大鼠内皮型NO合酶eNOS酶联免疫分析
大鼠p物质(SP)酶联免疫分析(精)
大鼠p物质（SP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E08358r检测范围： 1.56 pg/ml - 100 pg/ml最低检测限：0.39 pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠SP,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期： 6 个月预期应用：ELISA 法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中SP 含量。
说明1.试剂盒保存：-20C（较长时间不用时）；2-8C（频繁使用时）。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质, 此为正常现象, 不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗SP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗SP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的SP呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板(Assay plate )：一块(96 孔)。
2.标准品(Standard): 2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent): 1 >20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent): 1x10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent): 1 xiOml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody): 1 x 120 併瓶(1：100)。
7.辣根过氧化物酶标记亲和素 (HRP-avidin): 1X 120训(1:100)。
8.底物溶液(TMB Substrate): 1X0ml/瓶。
两种方法检测胚胎小鼠内皮型一氧化氮合酶结果的相关性分析
白含 量进行 检 测 ， 旨在探 讨两 种 方法 检测 结果 之间 是否 有相关 性 。
两 种 方 法 检 测 胚 胎 小 鼠 内皮 型 一 氧 化 氮 合 酶 结 果 的 相 关 性 分 析
包 翠 芬 刘 霞 王 晓 梅 穆 长 征
（ 辽宁 医学 院科学 实验中心 ， 组织胚胎学教研室 ， 第一 临床学 院，锦州 １ １Ｏ ） ２ Ｏ １
（ 关键词］ 小 鼠； 肾 ； 内皮型一氧化氮合酶 ； 流式细胞仪
材料 和 方法
裂解 液 加 入 电泳 胶 样 品槽 ，１０ 电压 下 电泳 ，待 ０Ｖ 样 品 到达合 适 位置 ，停 止 电泳 ，将 胶板 取 下 ，转膜 液 洗 涤 １－０ ｎ ０３ｍｉ。将 胶 与 ０４ ／ Ｐ ＤＦ膜 （ ． ５ ｍ Ｖ ￣ 用前 置于 甲醇 内浸 透 ５ ｎ左 右 ，再 放 人转 膜 液 中至少 ｍｉ ５ ｎ ｍｉ）置 于 厚 滤 纸 （ 已用 转 膜 液 浸 泡 ） 之 间 ，赶 尽 气 泡 ，常 温 下 半 干 转 印 ，转 印完 成 后 将 Ｐ ＶＤＦ 膜用 ＴＢ Ｔ （ Ｓ１ Ｔｕｅ２ Ｓ ＴＢ －％ ｅｎ ０溶 液 ） 冲 洗 ，５ ％ 脱脂 奶 粉 溶 液 室 温封 闭 １２ 。与 一 抗 （ 抗 小 鼠 —ｈ 兔 ｅ ＮＯＳ抗 体 ，稀 释 度 为 １：４ ０ ４ 孵 育 过 夜 ， ０） ℃ ＴＢ Ｔ洗 脱 ３次 ，每次 至少 ５ ｎ 再 与 二抗 （ 性 Ｓ ｍｉ； 碱 磷 酸酶标 记 的羊 抗兔 ＩＧ 抗体 ，稀 释 度 为 １：２０ ｇ ０） 室 温 孵 育 ｌ ，ＴＢ Ｔ 溶 液 洗 脱 ３次 ，每 次 至 少 ｈ Ｓ ５ ｎ ｍｉ；ＮＢ ／ Ｃ Ｐ显色 ；扫 描 电泳 条 带 输 入 电脑 ， ＴＢＩ
一氧化氮和氧化应激的关系
一氧化氮和氧化应激的关系一氧化氮（NO）是一种重要的生物活性分子，在多个生理和病理过程中发挥着重要作用。
氧化应激是细胞或组织遭受一系列有害刺激后产生的一种生理响应，它与多种疾病的发生发展密切相关。
本文将探讨一氧化氮与氧化应激之间的关系。
我们来了解一氧化氮的生成与代谢过程。
一氧化氮是一种无色气体，由一氧化氮合酶（NOS）催化L-精氨酸转化而来。
一氧化氮合酶有三个亚型：神经型一氧化氮合酶（nNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和细胞型一氧化氮合酶（iNOS）。
这三个亚型在不同组织和细胞中表达并调节一氧化氮的生成。
一氧化氮在体内主要通过反应物质丰度、酶活性和酶表达水平等多种因素来调节。
一氧化氮作为一种重要的生物信号分子，参与了多个生理过程的调节。
首先，一氧化氮在心血管系统中发挥着重要作用。
一氧化氮通过扩张血管、抑制血小板聚集和抗炎作用等方式，调节血管张力，维持心血管系统的正常功能。
其次，一氧化氮在神经系统中具有重要的调节作用。
它参与了神经递质的释放、神经元的发生和迁移等过程，对中枢神经系统的正常功能具有重要影响。
此外，一氧化氮还参与了免疫系统的调节、胃肠道功能的维持以及生殖系统的发育等。
然而，当机体面临外界有害刺激时，会引发氧化应激反应。
氧化应激是一种细胞内氧化还原平衡失调的状态，主要由自由基和氧化物质的过度产生和蓄积导致。
