胶回收常见问题
胶回收DNA注意事项
胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
切胶回收注意事项
切胶回收注意事项
以下是 6 条关于切胶回收注意事项：
1. 千万要选对工具啊！就像你去砍柴不能拿个小勺子一样，切胶得用合适的刀片啊。
比如你要是用个钝的不行的刀片去切，那能切得动吗？肯定不行呀！所以选择锋利的工具很重要，可别小瞧这个哦。
2. 切胶的时候可得细心点哟！这可不是开玩笑的，你想想，要是马马虎虎的，把需要的部分没切好或者切坏了，那不就白忙活啦！就好比搭积木，小心翼翼才能搭得稳当，对吧。
3. 做好防护措施呀！难道你不怕胶沾到手上或者其他地方吗？戴手套、穿实验服，这些都要准备好呀！不然万一沾到皮肤上，那多麻烦呀！
4. 操作环境要注意呀！你总不能在乱糟糟的地方切胶回收吧，就像你吃饭也不会在垃圾堆旁边吃呀。
找个干净整洁的地方，才能保证操作顺利呀。
5. 控制好力度啊！别太使劲了把胶都压坏了，也别太轻了切不下来。
就像骑自行车，太用力踩会累，太轻了又不走，得掌握好那个度。
6. 切完之后要妥善处理呀！别随手一扔就不管了。
就像你玩完玩具要收好一样，把切胶后的东西整理好，该放哪里放哪里，这样下次用起来也方便呀！
我觉得切胶回收一定要谨慎仔细，每个步骤都不能马虎，不然很可能前功尽弃呀！。
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
生物学实验之凝胶回收基础及操作
1. 分类
2. 应用
试剂耗材与设备
四 五
6
操作流程
常见问题解答
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生物实验培训
2.1 分类
1
• 硅胶柱法
2
• 玻璃奶/纯化填料法
• 低熔点琼脂糖法 • 透析带电洗脱法 • DEAE纤维素膜纸片法
特别是大片断的回收。
9
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2.1.3 低熔点琼脂糖法
传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，
电泳后切割目的条带，在 TE 溶液中 65 ℃保温融化，
用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。
这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇
由于绑透析带很难操作，只有在回收非常大的片断时 才会考虑的。
丙烯酰胺电泳凝胶产物回收的方法之一。
11
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2.1.5 DEAE 纤维素膜纸片法
将 DEAE 纤维素膜裁成小条活化处理 。 电泳后 在目的条带前切一刀 ，将比条带略宽 的 DEAE 纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳，条 带上的 DNA 被膜片截留，取出膜片冲洗后转移 到离心管中加缓冲液 65 ℃保温洗脱，直到膜上 DNA 被完全洗脱，将溶液用酚氯仿抽提沉淀。
33
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4.2 注意事项
６ . 切胶是，紫外照射时间应尽量短，以免对
DNA凝胶回收方法及常见问题
DNA凝胶回收方法及常见问题琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。
从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。
但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。
胶回收的质量好否直接影响后继实验的成功与否。
现今除了手工回收方法外，许多公司都开发了方便的回收试剂盒系列，但是无论借助何种方式，最基本的评定标准均包括: 回收产物质量：主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
对于大片断DNA回收，质量还包括产物的完整性；而对于较小片断回收，质量还包括回收产物的浓度；此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
回收率：由于上电泳样品量通常都很少，电泳过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。
回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；又如，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。
其他：操作方面，操作简单，快速，应用方便的方法或产品自然比较受欢迎。
如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计；离心过柱就比离心沉淀要简单方便。
还有要注意载量问题，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质都有一定的吸附限度，过量的产物吸附不了即被损失掉。
以下是我总结的常见问题，希望对大家有所帮助。
Q1：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A1: 可能有以下几个原因：1. 胶块未完全溶解，溶解凝胶时应置于55℃水浴，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤;2. 胶块体积太大,应使用枪头捣碎，还不能充分溶解，则应先将其切为小块，分多次回收或选用大量型回收试剂盒；3.紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；4. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH值（pH≤7.5）时可结合DNA，在低盐及高pH 值（pH≥8）条件下洗脱。
DNA凝胶回收.
