云南三七根腐病病原细菌的鉴定
云南灯盏花根腐病的2种新病原鉴定及防治药剂的室内筛选
云南灯盏花根腐病的2种新病原鉴定及防治药剂的室内筛选摘要引起云南省燈盏花根腐病的病原为茄病镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和半裸镰刀菌(F.semitectum)3种真菌，茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌为灯盏花根腐病的2种新病原，其中茄病镰刀菌为主要致病菌，其分离率为42.86%，茄病镰刀菌有伤接种发病率为70%，无伤接种发病率为56.7%。
采用室内生长速率法测定了50%多菌灵可湿性粉剂、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂、64%恶霜·锰锌可湿性粉剂、10%苯醚甲环唑水分散粒剂、10亿活芽胞/g 枯草芽胞杆菌·荧光假单胞杆菌可湿性粉剂5种供试杀菌剂对灯盏花根腐病主要病原茄病镰刀菌的毒力。
结果表明：5种供试药剂对茄病镰刀菌都有抑制作用。
对茄病镰刀菌的有效中浓度（EC50）分别为0.000 4、0.050 7、0.053 5、0.081 3和8.624 0 mg/mL，其中50%多菌灵可湿性粉剂有效中浓度最低，相对抑制效果最好。
5种药剂的毒力相关系数均在0.89以上，表明药剂质量浓度与抑制作用呈较高相关性。
关键词灯盏花；根腐病；病原鉴定；毒力测定；致病性中图分类号:S 435.67文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.05291542.2014.02.028Identification of the two new pathogens of root rot disease on Erigeronbreviscapus and screening of fungicidesLai Baochun1，Hu Xianqi2，Luo Wenfu2(1. Zhangzhou Institute of Agricultural Sciences of Fujian Province, Zhangzhou363005, China；2. Key Laboratoryfor Plant Pathology of Yunnan Province, Yunnan Agricultural University, Kunming650201, China)AbstractThe three pathogens causing root rot of Erigeronbreviscapus in Yunnan Province were identified as Fusarium solani, F.oxysporum and F.semitectum, among which F. solani and F.oxysporum were two new pathogens; the main pathogen was F.solani, and the isolation frequency was 42.86%. After artificial inoculation with or without wounds, the incidence of roots infected by F.solani was 70% and 56.7%, respectively. With mycelium growth rate test method, five fungicides to F.solani had inhibition effects, indicating that the EC50 values of 50% carbendazim WP, 70% thiophanate methyl WP, 64% oxadixyl·mancozeb WP, 10% difenoconazole WG, and 1 billion live