猪圆环病毒2型疫苗最新研究进展
(完整版)猪圆环病毒2型(PCV-2)及相关疾病
5、猪呼吸道病综合征（Porcine respiratory disease complex ,PRDC）
6、猪增生性和坏死性肺炎（Porcine proliferative and necrotizing pneumonia,PNP）
• PCV-2相关疾病包括：
1、断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome ,PMWS）
2、猪皮炎肾炎综合征（Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS）
3、繁殖障碍（Reproductive failure）
具体预防程序为：
1、 母猪于产前和产后各7天用支原净加强力霉 素拌料。
2、3、7、21日龄各注射0.5~1ml得米先。 3、3天补铁及10天硒。 4、 10日龄注射PRRS苗（兰耳苗） 5、15日龄注射自家苗（个别过敏）。 6、25日龄猪瘟免疫3~4头份。 7、42日龄注射PR苗（伪狂犬基因缺失苗） 8、断奶后拌料用药20天阿奇霉素、氟苯尼考
及黄芪多糖；黄芪多糖、替米考星。
9、育肥期每月初用支原净加强力霉素拌料7天， 月末用氟苯尼考拌料4~5天。
特别观注：目前还没有真正效果良好的商品化疫 苗用于PCV-2的免疫接种。其主要原因是现有 条件下体外培养PCV-2的最佳条件还没找到， 人工培养时PCV-2含量不高，难以达到制作疫 苗的要求。临床上可选用病变最为严重的猪送 到实验室制作自家苗，这是目前全国通用的方 法。
猪圆环病毒2型（PCV-2）及相关疾病
猪圆环病毒2型（PCV-2）是目前已知的最小的动 物病毒之一，近几年来对养猪业造成了巨大的经济损 失，就连美国一些养殖场也因此而垂头丧气。我国近 年来随着养猪的大发展及猪群的大规模调动，各地均 的发生，为了进一步预防和控制本病，现就PCV-2及 其相关猪病进行探讨，以期帮助养殖场正确对待本病， 提高经济效益，减少不必要的损失。
猪圆环病毒2型核酸载体构建及分子免疫研究
医师 ， 事 畜 牧 技 术 研 究 与 推 广 工 作 。 从
＊［ 讯 作 者 ］ 马友 记 ， — ｉ ｙｍａ ｇ ａ ． ｄ ． ｎ 通 Ｅ ｍａｌ ｊ ＠ ｓ ｕ ｅ ｕ ｃ ：
４ ２
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｉ ｌ ｃｅ ｃ ｎ ｅｅ ｉａ ｙ Ｍ ｅ ｉｉｅ ｏ ｒ ａ ｆＡｎ ｍａ ｉｎ ｅａ ｄＶ ｔ ｒｎ ｒ ｄ ｃｎ Ｓ
因的 真核 双表 达质 粒 ｐＲＥ － ａ —一Ｆ 经酶切 、 Ｃ ｌ ＳＣ ｐｏＩ Ｎ， 【 Ｐ Ｒ鉴 定和 测序 表 明构 建成功 。将 该 质粒 免 疫 ６
～
８周龄 Ｂ Ｂ ｃ 系小 鼠 ， 隔 ２周 免 疫 １次 ， 免 ２次 ， 次免 疫 前采血 分 离血 清 ， ＡＬ ／ 纯 每 共 每 实验 结束 时
Ｖｏ ． １ １３
Ｎｏ ４ ．
２ １ ０２
１ 材 料 和 方 法
１ １ 质 粒 及 菌 株 ．
体分别用 Ｂ ｌ和 Ｘ ｏ双酶 切 ， ｇⅡ ｈＩ 回收酶切 产物 用 Ｄ Ａ Ｎ
猪圆环病毒2型结构蛋白表达及其类病毒颗粒疫苗
信号 区域 ， 可以使 Ｃ ａ ｐ蛋 白正确地定位在 核上 ， 通 过定点诱 变发 现其 中 １ ２ — １ ８位 （ Ｒ — Ｈ— Ｒ — Ｐ — Ｓ — Ｈ） 和 ３ ４ — ４ １ 位
（ Ｈ — Ｒ — Ｙ — Ｒ — ｗ— Ｒ — Ｒ — Ｋ） 氨基酸残基对 Ｏ Ｒ Ｆ ２ 基 因 的 定 位 起
