70种常用培养基配方
培养基配制
（2）无机微量(100倍液，配制500ml） 无机微量(100倍液，配制500ml） 倍液 500ml 药品名称 MnSO4 ·4H2O 4H ZnSO4 ·7H2O 7H CuSO4 ·5H2O 5H H3BO3 Na2MoO4 ·2H2O 2 KI CoCl2· 6H2O 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 50倍称量 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 1150 22.3 8.6 0.025 6.2 0.25 0.83 0.025 430 1.25 310 12. 12.5 41. 41.5 1.25 定容于500ml 定容于500ml 蒸馏水中。 蒸馏水中。每 升培养基吸此 液10ml
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备） 2 2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处 开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒， 倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞； 无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将 叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签 （时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
实验三 月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁 ，掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物茎段（月季）
培养基的制备
培养基的制备一、配制原则和种类（一）培养基配制原则１、培养基：培养基是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环境条件的基质，如蘑菇菌是有机营养型中的草腐生菌。
制备培养基不仅要考虑它所需要的含碳化合物、含氮化合物、矿物盐类、生长因子，还要考虑水与pH环境，同时还应考虑它们培养方式是固体培养还是液体培养。
因此，可以把按菌类生长发育需要比例配制的灭菌营养基质，称为培养基。
换言之，培养基必须具备三个条件：含有菌株生长发育所需要的营养物质；具有菌类生长环境条件；经过灭菌，并保持无菌状态。
２、培养基的选择：在整菌种制备过程中，从母种到原种、栽培种，各个阶段的目的要求有所不同，所选用的培养基的配比也应有所区别。
一般母种初生菌丝较嫩弱，分解养分能力差，要求营养丰富、完全，氮源、维生素的比例应高。
须选用易于被菌丝吸收利用的物质，如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、蛋白胨、无机盐类及生长素等为等而原种、栽培种所需数量较多，且菌丝分解能力强，可利用大量农作物秸秆、粪草、棉籽壳、麸皮、米糠等原料作为培养基。
（二）培养基的种类１、根据营养物质的来源，可以把培养基分炎天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
（１）天然培养基天然培养基是指用化学成分还不清楚或化学成分不恒定天然有机物配制而成的培养基，如各种农副产品及其下脚料──小麦、大豆、玉米粉、麸皮、米糠、作物秸秆、木屑、棉籽壳、甘蔗渣等，以及动植物组织的浸出液──牛肉膏、肉汤、马铃薯汁、麦芽汁、豆芽汁等都可以用来配制天然培养基，这种培养基来源广，成本低，营养丰富，适合于在生产上大规模培养菌类使用，但这些天然有机物质因产地、品种、生长期的不同，化学成分不能宣。
每批成分也不稳定，不宜用来做精细的科学实验。
以分离驯化食用菌培养基（２）半合成培养基为了促进食用菌菌丝的生长发育，常在天然培养基中添加适量的无机盐类，或在合成培养基中添加适量的某些天然有机物，就成为半合成培养基。
这类培养基种类繁多，应用广泛，也是生长菌种和实际栽培最常用的培养基。
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基配制
一、食用菌菌种种类
人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。