spores of Bacillus subtilis and Pseudomonas fluorescens WP were 0.000 4 mg/mL, 0.050 7 mg/mL, 0.053 5 mg/mL, 0.081 3 mg/mL and 8.624 0 mg/mL, respectively, suggesting that 50% carbendazim WP was the best. The correlation coefficients for the five fungicides were all above 0.89, indicating that mass concentration had high correlation with inhibition.Key wordsErigeron breviscapus；root rot disease；identification of pathogen；toxicity test；pathogenicity 灯盏花［Erigeron breviscapus (Vant.) Hand.Mazz.］又名短葶飞蓬、灯盏细辛，属菊科飞蓬属植物，以全草或根入药，为多年生草本。
三七根腐病的初步研究
三七根腐病的初步研究
王淑琴;于洪军
【期刊名称】《特产研究》
【年(卷),期】1989(000)002
【摘要】三七[panax notoginseng(Burk)F·H·Chen]系正加科人参属植物,是中国特产的名贵药材。
三七根腐病,别名鸡屎烂、臭七等。
本病凡三七产地都普遍发生危害三七地下部分。
各年生三七一年四季均能受害,生长年限越长发病尤为严重,是一种毁灭性病害。
【总页数】4页(P7-10)
【作者】王淑琴;于洪军
【作者单位】[1]云南省铳卡三七药材场;[2]云南省铳卡三七药材场
【正文语种】中文
【中图分类】S
【相关文献】
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3.三七设施栽培根际微生物菌群变化及其与三七根腐病的相关性研究 [J], 官会林;杨建忠;陈煜君;崔秀明;王勇;张云峰
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5.生物菌剂控制三七根腐病的初步研究 [J], 陈昱君;王勇;刘芸芝;朱有勇;刘云龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三七立枯病诊断及防控
三七立枯病诊断及防治1范围本标准规定了三七立枯病诊断及防控技术有关的术语和定义、诊断、防控方法等内容。
本标准适用于三七立枯病的诊断及防控。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T20478植物检疫术语DB53/T055.2三七种子质量标准DB53/T055.3三七种苗质量标准DB53/T055.8三七农药使用准则DB53/T055.10三七栽培技术规范DB53/T055.11三七病虫草鼠害综合防治技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1三七五加科人参属植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen。
3.2三七立枯病三七立枯病俗称干脚病，是由病原菌立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kuhn）侵染引发的三七土传病害。
3.3科赫氏法则又称柯赫氏假设，是确定侵染性病害病原物的操作程序和法则。
4诊断4.1田间诊断4.1.1发病条件发病条件如下：a)高温少雨的月份易发；b)发病部位在距表土3cm～5cm的干湿土交界处。
4.1.2病状特征病原以侵染种苗假茎基部与土壤接触的部位为主，有如下特征：a)主要危害三七种芽及幼苗；b)感病种芽变黑褐色；c)感病三七幼苗，在假茎（叶柄）基部出现黄褐色水渍状条斑；d)随病情发展变暗褐色，最后病部缢缩，幼苗折倒死亡；e)症状及流行特点详情参见附录A。
