结核分枝杆菌耐药分子机制及耐药基因检测方法研究进展
结核分枝杆菌耐药机制研究进展
中国实用乡村医生杂志,2020,27(12)•39•I综述结核分枝杆菌耐药机制研究进展王秀媛作者单位：301800天津，天津市宝t氐区中医医院检验科【摘要】结核病是一种传染性疾病，其病原菌为结核分枝杆菌。
随着抗生素的广泛应用和不合理使用、新药研发速度缓慢等因素，导致耐药结核菌株出现，加大了结核病的防控难度。
为深入了解结核杆菌耐药机制,并作出相应的药物调整，以遏制耐药结核病的蔓延。
文章对结核分枝杆菌的可能耐药机制进行综述,以期为结核病的防治提供新思路。
【关键词】结核病;结核分枝杆菌;耐药机制；固有性耐药;获得性耐药【中图分类号】R52【文献标识码】A【文章编号】1672-7185(2020)12-0039-03doi:10.3969/j.issn.l672-7185.2020.12.015结核病是一种传染性疾病，其病原菌为结核分枝杆菌。
临床上常应用抗生素来治疗该疾病。
近年来,抗生素的广泛应用和不合理使用,导致耐药结核菌株的出现。
耐药结核菌株的产生和播散，已成为21世纪结核病控制难题之一。
因此，需深入了解结核杆菌耐药机制，并作出相应的药物调整，以遏制耐药结核病的蔓延皿。
结核分枝杆菌和其他细菌一样具有复杂的耐药机制，可分为固有性耐药和获得性耐药。
本文就结核分枝杆菌的耐药机制综述如下。
1固有性耐药机制1.1结核分枝杆菌细胞壁渗透性下降分枝菌酸、阿拉伯半乳聚糖和细胞壁黏肽三种成分共同组成结核分枝杆菌的细胞壁。
细胞壁内类脂质含量非常高，使亲水性抗生素进入细胞壁间隙较慢，这一物理屏障成为结核分枝杆菌第一道抵制药物的防线。
细胞壁渗透性下降，药物不容易通过高疏水性细胞壁间隙,这样就降低了药物的有效性,成为结核分枝杆菌耐药机制中最常见的一种囱。
1.2药物外排泵外排泵属于细胞重要功能性膜蛋白，是代谢链组成的重要部分，当有药物进入细胞时，外排泵充分发挥外排作用，将药物从胞内排除。
研究发现，外排泵在分枝杆菌耐药机制中发挥重要作用:当药物进入胞内时，外排泵会将胞内药物泵出胞外,这样胞内药物浓度显著降低，可能不能达到发挥作用的有效浓度,无法对分枝杆菌的生长等生理过程进行抑制，从而导致细菌耐药性的产生⑷。
结核分枝杆菌耐药机制研究进展
菌丧 失毒 力 ）磷 脂 （ 、 能促使 单 核细胞 增生 ， 并使 炎症
灶 中 的 巨 噬 细 胞 转 变 为 类 上 皮 细 胞 ， 而 形 成 结 核 从 结 节 ） 蜡 质 Ｄ（ 种 肽 糖 脂 和 分 枝 菌 酸 的 复 合 物 ， 、 一 可
化 物 酶 的 基 因 是 ｋ ｔ 因 此 ｋ ｔ 基 因 的 完 全 缺 失 ａＧ， ａＧ
右 。类脂 质是 一 类 复 杂 的 复 合 物 ， 赋 予 ＭＴＢ表 它
面疏 水性 ， 有分 枝菌 酸 （ ＭＴ 含 是 Ｂ和棒 状 杆 菌 属独
有 的结构 ， 要 由 ２ ～ ２ 主 ２ ４碳 短 链 和 ４ ～ ６ ０ ４长 链 分
壁 和其 他细 菌有 着 很 大 的差 别 ， 中类 脂 质 含 量超 其 过 ６ ， 革 兰 阴 性 细 菌 类 脂 质 含 量 仅 占 ２ 左 ０ 而 Ｏ
自由基 攻击 ＭＴＢ的 多个 靶 点 ， 主要 为 细 胞 壁 中的 分枝 菌 酸 ， 可能 包括 Ｄ 也 ＮＡ、 脂类 等 ， 抑制 了分 枝 故 菌 酸的合 成 ， 坏 细菌 的细胞 壁 ， 其 因丧失 耐酸性 破 使 和疏 水 性 而 死 亡 。在 ＭＴＢ中 编 码 过 氧 化 氢一 氧 过
ｏｘ ｙＲ 、 ｓ 、 ｈ、 ｍ ｂ ｋａ Ａ ｎｄ ｅ Ｃ ｅ ｂＡ 、 ｍ ｂ ａ ｒ ｍ ｅ Ｂ、 ｌＡ ｇａ Ａ ｄ
１ 细 胞 壁 结 构 与 组 成 变 化 ， 细 胞 壁 通 透 性 使