ｄ ｏ ｓ ｅ 。前者 主要 用于母猪免疫接种 ； 后者 主要适用于仔猪 的
制有关 ； Ｏ Ｒ Ｆ ２编码 一个主要 的结构 蛋 白 Ｃ ａ ｐ ， Ｃ ａ ｐ蛋 白含 有 特异性表位抗 原 ， 具 有很强 的免疫原性 ， 并能诱 导机体 强烈 的中和反应 ； Ｏ Ｒ Ｆ ３为病毒复制非必需基因 ， 经经典 途径诱导
细胞凋亡。
目前针对 Ｐ Ｃ Ｖ ２病毒设计 的疫苗 主要 有两类 ， 一类是全 病毒灭活疫苗 ， 一类是亚单位疫苗 。 在全病毒灭活疫苗方面 ， 国外 已有 两个 产品成功上市 ， 一个是 Ｍ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ 公 司研制 的全病 毒灭活 疫苗 Ｃ ｉ ｒ ｅ ｏ ｖ ａ ｅ ，另 一 个 是 Ｆ ｏ ｒ ｔ Ｄ ｏ ｄ ｇ ｅ公 司 研 制 的
Ｐ Ｃ Ｖ 一 １与 Ｐ Ｃ Ｖ 一 ２嵌 合 全 病 毒 灭 活 疫 苗 Ｓ ｕ ｖ ａ ｘ ｙ ｎ Ｐ Ｃ Ｖ ２ ｏ ｎ ｅ
１ 猪 圆 环病 毒 ２型 结 构 蛋 白
Ｏ Ｒ Ｆ ２基因是 Ｐ Ｃ Ｖ ２的第二大开放 阅读框 ，位于基因组 的互 补链 上 ， 通 常全长 为 ７ ０ ２个 碱基 ， 编码 ２ ３ ３个氨基 酸 ，
子平均直径 为 １ ７ ｎ ｍ。 他们能感染很多植物与动物 。 在过去的
猪圆环病毒2型疫苗研究进展
猪圆环病毒2型疫苗研究进展王晓军;王国珍【摘要】疫苗免疫接种是防控猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)的主要方式,PCV-2疫苗的研究与开发已成为国内外兽医工作者的关注热点.在国际市场上销售的商品化PCV-2疫苗主要包括亚单位疫苗、嵌合病毒疫苗和灭活疫苗,其中PCV-2灭活疫苗已在我国规模化猪场中广泛使用.综述了近年来国内外各类PCV-2疫苗研究进展及存在的问题,以期为猪圆环病毒病的防制与PCV-2新型疫苗的研发提供参考.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2014(041)023【总页数】5页(P106-110)【关键词】猪圆环病毒2型;传统疫苗;免疫;基因工程疫苗【作者】王晓军;王国珍【作者单位】浙江工业大学化学工程学院,浙江杭州 310014;浙江水利水电学院后勤处,浙江杭州 310018【正文语种】中文【中图分类】S855.3;S852.5+2猪圆环病毒 2 型（Porcine circovirus type 2，PCV-2）是圆环病毒科的一种无囊膜、二十面体对称、共价闭合、环状、单股DNA 病毒，直径平均为17 nm，是目前发现最小的动物病毒[1]。
猪圆环病毒病（Porcine circoviral disease，PCVD）是由 PCV-2 引起的一系列疾病的总称[2]，主要包括猪呼吸道疾病综合征（Porcine respiratory disease complex，PRDC）、猪断奶后多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（Porcine dermatitis and nephrophathy syndrome，PDNS）以及繁殖障碍等疾病。
此外，PCV-2 跟新生仔猪的先天性震颤（Congenital tremor，CT）、增生性坏死性间质性肺炎（Proliferative and necrotizing interstitial pneumonia，PNP）等有关。
猪圆环病毒免疫学研究进展
