脂糖上， ４０伏电泳，３小时。 １７．在紫外透射仪上观察结果。 １８．测定ＤＮＡ溶液OD260,OD280值。
切胶回收的原理
切胶回收的原理咱来聊聊切胶回收这事儿。
这就像是从一堆宝藏里挑出咱想要的那一件宝贝，然后把它单独拿出来好好保存起来。
先说说凝胶电泳吧。
想象一下，各种大小的分子就像一群小伙伴在参加一场马拉松比赛，跑道就是琼脂糖凝胶。
那些小的分子啊，它们身子轻，跑起来就快，能在凝胶里跑得老远；而那些大的分子呢，就像背着重重行囊的人，跑得慢，没跑多远就被落下了。
这样一来，不同大小的分子就按照自己的速度在凝胶里拉开了距离，形成了一条条不同的条带。
这就好比是小伙伴们按照不同的速度在跑道上分散开来，各自在自己的位置上。
然后呢，咱就看到了那凝胶里的条条带带，这里面就有我们感兴趣的那部分。
这时候切胶回收就登场了。
就好像我们在那跑道上，看到了那个我们一直在找的小伙伴，然后把他所在的那一小段跑道给切下来。
那凝胶里的目标条带就像是藏着宝藏的那一小块地方。
那切下来的胶块里可都是宝贝啊。
可是怎么把这宝贝拿出来呢？这就涉及到切胶回收的核心原理啦。
有一种办法呢，是利用溶胶液。
这溶胶液就像是一个超级魔法溶剂。
把切下来的胶块放到溶胶液里，就像把那藏着宝贝的小盒子放到一个能打开它的魔法池子里。
溶胶液会把凝胶慢慢溶解掉，那些原本被困在凝胶里的DNA分子就被释放出来了。
这就好比是把宝贝从那个锁住它的小盒子里解救出来了。
还有一种情况呢，是和吸附有关的。
就像小磁石吸引小铁屑一样。
有些材料可以专门吸附DNA分子。
当把切下来的胶块处理后，那些DNA 分子就被吸附到特定的材料上了。
这时候其他的杂质就被留在一边了，就像把沙子和金子分开一样。
然后再通过一些特殊的溶液把吸附着的DNA 分子从材料上洗脱下来，这样就得到了比较纯净的我们想要的DNA分子啦。
在这个过程中，温度有时候也很关键。
就像不同的花朵需要不同的温度来生长一样。
合适的温度能让溶胶的过程更顺利，也能让吸附和洗脱的效果更好。
如果温度不合适，就像花儿在不合适的温度下长不好一样，切胶回收的效果可能就会大打折扣。
咱再从一个更形象的角度看。
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
胶回收常见问题
胶回收常见问题dna回收|dna回收试剂盒|捷瑞dna回收试剂盒|胶回收|胶回收试剂盒|胶回收原理1、如何计算提取率？1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率；2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比；3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。
2、如何简易测算提取率？取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。
3、如何看待提取得率？影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。
4、回收率为什么与点样量和片段大小有关？DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因？1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例；2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收；3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率；5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好；6）回收前的样品量太少，加大点样量；7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。
分子实验
一SDS碱裂解法制备质粒DNA质粒DNA的提取主要分为手工提取和试剂盒提取两类，试剂盒提取根据试剂盒说明即可，而手工提取主要是参考《分子克隆实验指南》（第二版）质粒DNA的小量制备－碱裂解法。
实验操作流程如下：1.细菌细胞的收获1）将2ml含有相应抗生素的LB加入到通气良好的试管中，然后接种一单菌落，于37℃剧烈振荡培养过夜。
2）吸去培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。
（这一步很重要，如果培养液不能彻底除去，可能会导致制备的质粒DNA不能被限制酶切开。