4.2室内诊断4.2.1诊断原则应遵循科赫氏法则进行。
4.2.2病样材料采集根据立枯病症状及流行特点，采集典型的病样标本。
4.2.3培养基制备制成马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），灭菌后备用。
4.2.4病原菌分离培养前处理消毒后，在无菌操作台将切成5mm小块病样接于PDA培养基上，待培养5d。
按以下方法进行再纯化和形态特征观察：a)将病原菌菌丝接种于PDA培养基中；b)在光照12小时/天的条件下，22℃培养7d；c)观察菌丝的颜色、形状及菌核颜色；d)测量成熟菌丝、菌核大小。
三七叶腐病防治和治疗办法
未来研究方向
深入研究三七叶腐病的发病机 制，探索更加有效的防治方法
。
加强生物农药的研发和应用， 减少化学农药的使用量，保障
三七的品质和安全。
提高三七种植者的技术水平和 管理能力，从源头上预防和控
制叶腐病的发生。
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THANKS
及时清除田间杂草 和病残体，减少病 原菌的传播。
科学施肥，增施有 机肥和磷钾肥，提 高三七的抗病能力 。
清除病残体
在三七收获后，及时清除田间的病株残体，并集中销毁。
在发病初期，及时摘除病叶、病花等病残体，减少病原菌的传播。
05
三七叶腐病的经验分享
成功案例分享
成功案例一
在云南省文山州，某三七种植基地在发病 初期使用生物农药进行防治，有效控制了 叶腐病的蔓延，减少了经济损失。
增加管理难度
为了控制三七叶腐病的发 生和蔓延，需要加强田间 管理，增加了种植成本和 管理难度。
02
三七叶腐病的防治
农业防治
合理轮作
避免与茄科、葫芦科等易 感叶腐病的作物连作，实 行3年以上轮作制度。
清洁田园
及时清除病株、病叶，并 集中销毁，减少病原菌的 传播。
科学施肥
增施有机肥和生物肥料， 提高土壤微生物活性，增 强三七抗病能力。
成功案例二
在云南省普洱市，某中药材种植企业通过 加强田间管理，提高三七的抗病能力，成 功避免了叶腐病的发生。
失败案例分析
要点一
失败案例一
在云南省昆明市，某企业未能及时发现叶腐病的发生， 导致病害蔓延，经济损失严重。
要点二
失败案例二
在云南省大理市，某企业使用化学农药防治叶腐病，但 由于使用方法不当，不仅未能取得预期效果，还对三七 造成了药害。
云南和西藏十字花科蔬菜根肿病菌生理小种鉴定
云南和西藏十字花科蔬菜根肿病菌生理小种鉴定一、引言
云南和西藏是我国重要的蔬菜生产大省，其中十字花科蔬菜是当地蔬菜种植的主要品种之一。
然而，根肿病菌是十字花科蔬菜生产中常见的重要病原体之一，在不同区域和品种间的发病情况和生理小种存在较大的差异，因此进行了鉴定研究。
二、材料和方法
1.材料
本研究采集了云南和西藏不同品种和不同地点的十字花科蔬菜样品，共计17个。
2.方法
（1）分离根肿病菌
将疑似根肿病菌的菌丝切取，接种在Potato Dextrose Agar（PDA）培养基上，稀释至纯菌培养，保存备用。
（2）生理小种鉴定
采用VCG（Vegetative Compatibility Group）法鉴定各株菌，按照方式进行分类，并确定其在VG II型下的生理小种。
三、结果
根据VCG鉴定，共鉴定出4个生理小种，分别为VG II-1、VG II-2、VG II-3、VG II-4，其中，VG II-2与VG II-3分别是云南和西藏样品中分离出来的主要生理小种。
四、讨论和结论
本研究对云南和西藏不同品种和不同地点的十字花科蔬菜进行了根肿病菌生理小种的鉴定。
结果表明，根肿病菌存在明显的生理小种间差异，其中VG II-2与VG II-3是主要生理小种。
该研究结果可为云南和西藏地区十字花科蔬菜的防治提供理论依据和实践指导。
一种三七根腐病的防治方法
一种三七根腐病的防治方法
1 三七根腐病
三七根腐病是一种常见的三七植株病害，是一种真菌性病害，对
北京等北方植物的健康有很大的影响。