改 变 Ｅ－］ ２４
１ １ 分 枝 杆 菌 细 胞 壁 的 组 成 分 枝 杆 菌 细 胞 壁 上 ． 有 选 择 性 阳 离 子 的 孑 蛋 白 ， 有 效 控 制 或 阻 滞 亲 水 Ｌ 能
结核分枝杆菌耐药分子机制及耐药基因检测方法研究进展
３８ ３
・
专 家 论述 ・
结 核分 枝杆 菌 耐药 分 子机 制 及耐 药基 因检 测方 法研 究 进展
解放军 ３９医院全军结核病中心研究室（ ０ 北京
关键词 结核分 枝杆菌 ； 耐药 基 因 ； 检测 ； 述 综
１ ０１ ０ ９） ０
辟 了一 条新 的途 径 。
变 导致 过氧化 氢酶 一过 中一 究 室 副 主 任技 师 ， 国 病 研 中
防痨协 套 基 础 （ 细 菌） 业委 台 专 氧 化物 酶活性 降低或 丧 失 ， 止 Ｉ Ｈ转 换 成 活 员会委 员 从 事结 核病 细茵 学、 阻 Ｎ
１ 结核分 棱杆菌 的耐药 分子 机制
ｉ Ａ基 因 ９ ｎ ｈ ４位 密 码 子 ； 队 级 、 家卫 生 部 和 北 京 项 军 国
编码 的氨基酸改变 ， Ｒ Ａ聚合酶分子原有 Ｒ Ｐ结合 使 Ｎ Ｆ 点的构象发生改 变， 失去结合 Ｒ Ｐ的能力 ， Ｆ 而导致耐
ＲＦＰ。
突变使 Ｎ Ｄ Ａ Ｈ与之结合 学挂 术 进 步 二 等 奖 ５面 、 市科 三 降低 ， 抑制 了 ＩＨ活化 Ｎ 等奖 ６面 。参加 专（ ） 编写 ４ 译 著
用。结 核 分 枝 杆 菌 耐
ＩＨ 与过 氧 化氢 酶 一过 Ｎ
氧 化 物 酶 编 码 基 因 Ｋｔ ａ Ｇ和／ 或烯 酰 基 还 原
酶编 码 基 因 ｉ Ａ 突 变 ｎ ｈ
有 关 。 Ｉ ｔ 基 因 的 突 （Ｇ ａ
■
牵 国利 解 放 军 第 ３ ９医 院 垒 军 结 核 ０
的发展 ， 结核分枝杆菌的耐药机制及 耐药 的分子基础 大部分已被阐昵 ， 建立了快速检测结核分枝杆菌耐药 基 因的方法 ， 为结核 分 枝杆 菌快 速 药 物 敏 感性 试验 开
结核分枝杆菌耐药的分子机制及耐药基因检测方法的研究进展
结核分枝杆菌耐药的分子机制及耐药基因检测方法的研究进展孙冰梅;车志宏
【期刊名称】《山西医药杂志》
【年(卷),期】2005(034)004
【摘要】结核分枝杆菌(MTB)简称结核杆菌，于1882年由德国科学家Koch发现并证明是结核病的病原体。
随着抗结核药物的不断发展和卫生状况的改善，结核病的发病率和病死率曾大幅度下降，但20世纪80年代后，结核病在世界范围内又死灰复燃。
结核病疫情呈现全球性明显回升趋势的主要原因之一是耐药菌株的产生和播散，尤其是耐多药菌株的出现。
结核杆菌的高耐药问题已成为新世纪结核病控制的三大难题之一。
【总页数】3页(P301-303)
【作者】孙冰梅;车志宏
【作者单位】青岛大学医学院第二附属医院,266042;青岛大学医学院附属医院【正文语种】中文
【中图分类】R378.911
【相关文献】
1.结核分枝杆菌耐药主要分子机制及检测方法研究进展 [J], 王英全;岳昌武
2.细菌耐药性产生的分子机制与耐药基因的快速检测方法 [J], 崔晓文;张秀英
3.2种结核分枝杆菌耐药基因突变检测方法诊断利福平耐药结核病的评估研究 [J], 薛建昌;梁冰锋;吴海峰;郑浩;孙志平;任哲
4.2种结核分枝杆菌耐药基因突变检测方法诊断利福平耐药结核病的评估研究 [J],
薛建昌;梁冰锋;吴海峰;郑浩;孙志平;任哲
5.结核分枝杆菌耐药分子机制及检测方法的研究进展 [J], 曾涛;朱中元
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结核分枝杆菌异烟肼耐药基因与耐药机制研究进展