自由基是具有不成对电子的分子或原子，它们具有高度活性，可以与细胞内的脂质、蛋白质和核酸等生物大分子发生氧化反应，造成细胞损伤和疾病的发生。
氧化应激反应在多种疾病的发生和发展中起到重要作用，如心血管疾病、神经系统疾病和肿瘤等。
研究发现，一氧化氮与氧化应激之间存在着复杂的相互关系。
一方面，一氧化氮在机体内可以通过多种途径减轻氧化应激的损害。
一氧化氮具有较强的抗氧化作用，可以清除自由基，保护细胞免受氧化损伤。
此外，一氧化氮还可以通过激活抗氧化酶的表达，增强细胞对氧化应激的抵抗能力。
另一方面，氧化应激也可以影响一氧化氮的生成和代谢。
一氧化氮肾内作用
鼠髓袢升支粗段细胞中 NF/KB p50/P65 蛋白参与iNOS基因活化
髓袢升支粗段和内髓部集合管，受低氧 诱导基因调节 转化生长因子-β1，局部调控
二、NO与肾脏生理学
二、 NO与肾脏生理学
二、NO与肾脏生理学
（一）NO与肾血流动力学
NO 对肾血流量和局部微循环具有重 要的调节作用。NO可明显舒张隔离灌流的 鼠和人肾动脉。 NO可能是肾内血管紧张性的调定者
局部NOS抑制在髓旁肾单位引起入球、出 球小动脉阻力同等程度增强
二、NO与肾脏生理学
在深层肾单位，NO既可调节入球小动脉 的阻力，也可调节出球小动脉的紧张度。 生理情况下，皮质肾单位出球小动脉不 释放NO，这可能是允许入球、出球小动脉独 立调节其紧张性，从而参与肾小球血流动力 学的精细调节机制
二、NO与肾脏生理学
二、NO与肾脏生理学
在麻醉大鼠，抑制 NOS 而未引起血压 变化时，可潜在地提高肾神经活动，横断 脊髓可使这一效应消失，由此推测 NOS 阻 断剂可通过血-脑屏障直接刺激交感中枢。 在清醒动物，肾去神经支配对急性 NOS 抑制所致的肾血流动力学反应无影响， 但可阻断压力性利钠效应。
二、NO与肾脏生理学
在远端肾单位，NO可直接抑制集合管对钠 的重吸收和水的渗透。
三、长期NO抑制效应
三、 长期NOS抑制效应
三、长期NO抑制效应
慢性NOS抑制可导致持久的、剂量依赖性高 血压并伴有心血管和肾损伤。 中等剂量L-NAME（5mg/kg/day）持续应用 2月可出现高血压、肾血管收缩，肾小球滤过率 降低、肾小球毛细血管压持续升高、蛋白尿、肾 小球硬化和肾间质纤维化。 高剂量的L-NAME持续4-6周，除上述类似变 化外还观察到更严重的肾内血管损伤，如小动脉 管壁明显增厚和纤维素样变性，并常伴有肾小球 片状崩解。
【国家自然科学基金】_内皮型一氧化氮合酶(enos)_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
53 e-选择素 54 amd
1 1
53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106
107 108 109 110 111
2011年
2012年 科研热词 推荐指数 序号 内皮型一氧化氮合酶 10 1 一氧化氮 8 2 一氧化氮合酶 7 3 高血压 4 4 新疆汉族 3 5 多态性 3 6 原发性高血压 3 7 内皮祖细胞 3 8 人脐静脉内皮细胞 3 9 血管新生 2 10 精氨酸 2 11 氧化应激 2 12 小鼠 2 13 动脉粥样硬化 2 14 黄芪多糖 1 15 高糖/高渗透压 1 16 高同型半胱氨酸血症 1 17 颅骨缝 1 18 非诺贝特 1 19 非肥胖goto-kakizaki大鼠 1 20 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 1 21 锌指蛋白580 1 22 钙敏感 1 23 遗传 1 24 逆转录-聚合酶链式反应 1 25 载脂蛋白e类/代谢 1 26 载脂蛋白e类 1 27 转染 1 28 转化生长因子β 1(tgfβ 1) 1 29 血红素加氧酶 1 30 血管重构 1 31 血管活性物质 1 32 血管内皮细胞 1 33 血管内皮生长因子/血管内皮生 1 34 蛋白激酶b 1 35 自发性高血压大鼠 1 36 膳食脂肪类 1 37 脑出血 1 38 胰岛素 1 39 胃肠平滑肌细胞 1 40 肼苯哒嗪 1 41 肺纤维化 1 42 肥胖otsuka long-evans tokushima 1 fatty大鼠 43 缺血-再灌注 1 44 维生素d 1 45 细胞种植 1 46 细胞凋亡 1 47 组织纤溶酶原激活物 1 48 纤毛 1 49 红细胞 1 50 磷酸肌醇3-激酶 1 51 磷脂酰肌醇-3激酶 1 52
lps处理时inos的含量
lps处理时inos的含量
在生物医学研究中，LPS（脂多糖）处理通常被用来模拟细菌感染和炎症反应。
iNOS（诱导型一氧化氮合酶）是一种在细胞受到刺激（如LPS）后表达量显著增加的酶，它可以催化生成大量的一氧化氮(NO)，这种分子在免疫反应、炎症及组织损伤修复过程中起到关键作用。
实验中，在给予大鼠或细胞系LPS处理后，会通过不同的技术手段（如Western Blot、实时定量PCR等）检测iNOS蛋白及其mRNA的表达量，以评估LPS刺激对iNOS产生的影响。
具体到“LPS处理时inos的含量”，指的是在实验条件下，LPS刺激前后细胞内iNOS蛋白质或者其编码基因inos mRNA的相对或绝对含量变化。
比如在某些研究中，发现LPS可以显著上调巨噬细胞或RAW264.7细胞株中的iNOS表达，从而导致NO水平上升。
而药物干预（如洛伐他汀或其他抗氧化剂）可能能够降低由LPS引起的iNOS过度表达以及后续的·OH（羟自由基）生成、MDA（丙二醛）积累，并可能提高抗氧化防御系统中的tSOD（总超氧化物歧化酶）活性，以此减轻炎症反应和组织损伤。
内皮型一氧化氮合酶脱偶联分子机制
