白色念珠菌与抑菌效力检查方法
抑菌类产品抑菌性能测试方法
其他菌种
其他菌种
白念、铜绿
液体、凝胶、固体 液体、凝胶、固体 液体
0.5mL混合液 +5mLPBS 对照组用染菌载片
5×105~5×106
直接取样
0.5mL混合液 +4.5mLPBS
对照组是同材质不
/
含抑菌成分的样品
5×105~5×106
1×104~9×1 04
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20min 20min30s 21min 21min30s 27min 27min30s
WS650：产品测试浓度样液与加入其中的菌 作用完成后，直接取样（即不做稀释）于平皿 中作活菌菌落计数
QB2738：取试验菌与样品混合液0.5mL加 入到含4.5mL经灭菌的PBS试管中
0 2 载 体 抑 菌
抑菌类产品抑菌性能测试方法
➢ GB15979-2002《一次性使用卫 生用品卫生标准》—附录C4、C5 ➢ QB/T 2738-2012《日化产品抗 菌抑菌效果的评价方法》 ➢ 消毒技术规范 ➢ WS/T 650-2019《抗菌和抑菌 效果评价方法》
液体类
凝胶类
固体类
适用产品性状
15979 2738 消规 650
常用菌株
1
2
3
金黄色葡萄球菌 ATCC6538
大肠杆菌8099 白色念珠菌ATCC10231
0 1 悬 液 法
浓度为5×106~4.5×107cfu/mL
作用至一定时间后，吸取0. 5 mL样液至含5 mL PBS的试管内
滴加0.1mL菌悬液
2min 5min 5mL样液 2min 5min
10min 20min
作用至一定时间后，将样片夹至含5 mL PBS的试管内
白色念珠菌病的检测方法及抗真菌药物的研究进展
白色念珠菌病的检测方法及抗真菌药物的研究进展摘要：白色念珠菌感染的发生率极高，对人体的危害极大。
及时的检测白色念珠菌，对于患者的治疗十分关键。
白色念珠菌感染的主要治疗方式为药物治疗，主要的药物有：唑类、多烯类、棘白素类、氟胞嘧啶。
但现有的抗真菌药物耐药情况严重，需开发新药物改善现状。
关键字：白色念珠菌；抗真菌药物；检测方法20世纪70年代以来，由于艾滋病大流行和现代医学的一些进步（包括大规模化疗、器官移植、免疫抑制和植入式医疗设备）。
真菌感染大幅度增加，对人类健康造成了很大威胁[1]。
白色念珠菌是一种常见的真菌病原体。
白色念珠菌是一种机会性致病真菌，通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式（芽生菌丝相）侵入细胞引起疾病[2]。
白色念珠菌病对人体造成不可逆的损害，严重威胁人体健康。
及时的检测到白色念珠菌，在感染早期进行治疗，合理的应用抗真菌药物，积极有效的控制白色念珠菌病。
现将白色念珠菌的检测方法以及抗真菌药物的研究进展展开综述，旨在为临床控制白色念珠菌病提供科学依据。
1.检测方法白色念珠菌病的伤害性大、病死率高。
选择合适的检测方法，及时准确的诊断深部真菌，有效的发出检验报告对临床诊断尤为重要。
白色念珠菌的检测方法有直接镜检、白色念珠菌培养、组织病理学检测、血清学方法、PCR技术、肽核酸荧光原位杂交技术（PNA-FISH）和靶向分子直接检测等[3]。
直接镜检、白色念珠菌鉴定以及组织病理学检测是较为传统的检测方法。
其中白色念珠菌培养鉴定（Vitek-2 Compact型全自动微生物分析仪、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MS））将培养后的真菌进行检测，可明确病原菌的名称。
是诊断白色念珠菌病的金标准。
但存在培养时间较长这一缺陷，对于临床诊断有一定的影响。
血清学方法主要G试验。
白色念珠菌与抑菌效力检查方法
表
类别
产品分类
药品
1 类 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、 制剂、 耳用 制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于 局部给药制剂、 黏膜的乳剂 3类 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 4类 非固体抗酸制剂
抑菌剂效力测定 概述 1、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、 、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、 非灭菌制剂中抑菌剂的活性， 非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终 产品的抑菌效力， 产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产 企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。 企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。 2、如果药物本身不含有充分的抗菌活性， 、如果药物本身不含有充分的抗菌活性， 那么应根据制剂特性（如水溶液制剂） 那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添 加适宜的抑菌剂， 加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存 和使用过程中可能发生微生物污染和大量 繁殖尤其多剂量包装的制剂， 繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物 微生物污染及对患者造成伤害。 微生物污染及对患者造成伤害。
2、如平板上生长的菌落与上述菌落形态特 、 征相符或疑似，应挑选2～ 个菌落分别接 征相符或疑似，应挑选 ～3个菌落分别接 种至念珠菌显色培养基平板上，培养24～ 种至念珠菌显色培养基平板上，培养 ～ 48小时（必要时延长至 小时）。若平 小时（ 小时）。 小时 必要时延长至72小时）。若平 板上无绿色或翠绿色的菌落生长， 板上无绿色或翠绿色的菌落生长，判供试 品未检出白色念珠菌。 品未检出白色念珠菌。 3、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色， 、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色， 挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温 吐温80 挑取相符或疑似的菌落接种于 吐温 玉米琼脂培养基上，培养24～ 小时 小时。 玉米琼脂培养基上，培养 ～48小时。 取培养物进行染色，镜检及芽管试验。 取培养物进行染色，镜检及芽管试验。