）2.碱裂解法1）将所得的细菌沉淀重悬于100µl用冰预冷的溶液Ⅰ中，用枪吹打再旋涡振荡。
2）加200µl新配制的溶液Ⅱ。
盖紧管口，快速颠倒离心管5次，以混合内容物。
应确保离心管的整个内表面均与溶液Ⅱ接触。
不要振荡，将离心管放置于冰上。
3）加150µl的溶液Ⅲ。
盖紧管口，反复颠倒数次之后将管置于冰上3－5 min。
4）用微量离心机于4℃以12000g离心5 min，将上清转移到另一离心管中。
5）加等体积酚∶氯仿，振荡混合有机相和无机相，用离心机于4℃以12000g 离心2 min，将上清转移到另一离心管中。
6）用2倍体积的乙醇于室温沉淀双链DNA。
振荡混合，于室温放置2 min。
7）用离心机于4℃以12000g离心5 min。
8）小心吸去上清液，将离心管倒置于一张纸巾上，以使所有液体流出。
再将附于管壁的液滴除尽。
（这一步也很重要，因为如果除尽上清液，同样会影响以后的酶切。
）9）用1ml 70％乙醇于4℃洗涤双链DNA沉淀，除尽上清，在空气中使沉淀干燥10 min，风干酒精直至无任何液体。
10）加入30µlTE，再加1µlRNase(1mg/ml) 37℃水浴15 min。
注意事项：1.手工提取的质粒DNA的量较大，但是质量稍差，较难除尽RNA和杂蛋白；试剂盒提取的质粒DNA的量相对较少，但是质量很高。
2.操作时动作不能过于剧烈，尤其是细胞破碎以后。
琼脂糖凝胶电泳回收试剂原理、步骤、问题大全
什么是凝胶电泳？凝胶电泳是根据大小分析和分离DNA片段的可靠方法。
电泳分离后，可以将特定的条带切出琼脂糖凝胶基质，然后进一步处理以纯化DNA。
对于许多工作流程，凝胶电泳仍然是分离特定大小的DNA的最佳方法（尤其是对于大于1kb的片段）。
许多下一代测序（NGS）文库制备仍需要在测序前使用琼脂糖凝胶分离出片段来分离样品。
但是，由于许多研究人员都在努力从原始输入中回收超过50％的产率，因此从凝胶切除物中回收DNA可能具有挑战性。
通过特别注意几个关键点，DNA的产量和质量可以大大提高。
凝胶电泳步骤：从套装开始为了回收尽可能多的DNA，甚至需要在凝胶凝固之前进行考虑。
确认试剂盒的规格以确定其是否与凝胶兼容非常重要。
此外，我们建议选择能产生最小孔的梳子，以解决要溶解的DNA溶液的体积。
这最终将使条带的尺寸保持在更集中的空间，从而使凝胶切除片变小。
快速工作重要的是要记住凝胶暴露在紫外线下的时间。
样品在灯上保存的时间越长，DNA在此过程中受损的风险就越大。
因此，强烈建议在对凝胶成像并切割带子时快速有效地工作。
注意百分比通常，琼脂糖凝胶百分比由DNA片段大小决定。
较小的碎片需要更紧密的矩阵以分隔条带并获得清晰的可视化效果。
这种更紧密的基质需要更高百分比的琼脂糖才能分离出小的DNA片段。
通常，低于2％的琼脂糖凝胶很容易加工。
但是，如果凝胶的琼脂糖含量超过2％，则建议使用额外体积的琼脂糖溶解缓冲液，以确保在进一步处理之前将凝胶完全溶解。
切近DNA条带优化样品输入对于任何实验方案都是至关重要的，从凝胶切除中回收DNA也不例外。
在这种情况下，确保将切片切成尽可能接近所需的DNA条带极为重要。
这样做减少了需要溶解的琼脂糖的量。
我们建议称重切下的凝胶切片，以确保其不超过400毫克。
如果确实超过该数量，则需要扩大反应规模。
确保凝胶切片已溶解在结合到色谱柱上之前，确保琼脂糖完全溶解至关重要。
如果存在任何部分未溶解的琼脂糖痕迹，则可能会将盐浸入基质中，从而与DNA共纯化。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
DNA的凝胶回收一、琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法介绍：1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。
全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。
这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。
但是这个方法不适合用于大片段的回收。
2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。
前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，B uffer溶解，(区别在于这里)加入纯化填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片段释放出来，离心，取上清，就是回收的产物。
