2009食品研究与开发—LF抗菌作用和CPPs促钙吸收功能及其影响因素

科学研究　食品研究与开发　２００９年４月　第３０卷第４期　ＬＦ抗菌作用和ＣＰＰｓ促钙吸收功能　及其影响因素　

倪晓娟　。胡志和。，路福平’　（１．天津科技大学生物工程学院，天津市工业微生物重点实验室，天津３００４５７；　２．天津市食品生物技术重点实验室，天津３００１３４；３．天津第二商业学校，天津３００１９３）　

６３　

摘要：乳铁蛋白（Ｉ　）和酪蛋白磷酸肽（ｃＰＰｓ）均为天然功能性营养成分，具有抑茵、抗氧化、增强免疫力及促进钙、　铁、锌等矿物质吸收等多种生物学功能。对乳铁蛋白的抗大肠杆茵性能和酪蛋白磷酸肽延缓磷酸钙沉淀效果及木糖　醇、ｖｃ等成分对其功能影响进行研究。结果显示，ＬＦ浓度在２．０　ｇ，Ｌ时抑茵效果较强；ＣＰＰｓ浓度大于０．２　ｇ／Ｌ时有较　好的延缓磷酸钙沉淀效果；Ｖｃ浓度０．８　ｇ，Ｌ，木糖醇浓度２０．０　ｇ，】　时，对乳铁蛋白抑茵效果及ＣＰＰｓ促钙吸收均有促进　作用。　关键词：乳铁蛋白；酪蛋白磷酸肽；ｖ　；木糖醇　

ＡＮＴＩＢＡＣ　ｒＥＲＩＡＬ　ＥＦＦＥＣＴ　ＯＦ　ＬＡＣＴＯＦＥＲＲＩＮ　ＡＮＤ　ＣＡＬＣＩＵＭ　ＡＢＳＯＲ　ｎＯＮ　ＰＲ０ＭＯＴＩＯＮ　ＦＵＮＣＴＩＯＮ　ＯＦ　ＣＡＳＥＩＮ　ＰＨＯＳＰＨＯＰＥＰ１１ＤＥＳ　ＡＮＤ　ＲＥＬＡＴＥＤ　ＦＡＣＴＯＲＳ　ＮＩ　Ｘｉａｏ－ｊｕａｎＬ３，ＨＵ　Ｚｈｉ—ｈｅ　，ＬＵ　Ｆｕ—ｐｉｎｇ　（１．Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｋｅｙ　Ｌａｂ　ｏｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉＶｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｔｉａｎｊｎ　３００４５７，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｎｉｎｇ，Ｔｉａｎｊｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｏｍｍｅｒｃｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００１３４，Ｃｈｉｎａ；　３．Ｔｉａｎｊｎ　ｔｈｅ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｓｃｈｏｏｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００１９３，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ（Ｌ　ａｎｄ　Ｃａｓｅｉｎ　ｐｈｏｓｐｈ０ｐｅｐｔｉｄｅｓ（ＣＰＰｓ）ａｒｅ　ｎａｔｕｒａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｎｕｔｒｉｍｅｎｔｓ　ｗｈｉｃｈ　ｈａｖｅ　ｔｈｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ，ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｏｏｓｔ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｃａｌｃｉｕｍ，ｉｒｏｎ，ｚｉｎｃ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｍｉｎｅｒａｌｓ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ．Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＬＦ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ａｎｄ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ　ｄｅｌａｙ　ｂｙ　ＣＰＰｓ，ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｂｙ　Ｘｙｌｉｔｏｌ　ａｎｄ　Ｖｃ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＬＦ　ｈａｄ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＬＦ　ｗａｓ　２．０　ｇ／Ｌ；ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ　ｄｅｌａｙ　ｂｙ　ＣＰＰｓ　Ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＰＰｓ　Ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　

作者简介：倪晓娟（１９６６一），女（汉），讲师，在职研究生，研究方向：食品与发酵工程。　●●◆●●　◆　●　●　●　●◆　◆　◆　◆　◆一◆●●◆◆ｉ◆　●　●◆◆Ｈ●ｌ　ｒ◆●●ｔｌ●一●Ｈ●－．◆　●　●１　ｒ●◆一◆　◆　●●●＿＇．　●・◆　◆　下，溶液中可能含有较多量的抗氧化生物活性肽。可作　为下一步抗氧化肽的分离、纯化工作的基本着眼点。　