1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分 离等培育的菌丝体称为母种。
2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、 棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。
3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成 为生产上使用的菌种称为栽培种。
4）菌种：实质上就是经过人工培养并进一步 繁殖的食用菌的纯菌丝体。
二、食用菌的制种程序
种菇
孢子分离 组织分离
接种→母种（一级） 接种→培养→原种（二级）
培养
接种→→栽培种（三级）
经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。
一般1支试管菌种可繁殖4~6瓶原种，每瓶原种又 可扩大繁殖60~100瓶栽培种。
母种
原种和 栽培种
三、菌种生产常用的设备和用具 1、接种设备 ⑴ 接种室 ⑵ 接种箱 ⑶ 超净工作台
超净工作台
三、菌种生产常用的设备和用具
2、灭菌设备
Ⅰ
1）手提式：容量小，适于斜面试
高
管及玻璃器皿等；
压 蒸
2）立式： 容量大，投资大；
气 灭
3）卧式：容量大，投资大；
菌
4）家用24或26 cm压力锅：母种、
胡萝卜葡萄糖琼脂培养基胡萝卜200g葡萄糖或蔗糖1820g琼脂20ghpda培养基配制方法马铃薯去皮去芽眼切成片玉米大小称取20g70mlo煮沸1520min双层纱布过滤取滤液并补足100ml琼脂2g熔化葡萄糖2g分装试管不要倒到试管壁上塞上棉塞捆扎灭菌高压蒸气灭菌1530min制成斜面检查灭菌效果即2830培养23d1每人制5支试管斜面
三、菌种生产常用的设备和用具
3、培养设备 ⑴ 培养室 ⑵ 生化培养箱
【安徽】中职农业生物技术(主编曹春英、丁雪珍第二版 高教版)教案：第二章 植物组织培养技术04
第三节植物组织培养操作技术（2）一、授课章节第三节植物组织培养操作技术（2）。
二、学时安排2学时。
三、教学目标1．掌握培养基的作用。
2．掌握培养基中生长调控物质的作用。
3．了解培养基的类型。
四、教学重点、难点分析重点：培养基的基本成分。
难点：培养基中生长调节物质的作用。
五、教具电化教学设备。
六、教学方法讲授法，演示法。
七、教学过程Ⅰ.导入培养基是进行植物组织培养的基质，进行植物组织培养必须掌握培养基的基本知识，今天我们就学习培养基的种类和基本成分。
II.新课三、培养基制备技术（一）配制培养基的目的配制培养基的目的是人为提供离体培养材料的营养源。
配制的不同培养基，是为满足不同类型植物材料对营养的不同需要。
没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一种合适的培养基，培养才有可能成功。
（二）培养基的种类1.培养基的种类划分2.常用培养基的配方和特点 目前已公开报道的基本培养基有许多种类，各有不同的特点和适用范围，在植物组织培养生产中应根据不同的植物种类和培养部位及不同的培养目的选用不同的培养基。
常用的培养基配方：表1 常用培养基配方只含有无机盐、蔗糖、维生素和水等最基本成分的合继代培养中促进培养物快速增殖的培养基，也称扩繁培养基。
培养基主要有水、无机盐、有机物、植物生长调节物质、培养基的支持材料五大类组成。
1.水水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。
它是生命活动过程中不可缺少的物质。
配制培养基母液时要用蒸馏水，以确保母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质，大规模生产时可用自来水。
但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。
2.无机元素(1)大量元素指浓度大于0.5 mmol／L的元素，有N，P，K，Ca，Mg，S等。
常由KN03、NH4NO3、KH2P04、NaH2P04、KCl、MgS04·7H20、CaCl2·2H20等化合物来提供。
培养基的组成、配制与灭菌
1、大量元素：
组织培养中，各种矿质营养主要从培养基中获得， N、P、K、Ca、Mg、S等6种大量元素依靠各种无机 盐提供。
不同植物种类和不同试验目的对元素的使用量要求 不同，需经试验确定。
目前已选择出多种培养基配方用于植物组织培养。 其中以MS应用最广泛。
通常激素母液浓度生长素类为0.1~0.5 mg/ml, 细 胞分裂素母液浓度为0.2~1.0 mg/ml.
