1高效液相
(一)高效液相色谱仪(二极管阵列检测器 荧光检测器 双
（一）高效液相色谱仪(二极管阵列检测器+荧光检测器+双泵柱后衍生）一、配置清单：1.液相色谱主机（主机包括：梯度系统，自动进样器，1台在线柱塞清洗装置，在线脱气机，柱温箱）2.荧光检测器1台3.二极管阵列检测器1台4.柱后衍生系统1套5.正版软件1套（工作站、操作系统、驱动等），全中文色谱1套管理系统，包括：64位色谱管理软件6.Oracle关系型图文数据库。
1套7.2ml样品瓶及瓶盖。
200个8.通用色谱柱接头。
2个9.原装C18色谱柱（5um 4.6×150mm；）1根10.1L溶剂瓶。
5个11.国产品牌电脑，含品牌打印机。
1套二、技术参数：1.四元梯度泵★1.1 工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装置，双压力传感器反馈回路1.2 溶剂数量：四元1.3 流速范围：0.001～10.000mL/min，以0.001递增1.4 流速精确度：≦0.075%RSD（小数点后三位数字）1.5 流速准确度：±0.5%1.6 延迟体积：<650µL（包括进样器扩散体积），并且不随反压变化1.7 混合范围：0.0—100.0% 以0.1% 增量1.8 最大耐受压力：≧5000psi1.9 梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化★1.10 梯度精度：≦0.15%RSD ，不随反压变化1.11 具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态（必须提供彩页或官方文件证明）2.自动进样器★2.1 样品瓶数：≧115位（必须提供彩页或官方文件证明）2.2 进样范围：0.1—100uL2.3 进样次数：每个样品1—99次进样2.4 进样精度：≦0.25%RSD2.5 进样范围：0.1—100µL2.6 进样线性度：>0.999进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗3.荧光检测器3.1 灯：150W 氙灯，连续弧光，3.2 灵敏度：水的拉曼光谱≥10003.3 激发波长：200～890nm3.4 发射波长：210～900nm3.5 波长重现性：±0.25nm3.6 波长准确度：±3nm3.7 流通池：< 13ul3.8 采样频率：80Hz3.9 流通池耐压：145psi3.10 需提供至少5次进样保留时间和峰面积重现性色谱图。
高效液相色谱习题及答案 (1)
高效液相色谱法习题一、思考题1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。
2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么?4．液相色谱有几种类型? 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么?10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？16．以液相色谱进行制备有什么优点？17．在毛细管中实现电泳分离有什么优点？18．试述CZE的基本原理19．试述CGE的基本原理20．试述MECC的基本原理二、选择题1．液相色谱适宜的分析对象是（）。
A 低沸点小分子有机化合物B 高沸点大分子有机化合物C 所有有机化合物D 所有化合物2．HPLC与GC的比较，可忽略纵向扩散项，这主要是因为（）。
A 柱前压力高B 流速比GC的快C 流动相钻度较小D 柱温低3．组分在固定相中的质量为MA(g)，在流动相中的质量为MB（g），而该组分在固定相中的浓度为CA（g·mL－1），在流动相中浓度为CB（g·mL－1），则此组分的分配系数是( )。
1 waters高效液相色谱仪操作标准
【目的】：制定高效液相色谱仪的操作标准，确保操作人员正确操作。
【范围】：本标准适用于高效液相色谱法进行的检测。
【责任】：高效液相色谱仪的操作人员。
【内容】：1 组成: 高压输液泵、柱箱、检测器、系统控制器、数据工作站及打印机。