根腐病会影响植物的正常生长
发育，令植株萎缩发黄，严重的甚至会导致植物的死亡。
2 预防方法
1. 后期管理。
加强植株的种植管理，增加植株的叶面湿度，减少
植株与地面接触，有助于防止病菌侵染；
2. 控制营养平衡：选择肥料要按植株的不同物性提供适当的营养
素供应；
3. 避免强烈阳光：可以选择半阴环境的种植，避免强烈的直射阳光；
4. 选择健康的种子：种植时，选择健康的种子，以免植株受到病
菌感染；
5. 适当施肥：可以在施肥时加入杀菌剂，有效控制病害；
6. 防湿：进行防湿处理，保持植株叶面湿度，降低病菌滋生的温度；
7. 及早检测和防治：及早发现病情，并选择安全有效的防治药剂，及早防治。
3 治疗方法
1. 对严重发病的地方可以施用根腐病治疗剂，使病菌活性剂对病菌有明显的抑制作用；
2. 根部拔苗、挖、掏掉腐烂的茎、叶柄，更换新苗种植，并以喷施防治剂消除病原体；
3. 采用辐照或低温等物理化学处理技术，降低根腐病苗的害穤；
4. 采用施肥、增补补和调整土壤pH值的方法，改善不足的土壤和释放抑制病菌的因子；
5. 养护时及时施肥和灌水，加强休眠期的保护，降低病原体的滋生环境。
4 总结
三七根腐病危害严重，必须加强预防措施，在施肥、增补养护和早期检测及及时施肥灌水等方面必须认真做好。
早期及早防治，及早恢复植株正常生长，以确保植株的健康。
云南地区三七和草果上真菌污染的初步分析
云南地区三七和草果上真菌污染的初步分析［摘要］目的：了解云南地区主产的中药材三七和草果上污染真菌的主要类群，分析这2种常用药材上潜在的真菌毒素污染的可能性。
方法：采集来源于云南不同地区市售的三七、草果药材，使用稀释平板法分离药材表面真菌，依据形态学特征结合分子生物学方法对主要分离菌株进行鉴定。
结果：三七污染真菌以淡紫拟青霉和橘青霉为优势菌；草果污染菌中的优势菌为淡紫拟青霉和黄曲霉。
结论：根据三七和草果上污染菌的情况，在云南地区三七存在橘青霉毒素污染的风险，草果存在黄曲霉毒素污染的风险。
［关键词］三七；草果；污染真菌；真菌毒素；云南霉变引起的真菌毒素污染是中药材安全评价的重要内容之一。
常见的曲霉属、青霉属、镰刀菌属的真菌是产生黄曲霉毒素[1]、赭曲霉毒素[2]、单端孢霉烯族毒素[34]等真菌毒素的主要类群，以往研究已经证明上述真菌毒素具有致癌、致畸、致突变作用[5]。
三七和草果主产于云南的东南部，产量占全国的70%以上[67]，是2种常见中药材。
三七属五加科Araliaceae三七干燥的根及根茎，具有散瘀止血、消肿定痛之功效[8]；草果属姜科Zingiberaceae植物草果的干燥成熟果实，具有燥湿温中、除痰截疟的功效[8]，均为临床常用中草药。
云南地处我国西南，大部分地区年均温度较高且气候潮湿，市场上销售的中草药发霉现象容易存在。
由于真菌毒素的产生具有种的特异性，因此，明确污染霉菌的种类和确定是否存在能够产生真菌毒素的类群是研究药材真菌毒素污染及防控的前提。
目前，在三七和草果药材上的主要污染性霉菌尚不清楚。
本研究通过对云南不同地区市售的三七和草果调查取样和对样品污染性真菌分离培养、形态鉴定，初步明确主要的产毒真菌种类，由此估计真菌毒素污染的风险，为建立真菌毒素污染的防控技术提供理论依据。
1材料与方法1.1药材三七和草果分别购买于云南昆明、玉溪和思茅等地药店或药材市场，每个地点每种药材采集样品约200g，药材经李学兰研究员鉴定。
中药材三七根腐病防治措施
机电设备安全管理模版第一章绪论1.1 研究背景与意义1.2 研究目的和内容1.3 研究方法和途径第二章机电设备安全管理的理论基础2.1 机电设备安全概念的界定2.2 机电设备安全管理体系的构建2.3 机电设备安全管理的原则第三章机电设备安全管理的组织机制3.1 机电设备安全管理的职责和权限3.2 机电设备安全管理的组织结构3.3 机电设备安全管理的人员配备和培训第四章机电设备安全管理的规章制度4.1 机电设备安全管理的基本规定4.2 机电设备安全管理的操作规程4.3 机电设备安全管理的纪律规定第五章机电设备安全管理的风险评估与控制5.1 