结核分枝杆菌(MTB)耐药突变基因检测在结核检测中的应用

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结核分枝杆菌γ- 干扰素释放试验在结核感染诊断中的价值分析

２０２１年７月　第１３期影像学及诊断检验结核分枝杆菌γ-干扰素释放试验在结核感染诊断中的价值分析杨歆，刘琼*南华大学附属第一医院感染科，湖南衡阳 421001【摘要】目的：测评结核分枝杆菌(MTB)γ-干扰素(γ-IFN)释放试验(IGRAs)用于结核感染疾病诊断中的价值。

方法：选择2018年10月至2019年12月期间在我院就诊的88例MTB感染患者，其中痰涂阳性肺结核32例(甲组)、痰涂阴性肺结核38例(乙组)与单纯结核性胸膜炎18例(丙组)，取同期健康体检志愿者45例(空白组)，以受试者均进行IGRAs与TB-DNA检测，统计试验检测情况。

结果：甲组、乙组、丙组及空白组IGRAs阳性率分别为87.50%、68.42%、50.00%、4.44%，差异存在统计学意义(P<0.05)；对比不同分型结核菌感染内痰涂片与TB-DNA检出阳性率，未见显著性差异(P>0.05)；IGRAs的敏感性、特异性分别为90.91%、77.27%，和PPD皮试76.14%、52.27%相比较，存在显著性差异(P<0.05)。

结论：结核感染临床检查诊断中配合使用IGRAs，表现出较高的诊断价值，值得普及推广。

【关键词】结核感染；γ-干扰素；释放试验；诊断价值[中图分类号]R52；R446.5 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2021)13-0153-02MTB能以呼吸道、消化道与破损皮肤等为载体感染机体，可能还会导致多种脏器组织的结核病。

结核病诊断始终是本病防治领域中的一大难题，结核培养与涂片抗酸染色为诊断结核的“金标准”，但暴露出培养周期长、灵敏度偏低、假阴性率偏高的不足[1]。

肺外结核因完整标本获得困难或载菌量偏低等，构建病原学诊断的概率偏少，进一步增加结核感染诊断及鉴别诊断的难度，增加漏诊、误诊率，很可能使患者错过最佳治疗时机。

IGRAs 能激活CD4+、CD8+T细胞产生的MTB，进而定性判断其是否存在着MTB感染，为结核病临床诊治提供较可靠的支持[2]。

结核分枝杆菌常见耐药基因突变的检测与分析

分类号：R 378.91+1 密级：一般U D C ：616-093 编号：2010212554广州医学院硕士学位论文结核分枝杆菌常见耐药基因突变的检测与分析研究生：杨辉导师：吴爱武教授陈心春教授申请学位级别：医学硕士年级：二零一零级学科专业：临床检验诊断学研究方向：感染与免疫论文提交日期：2013年5月论文答辩日期：2013年6月学位类型：医学科学学位学位授予单位：广州医学院答辩委员会主席：评议人：二0一三年三月广州医学院硕士研究生学位论文结核分枝杆菌常见耐药基因突变的检测与分析Detection and evaluation of common drug-resistance gene mutations in Mycobacterium tuberculosis专业名称: 临床检验诊断学研究生: 杨辉导师: 吴爱武教授陈心春教授二0一三年三月·广州目录中文摘要~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~1 英文摘要~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~4 英文缩略词~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 7 前言~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~8 第一部分利福平耐药结核分枝杆菌rpoB 基因的检测与分析~~~~~~~~~~~~ 111.材料和方法~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 112.结果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~163.讨论~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~184.小结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~20 第二部分异烟肼耐药结核分枝杆菌相关耐药基因的检测与分析~~~~~~~~~~~211.材料和方法~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 212.结果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~273.讨论~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~304.小结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~31 第三部分HRMA技术检测结核分枝杆菌利福平与异烟肼耐药~~~~~~~~~~~~ 321.材料和方法~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 322.结果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~363.讨论~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~424.小结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~44 全文总结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 45 参考文献~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 46 综述~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~51 附录~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~59 攻读学位期间取得研究成果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 61 致谢~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~63 学位原创性声明~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~64 学术论文知识产权声明~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~64 关于学术论文使用授权的说明~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~64结核分枝杆菌常见耐药基因突变的检测与分析研究生：杨辉导师：吴爱武教授陈心春教授中文摘要研究背景及目的结核分枝杆菌（结核菌，Mycobacterium tuberculosis，MTB)是引起结核病的病原菌，至今仍然是单一感染因素导致死亡率最多的疾病之一。