2 使用要求：2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室高效液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。
2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
2.3 仪器的一般要求及系统适用性试验见“高效液相色谱法检验操作标准”项下规定。
2.4 若需要梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
2.5 使用前详细参阅各操作说明书。
3 操作方法：3.1 基本操作说明3.1.1 将溶剂输半空塑料管置溶剂瓶内液面下，打开电源开关，机器开始作自我检查，注意是否有任何故障讯息出现，屏幕出现在设定“FLOW”的界面上。
3.1.2 以反时钟方向转松“溶剂抽取阀门”，以10ml针筒插入阀门洞口，抽取约20ml，然后在阀门下方放置一小烧杯，准备接废液。
3.1.3 在“FLOW”设定界面上，按一下“EDTT/ENTER”键，数字光标开始闪烁，连续按压“▲▼”键设定流速至8.0ml/min，再按一下“RUN/STOP”键，启动PUMP流速来挤压排除气泡。
3.1.4 约等待30秒钟后，再按一下“RUN/STOP”键，停止PUMP流速，然后再将“溶剂文件编号：SOP-QC-1001-03 第 2 页共 5 页抽取阀门”以顺时针方向转紧。
3.1.5 按上色谱柱，调整FLOW设定，逐步递增流速至所需条件，平衡稳定系统。
3.2准备工作：3.2.1 流动相的配制：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法项下对溶剂的要求进行检查，应符合要求。
水应为新鲜配制的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水；凡规定PH值的流动相应使用精密PH计进行调节。
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种无机化合物，常用于工业制造和农业生产中，然而高浓度的三聚氰胺会对人体造成严重危害，特别是对婴儿和幼儿的影响更为严重。
由于近年来液态奶中三聚氰胺事件的频繁发生，因此对液态奶中三聚氰胺含量的检测显得尤为重要。
固相萃取一高效液相色谱法是目前常用的一种高效、准确的检测方法。
本文将介绍使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的方法和结果。
二、实验材料和仪器1. 实验材料：液态奶样品、甲醇、乙腈、乙酸、二氯甲烷、硅胶2. 仪器：高效液相色谱仪、固相萃取柱、离心机、显微天平、pH计、紫外可见分光光度计等三、实验方法1. 样品处理：首先将液态奶样品样瓶放在冰箱中冷藏，取出一定量的样品后使用显微天平称取出适量样品，并将其加入样品离心管内。
然后加入适量的甲醇，进行振荡混合，最后使用离心机离心沉淀，得到混合物的过滤液。
2. 固相萃取：将得到的过滤液加入到固相萃取柱中，使用甲醇等洗脱混合物，得到固相萃取柱的萃取液。
3. 色谱分析：将获取到的固相萃取液置于高效液相色谱仪中进行色谱分析，根据三聚氰胺的特征峰进行定性和定量分析。
四、实验结果经过实验验证，使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的结果显示，样品中三聚氰胺的含量为xmg/kg，达到了食品卫生安全标准。
五、实验结论通过该实验结果可以得出结论：固相萃取一高效液相色谱法是一种准确可靠的测定液态奶中三聚氰胺含量的方法。
该方法操作简便，结果准确，可以满足食品安全检测的需求。
六、实验改进尽管该方法已经得到了实验结果的验证，但在实际操作中还是存在一些可以改进的地方。
例如固相萃取柱的选择、色谱分析条件的优化等方面可以进行进一步的改进，以提高该方法的灵敏度和稳定性。
高效液相色谱考题（一）
高效液相色谱考题（一）第一章高效液相色谱法练习一．判断对错1）液液色谱流动相与被分离物质相互作用，流动相极性的微小变化，都会使组分的保留值出现较大的改变。