Ｐ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｖｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｍ ｅ ｉｉ ｅ ｒ ｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎ ｒ ｄ ｃｎ
猪 圆环 病 毒 免 疫 学 研 究 进 展
邓柏林 韦海涛 姚 杰章。赵 景义 于春 明 王晓清。 ， ， ， ， ，
和 经产母 猪进行 Ｐ Ｖ一 疫 ， Ｃ ２免 增加 母 源性 免 疫和 降低 病毒 血症 的措 施 可 以减 少 Ｐ ＭＷＳ对 仔猪 死 亡 的影 响 。
Ｐ Ｖ ２疫 苗现在 已经在 商业 上应 用 ， 苗对 Ｐ Ｖ－ Ｃ 一 疫 Ｃ ２复制 和 Ｐ ＶＤ 的诱 导增 强 作 用 似 乎依 赖 于 疫 苗佐 剂 的 Ｃ
染 源 的结 论仍 有 待 于进 一 步 的证 实 。
Ｐｒ ｇ ｅ ｓｏ ＤＮＡ ｅｈｙ ａ ｉ ｎ Ｒｅ ｒ ｇ ａ ｍ ｉ ｆ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｍ ｔ ｌ ｔｏ ｐ ｏ ｒ ｍ ｎｇ ｏ
Ｓ ｍａ ｉ ｌ Ｎｕ ｌａ ａ ｓ ｅ ｎ Ｍ ａ ｏ ｔｃＣｅｌ ｃｅ ｒＴｒ ｎ ｆｒ ｉ ｍｍ ａ ｌ
中 图 分类 号 ：８ ２ ６９ ２ ￥ ５ ． ８ ￥ ５ ． ５ ． ；８ ８ ２ 文献标识码 ： Ａ
文章 编号 ：０ ７５ ３ （０ ９ ０ ・０ ７０ １０ —０ ８ ２ ０ ）４０ ７—６
猪 圆环病 毒 （ ｏｃ ｅ ｉ ｏ ｉ ｓＰ Ｖ） 目前兽 Ｐ ｒｉ ｒ ｖｒ ，Ｃ 是 ｎ ｃｃ ｕ 医学界 发 现 的最 小 的 无 囊 膜 单 股 Ｄ ＮＡ 病 毒 ， 据 根
Ａ ｓ ａｔＤＮ ｍｅｙａｉｎｉ ｏ ｅ ｆ ｈ ｊｒ ｐｇ ｎ ｔ ｄｆ ａｉｎ ．Ｔｈ ｒ ｌ ｂ ｂ ｏ ｍａ ＮＡ ｔ — ｂｔ ｃ ： Ａ ｔｌｔ ｎ ｅｍａｏ ｉｅ ｅｉ ｍｏ ｉｃ ｔ ｓ ｒ ｏ ｓ ｏｔ ｅ ｃ ｉ ｏ ｅｅｗｉ ｅ ｎ ｒ １ ｌ ａ Ｄ ｍｅｈ
猪圆环病毒2型的诊断与防控技术
灭活的猪圆环病毒处理 的外周血细 胞中 ，结 果是一致 的，提示 圆环病
要 因素 。
感 染 互 相 交 织 。研 究 发现 ， 与未 感 染 圆 环 病 毒 组 相 比 ，事 先 感 染 猪 圆
环病毒，然后免疫猪蓝耳病活疫苗 ，
程 度 最 低 ， 该组 的 蓝 耳 病 疫 苗 抗 体 也 最 低 ， 因 此 ， 作 者 认 为 ，我 国 不 重 程 度 不 同 ，是 造 成 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 活 疫 苗在 不 同猪 场 之 间 效 果 差 异 的 原 因 之 一 。 另一 方 面 ，猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 病 毒 感 染 后 ，增 加
４ ５ ｄ后 剖 杀 病毒感染的致病原因
是否与病毒对不同组织的嗜性有关，
用 的结果 。皮 炎与 。 肾 病 综 合症从 本 质
（ 一 ）单独感染的致病性 Ｐ Ｃ Ｖ２ 还是 与不 同生长 阶 段中与 宿主相 互作
感 染 后 主 要 引 起 免 疫 抑 制 。这 可 以 从 几 个 方 面 来 概 括 。（ １ ） 病 毒 能 够 感 染 机 体 树 突 状 细 胞 和 肺 泡 巨噬
性 菌细胞壁 中的重要成分 ，可以推
性 菌 的感 染 ， 由于 Ｌ Ｐ Ｓ 的刺激作用 ， 猪 体 内 已经 感 染 的 猪 圆环 病 毒 ２型