地方 。 。因此 ， 为 联 合 化疗 中 常 用 的成 分 ，ＮＨ 作 Ｉ
面临着更 为严 重的耐药 问题 。在 分 子水平 上 ， ＭＴＢ
基 因完 全缺失 ， 不产生该 基 因的 Ｐ Ｒ扩增 带 。用 分 Ｃ
析 Ｐ Ｒ产 物 的单 链 构 象 多 态 性 方 法 （ Ｃ —ｉｇｅ Ｃ Ｐ Ｒ ｓ ｌ ｎ —
ｓ ｒ ｎｄ ｃ ｎｆ ｒ ｔｏｎ ｌ ｔａ ｏ ｏ ｍａ ｉ ａ ｐｏ ｙ ｒ ｓ ， ｌ ｍｏ ｐｈｉｍ ＰＣＲ— ＣＰ） ＳＳ
对Ｉ ＮＨ 形成耐药 的遗 传学机制 十分复 杂 ， 本文 仅就
此方 面的研究 现状作一 综述 。 １ ｋ ｔ 基 因 ａＧ Ｉ ＮＨ 结 构 简 单 ， 以被 动 扩 散 方 式 进 入 增 长 期 细
现 ， 结 核 的 一 线 药 物 异 烟 肼 （ ｏ ｉｚ ，ＮＨ） 果 抗 ｉ ｎａｉ Ｉ ｓ ｄ 如
１２ 基 因部分 突变 ．
在 临床分离 的 Ｉ 耐药 菌株 ＮＨ
中 ，ａＧ基 因完 全 缺失 的发 生率 并 不 高 ， ｋｔ 大部 分 对 Ｉ ＮＨ 耐药 的 ＭＴＢ仍存有 ｋ ｔ 基因 ， ａＧ 只是部分 基 因 发生 突 变 。应 用 Ｐ Ｒ 技 术 对 ３ Ｃ Ｏ株 Ｉ ＮＨ 耐 药 的 ＭＴＢ进 行 分 析 ， 有 ２株 出 现 ｋ ｔ 基 因 完 全 缺 仅 ａＧ
陈 亮 ， 宝福 凯
中图 分 类 号 ： ３ ８４ 文 献标 识 码 ： Ｒ ７ ． Ａ
因耐 药甚 至耐 多药 的结 核分 枝杆 菌 （ ｃｂ ｃ Ｍｙｏ ａ—
研究证 实 ， 高度耐药 的 ＭＴ 在 Ｂ中发 现有 ｋ ｔ ａＧ基 因 完 全 缺 失 ， 时其 编 码 的 过 氧 化 氢一 氧 化 物 酶 阴 同 过 性 。如 果 将 ｋ ｔ 基 因 克 隆 导 入 耐 Ｉ ㈣ ａＧ ＮＨ 的
结核分枝杆菌耐药性检测
二、常用的MTB DST检测方法
（二）探针熔解曲线法
采用多色探针熔解曲线法快速检测MTB对RFP、INH、Sm、EMB和FQs 常见耐药决定区域，简便、快速，闭管检测不会交叉污染或造成实验室 污染，只需1台通用的荧光定量PCR仪，无需繁琐的杂交、显色过程，整 个检测过程只需2～3 h，可较全面地了解耐药基因突变信息，辅助诊断 MDR-TB和pre-XDR-TB（指对FQs或至少1种二线注射类药物耐药）；其 缺点是不报告具体的突变类型。
二、常用的MTB DST检测方法
分子DST方法
该方法是基于MTB对抗结核药物耐药分子机制，采用分子生物学技术检 测MTB的耐药基因型。分子DST已成为DR-TB的确诊方法之一，其建立 在基因扩增基础上，快速（2～48 h）、敏感地从MTB分离株或预处理的 临床标本（包括涂阴、培阴的标本）中检出MTB耐药基因突变；分子 DST只在初始阶段需要有较高的生物安全条件，标本消化处理和DNA提 取后标本的传染风险降低。
绝大多数常用的表型DST需要MTB纯培养物，MTB生长慢的特性决定了 该方法需花费较长时间，而且可能因为生长不良或其他微生物污染而导 致结果的不确定性，但该方法可检测多种抗结核药物的耐药性。
二、常用的MTB DST检测方法
（一）传统的DST方法
1.绝对浓度法（absolute concentration method）：将1 mg/ml菌悬液用生理 盐水倍比稀释至10^-2 mg/ml，吸取0.1 ml菌液分别接种于含高、低浓度药 液培养基和对照培养基上，置37 ℃培养4周，按下列方式报告菌落生长情 况：分枝杆菌培养阴性（－）：斜面无菌落生长；分枝杆菌培养阳性 （+）：菌落生长占斜面面积的1/4；分枝杆菌培养阳性（++）：菌落生 长占斜面面积的1/2；分枝杆菌培养阳性（+++）：菌落生长占斜面面积 的3/4；分枝杆菌培养阳性（++++）：菌落生长布满整个斜面；培养基斜 面上菌落数少于20个时，报告菌落数。