机电设备安全风险评估的方法与流程5.2 机电设备安全风险控制的原则与措施第六章机电设备安全事故的应急管理6.1 机电设备安全事故的预防措施6.2 机电设备安全事故的应急预案6.3 机电设备安全事故的调查与处理第七章机电设备安全管理的监督与评估7.1 机电设备安全管理的监督机制7.2 机电设备安全管理的效果评估7.3 机电设备安全管理的改进措施第八章机电设备安全管理的案例分析8.1 案例一：机电设备事故原因与处理8.2 案例二：机电设备安全管理的成功经验总结第九章结论与展望9.1 主要研究结果总结9.2 存在问题及改进措施建议9.3 后续研究方向参考文献附录：相关表格、图表和附件以上为机电设备安全管理模板的基本结构，具体内容和字数根据需要和实际情况进行调整。
机电设备安全管理模板的目的是为了指导和规范机电设备安全管理工作，确保生产过程中的安全和可靠性，保障员工的身体健康和财产安全。
模板中包含了理论基础、组织机制、规章制度、风险评估与控制、应急管理、监督与评估等内容，通过对案例的分析可以进一步加深对机电设备安全管理的理解和应用。
机电设备安全管理模版（二）第一章总则第一条为了加强机电设备安全管理，确保生产作业的安全可靠进行，保护员工的生命财产安全，制定本管理规定。
第二条本管理规定适用于机电设备的安全管理工作，包括设备投入使用前的验收检查、设备定期检修、设备维修、设备废弃报废等各个环节。
三七种植病害防治杀菌剂
三七是一种经济附加值较高的中药材，三七粉、三七花、三七根都可以入药，要用价值高。
我国三七主要种植区域在云南省，主要分布在文山、红河，另外在昆明、曲靖、玉溪、大理、保山等区域也有种植。
三七常年生长在隐蔽条件下，十分适合真菌等微生物生长，常见病害种类多达20多种，危害性较大的病害以真菌类病害为主。
三七常见病害有：1.黑斑病，病原菌Alternaria panax Whetz，真菌；2.疫病，病原菌Phytophthora cactorum，真菌；3.立枯病，病原菌Rhizoctonia solani Kuhn，真菌；4.三七猝倒病，病原菌Phytophthora，真菌；5.三七根腐病，病原菌Fusarium scirpi lamb，真菌；6.三七黄锈病，病原菌人参夏孢锈菌，真菌；7.三七炭疽病，病原菌Colletotrichμm g10eosporioides Penz. 和C.dematiμm (Pers.) Grove，真菌；8.三七白粉病，病原菌为真菌中一种半知菌；9.三七灰霉病，Botrytis cinerea Pers，真菌；10.三七圆斑病，Mycocentrosporaacerina (Hartig)Deighton，真菌；微生物病害对三七种植造成巨大的经济损失，以灰霉病为例，灰霉病对一般病园的造成的经济损失约为5％左右,重病园的损失率可高达20％以上。
由此可见，微生物（真菌、细菌、病毒）对三七种植危害巨大，在某些情况下，微生物病害对三七种植都可能造成毁灭性的损失。
三七微生物病害难治理原因分析原因1：三七常年生长在蔽荫环境下，此种条件下特别适合微生物生长繁殖，所以病害种类多，发生频繁。
原因2：三七病害以真菌类病害为主，真菌具有高抗性、顽固反复发作的特性。
原因3：传统农用杀菌药剂存在四大缺陷，无法达到良好效果。
1)传统药物杀菌效力差，无法达到理想病害防治效果。
2)传统药物杀菌谱窄，一种药剂只能杀灭部分种类病原菌。
中草药根腐病及其微生物防治研究进展
中草药根腐病及其微生物防治研究进展中草药根腐病是近年来严重威胁中药产业发展的重要因素之一。
该研究主要就中草药根腐病的发生情况、病原菌种类的多样性、优势病原菌的区域差异性和引发症状的复杂性等方面进行了综述，并就利用拮抗微生物防治中草药根腐病的研究进展进行了概述，同时，还对目前存在的问题和研究前景进行了探讨和展望。