磁珠法在痰液结核分枝杆菌核酸检测中的应用研究

磁珠法在痰液结核分枝杆菌核酸检测中的应用研究目的应用配体包被磁珠技术富集痰液中的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）以用于实时荧光定量PCR检测。

方法采用磁珠法富集提取107例临床痰液样本中结核分枝杆菌的DNA，采用ABI 7500 Real-time PCR仪进行核酸定量分析，结果和传统提取方法进行比较。

结果采用磁珠法富集提取的结核分枝杆菌DNA（阳性率66.36%）高于普通DNA抽提方法（阳性率62.62%），也高于罗氏培养（阳性率38.32%），明显高于痰涂片结果（阳性率31.78%）。

结论磁珠法对提高结核分枝杆菌的核酸定量检测阳性率有积极作用，特别对他其他方法检测为弱阳性或者假阴性的病人效果显著。

标签：配体包被磁珠；结核分枝杆菌；核酸第一简介：张时良，男，（1980-05），汉族，籍贯：江苏宜兴，学历：本科，职称：主管技师，研究方向：分子生物学临床工作。

通讯作者：周红，Email：hongzhou0123@。

结核病（Tuberculosis，TB）是当今世界范围内最为重要的传染性疾病之一。

我国是结核病高负担国家之一，患病人群数量巨大，面临着严峻的结核病流行形势[1-2]，目前缺乏有效的早期、快速、特异的诊断手段。

因此，加强结核病的实验室诊断技术研究，对及时发现确诊疾病、有效治疗控制传染源、从而控制结核病的流行具有极为重要的意义。

近年来，随着分子实验诊断技术的不断发展，聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术以其简单快速，成本低廉，灵敏度和特异度高等特点而被广泛应用于传染病的诊断。

相比于传统的临床诊断方法，分子实验诊断技术可以弥补传统临床诊断方法的某些缺陷，能够通过应用PCR技术而缩短临床标本（呼吸系统标本和肺外标本）中检测和鉴别结核分枝杆菌的时间，提高结核分枝杆菌的检出率，从而提高病人的发现率[3-4]。

目前国内一般都是通过优化核酸提取这一过程来提高PCR的阳性率[5]，国外已经开始通过配体包被磁珠技术（Ligand-coated magnetic bead technology）来富集痰液中的结核分枝杆菌[6，7]，以提高痰涂片的阳性率。

结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因及其突变的研究进展

结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因及其突变的研究进展摘要】本文就报道的结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因katG、inhA、ahpC、kasA、ndh、OxyR-ahpC、mabA-inhA、furA-katG、fabG-inhA、efpA、ini (A,B,C)及其突变位点进行综述。

【关键词】结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)引起的慢性传染病。

随着耐药结核病，尤其是耐多药和广泛耐药结核病的出现，给结核病的防控工作带来了严峻挑战。

异烟肼是治疗结核病主要药物之一，但MTB耐异烟肼率已达17.6%，其耐药机制尚不明确，大多认为与MTB相关基因突变有关[1]。

本文综述目前国内外报道的MTB耐异烟肼相关基因及其常见突变位点，以进一步了解MTB耐异烟肼的发生机制。

1 katG基因异烟肼经MTB katG基因编码的过氧化氢-过氧化物酶活化后产生杀菌作用，katG突变使过氧化氢-过氧化物酶失活，导致MTB对异烟肼耐药。

KatG最常见突变位点是Ser315Thr。

Khadka JB等研究尼泊尔地区107例耐异烟肼菌株中，Ser315Thr及Ser315Ile突变率分别为77.6%及17.1%。

陈玲等研究显示Ser315Thr突变频率为66.7%[2]。

315位点还有Ser→Asn、Ser→Thr、Ser→Arg和Ser→Gly突变形式。

此外，还存在Val230Met、Pro232Gln、Gly237Glu、Gly309Cys、Asp304Glu、Asp357His、Asp357Asn、Arg463Leu、His276Met、Gln295His、Glu454Arg等突变[2-5]。

2 inhA基因inhA基因编码NADH依赖的enoyl-Acp还原酶，该酶催化α-不饱和脂肪酸转化为饱和脂肪酸，产生的长链脂肪酸是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分。