四、培养基的配制：
1、量取母液：营养元素和激素。 2、称量蔗糖、琼脂，放入600ml左右蒸馏水的锅 内，电路上加热，使琼脂溶化。 3、加入母液，混合均匀，调整pH值。 4、分装入瓶，每瓶40－50ml。 5、封口：用4－6层称量纸封口，之后灭菌备用。
在植物组织培养中，主要通过植物激素 及生长调节物质对离体的组织、器官的形 态发生进行调控。包括诱导细胞分裂、愈 伤组织的生长、根芽的分化以及体细胞胚 胎发生等。
常用的植物激素及生长调节物涉及五大类植物 激素：
1、生长素类：IAA、IBA、NAA、2，4-D 2、细胞分裂类：6-BA、KT（Kin）、ZT、2ip 3、赤霉素类：GA3、GA4、GA7 4、脱落酸：ABA 5、乙烯：ETH
五、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）：
1、加热：
灭菌前检查灭菌锅内水量是否充足， 然后将培养基放于灭菌锅内，改好盖，关 闭放气阀，打开电源，加热升温。
2、排气：
当温度升至0.5kg/cm2时，打开放气阀 彻底排出锅内冷空气。然后关闭放气阀， 促使压力继续上升。
3、温度控制：
当锅内压力升至1.1kg/cm2时，计时15－20 分钟，计时结束后，关闭电源。
二、培养基的类型： 1、高盐浓度培养基：MS、B5、SH等。
秀珍菇种植管理技术
秀珍菇，又称袖珍菇、姬平菇等，是一种营养价值高、口感佳的珍稀食用菌。
其种植管理技术如下：一、栽培季节选择秀珍菇属中偏高温型食用菌，根据其生物学特性，最佳栽培季节为春末夏初或夏末秋初。
各地可根据当地气候、海拔高低等因素，适当调整栽培时间。
二、培养基配制1. 常用培养基配方：配方一：棉籽壳74%，豆秆15%，麦麸8%，石灰1.5%，石膏粉1.5%；配方二：杂木屑80%，麦麸7%，蔗糖1%，碳酸钙1.5%，石膏粉1.5%；配方三：玉米芯50%，豆秆28%，麦麸17%，碳酸钙2%，石膏粉2%，蔗糖1%；配方四：甘蔗渣40%，杂木屑25%，豆秆15%，麦麸18%，碳酸钙1.5%。
2. 料水比值：11～1.2，含水量60～65%，灭菌前pH值7。
三、装袋灭菌1. 采用袋料灭菌，使木质素、纤维素结构发生物理变化，有利于菌丝分解吸收。
2. 灭菌温度一般为121℃左右，灭菌时间2小时。
四、接种与培养1. 接种：在灭菌后的培养基中接种秀珍菇菌种，接种量一般为培养基总量的3%。
2. 培养：将接种后的菌袋置于适宜的温度、湿度条件下培养，温度控制在23～25℃，湿度保持在60%～70%。
五、出菇管理1. 菌丝满袋后，继续培养5～7天，使菌丝达到生理成熟，积累养分。
2. 将菌袋运至出菇场所，堆叠成墙式出菇。
3. 刺激温度控制在10℃以下，维持10小时以上。
4. 向地面及四周空间喷水，提高空气相对湿度为85%～95%，加强通风，给予散射光照射，促使菌丝扭结分化为原基。
5. 原基形成后，棚内温度稳定在20℃左右，要求空气相对湿度为90%。
6. 适当减少通风，只在早晚进行，以保证子实体生长。
7. 子实体成熟后应及时采收。
六、病虫害防治1. 菇房应选择通风良好、清洁的地区，四周无杂草和臭水沟等菌蝇和菌蚊滋生的场所。
2. 菇房应安装通风设备，门窗均应安装细眼纱网，以防蝇蚊类进入。
3. 对菇房进行预处理，使用DDV药剂熏蒸一整夜后散气，再用高锰酸钾和甲醛熏蒸一夜，待气味散尽后，对菇房进行预湿处理。
实验五微生物培养基配制与灭菌
过滤除菌法：
不能用加热灭菌的液体物质（如维生 素、血清），一般可用细菌过滤器进 行除菌。
培养基和玻璃器材的灭菌方 法
第三十二页，共七十三页。
培养基和玻璃器材的灭菌方法
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使 室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增 强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层 玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀 菌。
K2HPO4 KCl
2.0 g 1.0 g
0.5 g
MgSO4
FeSO4 蔗糖
0.5 g
0.01 g 30g
琼脂
自来水
pH
20 g
1000 mL
自然
第十七页，共七十三页。
LB(Luria-Bertani)培养基
1000mlLB培养基的配方
胰蛋白胨 (Tryptone)
10g