妇科念珠菌感染3种微生物检验方法的效果观察研究
妇科念珠菌感染3种微生物检验方法的效果观察研究妇科念珠菌感染是女性常见的妇科疾病之一，念珠菌是一种常见的真菌，在女性生殖道中也常见。
念珠菌感染主要表现为白色凝块样分泌物增多、阴道瘙痒、灼热感或排尿疼痛等症状。
为了准确诊断和治疗妇科念珠菌感染，需要进行微生物检验，目前常用的方法有湿片镜检、培养法和PCR技术。
湿片镜检是最常用的念珠菌检测方法之一。
它通过在显微镜下观察样本中的真菌形态和特征，以确诊念珠菌感染。
湿片镜检简便快捷，可以直接观察样品中的真菌形态，对初诊的念珠菌感染有较高的敏感性和特异性。
通过湿片镜检，可以迅速确定感染的念珠菌种类和数量，为进一步治疗提供依据。
培养法是常用的细菌和真菌检测方法之一，它通过将患者样本培养在特定的培养基上，利用真菌的生长特性来确定是否存在念珠菌感染。
培养法具有较高的特异性和准确性，可以检测到低浓度的念珠菌。
但是培养法的缺点是时间较长，一般需要3-7天才能得到结果，给治疗带来了一定的延迟。
PCR技术是一种高灵敏度的念珠菌分子生物学检测方法。
它通过特异性引物和荧光探针来扩增和检测念珠菌的特定基因序列，可在短时间内获得结果。
PCR技术具有高度灵敏度和特异性，可以检测到非常低浓度的念珠菌，对念珠菌感染的早期诊断具有重要意义。
但是PCR技术的操作复杂，设备要求较高，而且相对于湿片镜检和培养法来说，成本较高。
经过观察研究，我们发现湿片镜检、培养法和PCR技术在诊断妇科念珠菌感染方面各有优势。
湿片镜检具有操作简便、结果迅速的优点，适用于临床初诊和快速筛选。
培养法具有较高的特异性和准确性，可以检测到低浓度的念珠菌，对感染的念珠菌种类和数量有更准确的判断。
PCR技术具有高灵敏度和特异性，可以用于早期诊断和监测治疗效果。
在临床实践中，根据患者病情和实验室条件选择合适的检测方法，以提高准确诊断率和治疗效果。
3类产品抑菌效力检查方法
1 检查内容及步骤 1.1 菌种确认1.2 培养基确认确认人及日期：复核人及日期：6.3培养条件确认6.3.1本检查法中细菌、控制菌的培养温度为 ℃，真菌的培养温度为 ℃。
6.3.2培养箱确认确认人及日期： 复核人及日期：6.4样品来源确认确认人及日期：复核人及日期：6.5操作环境确认为的洁净区域以内，局部（操作台）为级并单向流空气。
确认人及日期：复核人及日期：7 培养基的适用性检查7.1抑菌剂效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
7.2菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC(B)10 104〕大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC(B) 44 102〕金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC(B)26 003〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC(F) 98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC(F) 98 003〕7.3菌液制备7.3.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养24～48小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。
抑菌剂效力测定
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一、概述
抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以 评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶 段抑菌剂的确定。
如果药物本身不含有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶 液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存和使用过程中可 能发生微生物污染和大量繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物微 生物污染及对患者造成伤害。
抑菌剂效力测定
举例
1、氯化钠注射液、碳酸氢钠注射液不含抑菌剂加入菌从初始到 6h就开始无限增加，不具抑菌力，抗病毒口服液从初始到24 h对 数值无变化，72h后明显降低，具一定的抑菌力。
2、呋麻滴鼻液、硫糖铝混悬液、阿昔洛韦滴眼液、鲸脂滴耳液、 洁尔阴洗液从初始值到7天后计算值大于1.0 lg降低值，从初始值 到14天后计算值大于3.0 lg,具较强的抑菌效力。
取白色念珠菌、黑曲霉孢子各50～100cfu，分别注入无菌平皿中， 立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿， 混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；
同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
结果判定
被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%，菌落 形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性 检查符合规定。
菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
培养基的适用性检查
适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌各50～100cfu，分 别注入无菌平皿中，立即倾注胰酷胨大豆琼脂培养基，每株试验菌 平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；
抑菌效果的检测方法
抑菌效果的检测方法
另外，我们还可以从化学角度来考虑。
常见的抑菌效果检测方法包括最小抑菌浓度法和扩散法。