2.加入3个凝胶体积的Buffer DE-A,混合均匀后于75°C加热(低熔点琼脂糖凝胶于40°C加热,间
断混合(每2-3 min,直至凝胶块完全熔化(约6-8 min。
* Buffer DE-A为红色溶液。在熔化凝胶的过程中,可以帮助观察凝胶是否完全熔化。
下易于水解,从而提高回收率。勿将含DNA的凝胶长时间地暴露在紫外灯下,减少紫外线对DNA
造成的损伤。
3.在步骤2中凝胶必须完全熔化,否则将严重影响DNA回收率。
4.将Eluent或去离子水加热至65°C,有利于提高洗脱效率。
5. DNA分子呈酸性,建议在2.5 mM Tris-HCl,pH 7.0-8.5洗脱液中保存。
Eluent:洗脱液,室温密闭贮存。
二、注意事项
1. Buffer DE-A(含有β-巯基乙醇、Buffer DE-B和Buffer W1含刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套
和眼镜,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水
或生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。
2.在步骤1中,将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间(线型DNA长时间暴露在高温条件
连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性
Cat. No. AP-GX-4 AP-GX-50 AP-GX-250
制备次数4 preps 50 preps 250 preps
制备管4 50 250
2 ml离心管4 50 250
1.5 ml离心管4 50 250
三、实验准备
1.第一次使用前,Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
塑料回收行业行业痛点与解决措施ppt
xx年xx月xx日
目录
• 引言 • 行业痛点 • 解决措施 • 其他建议 • 加强科技创新引领 • 结论
01
引言
行业背景及现状
全球塑料生产和消费持续增长，废弃塑料数量不断增加，对 环境和人类健康造成严重影响。
塑料回收行业作为资源循环利用的重要组成部分，已成为全 球关注的焦点。
率。
降低成本
通过优化回收体系、提高回收 效率和降低运输成本等措施， 降低整个回收过程的成本。
加强监管
政府应加强对塑料回收行业的 监管力度，打击非法倾倒和处 置塑料废弃物的行为，促进正
规回收。
塑料污染得到有效控制
减少使用
推广可重复使用和生物降解的 替代品，减少一次性塑料制品 的使用，从根本上减少塑料污
加强市场监管
建立健全监管机制，打击不正当竞争和违法行 为。
培育良性竞争
3
鼓励企业之间开展良性竞争，提高服务质量。
加强行业自律
建立行业协会
成立相关行业协会，促进行业 内部的交流和自律。
加强自我约束
企业应自我约束和管理，遵守行 业规定和道德准则。
信息公开透明
及时公开相关信息，接ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ社会监督 ，树立行业良好形象。
报告目的和结构
报告旨在分析当前塑料回收行业所面临的痛 点，并提出相应的解决措施。
报告将分为以下几个部分：行业概述、痛点 分析、解决措施和建议。
02
行业痛点
回收率低下
原因
公众对塑料回收价值认识不足，回收设施不足，政策引导不 够
影响
大量塑料垃圾进入填埋场或焚烧处理，导致资源浪费和环境 污染
回收成本高昂
政府补贴支持
切胶回收注意事项
胶回收DNA注意事项胶回收DNA注意事项①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA 污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
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胶回收常见问题
dna回收|dna回收试剂盒|捷瑞dna回收试剂盒|胶回收|胶回收试剂盒|胶回收原理
1、如何计算提取率？
1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率；
2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比；
3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。
2、如何简易测算提取率？
取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。
3、如何看待提取得率？
影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。
4、回收率为什么与点样量和片段大小有关？
DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因？
1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例；
2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收；
3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；
4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率；
5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好；
6）回收前的样品量太少，加大点样量；
7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。
6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象？
1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶；
2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收；
3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。
7、琼脂糖凝胶块不溶？
1）琼脂糖质量不好；
2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃；
3）制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
8、点样时发现DNA样品有漂出点样孔外的现象？
柱子上的乙醇未完全挥发干净，延长室温下空柱静置时间以确保乙醇完全挥发干净。
9、能否使用去离子水洗脱回收？
可以，但是实验室所用去离子水一般PH值偏低，可用NaOH适当调高PH值＞7.0，以增加回收得率。
10、能否使用TE（PH8.0）洗脱？可以。
11、可否使用小于30μl的洗脱液进行洗脱？
不可以。
因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积。
12、关于DNA片段大小与回收率的问题？
100bp-500bp，30-60%；500bp-4kb，80-95%；4kb以上，30-50%。
13、OD值与琼脂糖凝胶中的DNA产量不相符？
从柱子上洗脱下来的痕量杂质增加了A260的值。
14、吸光度纯度测定时应注意哪些问题？
吸光度测量的是未知样品与调零标准之间的相对吸光度，所以请用与洗脱液体相同的液体，对测量样品进行稀释和调零。
15、为什么溶胶不彻底会影响回收结果的纯度？
在电泳过程中，DNA会与大分子的多糖紧密的结合在一起，凝胶的种类和质量不同，DNA与之结合力也不同，只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放，否则，凝胶将与DNA一起沉淀下来，洗脱后将影响回收结果的纯度。