内皮型一氧化氮合酶脱偶联分子机制王妍琦【摘要】目的:内皮型一氧化氮合酶(eNOS)主要表达于血管内皮细胞中,是保护心血管系统的重要酶,当病理刺激因素作用于血管时,eNOS发生脱偶联,导致心血管疾病的发生发展.目前已明确的脱偶联机制包括四氢生物蝶呤(BH4)缺乏、L-精氨酸缺乏、锌指结构破坏、谷胱甘肽化、乙酰化、蛋白质-蛋白质相互作用及氮氧化合物4(NOX4)与内质网应激,本文就此内容进行综述.【期刊名称】《微循环学杂志》【年(卷),期】2018(028)002【总页数】4页(P66-69)【关键词】内皮型一氧化氮合酶;脱偶联;一氧化氮【作者】王妍琦【作者单位】青岛大学医学部,青岛266071【正文语种】中文【中图分类】R543病理条件(如高血压，高血脂和糖尿病等)引起内皮细胞合成和分泌血管活性物质[如一氧化碳(NO)、前列环素]功能受损，导致血管舒缩异常、血管紧张度增加、血小板聚集、白细胞黏附和血管壁受损等现象。
一氧化氮合酶(NOS)合成的NO是促进血管舒张的重要细胞因子，包括内皮细胞型(eNOS)、神经型(nNOS)、诱导型(iNOS)三种类型，iNOS在细胞受损后诱导生成，nNOS多位于神经元细胞；eNOS在血管内皮细胞中合成NO，调节血管功能。
引起内皮细胞最首先暴露于外源性损伤因子中的组织，eNOS脱偶联，NO生物利用度降低，内皮细胞功能障碍或受损，是许多心血管疾病的始动事件。
因此，深入了解eNOS脱偶联机制，对靶向性防治心血管疾病具有重要意义。
1 eNOS分子结构位于内皮细胞的eNOS包含多个结构区域，包括氧化域和还原域。
四氢生物蝶呤(BH4)、血红素和L-精氨酸的结合位点在N-端的氧化域[1]。
锌指结构是由两个亚基上的半胱氨酸残基和锌离子(Zn2+)构成的，是连接两个结构域之间的桥梁[2]。
钙调蛋白(CaM)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)和黄素的结合位点在C-端的还原域。
NO合成过程中， NADPH 氧化产生的电子从还原域的黄素传递到氧化域的血红素，使血红素铁与O2结合催化L-精氨酸逐步合成NO。
参阳胶囊急性毒性及对肾阳虚所致雄性不育大鼠的药效学研究
5October【论著】参阳胶囊急性毒性及对肾阳虚所致雄性不育大鼠的药效学研究柳宇双1，杨德森1，2，王叶子1，干国平1，2（1.湖北中医药大学药学院，湖北武汉430065；2.湖北省中药炮制工程技术研究中心，湖北武汉430065）摘要：目的研究参阳胶囊急性毒性及对肾阳虚所致雄性不育大鼠的药效。
方法取40只KM小鼠随机分为空白对照组和给药组，以最大剂量1日灌胃2次，给药后连续观察14d，测定最大给药量。
取80只SD大鼠，使用腺嘌呤造模法制备大鼠肾阳虚模型，将造模成功的大鼠随机分为6组，正常组、模型组、男宝胶囊给药组、参阳胶囊给药组（低、中、高剂量），连续灌胃给予相对应的药物30d。
观察参阳胶囊对腺嘌呤所致肾阳虚大鼠雄性不育的治疗效果，采用酶联免疫法（ELISA）测定血清中睾酮（T）的水平，采用免疫印迹法（WB）检测阴茎组织中神经型一氧化氮合酶（nNOS）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS），取大鼠的睾丸器官采用苏木素-伊红（HE）染色病理切片、大鼠精液在高倍显微镜下观察精子数量与存活率。
结果急性毒性研究中小鼠最大给药量为1.6g/kg。
药效学研究中，镜下观察发现，与模型组相比，各给药组大鼠睾丸组织中生精小管和精子数量增加；各给药组精液中精子存活率均显著提高（<0.01）；参阳胶囊中剂量给药组大鼠阴茎组织中eNOS、nNOS含量均显著升高（<0.05）；各给药组血清T含量均显著升高（<0.05，<0.01）。
结论参阳胶囊毒性较低或无毒性，对腺嘌呤所致的肾阳虚模型有治疗作用，能显著改善肾阳虚所致的雄性不育。
关键词：肾阳虚；参阳胶囊；腺嘌呤；睾酮中图分类号：R285.5文献标识码：A doi：10.3969/j.issn.1008987x.2020.05.01 Acute Toxicity of Shenyang Capsule and Its Pharmacodynamics in Male SterileRats Caused by Kidney-yang DeficiencyLIU Yushuang1，YANG Desen1，2，WANG Yezi1，GAN Guoping1，2（1.College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan430065；2.Hubei Engineering Technology Research Center for Processing Chinese Medicine，Wuhan430065）Abstracts：Objective To study the acute toxicity of Shenyang Capsule and its pesticide effect in male sterility rats caused by kidney-yang deficiency.Methods40KM mice were randomly divided into control group and drug administration group. The maximum dose was gavaged twice a day，and the maximum dose（MFD）was determined after14d of continuous observation. 