最小抑菌浓度法是将不同浓度的待测物溶液与一定数量的细菌接种在琼脂培养基上，培养一段时间后观察最低浓度的待测物能够抑制细菌生长。
扩散法是将待测物溶液加在琼脂培养基上，待其凝固后在琼脂上打孔，然后在孔中加入一定数量的细菌液，培养一段时间后观察抑菌圈的直径来评价抑菌效果。
此外，还可以从临床角度考虑。
在医药领域，抑菌效果的检测方法包括在体外和体内实验。
在体外实验中，可以使用培养皿法或微量稀释法来评价抗菌药物的抑菌效果。
在体内实验中，可以通过动物模型来评价抗菌药物的疗效和抑菌效果。
综上所述，抑菌效果的检测方法涉及微生物学、化学和临床等多个领域，不同的方法各有优劣，选择合适的方法取决于具体的实验要求和研究目的。
希望以上信息能够对你有所帮助。
抑菌剂效力检查法指导原则
抑菌剂效力检查法指导原则抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。
如果药物本身不具有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖，尤其是多剂量包装的制剂，避免因药物微生物污染及变质而对患者造成伤害。
在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非灭菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。
所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。
同时，为保证用药安全，最终包装容器中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。
要求具有抗菌活性的制剂（参见制剂通则），不管是添加的抑菌剂，还是药物本身具有抗菌活性，在药物研发阶段，均应确认其抗菌效力。
抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而提高或降低，因此，应验证最终容器中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。
本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。
产品分类需要进行本试验的药品分为四类（见表1），以便标准的制定和执行。
表1 产品分类类别 药品1 类 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、耳用制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于黏膜的乳剂3 类 口服制剂（非抗酸制剂）4 类 抗酸制剂培养基培养基的制备1.胰酪胨大豆肉汤培养基酪蛋白胨 17.0g 磷酸二氢钾 2.5g大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0 g 氯化钠 5.0g葡萄糖 2.5g 水 1000ml 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调pH约7.0，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH使灭菌后为7.3±0.2，分装，灭菌。
2. 胰酪胨大豆琼脂培养基除上述胰酪胨大豆肉汤培养基的处方和制法，加入14.0g琼脂，调pH使灭菌后为7.3±0.2，分装，灭菌。
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2、如平板上生长的菌落与上述菌落形态特 征相符或疑似，应挑选2～3个菌落分别接 种至念珠菌显色培养基平板上，培养24～ 48小时（必要时延长至72小时）。若平 板上无绿色或翠绿色的菌落生长，判供试 品未检出白色念珠菌。
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4、1、2、3类供试品1g或1ml接种菌量为 105～106cfu，4类供试品中1g或1ml接 种菌量为106～108cfu，接种菌液的体积 不得超过供试品体积的0．5%～1% ， 充分混合，使供试品中的试验菌均匀分布。
5、将接种的供试品在试验期间置20～ 25℃，避光贮存，贮存温度的变化应尽 可能控制在最小范围，并防止被污染。
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2、若因供试品的性状或每个容器装量 等因素需将供试品转移至无菌容器时， 该容器的材质不得影响供试品的特性 （如吸附作用），特别应注意不得影 响供试品的PH，PH对抑菌剂的活性影 响很大，同时容器的口径大小应便于 供试品的进出及混匀。
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3、 取包装完整的供试品至少5份，直接接 种试验菌，或取适量供试品分别转移至5 个适宜的无菌容器中（若试验菌侏数超过 5株，应增加相应的供试品份数），每一 容器接种一个试验菌。
3、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色， 挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温80 玉米琼脂培养基上，培养24～48小时。 取培养物进行染色，镜检及芽管试验。
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4、芽管试验 挑取1%吐温80玉米琼 脂培养基上的培养物，接种于加有一 滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置 湿润的平皿内，置35～37℃、1～3h， 置显微镜下观察，可见到由孢子长出 短小芽管。
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适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即 倾注胰酷胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行 制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养 48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50～ 100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏 葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平 皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计 数；同时，用对应的对照培养基替代被检培养 基进行上述试验。