这个方法适合各种不同大小的片段，特别是大片段的回收，但是操作就较前者复杂一些，涉及到多次离心沉淀和取上清，有可能会误吸了微量的沉淀;另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。
后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，这样就避免了上述的问题。
3.低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。
这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，而且低熔点琼脂糖价格较高现在用的人已经不多了，除非用于大片段的回收。
4.透析带电洗脱法。
切下的条带放在充满TAE的透析带中再电泳一段时间，让DNA走出凝胶，走向溶液中，再反向电泳一会儿，将附在透析带上的DNA赶回溶液中，取溶液部分，再用TAE洗洗袋子，合并溶液后传统方法酚抽沉淀，那块胶通常还要再染色看看残留。
由于绑透析带非常难搞，只有在万不得已的非常大的片段时才会考虑的。
也是丙烯酰胺电泳凝胶产物回收的方法之一。
以色列的一个小公司GeBA出了一种简易透析管，就是将小管两边各开一小窗，贴上透析膜，把胶块放在管中再电泳。
由于不需要绑透析带，使用方便;而且管中溶液体积小，容易处理;膜的面积也小吸附也少;顿时觉得是救星。
Pierce也推出了类似的东西，买起来更方便一点。
5.DEAE纤维素膜纸片法和其他改良法。
早期实验室最常用方法之一。
将DEAE 纤维素膜裁成小条活化处理。
电泳后在目的条带前切一刀，将比条带略宽的DE AE纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳一会儿，条带上的DNA被膜片截留，取出膜片冲洗后转移到离心管中加缓冲液65度保温洗脱，直到膜上没有D NA了，将溶液用酚氯仿抽提沉淀。
这个方法不适合做较大的DNA，因为洗脱比较困难。
常规片段级(DNA片段为100bp-10kb)：主流方法是柱回收试剂盒大片段级(DNA片段>7kb)：可选方法是玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒，电洗脱，低熔点琼脂糖小片段级(DNA片段<100bp)：丙烯酰胺凝胶回收，也有专门的柱回收试剂盒注意：1.几乎所有胶回收试剂盒进行胶回收时，离心都是在室温下进行，严禁低温离心；2.不同的胶回收试剂盒适合回收DNA片段的大小不同，根据试剂情况进行选择。
对于分子量小于100bp的DNA片段，试剂盒的回收效率低，建议用PAGE电泳分离，核酸抽提沉淀的方法回收；3、在结合（binding）步骤中，建议使用低转速离心，这样可以增加结合时间，促进回收效率，其它步骤中都用10000-12000rpm离心。
基本步骤：1：切胶（要尽量轻）2：溶胶（必须要保证完全溶解）3：上回收柱4：洗涤5：洗脱DNA能够跟吸附柱结合的条件是高盐低pH下结合，低盐高pH条件下洗脱，其中小分子DNA结合能力差但洗脱能力强，大分子DNA结合能力强但洗脱能力差，一般吸附柱能结合的DNA范围在50-50kb之内。
Thermo GeneJET Gel Extraction Kit（该试剂盒比较贵，除了回收分子量较大7kb 以上的DNA片段选择此试剂盒，否则选择其他国产试剂盒）一．原理/order/catalog/product/K0692?ICID=search-k 0692从琼脂糖凝胶中切出目的DNA片段，置于离心管中，加入结合液进行溶解，之后转入回收柱中。
结合液中的促溶剂溶解琼脂糖、使蛋白变性、促使DNA结合于回收柱中的硅膜上。
结合液中含有颜色指示剂，能够方便监测溶液pH是否最为适合DNA结合。
通过简单的漂洗步骤去除杂质。
纯化的DNA通过加入洗脱液从回收柱中洗脱出来。
该试剂盒可用于回收25bp到20kb大小的DNA片段。
每个回收柱拥有结合25ug DNA 的能力，能处理多达1g的琼脂糖凝胶。
二．步骤1：用干净的手术刀或刀片（用酒精棉球擦拭）切割含有DNA片段的凝胶，尽可能的靠近DNA片段切割，以减小凝胶的含量，将胶片放在事先称重的 1.5毫升离心管并称重。
记录胶块的重量。
注意：如果纯化的DNA片段用于克隆反应，要避免暴露在紫外灯下对DNA的损害。
尽量减少紫外线照射时间，或在紫外照射期间保持凝胶在玻璃或塑料盘中。