（）2）正相分配色谱的流动相极性大于固定相的极性。
（）3）反相分配色谱适合于非极性化合物的分离。
（）4）液相色谱固定相通常粒度为5-10微米。
（）5）示差折光检测器是属于通用型检测器，适于梯度洗脱。
（）6）在液相色谱中为避免固定相的流失，流动相与固定相的极性差别越大越好。
（）7）液相色谱的流动相又称为淋洗液，改变淋洗液的组成、极性可显著改变组分分离效果。
8）在液相色谱中，流动相的流速变化对柱效影响不大。
（）9）色谱归一化法只能适用于检测器对所有组分均有响应的情况。
（）10）检测器性能好坏将对组分分离产生直接影响。
（）二．填空题1）高效液相色谱中的技术类似于气相色谱中的程序升温，不过前者连续改变的是流动相的，而不是温度。
2）在液液分配色谱中，对于亲水固定液采用流动相，即流动相的极性固定相的极性称为正相分配色谱。
3）以ODS键合固定相，甲醇-- 为流动相时，该色谱条件为色谱。
4）在液相色谱中，为改善分离度并调整出峰时间，可通过改变流动相和______的方法达到。
5）在正相色谱中，极性组分先出峰，极性组分后出峰。
三、选择题1）液相色谱适宜的分析对象是（）A 低沸点小分子有机化合物B 高沸点大分子有机化合物C 所以有机化合物D 所有化合物2）液相色谱中，为了改善分离的选择性，下列措施（）是有效的。
A 改变流动相的种类B 改变固定相的类型C 增加流速D 改变填料的粒度3）在液相色谱中，梯度洗脱适用于分离（）A 异构体B 沸点相近，官能团相同的化合物C 沸点相差大的试样D 极性变化范围宽的试样4）用ODS柱分析一有机弱酸混合物样品，以某一比例甲醇—水为流动相时，样品的容量因子较小，若想使容量因子适当增加，较好的方法是（）A 增加流动相中甲醇的比例B 增加流动相中水的比例C 流动相中加入少量HAcD 流动相中加入少量的氨水5）如果样品比较复杂，相邻两峰间距离太近或操作条件不易控制稳定，要准确测定保留值是有一定的困难时，可选择一下方法（）定性。
高效液相色谱柱
高效液相色谱柱高效液相色谱柱是一种在分析化学领域中广泛使用的技术。
它的原理是通过溶液在色谱柱中的流动过程中，对溶质进行分离和纯化。
高效液相色谱柱的优点是分析速度快、分离效果好、操作简便等。
本文将介绍高效液相色谱柱的原理、种类、应用以及未来的发展趋势等内容。
高效液相色谱柱的原理主要包括固定相和移动相两个基本要素。
固定相负责分离溶质，常用的固定相有疏水相、离子相、亲合相等。
移动相则是将溶质带动在柱子中流动的溶剂，通常是有机溶剂和水的混合物。
这样，在溶液在色谱柱中流动过程中，不同溶质会在固定相的作用下发生分离，从而实现对混合物的分析和纯化。
高效液相色谱柱根据固定相的不同可以分为几种不同的类型。
例如，疏水相色谱柱广泛应用于有机物的分离和分析，它的固定相表面通常具有疏水性，可以对有机物进行选择性的吸附和分离。
离子相色谱柱则适用于进行离子化合物的分离和分析，例如酸和碱等。
亲合相色谱柱主要是基于生物大分子与其他化合物之间的生物亲和性进行分析。
高效液相色谱柱在实际应用中有着广泛的用途。
在生命科学研究领域，高效液相色谱柱可以用于对蛋白质、核酸等生物大分子的分离和纯化。
在药物分析领域，高效液相色谱柱经常被用于药物的纯化和质量控制。
在环境监测方面，高效液相色谱柱可以用于对环境污染物的检测和分析。
此外，高效液相色谱柱还被广泛应用于食品安全、农药残留检测、天然产物分析等领域。
随着科学技术的不断进步，高效液相色谱柱也在不断发展和完善。
目前，研究人员正在努力提高高效液相色谱柱的分离效率和分离速度，使其更加适用于复杂物质的分离和分析。
同时，也在研发新的固定相和移动相，以满足不同类型化合物的分析需求。
此外，一些新的检测技术和装置也被引入到高效液相色谱柱中，提高对溶质的灵敏度和准确性。
总之，高效液相色谱柱是一种重要的分析技术，具有广泛的应用前景和发展空间。
它在生命科学、药物分析、环境监测等领域都有着重要的作用。
随着科学技术的不断进步，相信高效液相色谱柱在未来会发展出更多的新技术和新应用，为我们的科研和生产提供更多的支持和帮助。
实验一-苯酚的高效液相色谱法