病发生的可能 。
（ 三 ）皮炎与肾病综合症 本病主
段 的 猪 群 ， 主要 表 现 在 臀 部 或 后 肢 皮 肤 出现 近 乎 圆形 的 紫 色 丘 疹 ，与 周 围健 康 皮 肤 界 限 清 晰 。病 理 变 化
猪圆环2型3型抗原检测依据国标
猪圆环2型3型抗原检测依据国标环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV-2)是造成断奶仔猪多系统衰竭综合症(Postweanig multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原，也可导致免疫抑制，引起其它相关疾病的并发和继发感染，给养猪业造成了巨大的经济损失。
疫苗免疫接种是预防PCV-2的主要措施，免疫猪群中仍会存在野毒感染的猪。
要将其从免疫猪群中淘汰，必须要建立能大规模鉴别野毒感染的方法。
本研究的目的就是建立检测PCV-2野毒感染抗体的ELISA方法。
为鉴定PCV-2 ORF3蛋白的抗原性，本实验首先将ORF3基因插入pT7-IRES表达载体，使用体外无细胞蛋白合成系统进行蛋白表达，用PCV-2野毒感染猪的血清对表达蛋白的抗原性进行Western-blot鉴定。
为获得大量的表达蛋白进行纯化和ELISA方法的建立，将其插入pET-28a表达载体构建重组表达质粒，鉴定后进行纯化，随后用其作为包被抗原建立间接ELISA，并对临床野毒感染样品进行了检测。
试验结果表明，PCV-2 ORF3基因被插入pT7-IRES表达载体，构建成功pT7-PCV-2-ORF3表达质粒，使用体外无细胞蛋白合成系统可特异性的表达出ORF3蛋白，在Western-blot试验中，表达蛋白可与PCV-2野毒感染的猪血清进行特异性反应，表明ORF3蛋白和刺激机体产生抗体并与抗体发生特异性反应。
为获得大量的重组表达蛋白进行纯化，又将ORF3基因插入pET-28a原核表达载体成功构建了pET-PCV-2-ORF3原核表达质粒，转化BL21(DE3)大肠杆菌后可高效的诱导表达。
Western-blot试验表明表达蛋白可与6XHis单克隆抗体发生反应，也与野毒感染的猪血清发生反应，但与PCV-2 CAP蛋白重组疫苗免疫小鼠的血清不能发生反应。
将原核表达的ORF3蛋白亲和层析纯化后，作为抗原包被ELISA 板，初步建立了间接ELISA方法，对40份临床阴阳性血清的检测结果表明，其能从26份阳性血清中检出24份为阳性，阳性符合率为92%，具有很高的符合率。
猪圆环病毒2型疫苗的应用现状
粒子无 囊膜 ， 为单 股环状 Ｄ Ａ病 毒 ， 因组全长约 Ｎ 基 １ ６ｋ嘲 Ｃ 包括Ｐ ＶＩＩ Ｃ ２ ． ｈ 。Ｐ Ｖ ． ７ Ｃ ￣ Ｐ Ｖ 两种基 因型 。 Ｃ １ ３ Ｐ Ｖ 分 离 自污 染 的 Ｐ 一 ５细 胞 ， Ｋ １ 对猪 无致 病性 ， 但广泛 存在 于猪体 内及猪源细胞系／ Ｃ Ｖ ３ １ 。Ｐ ２分离 白发生断 奶 仔猪 多系统 衰竭综 合征 （ＭＷＳ 的猪 群 ， 引发 Ｐ ） 除 仔 猪 Ｐ ＷＳ外 ， Ｍ 还可 导致母猪 繁殖 障碍 、 皮炎 肾 猪 病综 合征 （Ｄ Ｓ 、 Ｐ Ｎ ） 新生 仔猪先天 性震颤 （Ｔ 、 生 Ｃ ）增 性 坏死性肺 炎 （Ｎ ） 肠炎等疾 病 ， Ｐ Ｐ和 同时 也是猪 呼 吸道病综合征 （Ｒ Ｃ 的原发病原之 一『Ｉ ＰＤ ） ４。 ｆ ５