5、若上述疑似菌为非革兰阳性菌，显 微镜未见厚膜孢子、假菌丝、芽管， 判供试品未检出白色念珠菌。
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抑菌剂效力测定
概述
1、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、 非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终 产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产 企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。
2、如果药物本身不含有充分的抗菌活性， 那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添 加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存 和使用过程中可能发生微生物污染和大量 繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物 微生物污染及对患者造成伤害。
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3、所有抑菌剂都具有一定的毒性， 而且在贮存过程中其有效性有可能因 药物的活性成分提高或降低，为保证 药品的质量和用药安全，添加防腐剂 的量应根据制剂本身是否具抗菌活性， 保持最低有效量并在药品包装上注明 添加抑菌剂的名称和数量。
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培养基 1、胰酪胨大豆肉汤培养基 2、胰酪胨大豆肉汤培养基 3、 沙氏葡萄糖肉汤培养基
不少于3.0 lg ，第14天到28天菌数不增加。 真 菌 与初始值比，到7、14、28天菌数均不增加。
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结果判断
1、抑菌剂效力根据各间隔时间测定的菌数 1.0 lg值相对于初始值（0时菌数1.0 lg值） 减少程度进行评价（见表），试验结果按有 效数字的修约规则进舍，保留一位小数点。 结果符合表，要求可判断该产品抑菌效力符 合规定。
.Leabharlann 表 防腐剂抗菌效力标准1类供试品 细 菌 7天菌数下降不少于1.0 lg，14天菌数下降
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表 产品分类
类别
药品
1 类 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、 耳用 制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于
黏膜的乳剂 3 类 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 4 类 非固体抗酸制剂
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菌种和菌液的制备同培养基适用性检查 供试品接种
1、抑菌剂效力可能受试验用容器特征的影响，如 容器的材质、形状、体积及封口的方式等。因此， 只要供试品每个包装容器的装量足够试验用，同 时容器便于按无菌操作的接入试验菌液、混合及 取样等，一般应将试验菌直接接种于供试品原包 装容器中进行贮存。
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结果判定 被检培养基的菌落数与对照培养基菌 落数相比大于70%，菌落形态大小应 与对照培养基上的菌落一致。判该培 养基的适用性检查符合规定。
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抑菌剂效力测定 供试品分类 为了达到试验目的，根据供试品的给药 途径和用途将供试品分为四类，以便标 准的制定和执行，但对于一些抗酸性制 剂和含活生物制剂应考虑会降低有益菌 的生物活性。见表
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培养基的适用性检查 菌种
铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa） 金黄色葡萄球菌（staphycococcus） 白色念球菌（Candida albicans）] 黑曲霉（Aspergillus niger） 大肠埃希菌（Escherichia Coli） 菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
白色念珠菌检查方法
1、增菌培养 取供试液10ml（相当于 供试品1g、ml、10cm2）直接或处理 后接种至适量（不少于100ml）的沙 氏葡萄糖肉汤培养基中，培养48～72 小时。
2、分离培养 取上述培养物划线接种 于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，培 养24～48小时（必要时延长至72小 时）。
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结果判断
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存活菌数测定
由于供试品中含有抑菌活性，所以菌数 测定方法应进行验证。根据菌数测定结 果，计算1ml(g)供试品各试验菌所加的 菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg 值。
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测定细菌用胰酷胨大豆琼脂培养基，测定真菌 用沙氏葡萄糖琼脂培养基 根据产品类型，在规定的接种时间，分别从上 述每个容器中取供试ml(g)，用pH7.0无菌氯化 钠-蛋白胨缓冲液稀释成1：10、1：102、1： 103等稀释级。