实验一高效液相色谱法-紫外法测定水中的苯酚含量一、实验目的1、熟悉高效液相色谱仪的结构2、掌握苯酚的高效液相色谱-紫外测定法3、熟练掌握高效液相色谱仪的操作二、实验原理苯酚是最简单的酚，为无色固体，有特殊气味，显酸性。
苯酚是有机化工工业的基本原料，可通过多种途径对环境水体造成污染，对人类、鱼类以及农作物带来严重危害。
根据国家环保部门有关规定，工作场所苯酚的最高允许质量浓度为5 ×10 - 6 μg/ L，饮用水中为2μg/ L，地面水中为0.1 mg/ L。
苯酚的测量方法有多种，如溴化容量法、比色法、高效液相色谱法等。
但前两种方法分析速度较慢、精度较低，高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新技术，具有分析速度快、检测灵敏度高、操作简便、样品用量少等特点。
三、仪器和试剂1、设备及试剂安捷伦高效液相色谱仪1100，紫外检测器，C18色谱柱。
苯酚(分析纯) ，甲醇(色谱纯)，二次蒸馏水。
2、操作条件色谱柱为C18柱；流动相为甲醇/ 二次蒸馏水= 80∶20 (体积比)；检测波长为270nm；流速为1.0 ml/ min；进样量为20μL。
四、实验步骤1、标准曲线的制备称取纯苯酚600 mg 于100.0 ml 容量瓶中，用适量甲醇溶解，用甲醇稀释至刻度。
分别吸取该溶液(单位:ml) 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 于50 ml 的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
得到标准系列溶液。
分别采用高效液相色谱-紫外法测定标准溶液，记录色谱峰面积，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
2、样品分析将水样经过滤(0.45 um 滤膜) 处理后，测定其峰面积值，根据标准曲线进行定量。
五、实验数据1 标准曲线的绘制2 样品分析数据六、数据处理仪器和试剂1、仪器：⑴岛津（SHIMADZU）LC-20A液相色谱仪：①流动相：乙腈、MQ 水（由铝箔纸包裹，防止其中产生藻类，堵塞进口）②高压输液泵：并联式微体积柱塞往复泵（Prominence LIQUID CHROMATOGRAPH）型号：LC-20AD 厂家：UFLC SHIMADZU ③色谱柱：固定相填充物：十八碳（C18）型号：Intertsil ODS-SP 参数：填充物粒径：5 μm 内径××250 mm ④检测器：二极管阵列检测器（PDA）型号：SPD-M20A 电压：230V 厂家：SHIMADZU ⑤脱气装置：型号：DQO-20A5 ⑥进样装置：高压六通进样阀两个状态： Load：样品进入六通阀，未入色谱柱 Inject：位于六通阀的样品进入色谱柱种类：SIL-10A 、SIL-10Ai 、SIL-10ADVP⑦淋洗液（洗针、洗阀）：甲醇⑵移液管 2 mL、5 mL各一支⑶具塞离心管10 mL一次性离心管一支 2. 试剂：甲醇（色谱纯）；苯酚标准使用溶液（10 mg/L）待测水样四、实验步骤 1 标准系列配制 mL于10 mL的具塞离心管中，用甲醇定容至5 mL，混匀。
图1高效液相色谱仪的系统流程图原理
液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视, 如分析氨基甲酸酯 农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快,如在环 境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染 分析得到新的发展。
高效液相色谱仪的应用
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的 限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离 热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范 围的物质。
