紫外可见分光光度法实验

1.实验目的

1.1了解紫外可见分光光度计的食用方法及基本结构

1.2掌握用紫外可见分光光光度法进行定性分析和定量分析的方法

2.实验原理

2.1定性分析

不同物质的分子结构不同，因此各种物质各有其特征的紫外可见光吸收光谱。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到的曲线称为吸收光谱曲线，他能清楚的描述该物质对不同波长光的吸收情况。光吸收程度最大处叫做最大吸收波长，用λmax表示。浓度不同时，光吸收曲线的形状相同，最大吸收波长不变，只是相应的吸光度大小不同。说明吸收曲线的形状只与物质的本性有关，而与物质的浓度无关。因此，我们可以利用吸收曲线对物质进行定性分析。

2.2定量分析

根据朗伯-比尔定律：

A=εbc，式中A—吸光度，ε—摩尔吸光系数，b—液层厚度cm，c—浓度，mol/L

当液层厚度b固定时，吸光度正比于浓度，因此可采用标准曲线法对物质进行定量分析。

通常选择最大吸收波长进行定量分析，以提高分析灵敏度和消除干扰影响。

3.仪器及试剂

3.1仪器及配件

UV1800PC型紫外可见分光光度计，1cm石英比色池

3.2试剂

3.2.1虾青素标准溶液

3.2.1.1标准储备液（浓度为1.0mg/mL）

称取10mg虾青素标准品溶于二甲基亚砜（DMSO），定容至10mL，摇匀，避光-20℃保存。

3.2.1.2标准系列溶液的配制

用移液管分别量取0.5，1.0，2.0，3.0mL标准储备液，分别用50mL容量瓶定容，稀释溶剂为无水乙醇，定容之后摇匀，避光放置。

3.2.2未知浓度的虾青素样品溶液。

4.实验内容

4.1不同浓度的虾青素溶液吸收曲线的比较。

4.2标准曲线的制作。

4.3样品溶液的测定。

5.仪器操作步骤

5.1开机，自检，预热20分钟

5.2放置样品

将配好的样品转入比色池，比色池要用蒸馏水和待测溶液润洗，溶液装至比色池的

左右。装好后用纸巾吸干比色池表面的液体，将比色池放入样品槽中，注意比色池透光面要对住样品槽有孔的一边。

5.3全波长扫描

将不同浓度的标准品依次转入比色池中进行全波长扫描，比较其吸收曲线和最大吸收峰对应的波长。

5.4制作标准曲线

取不同浓度的标准品最大吸收波长处的吸光值绘制标曲。

5.5样品浓度的测定

6.注意事项

6.1拿比色池要拿毛玻璃面，放置比色池要使毛玻璃面向下，以免影响透光面的透光性。

6.2比色皿按材质分为几种，使用时需根据样品的性质选择不同材质的，石英比色池价格昂贵，要小心使用。

7.实验报告内容：

1）目的

2）原理

3）简单操作步骤

4）实验结果（全波长扫描图、标准曲线、样品浓度的计算，定性定量依据）

5）注意事项（就自己的学习和体会写几点）