耐药肺结核病防治研究进展
Strait Phavnaceutical Joumai Vol 33 NoO 2021耐药肺结核病防治研究进展乔 进-,张小柏2* (4南通市第三人民医院药学部，江苏南通226006;1南通市第三人民医院呼吸科，江苏南通 229707)摘要：结核病是一种严重危害民众健康的慢性传染病，尤其是耐多药肺结核的传染周期长，治疗难度大，治疗费用高，治愈率低，死亡率高。
耐多药结核病预后较药物敏感性肺结核差，且多影响年轻人，虽然耐多药和广泛耐药肺结核在资源贫乏地区占极小部分，但这些结核菌消耗了结核病规划的不相称比例资源。
因此，及早诊断、预防和治疗耐多药结核病非常重要。
关键词：肺结核；耐药性;综合预防；治疗；流行病学中图分类号:R969.4 文献标识码:B 文章编号：10062723 (2241) -38-3275-34Research P regress of Drug Resista n t Pulmo n ary TuberculosicQIAO Jin 1,ZHANG Xivoyai 2(4 Department of Pharmacy,ae Third People's Hospital or Nantong, Nan tong 226006,China ；；. Department of Respiretory Medicine,the Third People's Hospital or Nantong,Nan-tong 226006,China )通讯作者:张小柏，男”职称:副主任医师”擅长慢阻肺与哮喘的治 疗”基金项目 江苏省南通卫健委青年医学人才科研基金项目（WR2607210-；江苏省南通市临床医学中心项目（HS2012022-ABSTRACT : Tuberculosis is a kin) of chauic infectious diseaso which is a serious haen to tha health of pea- P-P1 EspecialH that tha multi dmp resistant pulaonaa tudercuHsis ha) a Hug infectious peUoU , ha) a bigof treatment , an) tha cure rata was Hw , tha moUality was high. Drup-resistant tudercuHsis has poorer outcomas thanthoso dma-sdsceptibia tudercuHsis , an) frequuit-y aCects young dbuUm AUhouph multiPruu-resistaut an) extensiveip dmyasismut tudercuHsis represent a vea small fraction of the total tudercuHsis burUen in resource -300- setting ,theso strain consume a disyapovmtm percentage of resources in tudercuHsis papmmmes. For this reason , it is veanipoUaut to diagnose , prevent an) cure dmp-resistant tuderculosis as soon as possibH1KEY WORDS :Tuderculosis ；Pulaoxaa : Dmp resistauce ； Universal precautiox , Theragp : Ehidemiologp我国是结核病的高耐药国家之一,2014年全国第五次结 核病流行病学抽样调查显示,初始耐药率与耐多药率分别为36. 