与试样预处理技术相配合,HPLC 所达到的高分辨率和高灵 敏度, 使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够 分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展, 有可能在充分 保持生化物质活性的条件下完成其分离。
（2）高压输液泵容易出现的问题是：①压力升不上去：检查一下桌面上是否 有漏下的液滴，如果有拧紧漏液处即可。②压力过高：看一下抽取流动相的 塑料管里是否有气泡，如果有，则按一下Stop，这时候千万别抽气泡，等压 力降下来，最好到0Psi，这时候抽出气泡。如果在过高的压力下抽气泡，后 果会非常严重，流通池会被鼓破，无法分析样品，并且会给你带来很多困 惑，当然如果有经验的话会及时发现，因为流通池破了后会流出蓝色的墨水 样的液体。
高速——流速为0.1～10.0 mL/min。 高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达 100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品 少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在 5 min内即可完成。
1超高效液相色谱四极杆超高分辨质谱联用仪
1、超高效液相色谱-四极杆超高分辨质谱联用仪1.设备用途食品安全检测和未知添加物的定性定量检测2. 工作条件2.1．电源：230V±10%，AC(交流)，50/60Hz2.2．环境温度：18-25℃；2.3. 相对湿度：40-60%2.4. 仪器可连续正常运行。
2.5．工作条件及安全性要求符合中国及国际有关标准或规定。
3. 质谱部分技术参数*3.1 配备独立的可加热电喷雾离子源ESI，大气压化学电离源APCI，要求离子源具有真空锁定装置，ESI 与APCI 切换快速方便。
3.1.1 可加热电喷雾离子源ESI 流速：1-2000ul/min3.1.2 独立的大气压化学电离源APCI 流速50-2000ul/min*3.2 质量分析器：采用四极杆与静电场轨道阱串联组合质谱。
若采用四极杆-飞行时间组合质谱,需采用各厂家最高端型号(提供官方网站证明)。
3.2.1 质量范围：50-6000 m/z。
3.2.2 四极杆：要求金属钼双曲面四极杆，其选择性达到小于0.4Da。
*3.2.3 分辨率：要求所提供设备的分辨率不小于140,000（在m/z200），可扩展到200,000。
若达不到140000FWHM（在m/z200）需加配离子淌度和纳升液相色谱各一套(需提供技术彩页证明)3.2.4 分辨率与灵敏度:在提高仪器分辨率时，设备的灵敏度保持不降低；也即100fg 利血平标准品进样，ESI+模式下，分辨率分别为35000 和70000 时，其它仪器参数一致的前提下，其609 信号的响应值(峰面积)相差不超过10%。
（该项指标将作为验收指标）。
3.2.5 质量准确度（MS 和MS/MS）：内标：小于1 ppm，外标：小于3 ppm*3.2.6 质量轴稳定度：设备一次校正后不再校正且不使用内标情况下，连续48 个小时内重复进样100fg 利血平，609 质量精确度≤3ppm；（此项指标将作为设备验收指标）。
高效液相色谱实验技术问题解答
高效液相色谱实验技术问题解答高效液相色谱以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测。
1、高效液相色谱是如何实现高效、快速、灵敏的? 解：气相色谱理论和技术上的成就为液相色谱的发展创造条件，从它的高效、高速和高灵敏渡得到启发，采用5一10四微粒出定相以提高柱效，采用高压泵加快液体流动相的流速;设计高灵敏度、死体积小的紫外、荧光等检测器，提高检测灵敏度，克服经典液相色谱曲缺点，从而达到高效、快速、灵敏。
2、与气相色谱法相比高效液相色谱有哪些优点和不足? 解：气相色谱的分析对象是在校温下具有一定的挥发性、对热稳定购物质。
因此它只限于分析气体和沸点低的化合物或挥发性的衍生物。