2：加1:1量的Binding Buffer到胶块中（体积：重量）（如每100毫克凝胶加100微升的Binding Buffer）其他回收试剂盒一般加的溶胶液是100mg凝胶加入300ul溶胶液，不足100mg 的安装100mg计量注意：对于琼脂糖含量大于2%的凝胶，向胶块中加入2：1体积的Binding Buffer。
3：在50-60度的条件下温育凝胶混合物10 min以上等到凝胶全部融化。
每隔几分钟颠倒离心管，促进胶融化，保证胶全部溶解。
加入回收柱前短暂涡旋凝胶混合物。
注意检查溶液的颜色，黄色是结合DNA的最佳PH。
如果颜色是橙色或紫色，加10 μL 3 M 的乙酸钠溶液，混匀，溶液会变为黄色。
在溶胶的过程中，胶溶解的好坏直接会影响DNA的回收效率。
4：（此步骤适用于≤500bp和>10kb的DNA片段）如果该DNA片段≤500 bp，向溶解的凝胶溶液中加入1:2体积的异丙醇（如100mg凝胶溶于100μL Binding Buffer中，加入100μL异丙醇），混匀。
如果该DNA片段>10 kb，向溶解的凝胶溶液中加入1:2体积的水（如100mg 凝胶溶于100μL Binding Buffer中，加入100μL水），混匀。
5：将800μL凝胶溶液转移到回收柱。
2000 rpm室温离心1分钟。
倒掉废液，然后将柱放回收集管。
注意：如果凝胶溶液总量超过800μL，溶液可以分几次加入回收柱。
每次操作后离心30-60 s并丢弃废液，直到加入所有凝胶溶液，每个回收柱不能超过1克琼脂糖凝胶。
低转速离心可以增加ＤＮＡ与硅膜的结合时间，有利于增加回收效率；6：可选步骤。
此步骤适用于回收的DNA直接用作测序。
向回收柱中加入100μL Binding Buffer。
离心1分钟，倒掉废液，然后将柱子放回收集管。
7：向回收柱中加入700μL Wash Buffer（已用无水乙醇稀释。
10000rpm离心1分钟。
倒掉废液，然后将柱子放回收集管。
8：将空的回收柱再离心1分钟，彻底去除残留的Wash Buffer。
注意：此步是为了避免回收的DNA溶液中残留乙醇。
若DNA中残留乙醇，可能抑制下游酶促反应。
9：将GeneJET回收柱转入新的1.5 ml离心管，向回收柱中膜中心加50μL 洗脱液。
离心1分钟。
注意：（1）对于DNA含量较低，可适当减小洗脱体积以增加DNA浓度。
洗脱体积在20-50μL之间，不会明显减少DNA产量。
但是洗脱体积应不小于10μL。
（2）如果DNA片段>10 kb，洗脱液在加入回收柱之前应预热至65°C。
（3）如果洗脱体积为10μL，DNA含量≤5微克，在室温时放置1分钟再离心。
10 ：丢掉GeneJET回收柱，回收的DNA储存于-20℃。
实验室其他胶回收试剂盒原理和用法与上述试剂盒相似，只是结合液(又称为溶胶液)与凝胶块的比例不一样。
使用试剂盒，先看说明书。
注意事项：1.胶回收时电泳槽中的缓冲液要更换。
2.做胶时要选用的合适的梳子，使电泳后的条带成为锐利的一条带，条带尽可能的细，不能糊，所以可以将最小号的梳子根据所需体积使用胶带粘了以后使用。
3.电泳时根据条带大小调节电压，低电压有利于提高电泳的分辨率。
4.尽量减少紫外线照射DNA的时间，防止DNA突变。
5.切胶时在保证切下目的条带时，凝胶切得越小越好。
6.凝胶时要确保凝胶全部溶解，并注意观察凝胶溶液颜色。
7.溶胶后等降至室温在加入回收柱中，确保DNA更好地与膜结合。
8.凝胶溶液加入到回收柱中后可以先室温静置1-2min，再离心。
9.凝胶溶液加入到回收柱中后可以低速离心，离心后可将溶液再加入回收柱中重新结合。
10.使用Wash Buffer前，确定是否使用无水乙醇稀释。
11.漂洗后要空转1min，并开盖静置1-2分钟（时间太长不利于洗脱）挥发乙醇。
12.洗脱前现将洗脱液预热可增加洗脱效率，加洗脱液时要加到膜的中心，并静置2-3min。
DNA的PAGE凝胶回收PAGE凝胶适合分离小片段DNA，比如100bp以下，由于PAGE凝胶后不能再溶解，因此其回收比较难，按照洗脱原理不同，可以分为2类，直接洗脱法和电洗脱法。
直接洗脱是DNA片段在溶剂的浸泡下自由扩散纯出，后者跟从琼脂糖凝胶中电洗脱方法相同。
直接洗脱法:1:用干净的刀片将目的条带切下，放入离心管中，先用水洗涤1-2次，去掉杂质2：加入2倍体积的水或洗脱缓冲液进行煮沸5-10分钟，或者直接放在37℃中温浴为了促进样品从凝胶中浸出，可以用研磨棒将凝胶碾碎，凝胶越碎浸出效果越好。
3：收集浸出液，加入1/10体积的3M pH5.2的NaAC，再加入乙醇或异丙醇进行沉淀（乙醇2-2.5体积，异丙醇0.7倍体积）。