来， 该病 已给全世 界养猪业造成 了巨大 的经济损失 。 ２０ ０ ８年 第 ２ ０届 国际猪 病大会 （０ Ｖ ） ， ２ ｔ Ｉ Ｓ 上 人们 ｈＰ 更将其列 为当前危 害养猪业发展 的头号疫病 。我 国 自 ２０ ０ ０年报 道猪群 中存在 Ｐ Ｖ Ｃ ２感 染 的血清 学证 据 以来Ｉ 各地 区陆续报道 ， ・ Ｉ ， 流行范 围已波及全 国， 猪 群平均 阳性率３ ． ％， ８ ７ 猪场 阳性率５ ． ％以上 ， ４ ８５ ７ 危害 日趋严重 。目前 ， 如何有效防控 Ｐ Ｖ 已成为全球养 ＣＤ 猪 业关注的焦点 。迄今 ， 全球有４ 种商品化 Ｐ Ｖ Ｃ ２疫 苗相继 问世 ， 在部分 国家和地 区已有应用 ， 本文就当
目前 已鉴定 出 ３ 种基 因型的 Ｐ Ｖ Ｃ ２病毒 ，分 别 为 Ｐ Ｖ ａ Ｐ Ｖ ｂ和 Ｐ Ｖ ｃ Ｃ ２ 、Ｃ ２ Ｃ ２ ，只 有 Ｐ Ｖ ａ和 Ｐ Ｖ ｂ Ｃ２ Ｃ ２ 作 者 简 介 ： 东升 （ ９ ０ ） 男 ， 龙 江牡 丹 江 人 ， 士 ， 究 方 向 赵 １８－ ， 黑 一 硕 研 发 现 自 Ｐ ＷＳ病 例 。调 查 显 示 ，Ｃ ２ 仅 于 ２ 世 纪 Ｍ ＰＶ ｅ ０ 为兽 医微 生 物 学 与 免 疫 学 ．－ ｉ Ｚ ａＤＳ ａ ｇ ｃ ． Ｅ一 ｌ ｈｏ ＠ｃｈ． ｒ ｃ ｍａ ： ｅｕ ｎ
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猪圆环病毒2型疫苗最新研究进展 猪圆环病毒病是公认的免疫抑制病之一，造成猪场损失惨重，疫苗免疫成了救命的稻草。从2011年猪圆环疫苗上市至今，已有17家圆环产品先后上市，目前，出现严重供大于求的现象，同时，养殖场也面临着幸福的烦恼，大量产品的上市，产品价格可能下降，但是，面对玲琅满目的产品，如何选择疫苗成了养殖场一个重要的课题，针对这些烦恼，本文希望能够为养殖场选择疫苗带来帮助，避免走弯路，为养殖场服务。 1.PCV-2国内外最新流行动态 由PCV-2引发的疾病已成全球流行之势，在加拿大首次报道该病原引起PMWS后[1]，学者通过调查本国包括SPF猪、部分散养猪以及育肥猪发现，猪群中PCV-2血清中抗体普遍存在，但目前该病在加拿大仍然只是散发。在英国和北爱尔兰，猪群血清中PCV-2抗体阳性率分别为86％和92％。美国、法国、丹麦、意大利、西班牙、荷兰、新西兰、日本、韩国、墨西哥等国家也相继报道猪群中存在PMWS。在我国猪群中PCV-2感染情况也不容乐观。2000年郎洪武等[2]在北京、河北、山东、天津、江西、吉林、河南等7省(市)的22个猪群采集了559份血清，用ELISA方法检测PCV-2抗体，其阳性率高达5l％，表明我国猪群中存在PCV-2的感染。王忠田等[3]用PCR方法对我国北京、山东、河北、深圳、山西、天津、广东等省(市)的12个规模化猪场发病猪群进行猪圆环病毒2型感染的流行病学调查，结果表明猪圆环病毒2型感染情况在我国猪群中相当严重。李超等[4]在2010年对安徽省PCV-2流行病学调查，结果表明安徽省14个市(县)的PCV-2抗体阳性率平均为74.36％，表明安徽省猪群中普遍存在着PCV-2的感染。从上述报道表明PCV-2在我国猪群中广泛存在。根据流行病学调查显示，虽然猪群中PCV-2抗体阳性率较高，但很大比例的抗体阳性猪群并不表现出临床症状。PCV-2与其他多种病原混合感染较为严重，调查发现沙门氏菌、大肠杆菌等细菌性病原与PCV-2混合感染率达到了20％[5]。陕西省PCV-2与PRV混合感染率是21.7％[6]。2005年陈义祥等对广西地区197份组织病料检测发现，PCV-2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染占总病料数量的57.73％。2003年王文军等[7]对黑龙江地区PCV-2阳性猪群的病料调查发现，蓝耳病和猪瘟的阳性率也较高。 