而高效液相色谱由于以液体作为流动相，只要被分析的物质在选用的流动相中有一定的按解度，便可以分析，所以适用性广，不受样品挥发性和热稳定性的限制，特别适合于那些沸点高、极性强、热稳定性差的化合物，例如，生化物质和药物、离子型化合物、热稳定性差的天然产物等。
在目前已知的有机化台物中，只有20%样品可不经化学处理而能满意地用气相色谱分离，80%的有机化合物要用高效液相色谱分析。
气相色谱中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用、而高效液相色谱的流动相不仅起运载作用，而且流动相对组分有一定亲合力，可以通过改变流动相种类和组成提高分离的选择性，另外可作流动相的化合物多，选择余地广。
与气相色谱相比，高效液相色谱的另一个优点是样品的回收比较容易，只要开口容器放在柱子末端，就可以很容易地将所分离的各组分收集。
回收是定量的，可以用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。
高效液相色谱不足的是，日前检测器的灵敏度不及气相色谱。
必须特别注意“柱外效应”对柱效率及色谱分离的影响。
3、试比较气相色谱与液相色谱的H-u曲线，分析产生不同的原因。
解：从图可看出，气相色谱和液相色谱得到的H-u曲线，形状迥然不同，流动相的流速对柱效的影响也不一样，在气相色谱的H-u曲线上，塔板高度H随u变化呈双曲线.曲线有一最低点，这时柱效最高，板高最小，流速最佳。
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色谱柱的保养维护
4．4 流动相pH值过大或过小使固定相结
构破坏或溶解；解决方法如下：
4．4．1 当断定是色谱柱头中过滤筛板污染时，可将柱
头螺丝卸下，取出过滤筛板，并将其放置在30 %左右 的稀硝酸内，用超声波超声清洗约10分钟后，再用超 纯水超声约1O分钟，重新装入色谱柱内；
色谱柱的保养维护
色谱柱的保养维护
3．3 离子交换柱的再生 长时间在高pH值和高离子强度缓冲溶液中
使用，将导致色谱柱离子交换能力降低。用稀 酸缓冲溶液冲洗，可使阳离子柱再生；反之， 用稀碱缓冲溶液冲洗，可使阴离子柱再生。 以上色谱柱的再生方法并不是绝对的标准 方法，使用者可根据自己的实际经验和目的， 选择合适的并能溶解柱内污染物的溶剂作流动 相，按正方向或反方向的冲洗。但是需要指出 是，无论采用什么方法再生色谱柱，均不可能 完全恢复柱效或其他参数至新柱水平。
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
2．2系统管路和连接 2．2．1管路 根据承受压力的大小和流动相、样品性质
的差异，液相色谱仪需采用不同材质的管路， 常有不锈钢管和聚四氟已烯管。管路材质选择 不当将导致谱带展宽，甚至引起样品变性，直 接影响到分析结果。不锈钢管耐腐蚀，一般用 于有高压的部分，即连接从泵出口到检测器人 口段处，使用前应先经甲醇一水一硝酸溶液处 理；塑料聚和物管柔韧性好，化学惰性强，多 用于从储液器到泵、检测器出口和泄液阀出口， 使用前应先用甲醇冲洗即可。另外，流路管线 应保持通畅，不要存在硬性弯曲部分。
色谱柱的保养维护
1．4 样品
样品也要尽可能的清洁，同样可选用样
品过滤器或样品预处理柱(SPE柱)对样品 进行预处理；若样品不便处理，要使用 保护柱。在用正相色谱法分析样品时， 如无特殊要求，所有的溶剂和样品应严 格脱水。
色谱柱的保养维护
1．5 pH值
以常规硅胶为基质的键合相填料高效液
色谱柱的保养维护
3．2 正相柱再生 顺次以正己烷异丙醇二氯甲烷甲醇作
流动相冲洗色谱柱每步注意平衡溶剂的 顺序不要颠倒每种流动相流经色谱柱的 量为2O一30倍柱体积(因异丙醇的粘度较 大，冲洗过程中请随时注意调整冲洗的 流速)，用甲醇冲洗完后，再以相反的顺 序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必需严 格脱水。
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
2．1．5流动相的化学特性 流动相一般不要使用强酸或强碱溶液。因为pH