异烟肼与分枝菌酸合成途径中的NADH依赖的enoyl-Acp复合体结合，阻断90%以上长链脂肪酸合成，从而抑制MTB生长。

结核分枝杆菌(MTB)异质性耐药研究进展

结核分枝杆菌(MTB)异质性耐药研究进展柳清云;孙刚;高谦【摘要】异质性耐药,是指在同一样本中同时存在耐药菌和敏感菌的现象,这体现了细菌群体从部分耐药向完全耐药转变的过程.研究异质性耐药对于认识耐药结核病的发展过程,以及评估治疗方案和指导临床用药具有重要的意义.本文对结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)异质性耐药的产生及其对临床的影响进行了综述.%Hetero-resistance is the coexistence of both sensitive and resistant bacteria in the same specimen,which indicates the transition from partially resistant to fully resistant bacterium population. Studying hetero-resistance is of great significance in understanding the genesis of drug-resistant tuberculosis,accessing the treatment schedule,and guiding the prescription of drugs. In this article,we summarized recent progresses on hereto-resistance of Mycobacterium tuberculosis (MTB).【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2013(040)001【总页数】4页(P1-4)【关键词】结核分枝杆菌(MTB);异质性耐药;耐药结核病【作者】柳清云;孙刚;高谦【作者单位】复旦大学上海医学院生物医学研究院-医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032;复旦大学上海医学院生物医学研究院-医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032;复旦大学上海医学院生物医学研究院-医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032【正文语种】中文【中图分类】R378.91+120世纪40年代以来，链霉素、异烟肼、利福平等抗结核药物的广泛使用，使结核病的发病率和死亡率一度大幅下降［1］。

XpertMTB_RIF在福尔马林固定组织诊断结核病的应用

Xpert MTB/RIF 在福尔马林固定组织诊断结核病的应用发布时间：2021-06-16T12:08:50.633Z 来源：《中国医学人文》2021年12期作者：梁利斌黎容马华兰胡兵杨瑞仙崔燕邓芳[导读] 目的：Xpert MTB/RIF在福尔马林固定组织诊断结核病的应用分析梁利斌1，黎容2，马华兰3，胡兵1，杨瑞仙1，崔燕1，邓芳4重庆市黔江中心医院：1.病理科；2.手术室；3.检验科；4.消化内科，重庆409099【摘要】目的：Xpert MTB/RIF在福尔马林固定组织诊断结核病的应用分析。

方法：选取2018年1月-2020年6月重庆市黔江中心医院收治的首次就诊骨关节及淋巴结的疑似结核病患者88例作为研究对象。

所有患者均通过穿刺或手术同时获取两份标本，一份新鲜标本经NALC-NAOH预处理，制成悬浊液；另一份经10%中性甲醛固定后制成福尔马林固定组织标本。

新鲜标本进行MTB罗氏培养，福尔马林固定组织标本进行Xpert MTB/RIF检测。

结果：（1）以最后临床确诊的80例结核病例为标准,Xpert检测及MTB罗氏培养检出结核分支杆菌的敏感度分别为92.5%(74/80)及66.25%(53/80)。

Xpert检测的敏感度明显高于MTB罗氏培养。

（2）在8例非结核病例中，Xpert检测及MTB罗氏培养均为阴性，特异度均为100%(8/8)。

结论：对FFPE组织进行Xpert MTB/RIF检测具有耗时短、敏感性及特异性高的特点，值得在病理科对FFPE组织诊断结核的方法推广应用。

【关键词】Xpert MTB/RIF；福尔马林固定组织；结核病结核病是严重威胁人类健康的重要传染性疾病，是全球十大死亡原因之一，也是单一感染源导致的主要死亡原因。