哈尔滨兽医研究所刘长明[8]在2007年采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验（IPMA）对来自与黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地的健康猪群480份血清和发病猪群424份血清，抗体阳性率分别为79.2%和91.7%，表明PCV-2在猪群中感染率非常高。 山东农科院畜牧兽医研究所吴家强博士检测结果也证实PCV-2防控比较糟糕，PCV-2，2010年检出率为34.66%（124/357），2011年检出率为25.59%(174/588)；2012年检出率为21.38%(147/683)，圆环病毒病依然严重，但有下降趋势，这个和使用圆环疫苗免疫有关系。 2.PCV-2病毒特点
基因组内存在 11 个潜在 ORFs，即 ORF1-ORF11，其中 ORF1、5、7、10 方向相同,为顺时针方向；ORF2、3、4、6、8、9、11 方向相同，为逆时针方向 PCV-2 全长由 1768 或者 1767 个核苷酸组成，目前出现了新的 1766 个核苷酸的病例[9]。PCV2 基因型内核苷酸序列非常保守，同源核苷酸的同源性大于96%。 3．PCV-2(圆环病毒)毒株流行情况 根据对PCV-2毒株的序列分析结果，将PCV-2病毒分离株分为5个亚型(PCV-2a～PCV-2e),鉴于PCV-2a和PCV-2e都有l768bp的基因组；因此，又把这几个基因型统称为PCV-2a，所以PCV-2a基因型包括PCV-2a、PCV-2e等型；而PCV-2b、PCV-2c和PCV-2d都有l767bp 的基因组，因此，又把这几个基因型统称为PCV-2b，所以，PCV-2b基因型包括PCV-2b、PCV-2c、PCV-2d等型。随着时间推移，PCV-2基因型也有所变异，通过检测分析，世界范围内主要流行PCV-2亚型已从PCV-2a转化为PCV-2b(Patterson等，2010)，即PCV-2b为主要流行亚型，毒力也最强。Li等(2010)对2001-2009年间报道的136株PCV-2中国株进行了分析，结果表明PCV-2b占127株，PCV-2a占9株，其中2001年中国流行株以PCV-2a为主，以后PCV-2b占绝大部分。 2010年，西北农林科技大学张彦明[10]也得出类似结论：其对1999年～2009年NCBI中登录的556个PCV-2分离株全基因序列进行分析。结果表明，1999年～2002年所登录的PCV-2的优势流行毒株为基因a型(PCV-2a)；从2003年开始基因b型(PCV-2b)逐渐为优势流行毒株，在PCV-2分离株中基因b型所占比例，2004年为95.4％，2007年～2009年均超过76.0％。2003年～2009年国内的PCV-2分离株有287个，其中250个为PCV-2b，37个为PCV-2a，表明PCV-2b是国内猪群中的主要优势毒株。通过建立PCV-2a和PCV2-b PCR检测方法，对70份临床病料的检测显示，PCV-2检出率为34．29％(24／70)，基因型均为PCV-2b，无PCV-2a的检出，表明PCV-2b为检测猪群中的主要优势毒株。 4.疫苗研究进展 目前国内外学者对 PCV-2 疫苗的研究主要是从灭活疫苗、构建嵌合病毒、亚单位疫 苗、重组腺病毒基因工程疫苗以及核酸疫苗等方面进行研究。现在取得新兽药证书的有20家，其中包括外企4家，但在中国注册仅有1家，为勃林格，国内企业有文号的有10家，马上上市的也有10家。合法上市的17家圆环疫苗，不包括通过其它渠道进入中国市场的梅里亚、英特威/先灵葆雅、富道/硕腾3家及易邦的中试产品。