80SD rats were selected and adenine modeling method was used to prepare the rats’kidney-yang deficiency model.The successful modeled rats were randomly divided into6groups：normal group，model group，Nanbao Capsule administration group and Shenyang Capsule administration group（low，medium and high doses）.The effect of Shenyang Capsule on male sterility induced by adenine in rats with kidney-yang deficiency were observed，enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）基金项目：湖北省卫健委2018-2019年度中医药科研立项资助项目（项目编号：76）。
大鼠Ⅰ型前胶原 N 端前肽(PⅠNP)酶联免疫分析 试剂盒说明书
大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽（PⅠNP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：0.78ng/ml-50ng/ml最低检测限：0.195ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠PⅠNP，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中PⅠNP 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗PⅠNP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PⅠNP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的PⅠNP呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
内皮型一氧化氮合酶在正常心肌和心力衰竭心脏中作用机制
内皮型一氧化氮合酶在正常心肌和心力衰竭心脏中作用机制摘要：在心肌细胞中，一氧化氮是一种重要的第二信使，它是由三种一氧化氮合酶，即内皮型一氧化氮合酶；神经型一氧化氮合酶；诱导型一氧化氮合酶产生的内源性物质。
一氧化氮信号通过cGMP依赖途径或非cGMP依赖途径进行翻译后修饰从而调控下游蛋白。
NOS的功能障碍（即表达、位置、耦联、活性的改变等）存在于各种心脏疾病中，如心力衰竭，导致了收缩功能障碍、心室重塑和心肌肥大。
本文将重点阐述在健康和疾病中内皮型一氧化氮合酶的信号通路，并讨论现有的和潜在的方法通过靶向内皮型一氧化氮合酶通路来治疗心脏疾病。
内皮型一氧化氮合酶在正常心脏中信号转导分子机制在心肌细胞中，内皮型一氧化氮合酶（eNOS）结合 Caveolin-3基因存在于心肌细胞的caveolae中。
除了能够增加[Ca2+]i，eNOS也可以通过蛋白激酶B（PKB）激活磷酸化位点1179丝氨酸的磷酸化，这对终末期心力衰竭的心肌起到保护作用。
虽然一氧化氮是高度扩散的气体，但一氧化氮合酶信号是时间和空间的局部位点（即分割信号）。
由于eNOS和nNOS存在于心肌细胞的不同部位（eNOS主要存在于心肌细胞caveolae中、nNOS主要存在于肌质网中），它们的信号转导通路、终末靶蛋白以及对心肌功能的影响各不相同。
与nNOS不同的是，eNOS信号不能调控心肌基底细胞的收缩，但能调控β-AR刺激对其引起的收缩。
在心肌细胞caveolae中，eNOS密切定位于L-型钙通道（LTCC）和β-AR位点处。
与nNOS?/?心肌细胞相比，给予eNOS?/?心肌细胞β-AR刺激，其收缩力增加，而给予小鼠心肌细胞过表达eNOS基因相同的刺激，其收缩力减弱。
由于相同的亚细胞定位，eNOS可以调控LTCC。
总之，野生型心肌细胞eNOS的急性抑制或敲除心肌细胞eNOS?/?基因，β-AR刺激强度更高，钙离子内流增加。
此外，有数据表明，蛋白激酶G（PKG）可能参与LTCC在丝氨酸496位点的磷酸化。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大鼠内皮型NO合酶(eNOS）酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 2.5μmol/L -80μmol/L
使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中内皮型NO合酶(eNOS）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠内皮型NO合酶(eNOS）水平。用纯化的大鼠内皮型NO合酶(eNOS）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内皮型NO合酶(eNOS），再与HRP标记的内皮型NO合酶(eNOS）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的内皮型NO合酶(eNOS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠内皮型NO合酶(eNOS）浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（160μmol/L） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 80μmol/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