参考文献：　ｔｌｌ　Ｋｏｖａｔｃｈｅｖａ　Ｅ　Ｇ，Ｋｏｌｅｖａ　Ｉ　Ｉ，Ｉｌｉｅｖａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｌａｖａｎｄｕｌａ　ｖｅｒａ　ＭＭ　ｃｅｌｌ　ｃｕｈｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ．２００１，　７２（３）：２９５－３００　【２】Ｒｕｂｅｒｔｏ　Ｇ，Ｂａｒａｔｔａ　Ｍ　Ｔ＇Ｂｉｏｎｄｉ　Ｄ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍａｌｉｎｅ　ａｌｇａｌ　ｇｅｎｕｓ　Ｃｙｓｔｏｓｅｉｒａ　ｉｎ　ａ　ｍｉｃｅＵａｒ　ｍｏｄｅｌ　ｓｙｓｔｅｍ【Ｊ】．Ｊ．Ａｐｐ１．Ｐｈｙｃｏｌ，２００１，ｌ３（５）：４０３－－４０７　

【３】王春波，贺梦泉，秦守哲，等．海洋肽的体外抗氧化作用　．中国　海洋药物．１９９８，１７（３）：１５—１７　４　王舂波，贺梦泉，秦守哲，等．海洋肽抗皮肤老化作用的研究【Ｊ】．　中华医学美容杂志，１９９８，４（４）：１９５—１９７　【５】曾庆祝，许庆陵，林鲁萍．扇贝边酶解物抗氧化作用的研究【Ｊ】．中　国生化药物杂志，２００５，２６（２１：８６—８９　【６】许庆陵，曾庆祝，朱莉娜．鲢酶解物对羟自由基的清除作用【Ｊ】．水　产学报，２００４，２８（１）：９３—９９　【７】任国谱，余兵，李顺灵．蛋白质及其衍生物的抗氧化能力【Ｊ】．中国　油脂，１９９７，２２（４）：４７—５Ｏ　收稿日期：２００８—０６—１８　。。８０　４　食品研究与开发　第卷第期　瓦叩岍　叼丌　科学研究　

０．２　ｇ／Ｌ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＬＦ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ　ｂｙ　ＣＰＰｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｌ　ｂｅｔｔｅｒ　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｃ　ｗａｓ　０．８　ｇ／Ｌ　ａｎｄ　Ｘｙｌｉｔｏｌ　ｗａｓ　２０．０　ｇ／Ｌ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ（ＬＦ）；Ｃａｓｅｉｎ　ｐｈ０ｓｐｈｏｐｅｐｔｉｄｅｓ（ＣＰＰｓ）；Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｃ；Ｘｙｌｉｔｏｌ　