标签：中草药；根腐病；微生物防治；研究进展[Abstract] In recent years，root rot diseases of Chinese herbal medicine have been posing grave threat to the development of the traditional Chinese medicine industry. This article presents a review on the occurring situation of the root rot disease，including the occurrence of the disease，the diversity of the pathogens，the regional difference in dominant pathogens，and the complexity of symptoms and a survey of the progress in bio-control of the disease using antagonistic microorganisms. The paper also discusses the existing problems and future prospects in the research.[Key words] Chinese herbal medicine；root rot；microbial control；research progressdoi：10.4268/cjcmm20152102中草药是中成药及各类临床制剂的主要原料，也可用于某些功能性食品、保健品的生产。
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云南三七根腐病病原细菌的鉴定作者：张晋豪杨俊姬广海王彦芳张荣琴代真林刘棋魏兰芳来源：《南方农业学报》2020年第03期摘要：【目的】明确云南三七根腐病致病细菌的种属，为三七根腐病的综合防治提供科学依据。
【方法】从云南省不同三七种植区采集三七根腐病植株，采用组织分离法进行病原细菌分离，通过柯赫氏法则验证病原菌的致病性，利用形态学、生理生化与基因序列分析相结合的方法明确病原细菌的分类学地位。
【结果】采用组织分离法从发生三七根腐病的块根中共分离到200多株细菌，经室内组培离体筛选得到10株细菌能引起三七块根腐烂，其中1株细菌MA9对健康三七切伤组织的致病力最强，选取该株细菌进行后续研究。
健康三七块根离体接种MA9菌液9 d后出现菌脓，块根开始腐烂变黑、变软，并伴随有恶臭味。
将MA9菌株摇瓶发酵制备成OD600约0.5的菌悬液灌根接种到温室和田间健康三七植株上，均表现出与田间病株一致的症状：最初在芦头与芽基结合处出现褐色水渍状病变，随着病变不断扩展最终导致三七地下块根顶芽腐烂和地上部植株死亡。
在田间接种后发病的三七块根重新分离到该病原细菌。
利用Biolog微生物鉴定系统和16S rDNA序列比对结果均显示MA9菌株与产吲哚金黄杆菌（Chryseobacterium indoloqenes）为同一种属。
【结论】引起云南三七根腐病的致病细菌为产吲哚金黄杆菌。
这是国内首次报道该菌能引起三七根腐病。
关键词：三七根腐病;产吲哚金黄杆菌;病原细菌鉴定;云南省0 引言【研究意义】三七[Panax notoginseng（Burk.） F.H. Chen]属五加科人参属多年生植物，是我国特有珍贵中药材，也是云南省重要的生物资源（宫峥嵘，2014）。
因三七生长环境独特且生长周期较长，易诱发各种病害，其中以根腐病最严重（王勇等，2003）。
连年种植三七会加重根腐病的发病率，根腐病常年造成三七损失5%～20%，严重者在70%以上，甚至导致绝收（冯光泉等，2003）。
目前三七根腐病已成为云南三七产业发展的瓶颈，严重制约三七品质和产量的提升。
因此，明确引起三七根腐病的有害细菌，并针对病原靶标进行对症防治，对促进云南三七产业的健康发展具有重要意义。
【前人研究进展】目前对三七根腐病病原菌鉴定的研究较多，大多数报道三七根腐病是由病原真菌侵染引起。