2016-2020年，中国是世界卫生组织定义的三类结核(结核、耐药结核以及HIV合并结核)高负担国家[１]。

快速、准确的检测是预防、控制和治疗结核病的重要因素。

MDR-TB诊断与治疗

MDR-TB诊断与治疗引言多药耐药结核病（MDR-TB）是一种严重的传染病，其对公共卫生和全球健康构成了巨大的挑战。

MDR-TB是指对两种最常用的结核菌首选药物——异烟肼和利福平耐药的结核菌感染。

本文将介绍MDR-TB的诊断方法和治疗策略，旨在提供给医疗工作者和研究者们更多的了解和指导。

诊断方法临床症状评估MDR-TB的临床表现与非多药耐药结核病相似，如咳嗽、疲劳、发热等。

然而，MDR-TB患者通常对常规的结核菌病治疗方案不起反应，需要进一步的检测和评估。

结核菌培养和药敏试验结核菌培养是MDR-TB诊断的金标准。

通过将患者样本（如痰、尿液等）进行培养，可检测到结核菌的存在。

药敏试验则可以确定结核菌对不同药物的敏感性，从而指导治疗。

分子诊断方法分子诊断方法是一种快速和灵敏的诊断手段，可以通过检测结核菌DNA或RNA来确定细菌的存在。

多重聚合酶链反应（PCR）和核酸扩增试验（NAT）是常用的分子诊断方法。

治疗策略药物治疗MDR-TB的治疗通常采用联合药物治疗，以避免细菌对单一药物产生耐药性。

根据药敏试验结果，选择对MDR-TB菌株敏感的药物进行治疗。

常用的药物包括链霉素、乙胺丁醇、噻嗪酰胺等。

治疗方案通常为2年以上。

外科手术对于MDR-TB患者中存在严重病灶的患者，外科手术可能是一种有效的治疗方式。

外科手术可以切除病灶，并减少细菌对药物的耐药性。

心理支持和社会支持MDR-TB患者常常面临长期治疗和社会歧视的压力，因此心理支持和社会支持对于患者的康复非常重要。

提供心理咨询和社会工作服务，可以帮助患者提高治疗依从性，并改善生活质量。

结论MDR-TB是一种严重的传染病，需要早期诊断和治疗以避免病情的进展和传播。

临床症状评估、结核菌培养和药敏试验以及分子诊断方法是MDR-TB的诊断手段。

药物治疗、外科手术以及心理支持和社会支持是MDR-TB的治疗策略。

通过综合应用这些方法，我们可以更好地管理和控制MDR-TB的传播，保障公共卫生和全球健康。

结核分枝杆菌的核酸检测

结核分枝杆菌的核酸检测结核病是一种由结核分枝杆菌引起的严重传染病，对人类健康构成了重大威胁。

准确、快速地检测结核分枝杆菌对于结核病的诊断、治疗和防控至关重要。

在众多检测方法中，核酸检测技术凭借其高特异性和敏感性，成为了结核病诊断的重要手段。

一、什么是结核分枝杆菌核酸检测结核分枝杆菌核酸检测是一种通过检测样本中结核分枝杆菌的核酸（DNA 或 RNA）来确定是否存在感染的方法。

核酸是生物体遗传信息的携带者，每种生物都有其独特的核酸序列。

结核分枝杆菌也不例外，通过检测其特有的核酸片段，可以准确地判断样本中是否有这种病原菌的存在。

二、核酸检测的原理常见的结核分枝杆菌核酸检测方法包括聚合酶链反应（PCR）、荧光定量 PCR、环介导等温扩增技术（LAMP）等。

以 PCR 为例，其基本原理是先从样本中提取核酸，然后利用特定的引物（一小段与目标核酸序列互补的 DNA 片段），在 DNA 聚合酶的作用下，经过多次循环的变性、退火和延伸过程，使目标核酸序列得到大量扩增。

扩增后的产物可以通过琼脂糖凝胶电泳、荧光检测等方法进行检测和分析。

荧光定量 PCR 则是在 PCR 反应体系中加入荧光染料或荧光标记的探针，随着 PCR 反应的进行，荧光信号不断累积，通过实时监测荧光信号的变化，可以实现对核酸的定量检测。

LAMP 技术则是利用一种特殊的酶和引物设计，在恒温条件下就能快速扩增目标核酸，具有操作简便、快速的优点。

三、检测样本的类型结核分枝杆菌核酸检测的样本类型多样，常见的有痰液、支气管肺泡灌洗液、胸水、脑脊液、血液等。

痰液是最常用的样本之一，对于肺结核患者，痰液中往往含有较多的结核分枝杆菌。

但对于一些不排痰或排痰困难的患者，如儿童、肺外结核患者，就需要采集其他类型的样本。

支气管肺泡灌洗液对于肺部病变部位的检测具有较高的准确性。

胸水和脑脊液则常用于结核性胸膜炎和结核性脑膜炎的诊断。

血液样本常用于检测潜伏性结核感染。

四、核酸检测的优势1、高特异性：能够准确识别结核分枝杆菌特有的核酸序列，减少误判。

TB—PCR、Xpert MTB-RIF、T—SPOT诊断结核感染论文

TB—PCR、Xpert MTB-RIF、T—SPOT诊断结核感染论文摘要：目的检测TB-PCR、Xpert MTB/RIF、T-SPOT释放试验在结核感染中的诊断及价值评价。