乳铁蛋白（Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ，Ｌｒ３又称乳转铁蛋白　（Ｌａｃｔｏｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ，ＬＴＦ）是一种多功能的糖蛋白，它主要存　在于人及其它哺乳动物的乳汁、ｌｌ￣ｆｌ、唾液等外分泌液　及血浆和中性粒细胞中　。乳铁蛋白分子量为７６　Ｕ～　８２　Ｕ，在牛初乳中含量为２　ｇ／Ｉ　５　ｇ，Ｌ，牛常乳中含量为　０．１　ｇ／Ｌ～０．３　ｇｉＬｔ　。研究发现乳铁蛋白是一种具有多　种生物学功能的蛋白质，它具有抗微生物、抗氧化、调　节机体免疫抗炎症、调节细胞生长和分化及抗癌作　用、防止放射伤害的功效，极具开发潜力，应用前景　广阔。　酪蛋白磷酸肽（Ｃａｓｅｉｎ　Ｐｈｏｓｐｈｏｐｅｐｔｉｄｅｓ，ＣＰＰｓ）是　酪蛋白在消化过程中产生的一种生物活性肽．其特殊　的磷酸化部分具有结合钙的能力。ＣＰＰｓ通过在小肠内　与钙形成复合物而维持钙的可溶性．促使小肠对钙的　吸收：另外ＣＰＰｓ也以同样的方式促进锌、铁等其它微　量元素的吸收。体外细胞培养试验和动物试验都证实　ＣＰＰｓ可以促进钙及其它人体所需的矿物质的吸收［５－８／。　Ｋｉｔｔｓ等２００５年提出，ＣＰＰｓ不仅具有结合二价金属离　子以增强其溶解性从而促进钙、铁等重要矿物质的吸　收作用，而且具有抗氧化作用ｔｇｌ。ＣＰＰｓ作为一种新型　的绿色添加剂，作为矿物质（特别是钙）的吸收促进剂　应用到食品等各领域发展潜力巨大。　乳铁蛋白（Ｌ　和酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰｓ）的生物活性　功能通常会受到食品中其他共存成分的影响。主要研　究乳铁蛋白的抗大肠杆菌性能和ＣＰＰｓ延缓磷酸钙沉　淀效果。以及Ｖ　和木糖醇等成分对ＬＦ抑菌效果及　ＣＰＰｓ延缓磷酸钙沉淀效果的影响，从而确定使乳铁蛋　白和酪蛋白磷酸肽发挥最佳生物功能的最适宜浓度，　为其在食品领域的应用提供试验基础。　１材料与方法　１．１材料与设备　牛乳铁蛋白：纯度≥８５％，酪蛋白磷酸肽：纯度≥　８５％．天津商业大学食品工程系分离制备；大肠杆菌　菌株：天津商业大学微生物教研室保藏；酵母提取物：　化学纯：木糖醇：纯度９８．５％，河北省保定市满通实业　有限公司；Ｖ　：分析纯，天津市北方化玻购销中心。　７２３０Ｇ可见分光光度计：天津精密科学仪器有限　公司：ＤＰＸ一９０９８２Ｂ一１电热恒温培养箱：上海福玛实　验设备有限公司；ＳＷ—ｃＪ—ＩＦ单人双面净化工作台：苏　州净化设备有限公司；ＦＡ２００４Ａ电子天平：上海精天电　子仪器有限公司；ＰＨＳ一２９Ａ数字ｐＨ计：天津市盛邦科　学仪器技术公司；ＨＷＳ２４型电热恒温水浴锅：上海一　恒科技有限公司。　１．２试验方法　１．２．１乳铁蛋白抑菌功能及影响因素试验　１．２．１．１乳铁蛋白抑菌试验　将大肠杆菌分别接种在固体ＬＢ培养基上．３７℃　下连续活化２次。菌体用ＬＢ液体培养基洗下后．充分　振荡，制成菌悬液，调菌浓度为ｌ０ｓ个／ｍＬ。取６支已灭　菌试管，各加入１０ｍＬ菌悬液。在１号～５号试管内加　入不同量的ＬＦ，分别配制成ＬＦ浓度为０．５、１．０、１．５、　２．０、２．５　ｇ／Ｌ的溶液。在０号试管中不加ＬＦ作为空白。　测定各管吸光度，然后将各试管于３７℃培养６　ｈ后取　出，再应用同一方法测定各菌液吸光度。计算２次相　应吸光度的差值，以ＬＦ浓度为横坐标。０．Ｄ．差值为纵　坐标，作乳铁蛋白的抑菌功能曲线。　１．２．１．２　ＣＰＰｓ对乳铁蛋白抑菌性的影响　分别取６支已灭菌试管，各加入１０　ｍＬ含有２　ｇ／Ｌ　乳铁蛋白的菌悬液。在１号～５号试管内加入不同量　的ＣＰＰｓ，分别配成浓度为０．１、０．２、０．３、０．４、０．５　ｇ／Ｌ的　ＣＰＰｓ溶液。０号试管不ＪＪＩ－￣Ｌ铁蛋白作为空白。将各试　管于３７℃培养６　ｈ。分别测定培养前后各管吸光度，计　算出两次相应吸光度的差值，以ＣＰＰｓ浓度为横坐标，　Ｏ．Ｄ．差值为纵坐标，作ＣＰＰｓ对乳铁蛋白抑菌功能的影　响曲线。　１．２．１－３　ｖ　对乳铁蛋白抑菌性的影响　用１．２．１．２同样的方法配成浓度为０．５、０．６、０．７、　０．８、０．９　ｇ／Ｌ的Ｖ　溶液。０号试管不加Ｖ　作为空白。于　３７℃培养６　ｈ，测定培养前后各管吸光度，计算吸光度　差值，以ｖ　浓度为横坐标，Ｏ．Ｄ．差值为纵坐标，作　Ｖ　对乳铁蛋白抑菌功能的影响曲线。　１．２．１．４木糖醇对乳铁蛋白抑菌的影响　用１．２．１．２同样的方法配成浓度为１０、ｌ５、２０、２５、　３０　ｇ／Ｌ的木糖醇溶液。０号试管不加木糖醇作为空白。　测定培养前后的各管吸光度。以木糖醇浓度为横坐标，　Ｏ．Ｄ．差值为纵坐标．作木糖醇对乳铁蛋白抑菌功能的　影响曲线。