40μmol/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
20μmol/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
10μmol/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
5μmol/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 操作程序总结：
计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月 Mouse nitric oxide synthase（NOS） FOR RESEARCH USE ONLY Assay range：2.5μmol/L -80μmol/L 96 determinations
Purpose This kit allows for the determination of NOS concentrations in Mouse serum, cell culture supernates and other biological fluids
Principle of the assay The kit assay Mouse NOS level in the sample，use Purified Mouse NOS antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add NOS to wells, Combined antibody which With HRP labeled goat anti- Mouse become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of Mouse NOS in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve. Materials provided with the kit 1 wash solution 20ml×1bottle 7 Stopp Solution 6ml×1 bottle
2 HRP-Conjugate reagent 6ml×1 bottle 8 Standard（160μmol/L） 0.5ml×1 bottle 3 Microelisa stripplate 12well×8strips 9 Standard diluent 1.5ml×1bottle 4 Sample diluent 6ml×1 bottle 10 Instruction 1 5 Chromogen Solution A 6ml×1 bottle 11 Closure plate membrane 2 6 Chromogen Solution B 6ml×1 bottle 12 Sealed bags 1 Specimen requirements 1. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles. 2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure 1. Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table: 80μmol/L 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent
40μmol/L 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent
20μmol/L 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent
10μmol/L 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent
5μmol/L 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent
2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix. 3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃. 4.Configurate liquid: 30-fold wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve. 5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat. 6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well. 7.incubate：Operation with 3. 8.washing：Operation with 5. 9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃ 10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color). 11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.