值过高或过低会损坏输液泵中的密封圈和柱塞 杆，除非流路需要钝化(用2mol／L的硝酸溶液)， 也应用后立即用纯水冲净。在使用含水较高的 流动相时，应注意不同色谱柱使用方面的限制， 因为传统的烷基键合固定相在有机溶剂含量低 于5％ 的流动相中容易发生碳链断裂。一些新 型键合固定相可以在纯水为流动相的条件下使 用。
色谱柱的保养维护
综上所述，高效液相色谱柱的使用涉及
到了大量机械化学知识和应用经验。因 此，使用者可以根据自己实际情况加以 总结，不断提高色谱仪的使用寿命。
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
液相色谱仪的流路系统主要是由输 液泵和连接管道组成。输液泵的主要作 用是把流动相和样品带人色谱柱中，使 样品在色谱柱固定相和流动相之间作用 并实现分离。因此，正确配制流动相， 维护好泵体和连接管路，对保证输液泵 的流量精度和保留时间(tR)的重复性十分 重要。
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
2．1流动相的配制和准备
2．1．1溶剂的纯化
在高效液相色谱分析中，正相色谱以已
烷作为流动相的主体，二氯甲烷、氯仿、 乙醚作为改性剂；反相色谱以水作为主 体，以甲醇、乙腈、四氢呋喃作为改性 剂。HPLC分析均应使用HPLC级纯度的 溶剂，AR级的溶剂可能会由于杂质的存 在而出现鬼峰。
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
2．1．3过滤
无论是有机水溶液还是缓冲盐溶液的流动 相，配好后都要通过0．45 m滤膜过滤后再上 机使用，这样能够有效防止由于微粒的存在使 流路管道堵塞。过滤后应把溶剂放在密闭容器 中，以防止被重新污染。过滤后的溶液既可用 于色谱分析，也可用于清洗诸如泵头、柱塞杆、 单向阀和密封圈等仪器部件，保持输液泵的性 能良好。
HPLC维护与检修
高效气相色谱分析仪(以下简称 HPGC)和高效液相色谱分析仪(以下简转 HPLC)是两种常用的、精密度很高的分 析仪器。 对它的保养程度如何，直接关系到 分析的精确度和仪器的使用寿命。下面 谈谈对HPGC、HPLC 维护工作的认识和 体会
HPLC系统组成
2.常见问题的解决方法
相色谱柱通常的pH 值适用范围是2．0— 10．0。当必须要在pH 值适用范围的边 界(特别是在8．0≤pH≤ 10．0时)条件下使 用高效液相色谱柱时，每次使用结束后 立即用适合于色谱柱储存并与所使用的 流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉 原来所使用的流动相。
色谱柱的保养维护
2 色谱柱的保存
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
2．1．4脱气
所有的流动相在进人HPLC系统之前都应 该首先脱气(即使仪器上有在线脱气)，因为没 有脱气的流动相进人到高压系统后，存在的气 泡会导致系统的流速和压力不稳定，出现鬼峰 等问题。从溶液中排除气泡的方法主要有：真 空脱气、氦气脱气和超声波脱气，实际工作中 真空抽滤的方法很有效，它既能脱气又能过滤， 但必须在上机前完成。在线连续脱气可以防止 气体随温度的变化重新溶解在溶剂中。
色谱柱的保养维护
4．4．3 当断定是盐结晶时，用水冲洗色谱柱，使柱 内盐全部溶解并被冲洗出色谱柱，再换用含高浓度 甲醇或其他有机溶剂的流动相； 4．4．4 如果是因使用的流动相pH 值控制不当，通 常很难将色谱柱恢复。有一点必须注意一旦色谱柱 头被打开，即便是经过很仔细地修复都很难恢复到 原有新柱水平。
4．4．2 当断定是色谱柱头内的填料被污染时，可将 柱头螺丝卸下用专用小匙挖出柱内前段被污染的填 料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后重新安装 上柱头螺丝，或以能溶解污染物的流动相，按色谱柱 使用的相反方向，冲洗色谱柱(流动相的冲洗量为2O 至30倍色谱柱体积或视具体情况而定。另外，此时 最好不要连接检测器)，将污染物冲出色谱柱，再按 色谱柱标明的箭头方向使用(色谱柱上箭头方向说 明色谱评价是按此方向价。因此使用时最好按此方 向)；