20世纪50年代最早记载三七根腐病病原菌为藤草镰孢（Fusarium scirpi）（蒋妮等，2011）;缪作清等（2006）报道引起三七根腐病的病原真菌类群主要包括毁灭柱孢菌（Cylindrocarpon destructans）、黃腐柱孢菌（C. didynum）、腐皮镰刀菌（F. solani）、尖孢镰刀菌（F. oxysporum）、恶疫霉（Phytophthora cactorum）、草茎点霉（Phoma herbarum）和立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）;毛忠顺等（2013）报道三七根腐病病原是一种茎线虫（Ditylenchus sp.）;汪静等（2015）报道引起三七根腐病的病原菌为尖孢镰刀菌（F. oxysporum）、茄病镰刀菌（F. solani）和链格孢菌（Alternaria alternata）;Mi等（2017）报道土赤壳属（Ilyonectria mors-panacis）能引起三七锈腐病;董鲜等（2018）报道尖孢镰刀菌（F. oxysporum）为三七根腐病的重要致病菌，该菌可影响三七植株生长、光合作用及水分利用。
近年来，还出现关于人参属根腐病病原细菌的报道。
Lei等（2017）报道假单胞杆菌属（Pseudomonas sp.）与镰刀菌属（Fusarium sp.）、丝核菌属（Rhizoctonia sp.）的复合侵染会加剧三七根腐病发生;Li和Han（2017）首次报道普城沙雷氏菌（Serratia plymuthica）可引起人参属根腐病;李纪潮等（2019）报道三七根腐病3种变形门致病细菌假单胞杆菌属（Pseudomonas sp.）、无色杆菌（Achromobacter marplatensis）和产碱菌属（Candidimonas sp.）。
【本研究切入点】目前，有关人参属根腐病病原细菌的报道较少，关于金黄杆菌属细菌能侵染三七植株引发根腐病的研究尚无文献报道。
【拟解决的关键问题】对云南省三七根腐病病根组织进行病原细菌分离培养和致病性测定，并采用形态学、生理生化和分子生物学等方法明确其致病细菌的分类地位，以期为三七根腐病的综合防治提供科学依据。
1 材料与方法1. 1 试验材料1. 1. 1 样品采集样品采自云南省文山州、曲靖市、红河州和昆明市等三七种植地。
将发生根腐病植株的腐烂块根置于采样袋中，带回实验室进行病原细菌的分离培养。
1. 1. 2 培养基 NA培养基：葡萄糖/蔗糖10.0 g、蛋白胨5.0 g、牛肉浸膏3.0 g、酵母浸膏1.0 g、琼脂20.0 g，pH 7.0，蒸馏水1000 mL;KB培养基：蛋白胨20.0 g、MgSO4·7H2O 1.5g、K2HPO4 1.5 g、琼脂17.0～21.0 g、甘油10 mL，pH 7.0，蒸馏水1000 mL;LB液体培养基：胰蛋白胨10.0 g、酵母提取物5.0 g、氯化钠10.0 g，pH 7.0，ddH2O 1000 mL;Bug琼脂培养基（美国Biolog公司）。
1. 2 样品的分离和纯化采用组织分离法进行病原细菌分离（Dong et al.，2016）：取病健交界处病组织（切成5 mm×5 mm小块），用75%乙醇溶液表面消毒1 min，无菌水冲洗3次后用灭菌吸水纸吸干水分，将病组织切下的小块研磨捣碎后加入装有45 mL无菌水的100 mL三角瓶中，26 ℃下160 r/min摇床振荡20 min后取出静置5 min，通过梯度稀释成10-1～10-5，在NA、KB和LB固体培养基上依次按低浓度向高浓度进行涂布，28 ℃恒温培养。
1. 3 病原菌致病性筛选及测定1. 3. 1 室内组培离体筛选将保存的菌株在NA培养基上活化培养3代。
刮取菌落于NA液体培养基中培养至菌液浓度为OD600≈0.5（约3.0×108 CFU/mL），菌液稀释20倍接种于健康三七块根切口（位于三七块根靠近芦头的1/5处），每株菌株进行3次重复致病性筛选。
以健康三七块根切口接无菌水为对照。
接种完成后于28 ℃恒温培养，接种9 d后统一记录各菌株对健康三七块根的危害程度，进行病原细菌初步筛选。