93%和5. 39% ,获得性耐药率与耐多药率为35. 90%和4. 38%，与第四次结核病流行病学调查结果相比，呈逐年上升趋势34 ”过去十年中,全球许多地区耐多药肺结核的发病率迅速增长〔〕”最近，广泛耐药肺结核的威胁也越来越大3〕”本文从分子流行病学、临床流行病学探讨耐药肺结核的最新进展，总结比较各种耐药肺结核的药物、手术治疗以及临床结局，通过无法治愈的肺结核与耐药肺结核的院内感染， 以提高人们对预防耐药肺结核的警惕”1耐药性肺结核简介耐药性肺结核包括耐多药、广泛耐药、极度耐药和完全耐药肺结核，耐多药肺结核指结核杆菌至少对异烟肼、利福平耐药,广泛耐药肺结核指结核病患者感染的结核杆菌体外被证实除了至少对两种主要一线抗结核药物异烟肼、利福平耐药外,还对任何氟喹诺酮类抗生素（如:氧氟沙星、产生耐药，以及三种二线抗结核药物（如:卷曲霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素等、中的至少一种耐药〔〕”第一次报道发生在意大利,两例女性患者分别接受了 64个月和60个月的治疗,在送往医院422 d 和625 d 后死亡3〕”完全耐药性肺结核已在伊朗、印度和南非有过报道”超广泛耐药性肺结核目前尚未被WHO 所定义，且每种形式的严重程度尚不清楚”因此，国际协会需要商定超广泛耐药性肺结核的定义,包括应该由哪些 药物组成来定义该耐药结核菌，是否包括新的药物，应该多久 对这组药物进行重新评估，包含新的化合物”是否超广泛耐 药性肺结核较广泛耐药结核病预后差还不明确”最近公布的数据支持WHO 的推荐，超广泛耐药性肺结核不使用完全耐药肺结核术语，而是定义为新的类别”在一 项研究中⑺905例广泛耐药性结核患者在药物易感性数据 的基础上分为4个组,广泛耐药且耐所有二线药的肺结核患者的治愈率显著低于单独广泛耐药肺结核患者（4% a43%）,而患者（M48% a 35%）治疗失败和死亡的风险更高”这些数据表明，附加耐药超广泛耐药肺结核患者的临床预后较单独耐多药和广泛耐药性肺结核更差”另一项南非广-75 •海峡药学2001年第33卷第8期泛耐药肺结核的研究表明〔〕，结核分枝杆菌分离株耐药的数目，是患者死亡率的独立预测因子。
结核分枝杆菌耐药检测进展
菌种 鉴 定 ， 放射 性 污 染 。缺 点 ： 无 仪器 价 格 昂贵 ； 需
１ 细菌学方法
１１ 传统 方法 ．
专门进 口专利液体培养基， 费用较高。 Ｂ ｃ／ ｌ ｔ Ｄ 全 自动 快 速 结 核 分 枝杆 菌 培 养 ａＴ Ａｅ ｒ３ 检测系统 ： 是生物梅里埃公 司的产品。其原理是 当 检测标本经前处理接种于专用 的 ７ Ｈ 培养管后 ， 如 有分枝杆菌生长时， 分枝杆菌生长过程 中代谢产生 Ｃ 导致 ｐ Ｏ， Ｈ值改变 ， 传感器颜色从绿色变为黄色 ， 仪器每 １ｍｎ自动连续地检测、 ０ｉ 报告结果。优点 ： 简
污染。
其主要原理是测定分枝杆 菌生长 时的代 谢产
物， 即在 ７ Ｈ： 液体培养基 内加入含有放 射性 Ｃ棕
榈酸底物 ， 如有分枝杆菌生长繁殖 ， Ｈ Ｃ棕榈酸产生 带有放射性 的¨ Ｏ ， Ｃ ：经仪器检测显示结果 ， 以生长
２ 噬菌体扩增法
其原理是分枝杆菌噬菌体只能感染活的分枝杆 菌， 未进人感染菌体 内的噬菌体被 随后加入的杀毒 剂灭活 ， 已进入菌体的噬菌体不受影响。噬菌体在 感染体 内大量增殖 ， 并将菌体裂解 ， 释放出的子代噬 菌体可感染随后加入的指示细胞 ， 并将其裂解 ， 在琼 脂平 板 上 出现透 亮 的噬菌 斑 。若 在 培养皿 中事 先加