色谱柱的保养维护
4 色谱柱在使用过程中易出现的问题和解
决方法
高效液相色谱柱在使用过程中最容易碰到的问题就 是柱压升高。如果柱压是在长时问使用过程中缓慢地 增加，通常这属于正常现象。但柱压在使用过程中突 然升高(系统管路堵塞除外)，可能的原因有如下几点： 4．1 色谱柱头中过滤筛板(图1)中的2#部件污染； 4．2 色谱柱头内的填料被污染； 4．3 色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他 有机溶剂，形成结晶析出；
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
使用会延长色谱柱的寿命。
1．1 色谱柱使用前注意事项
色谱柱的储存液无特殊说明均为评价报告所示
的流动相。在使用前一定要注意色谱柱的储存 液与要分析样品的流动相是否互溶。如胺基 (NH2)氰基(CN)柱均为正相条件下评价，所以 如果使用条件为反相条件时，请用一中介流动 相(如异丙醇)。
色谱柱的保养维护
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
3泵的维护
① 高压泵经过较长时间使用后，往往会发生堵
塞流路的现象，引起堵塞的原因为：细菌繁殖， 盐析结晶，流动相中不溶物，灰尘微粒等。为 了防止堵塞现象应注意流动相的正确使用方法， 即避免溶剂之间互不相溶以及避免水或缓冲溶 液在泵内长时间集留。 选择去除堵塞的方法， 应根据其原因而定，可以用二甲基亚砜或二甲 基替甲酰胺去除有机物的污染，用弱酸性水溶 液去除盐折结晶，用上述方法无效时，可卸下 高压泵内的过滤器，用6%硝酸进行处理，并对 泵室和单向阀进行清洗。
2．1 在别无选择的情况下，流动相的使
用条件又非常剧烈时(如pH>10．0或 pH<2．O)，凡是以硅胶为基质的色谱柱， 关机前最好用适当的溶剂(如超纯 水)将流动相顶替出柱，然后方可短时间 或过夜保存
色谱柱的保养维护
2．2 如色谱柱要长时间保存，色谱柱必须存
于合适的溶剂状态下。对于反相柱可以储存于 纯甲醇或乙腈中，正相柱可以存于严格脱水后 的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水(含防 腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中，并将购买新色谱柱 时附送的防尘防干裂塑料堵头堵。对使用过含 盐浓度较高的流动相的色谱柱，在储存之前， 必须用超纯水顶替掉原来的流动相后，再储存 于合适的溶剂状态下。储存的温度最好是室温。
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
正相色谱分析中使用的己烷、二氯 甲烷、氯仿、乙醚中经常含有微量的水 分，这会改变液固色谱柱的分离性能， 使用前应用球形分子筛柱脱去水分。反 相色谱分析中使用的甲醇、乙腈、四氢 呋喃，不必脱除微量水，但甲醇、乙腈 等使用前最好经硅胶柱净化，去除具有 紫外吸收的杂质
液相色谱仪流路泵系统的管理与维护
先置换掉柱内的储存液，然后再应用反
相条件；对于C18固定相采用的是甲醇一 水为评价流动相，若要使用含盐浓度较 高的流动相，使用前请用超纯水或甲醇 含量相对较低的甲醇一水顶替掉原来的 评价流动相，否则会对色谱柱造成极大 的伤害，将会明显地减少色谱柱使用寿 命。
色谱柱的保养维护
1．2 色谱柱的使用方向 高效液相色谱柱 标签上的箭头所示方向是评价时流动相流动的 方向，使用过程相流动的方向也最好按此方向。 1．3 流动相 流动相中所用的各种有机溶剂 要尽可能地使用色谱纯，或至少是分析纯试剂； 配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双 蒸水。如果将所配得流动相再经过0．45或 0．22um 的滤膜过滤一次则更好，这一点对含 盐的流动相尤为重要。另外装流动相的容器和 色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗 或更换。总之，必须保证所使用的流动相 和色谱系统是足够的清洁。