这21家圆环病毒疫苗产品表现以下特点： 按生产方式可分：基因工程疫苗和全病毒灭活疫苗 4.1 基因工程疫苗：又可分为基因工程亚单位疫苗和基因嵌合疫苗 由于圆环病毒毒力弱，全病毒培养获得高滴度病毒难度大，部分企业采用原核表达和真核表达的方式，通过蛋白纯化浓缩提高抗原水平。勃林格、英特威/先灵葆雅为昆虫杆状病毒表达的基因工程亚单位疫苗，用PCV-2的ORF2基因（Cap蛋白）插入到昆虫杆状病毒，用昆虫细胞培养，获得重组的PCV-2 Cap蛋白，制备亚单位疫苗。而易邦采用PCV-2的ORF2基因（Cap蛋白）插入大肠杆菌原核载体中去，利用大肠杆菌表达PCV-2 Cap蛋白，制备亚单位疫苗，但是原核表达易出现包涵体，包涵体没有活性，需要进行蛋白复性来提高疫苗效果，这个也是为什么国外企业采用真核表达的原因。从工艺上讲，勃林格、英特威/先灵葆雅属于哺乳动物细胞真核表达，而易邦属于原核表达，真核表达对工艺要求是远大于原核表达系统，这和国外企业相比还是有一定差距的。富道/硕腾为PCV1-PCV2嵌合疫苗，把PCV-2的ORF2基因（Cap蛋白）替换PCV-1的ORF2基因（Cap蛋白），灭活制备基因嵌合体疫苗。 4.2 全病毒灭活疫苗 4.2 .1生产工艺 由于原核表达与真核表达成本高，而且表达产量有限，对于蛋白纯化要求较高，制约了产品的市场推广。所以更多的是采用全病毒灭活的方式研究疫苗，梅里亚是最早投放市场的全病毒灭活疫苗，但梅里亚圆环疫苗没有在中国注册。关于全病毒灭活疫苗最大的瓶颈在于如何获得高滴度病毒液，所以必须优化工艺，提高滴度，目前，生物制品厂家多采用微载体悬浮培养的方式来获得高滴度病毒（通过悬浮培养GMP验证的车间很少），这就能克服圆环病毒毒力弱带来活力不强的难题。 4.2 .2 毒株 目前市场上主要还是全病毒灭活疫苗，主要毒株：SH株、LG株、DBN-SX07株、WH株、ZJ/c株之分，但从本质上讲，是没有区别的，因为圆环病毒具有致病性的只有圆环2型，而且只有1个血清型，这5个毒株均属于PCV-2b，毒株只能表明分离地点以及天然免疫原性而已，笔者在NCBI上下载了PCV-1、PCV-2a、PCV-2b等参考序列，运用MEGA 4．0进行与疫苗毒株ZJ/C株、WH株、LG株、SH株、DBN-SX07株等序列进行比对，我们清晰的发现：ZJ/C株、WH株处于同一分支；LG株、SH株处于同一分支；DBN-SX07株与LG株、SH株遗传距离更近，这个也与毒株分离早晚有一定关系，LG株、SH株疫苗2011年上市、DBN-SX07株疫苗2012年上市、ZJ/C株、WH株2013年上市，但这5个毒株均处于1个大分支，这也说明他们之间的遗传距离比较近，所以，对于圆环病毒这个产品来讲，依据毒株选择疫苗没有多少实际意义，市场宣传毒株只是炒作的噱头而已，关键还是要病毒含量的高度。
4.2 .3 病毒含量 关于病毒含量，养殖场（户）老板以及技术人员一般对于此项技术参数理解较差，因为病毒含量的表示通常比较抽象，但此项技术指标也是最重要的参数，因此，这里提示各位养殖同仁注意。疫苗的免疫效果与病毒含量成正比，提高疫苗效果最好的方式之一就是增加抗原滴度。目前市场上的疫苗上市时间早晚不一，毒株各异，病毒含量差别也比较大，早期上市的产品病毒含量比较低，但最近上市的无论ZJ/c还是WH株，病毒含量都达到107.0TCID50以上，病毒含量最高的产品甚至是最低产品的63倍。对比各个毒株：病毒含量ZJ/c株＞WH株＞SH株＞LG株=DBN-SX07株。用另一种直观表示方式：ZJ/c株1头份=2头份WH株=20头份SH株=63头份LG株/DBN-SX07株。 猪圆环病毒含量比较表