第２ ４卷 第 ２ ３期 ２０ ０ ８年 １ ２月
甘肃科技
Ｇａ ｓ ｃｅ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏ ｎｕ Ｓ ｉｎ ｅ ａ ｄ Ｔ ｃ ｎ ｌ
蹦 ．４ ２
Ⅳ０ ２ ．３
Ｄｅ ． ２ ０ ｃ ０８
结 核 分 枝 杆 菌 耐 药 检 测 进展
杨永红
（ 兰州市肺科医院 ， 甘肃 兰州 ７００ ） ３００ 摘 要： 前 全球结核病发病率 明显 回升 ， 中耐多药 （ Ｄ ） 目 其 Ｍ Ｒ 结核是本病 上升的主要原因之一 。对结核分 枝杆菌 的
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近年来 ,在全球范围内 ,结核分枝杆菌耐药率不断 上升 ,高耐药和多耐药菌株不断出现和传播 ,对化疗疗 效及结核病流行产生很大影响 , 药物敏感性检测更显 重要 。 在临床实验室 , 目前分枝杆菌药物敏感性检测仍 采用常规方法 ,即绝对浓度法 , 比例法和抗性比率法 。 但这些方法均以细菌生长为终点判断结果 , 由于结核 分枝杆菌生长缓慢 ,在得到分离培养物后仍需 1～2 个 月方能获得结果 ,急需建立快速 、 准确 、 可靠的药物敏 感性试验方法 。近年来 , 随着分子生物学理论和技术 的发展 ,结核分枝杆菌的耐药机制及耐药的分子基础 大部分已被阐明 ,建立了快速检测结核分枝杆菌耐药 基因的方法 ,为结核分枝杆菌快速药物敏感性试验开 辟了一条新的途径 。
1178 个氨基酸 。rpoB 基因少数密码子突变引起它所
编码的氨基酸改变 ,使 RNA 聚合酶分子原有 RFP 结合 点的构象发生改变 , 失去结合 RFP 的能力 , 而导致耐 RFP 。 在结核分枝杆菌耐 RFP 分离株中 ,约 95 %～98 % 检出 rpoB 基因突变 ,突变一般发生在一个高度保守的 81bp ( 507～533 位 27 个氨基酸密码子 ) 组成的区域内 。 最常见的突变位点是 531 位丝氨酸 ( Ser ) 亮氨酸
338
Journal of Chinese Physician , April ,2002 , Vol 4 , No4
・ 专家论述・
结核分枝杆菌耐药分子机制及耐药基因检测方法研究进展
解放军 309 医院全军结核病中心研究室 ( 北京 100091) 李国利 关键词 结核分枝杆菌 ; 耐药基因 ; 检测 ; 综述
中国医师杂志 2002 年 4 月 第 4 卷第 4 期
339 pncA 基因含 561 个核苷酸 , 结核分枝杆菌耐 PZA
扰原核生物蛋白质合成的氨基糖苷类抗生素 。其主要 作用部位在核糖体 30S 亚基 ( 由 21 种核糖体蛋白和 16S rRNA 组成) ,引起遗传密码的错读 , 翻译启动的抑 制及校对的异常 , 从而抑制蛋白质合成 , 发挥抗菌作 用。 从基因水平的研究已发现结核分枝杆菌对 SM 耐 药性与编码核糖体 30S 亚基 S12 蛋白的 rpsL 基因和编 码 16SrRNA 的 rrs 基因突变有关 ,80 %耐 SM 结核分枝 杆菌临床分离株可见 rpsL 或 rrs 突变 。rpsL 基因最常 见的是 43 位密码子 AAG (Lys) AGG ( Arg) 的突变 ,88 位密码子也可发生同样突变 。少数可见 43 位 Lys Thr 的转变 。rrs 基因突变主要集中于相当于大肠杆菌 的 530 环区和 915 区 ,可见核苷酸 491 位 C T ,512 位 C T ,513 位 A C 或 A T ,516 位 C T ,903 位 C G 或 C A ,904 位 A G 的突变 ( 分别相当于大肠杆菌