方法活动性肺结核组256例，非结核组182例，痰液标本行TB-PCR、Xpert MTB/RIF检测，血液标本行T-SPOT 释放试验检测。

结果 TB-PCR、Xpert MTB/RIF、T-SPOT检测阳性率分别为31.6%、75.9%和96.5%；检测结果特异性均为100%。

且3者之间检查结果差异有统计学意义。

结论在诊断结核感染方面， Xpert MTB/RIF检测的应用价值明显高于TB-PCR检测及Xpert MTB/RIF检测；三者联合应用可提高结核的诊断价值。

关键词：TB-PCR；Xpert MTB/RIF；T-SPOT；结核感染；诊断据世界卫生组织统计，结核分枝杆菌（Mycobacterium tuber-culosis，简称结核杆菌）全球每年可引起约300[1]万人死亡。

由于痰菌阳性患者的管理、结核分枝杆菌耐药性和多重耐药菌株的出现等因素，结核病对许多国家已构成严重的健康威胁。

对结核病最客观、重要、科学的检测方法仍然目前是实验室检测，传统的实验室检测方法如痰结核菌培养、痰涂片等[2-4]均存在着不同程度的限制，如灵敏度低、检测时间长等，对结核的早起诊断和治疗均有一定的制约。

因此，找到一种快速、特异的诊断方法尤为重要。

细胞免疫学技术T- SPOT[5-6]及基因检测的应用，为结核病诊断技术提供了更可靠的方法。

现将我院有关结核诊断方面的研究简要报道如下。

1 资料与方法1.1一般资料收集我院2011年4月～2013年10月痰菌阳性肺结核患者共256例；非结核组182例，包括肺部感染126例，慢性阻塞性肺疾病56例；入组患者均经过临床诊断、实验室诊断、影像学诊断等而最终确诊。

其中男性207例，女性231 例；年龄18～60 岁，平均年龄32岁。

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结核分枝杆菌 (MTB)耐药突变基因检测
在结核检测中的应用
摘要：目的：研究在结核分枝杆菌（MTB）耐药突变基因检测在结核患者中
的检测效果。

方法：选取2019年4月～2020年4月在我院治疗的肺结核患者
562例，分别进行Xpert MTB/RIF系统结合利福平耐药性检测、液体培养法、直
接涂片三种检测方法，将临床诊断作为金标准。

结果：MTB/RIF系统结合利福平
耐药性检测的准确度、灵敏度、特异度均高于液体培养法与直接涂片法，P＜
0.05。

结论：在结核病的检测中，采用MTB/RIF系统结合利福平耐药性检测具有
较高的诊断价值。

关键词：结核分枝杆菌；耐药突变基因；结核病
结核病是常见的感染病，是由结核分枝杆菌（MTB）引起的强烈的慢性疾病，最常见的为肺结核，是导致人类死亡的主要原因之一。

据有关统计学报道，我国
每年新发的结核患者可多达上百万里，仅次于印度及印度尼西亚。

我国对结核病
的防治规划是在2030年之前，争取将结核病的发病率降低80％，为了实现这个
目标，对结核病患者的早期诊疗及耐药性检测就非常重要了[1]。

当前结核病的诊
断依然依赖传统的涂片及培养法，培养周期长，生物安全性高，检出率较低。

近
些年开始推荐Xpert MTB/RIF系统结合利福平耐药性检测，具有快速便捷的作用[2]。

本文就Xpert MTB/RIF系统结合利福平对可疑肺结核患者进行检测，评价此
检测方式在耐药突变基因中的检测价值进行研究，现汇报如下。

1.资料及方法
1.1一般资料
选取我院收治的562例疑似肺结核患者，均于2019年4月～2020年4月期
间收治，男369例，女193例，年龄：18-75岁，平均年龄（42.45±9.81）岁。

临床诊断结果显示562例疑似结合患者中，MTB阳性424例、阴性138例。

1.2方法
所有患者均采用美国BD公司生产的BACTECMGIT960系统、MGIT管及利福平
药粉；采用美国Cepheid公司生产的Xpert MTB/RIF设备及试剂盒以及贝索公司
生产的抗酸染液。

留取患者的痰液标本，按照《分枝杆菌分离培养标准》中的相
关操作程序进行，N-乙酰-L-半胱氨酸-NaOH消化处理，之后将菌液悬垂在1.2mL
的磷酸盐缓冲液中，将其中的0.5mL进行Xpert MTB/RIF系统检测，再取0.5mL
根据BACTEC MGIT960系统用于分枝杆菌培养瓶中进行痰液培养，将剩下的0.2mL
进行涂片抗酸染色检测。

