靶向抑制P4HB可促进尿路上皮细胞对吉西他滨的敏感性

【AbMole科研快报】靶向抑制P4HB可促进膀胱癌中尿路上皮细胞对吉西他滨的敏感性
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本期与您分享的是：靶向抑制P4HB 可促进膀胱癌中尿路上皮细胞对吉西他滨的敏感性
膀胱癌(BC)是世界范围内常见的恶性肿瘤，占全球癌症诊断的3%。

化疗带来的耐药性限制了药物对BC患者的治疗效果。

P4HB是一种在膀胱癌组织中上调的内质网(ER)分子伴侣(来自于癌症基因组图谱，TCGA数据集)。

在各种类型的癌症中，P4HB的敲除或抑制可发挥药物的抗癌活性并增加细胞对化疗的敏感性。

因此，在本研究中，作者的目的是研究抑制P4HB 是否能增强吉西他滨(GEM)在BC细胞中的抗癌作用，并研究其潜在的分子机制。

具体实验中，采用免疫组织化学(IHC)染色检测411例BC患者的P4HB mRNA表达水平、80例BC石蜡包埋标本的P4HB表达水平，并进行临床特征和预后分析。

机理部分的研究采用生物信息学分析。

P4HB-高表达的BC细胞系(T24和5637)则采用P4HB抑制剂Bacitracin (BAC)处理，研究BAC处理后BC细胞对GEM的敏感性变化及可能的机制。

在P4HB高表达的BC 细胞中进行P4HB抑制实验，检测T24和5637细胞的细胞活力、集落形成、细胞周期、活性氧(ROS)、凋亡和通路蛋白水平。

免疫印迹分析显示，P4HB在BC组织中的表达明显高于正常组织。

免疫组化结果显示，P4HB 高表达患者比P4HB低表达患者的总生存率(OS)更低。

此外,增加P4HB表达可以作为BC的独立预后标志物。

在功能上,BAC对P4HB的抑制降低了体外细胞的增殖能力。

此外，BAC处理使BC细胞对GEM更为敏感。

分子机理分析表明，抑制P4HB的作用机理为：BAC处理后，通过增加细胞中ROS含量、促进细胞凋亡和PERK/eIF2ɑ/ATF4/CHOP信号，增强了GEM的抗癌作用。

总结：BC患者P4HB高表达与不良预后显著相关。

BAC抑制P4HB可通过激活凋亡和PERK/eIF2ɑ/ATF4/CHOP信号途径降低细胞增殖能力，使BC细胞对GEM敏感。

CCK-8试剂盒(Abmole, M4839) 为MTT 法的替代方法，是一种基于WST(水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

作者在研究过程中，考察了BAC/GEM处理对BC细胞增殖和集落形成能力的影响。

其中，细胞增殖部分采用了Abmole的CCK-8试剂盒进行检测，获得了优质的数据结果。

CCK试剂盒使用方便，省去了洗涤细胞，不需要同位素和有机溶剂；检测灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；其重复性也优于MTT法。

鸣谢：Wang X,Bai Y, etc., Targeted Inhibition of P4HB Promotes Cell Sensitivity to Gemcitabine in Urothelial Carcinoma of the Bladder, OncoTargets and Therapy 2020:13 9543–9558。