免疫学 、 分子生物学研究工作 。 曾参加军队 “八五” 攻关课题 、 国 家卫生部医学科学基金重点课 题等 10 余项研究课题 ,现参加国 家 973 规划 “严重传染病防治基 础研究” 项目中子课题研究 。曾 获国家级科学技术进步三等奖 1 项 ; 军队级 、 国家卫生部和北京 市科学技术进步二等奖 5 项 、 三 等奖 6 项 。参加专 ( 译 ) 著编写 4 本 ,发表论文共 50 余篇 。
(Leu) 置换 ,526 位组氨酸 ( His) 酪氨酸 ( Tyr) 、 天门冬 ( ) ( ) 氨酸 Asp 或半胱氨酸 Cys 置换 ,516 位 Asp 缬氨酸 (Val ) 置换 。 1・ 2 异烟肼 ( INH)
[5～8 ]
药。 Kat G 基因位于结核分枝杆菌染色体上 ,含 2223 个 核苷酸 , 在耐 INH 结核分枝杆菌分离菌株中 , 约 10 ～ 24 %分离株发生 Kat G 完全缺失 ,过氧化氢酶 - 过氧化 物酶阴性 ,高度耐 INH ,50 %～70 %出现点突变部份缺 失或插入 。是常见的点突变是 315 位 Ser ( AGC) - Thr (ACC) 、 天冬酰胺 ( Asn) ( AAC) 、 ILe ( ATC) 或 Arg ( CGC) 置换 ,315 位 Ser 是决定酶活性的关键部位 。还可见 Kat G 基因 104 位 Arg 、 108 位 His 、 138 位 Asn 、 148Leu 、 270 位 His 、 275 位 Thr 、 312 位 Trp 和 381 位 Asp 密码子 突变 。inhA 基因突变主要见于 94 位 Ser Ala 置换 。 1・ 3 链霉素 ( SM) [5 ,9 ,10 ] SM 是一种在核糖体水平干
关于 INH 作用机制 , 目前的
研究认为 :Leabharlann INH 进入菌体后 ,在分枝杆菌过氧化氢酶 过氧化物酶作用下氧化脱氢生成亲电子形式 。这种过 氧化氢酶 - 过氧化物酶活化的 INH 形式能与分枝杆
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聚合酶β 亚基结合 , 抑制 RNA 聚合酶活性 , 干扰分枝 杆菌 RNA 的转录及合成 ,阻碍蛋白质合成而发挥抗菌 作用 。近年来的研究发现结核分枝杆菌耐 RFP 的发 生是由于其编码 RNA 聚合酶β 亚基的 rpoB 基因突变 所致 。rpoB 基因含有 3534bp 的开放阅读框架 , 编码
1 结核分枝杆菌的耐药分子机制 1・ 1 利福平 ( RFP) [1～5 ] RFP 是通过特异地与 RNA
菌分枝菌酸生化合成途 径中的烯酰基还原酶 NADH 复 合 体 结 合 , 抑 制其活性 , 干扰分枝菌 酸合成 , 发挥抗菌的作 用 。结 核 分 枝 杆 菌 耐 INH 与过氧化氢酶 - 过 氧化 物 酶 编 码 基 因 Kat G 和/ 或烯酰基还原 酶编码基因 inhA 突变 李国利 有 关 。 Kat G 基 因 的 突 解放军第 309 医院全军结核 变导致过氧化氢酶 - 过 病中心研究室副主任技师 , 中国 氧化物酶活性降低或丧 防痨协会基础 ( 含细菌 ) 专业委 失 ,阻止 INH 转换成活 员会委员 。从事结核病细菌学 、 性形式 , 导致耐药 。活 化 INH 形 式 抑 制 烯 酰 基还原酶活性作用好像 取决于结合烯酰基还原 酶活 性 部 位 的 NADH , 编码 烯 酰 基 还 原 酶 的 inhA 基因 94 位密码子 突变使 NADH 与之结合 降低 , 抑制了 INH 活化 形式的结合率 , 产生耐