1.3观察指标
（1）Xpert MTB/RIF检测结果；（2）液体培养法检测结果；（3）直接涂片
法检测结果；（4）三种检测方法的准确度、灵敏度、特异度。

1.4评价标准
采用细菌学检查阳性为确诊结合病的依据。

根据抗酸染色的多少来评定直接
涂片法的结果，阳性：4+、3+、2+、1+；根据BACTEC MGIT960系统来评定液体
培养法的阳性情况，采用涂片涂片萋尼氏染色镜检排除杂菌的污染后进行液体药
物敏感性使用，并计算报阳时间；Xpert MTB/RIF系统用未检出、极低、低、中、高五个量级来表示，循环次数＞38则MTB未检出；循环次数29-38，MTB检出极低；循环次数23-28，MTB检出低；循环次数16-22则MTB检出中等；循环次数
＜16则MTB检出高[3]。

1.5统计学分析
采用统计学软件SPSS24.0，“”、（）表示计量、计数，实施t、c2检验，P<0.05：有统计学差异。

2.结果
2.1 Xpert MTB/RIF检测结果
Xpert MTB/RIF诊断阳性418例、阴性134例，6个阳性误诊为阴性；4个阴性误诊为阳性，详见表1：
表1 Xpert MTB/RIF检测结果分析表 n
临床诊断经Xpert MTB/RIF合计
阳性阴性
阳性4186424
阴性4134138
合计422140562
2.2 液体培养法检测结果
液体培养法诊断阳性402例、阴性126例，22个阳性误诊为阴性；12个阴性误诊为阳性，详见表2：
表2 液体培养法检测结果分析表 n
临床诊断液体培养法合计
阳性阴性
阳性40222424
阴性12126138
合计414148562
2.2 直接涂片法检测结果
直接涂片法检查结果诊断阳性356例、阴性110例，68个阳性误诊为阴性；28个阴性误诊为阳性，详见表3：
表3 直接涂片法检测结果 n
临床诊断直接涂片法合计
阳性阴性
阳性35668424
阴性28110138
合计384178562
2.4 准确度、特异度、灵敏度
Xpert MTB/RIF的诊断准确度、灵敏度、特异度显著较高，见表4。

表4 三种检查方法的准确度、特异度、灵敏度对比表
诊断放
发
准确率灵敏度特异度
Xpert MTB/RIF （552/562）（418/424
）
（134/138）
液体培养法（530/562）（402/424
）
（126/138）
直接涂片法（466/562）（356/424
）
（110/138）
t11.9719.455 4.246 P0.0010.0020.039 t177.03959.91223.361 P10.0000.0000.000
t136.11226.3037.485
P10.0000.0000.001
注：t/P为Xpert MTB/RIF与液体培养法比较；t1/P1为Xpert MTB/RIF与
直接涂片法比较；t2/P2为液体培养法与直接涂片法比较。

3.讨论
结核病的检查虽然采用传统的结核菌培养、涂片抗酸染色、胸片检查对大部
分结核病患者均可作出明确的诊断，但也容易出现漏诊和误诊；结核菌培养虽然
有很高的特异度，但因为培养时间较长，无法满足临床快速诊断的需要，虽然这
些年也出现了集中快速诊断的方法，如短期培养在进行免疫抗原性分析，尽管可
以鉴别典型与非典型的MTB，敏感性高，但是也存在较大缺陷，如重复性差；还
有一种短期培养如核酸探针杂交法，可降低诊断的假阴性率，但是容易出现假阳性，加之操作繁琐，缺乏诊断优势[4]。

近些年，Xpert MTB/RIF系统的优势逐渐体现出来[5]。

Xpert MTB/RIF系统是
一种检测MTB耐药性的系统，可根据是否发生基因突变来检测样本中是否含有MTB及是否对利福平耐药，可全自动的对样本进行提取、纯化、浓缩，结果在2h
内就可以得出，是一种全自动化半定量巢式实时聚合酶联反应系统[6]。

本研究采
用Xpert MTB/RIF系统、直接涂片法、液体培养法进行检测，Xpert MTB/RIF系
统的准确度、灵敏度、特异度均高于其它两种检测方法，说明此系统可保持良好
的检测性能。

综上所述，Xpert MTB/RIF系统应用在MTB的检测中，具有较高的诊断价值，值得临床推广。

参考文献
[1]李爱芳、崔晓利、康磊,等. 荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的价值[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(09):120-124.
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