酵母提取物(Yeast extract) 5g
第一页，共七十三页。
微生物培养基的
配制与灭菌
第二页，共七十三页。
目的要求
1.明确培养基的配制原理和方法，掌握其配制的一般方法 和步骤。
2.了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽 灭菌法的原理及其使用方法。
3.熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方 法。（预习）
第三页，共七十三页。
消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、天 平、工作台、手等
第四十三页，共七十三页。
（四）无菌操作
1、目的：
（1）是保证待检物品不被环境中微生物的污 染；
（2）是防止被检微生物在操作中污染环境或感染
培养基
配制培养基的原则和方法是什么培养基有很多种，你要配制哪一种呢？你要查清楚，你要配的培养基的成分有那些，然后把要用的东西找到。
在配制之前你要把装培养基的容器准备好，是用试管、平皿还是三角瓶。
之后看要配的是固体培养基还是液体培养基，觉得是否放琼脂或明胶。
之后找来一个大烧杯，依次把要放的物质放入，要是配的是固体培养基要把加入琼脂或明胶的培养基放在电炉上加热，待琼脂或明胶完全溶解后趁热迅速分装。
之后把分装好的培养基封口，之后选择是干灭还是湿灭，等灭菌之后，配制培养基的工作就完成了。
培养基的配制与灭菌1目的1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。
2原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。
加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。
但多次反复融化，其凝固性降低。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
3材料3.1器皿及材料天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。
3.2药品试剂蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH 溶液、5%HCl溶液。
4流程称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。
食用菌培养基及其制作方法
食用菌培养基及其制作方法食用菌培养基它是根据各种食用菌生长时对营养物质的要求而采用人工方法配制成的营养基质，以便给菌丝生长发育提供营养物质。
就如同农作物需要土壤、肥料，动物需要饲料一样。
培养基种类目前，人们采用的培养基相当多，种类各不相同。
不论哪种培养基都有共同特点：一般都含有水分、碳源、氮源、无机盐以及生长因素等。
水分是食用菌的组成成分，食用菌在生理活动中，需要在有水的情况下进行。
碳源是构成细胞物质的主要元素，也是食用菌生长发膏所需能量来源。
碳源的主要原料是糖类、淀粉、纤维素物质。
代表物质是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麸皮、米糠、锯木、棉籽壳等。
氮源是食用菌细胞质和细胞核中蛋白质和核酸的主要元素，蛋白质和核酸是生命的基本物质。
一切生命活动都离不开这些物质。
氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸银、含有氮素的物质有玉米、棉籽壳。
培养基中的无机盐虽用量不多；但不可缺少。
它主要是酶类的组成成分，调节各种生命代谢活动。
如磷酸二氢钾、硫酸镁。
生长因素需要量很少，是培养基中的特殊营养物质，它是维持食用菌正常生长所不可缺少的生长因素。
如马铃薯、麸皮、米糠等都含有丰富的生长因素，维生素也属此类。
根据营养物质的来源，黄年来等同志进行了细致的分类，把所有培养基分成三大类：1.天然培养基：它是利用天然的有机物配制而成的培养基。
这种培养基来源广，成本低，很适合实胨生产。
特别具备营养丰富、制备方便、经济实用等优点。
但他学成分不能定量，每批成分也不稳定，因此不宜用来进行精确的科学实验。
常用的天然培养基，有马铃薯培养基、麦芽汁培养基、杏汁培养基、苹果培养基、麦芽培养基、堆肥培养基等。
2.半合成培养基：在天然培养基中，适当增加无机盐类，或在合成培养基中添加少量别的有机物，成为半合成培养基，介于天然培养基和合成培养基之间。