1. 3. 2 温室灌菌致病性验证取室内离体切伤初筛的细菌，菌悬液稀释10倍后制成100 mL 菌悬液，采用灌根法浇灌于健康三七根部，无菌水作对照，每处理3次重复。
接种50 d后统计块根腐烂程度。
1. 3. 3 高光环保型标准化设施荫棚三七致病性验证基于室内离体切伤和温室移栽灌菌两次筛选后的细菌，再进行田间灌菌验证试验。
试验在云南农业大学大河桥三七种植基地高光环保型标准化设施荫棚内进行，验证方法同1.3.2，采用灌根接种法将菌悬液进行浇灌接种，每隔15 d接种一次，每处理接种30株，每处理3次重复。
接种60 d后取样调查。
1. 4 病原菌生理生化鉴定病原菌生理生化鉴定采用MicrostationTM V4.01系统（美国Biolog公司）。
将供试菌株的单菌落划十字接种在Bug培养基上，28 ℃恒温培养24 h;用接种液配制成细菌悬浮液（浊度仪测定菌悬液的浊度约为90%），于Biolog GN微孔板中每孔加入150 μL菌悬液，使用微生物鉴定仪进行细菌的鉴定分析（谢关林，2000）。
1. 5 病原菌分子生物学鉴定细菌基因组DNA的提取采用DNA提取试剂盒[DP302-02，天根生化科技（北京）有限公司]，其步骤按说明进行操作。
以原核生物保守基因16S rRNA引物27F/1492R（27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCT CAG-3'/1492R：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'）进行扩增（杨霞等，2008）。
将PCR产物送至昆明硕擎生物科技有限公司进行测序，测序结果上传至GeneBank核酸数据库进行同源性比对分析，运用MEGA 7.0构建系统发育进化树以明确病原菌的分类学地位。
2 结果与分析2. 1 病原菌分离及其致病性测定结果2. 1. 1 病害症状三七根腐病常见于每年7—8月，恰逢云南省处于高温高湿，为病害高发季节。
病害发生时三七植株萎蔫，叶片发黄变软，基部發黑;病害发生严重时叶片脱落，茎秆枯萎腐烂，植株轻轻拔起茎秆即断，地下块根仍腐烂埋在土里，芦头处颜色发黑腐烂直至整个根部腐烂（图1-A）。
2. 1. 2 病原菌分离及筛选从不同地区三七根腐病病组织上分离到500多株细菌，剔除重复后剩余200多株。
经室内组培离体筛选，最后获得10株细菌可在室内引起三七离体组织块根腐烂。
筛选过程中发现健康三七接种其中1株细菌MA9后切伤组织的发病程度最严重，因此选取该株细菌进行后续研究。
2. 1. 3 病原菌致病性测定室内离体接种MA9菌悬液测定结果显示，健康块根切伤接入MA9菌悬液9 d后出现菌脓，块根开始腐烂变黑、变软（图1-C），并伴随有恶臭味，而接种无菌水的三七块根并无症状（图1-B）;温室灌菌验证试验结果显示，三七接种MA9菌悬液50 d后，拔起块根发现块根与茎秆连接处颜色变为黑褐色，块根变得皱缩稍软，轻轻按压有菌脓出现（图1-D）。
田间三七灌MA9菌悬液2个月后，发现有60%的三七块根发生根腐，芦头与芽基结合处出现褐色水渍状病变，随着病变不断扩展最终导致三七地下块根顶芽腐烂和地上部植株枯萎死亡（图1-E）。
连根拔起发现芦头处颜色变黑，出现断芽和少芽现象，接入MA9菌株的块根与健康块根相比变得皱缩，少量伴随创口（图1-F和图1-G）。
对接种后的发病块根芦头重新分离进行柯赫氏法则验证，再次获得相同的病原细菌，证明MA9菌株即为三七根腐病病原细菌。
2. 2 病原细菌形态学特征及培养性状MA9菌株在NA培养基上培养24 h后形成黄橙色，略带黏性，菌落呈半透明状，圆形（直径1～2 nm），边缘整齐，中部稍有隆起，表面光滑有光泽的菌落（图2-A），拉丝结果显示为革兰氏阴性菌。
在NA培养基中培养好的MA9菌落上滴加3% KOH溶液后1～2 s，菌落颜色由黄橙色变为红色（图2-B）。
2. 3 病原菌生理生化鉴定结果将MA9菌悬液接种到含有95种不同碳氮源的Biolog GN微孔板中，28 ℃恒温培养箱培养24 h后，用Biolog微生物鉴定仪测定MA9菌株对碳氮源的利用情况，并与数据库中的标准细菌菌株进行比较。