主要目的是促进菌丝生长发膏。
3.合成培养基：用化学成分已知的有机物或无机物配制而成的培养基。
由于各种化学成分已经清楚，容易控制，所以适合某些定性和定量研究。
YPDA 培养基的配方
YPDA 培养基用途:用于酵母菌增菌培养。
用法称取本品50.0g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装,116℃高压灭菌30 分钟,备用。
YPDA 培养基培养的保持培养物是应该保持在孵箱中的。
孵箱可以自动将O2与CO2混合很快达到培养基的设计要求，空气中的氧浓度比血液和脑脊液中要高得多。
对于某些细胞的生长，包括神经原，应使氧含量处在一个较低的水平。
可以用孵箱达到这个标准，但这样的孵箱并未广泛使用。
高湿度可避免培养皿中YPDA 培养基的蒸发，保持孵箱中的湿度通常是在箱底部放上一大盆水，这水应该经常换，乘水容器应经常消毒以防霉菌生长。
若孵箱曾被霉菌孢子严重污染过，那么要想完全去除污染则会非常困难。
当培养物必须要长期保持在孵箱中时，应采用较少培养基的瓶、皿，且将盖子盖紧以避免蒸发，或采用相应的按比例供空气的孵箱。
温度的精确调节应定期检查，孵箱温度常设置为37℃或较低温度。
细胞在低温时可有较长时间的忍耐限度，但当温度升至39℃时，几小时内即死亡。
维持培养物的最佳方案常常改变。
例如培养胶质细胞时，要经常换液以使其增殖达到最大。
而在培养某些神经原时，则要求尽可能少的换液，神经原在两次换液之间的条件下长的最好。
大脑皮质的培养要求在不换液的情形下维持一个月以上。
另一方面，象海马神经原那样的细胞，倚赖于条件培养基，若换液太频繁细胞就会衰退，此时，可采用1/3或1/2换液的方式YPDA 培养基操作步骤：1．取 2ml 左右的L-多聚赖氨酸（0.1mg/ml）包被培养板或coverlip；2. 将出生小于24h的乳鼠6-8个用70%乙醇消毒，逐个断头，取脑，放入冰浴的解剖液中；3. 用弯头镊镊取海马和皮层，去除脑膜和血管，分别放入干净的平皿中，用手术刀片分别将海马和皮层切细。
4. 将组织块置于15ml解剖液配制的0.25%胰蛋白酶中37?C，静置20min，取出时，勿摇晃。
5. 吸弃去上层胰酶液，下层组织沉淀约2ml, 加3ml种植液冲洗一遍。
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70种常用培养基配方
培养基是用于菌种的生长、繁殖和实验研究的一种基质。
常用培养基
种类繁多，各有不同的配方和用途。
下面介绍70种常用的培养基配方，
供参考。
1.通用培养基：
-营养琼脂培养基：牛肉浸提出液、酵母浸提出液、葡萄糖、琼脂。
-营养蚕豆琼脂培养基：蚕豆提取物、酵母浸提出液、葡萄糖、琼脂。
2.富集培养基：
-甘露醇富集培养基：菌落提取物、氯化钠、甘露醇。
-马铃薯富集培养基：马铃薯提取物、氯化钠、琼脂。
3.选择性培养基：
-MAC寄生虫选择性琼脂培养基：大肠杆菌寄生虫选择因子、大肠杆
菌不可吸收糖、蓝膏染色剂、琼脂。
-SS培养基：硫酸镁、琼脂、碳酸氢钠、硫酸铁。
4.染色选择培养基：
-LB琼脂培养基：牛肉浸提出液、酵母浸提出液、葡萄糖、琼脂。
-LB琼脂平板培养基：LB琼脂培养基、琼脂。
5.少培养基：
-惠普顿可溶性培养基：肉浸膏、番茄汁、酵母浸提物、葡萄糖。
-惠普顿可溶性培养基+90%乙醇：肉浸膏、番茄汁、酵母浸提物、葡萄糖、乙醇。
6.杂类培养基：
-牛血琼脂培养基：立克次体病原质、灭菌牛血、琼脂。
-葡萄酒琼脂培养基：葡萄酒、肉浸膏、酵母提取物、琼脂。
7.病毒培养基：
-293改良培养基：DMEM/F-12培养基、胎儿牛血清、L-谷胺酰胺、嘌呤鸟苷、角鲨烷醇。
- Vero细胞培养基：EMEM培养基、羊脑提取物、牛胎儿血清。
8.食品微生物培养基：
-SA培养基：牛肉浸取物、蛋葵况乳、葡萄糖、卵巢葡萄糖。
-TCBS琼脂培养基：钠氯化物、蛋黄粉、蔗糖、蓝膏染色剂。
9.植物组织培养基：
-MS培养基：硝酸铵、硝酸钾、硫酸镁、硫酸锌。
-B5培养基：硝酸铵、硝酸钙、硫酸镁、硫酸钾。
10.真菌培养基：
-SD培养基：蔗糖、酵母氮碱基、L-谷胺酸、琼脂。
-YPD培养基：酵母提取物、葡萄糖、琼脂。
以上是常用的70种培养基配方，涵盖了各种通用、富集、选择性、染色选择、少培养、杂类、病毒、食品微生物、植物组织和真菌培养基。
这些培养基适用于不同类型的实验研究和菌种培养。
在实际应用过程中，可以根据实验需要进一步调整配方。