葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法是一种检测血糖的重要方法，被广泛用于从心血管疾病到糖尿病检测等多种临床诊断和研究领域。
它可以帮助医生们诊断病人的血糖水平，以便确定合适的治疗方案，或者针对糖尿病患者的进一步管理。
在过去的十年里，葡萄糖氧化酶法不断改进，以提高检测灵敏度和准确度，提供更加可靠的诊断结果。
葡萄糖氧化酶法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖发生反应的原理，葡萄糖氧化酶是一种酶，具有将不可溶性的葡萄糖氧化到果糖的能力，葡萄糖含量越高，葡萄糖被氧化的速度就越快，反应的活性也就越强。
葡萄糖氧化酶法是利用这种反应特性，将样本中的葡萄糖氧化到果糖，并采用光学测定的方法检测果糖的浓度，从而实现血糖检测。
葡萄糖氧化酶法的检测过程通常包括样品前处理，反应检测和数据分析三个步骤。
样品前处理主要是用来处理样品，去除干扰物质，使其在实验室中稳定存放，以便进一步测定。
反应检测需要将样品、葡萄糖氧化酶溶液和可变因子（温度、pH值等）混合在一起，在一定条件下，葡萄糖会被氧化到果糖，而检测其反应活性，即可获得血糖浓度值。
最后，通过数据分析把检测结果转换成血糖浓度值，完成整个检测过程。
葡萄糖氧化酶法有着众多优点，其中最主要的一点是准确率高。
因葡萄糖氧化酶具有较强的反应活性，而且反应过程也是快速的，所以其准确率较高，可以更准确的测定血糖的含量。
此外，葡萄糖氧化酶法的另一个优点是样本量少，它可以用非常少的血液样本来测定血糖的含量，相比于其他检测方法，它可以减少患者的抽血量，减轻患者的负担。
虽然葡萄糖氧化酶法有着许多优点，但也存在一定的缺点。
首先，葡萄糖氧化酶法必须在一定温度和PH值范围内才能得到准确的结果，所以检测过程受异物的干扰较大，特别是有较多异物存在的样品，检测准确性会受到一定影响。
另外，它需要借助复杂的仪器设备和先进的技术，只有在实验室条件下才能进行测定，不利于家庭自测。
总的来说，葡萄糖氧化酶法是一种重要的血糖检测方法，它具有准确性高，样本量少，但由于它受到温度和异物的影响较大，以及测定需要专业仪器设备，因此也不利于家庭自测。
葡萄糖测定方法操作规程
葡萄糖（GLu）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：葡萄糖（GLu）测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）使用说明书【摘要】糖是人体的主要供能物质，也是组织细胞的主要成分。
血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖症状。
1.病理性高血糖：（1）原发性糖尿病（2）内分泌疾病：嗜铬细胞瘤、甲状腺毒瘤、肢端肥大症、巨人症、Cushing综合征、高血糖素细胞瘤；（3）胰腺疾病：急性或慢性胰腺炎、流行性腮腺炎引起的胰腺炎、胰腺囊性纤维化、血色病（血红蛋白沉着症）等；（4）抗胰岛素受体抗体与有关疾病：棘皮症、Wernicke’s脑病。
2.病理性低血糖：（1）胰岛细胞瘤、高血糖素缺乏；（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长激素、肾上腺皮质激素和甲状腺素分泌减少；（3）严重肝病患者，肝细胞糖原储存不足及糖原异生功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
【预期用途】该试剂盒采用葡萄糖氧化酶法，用于体外定量测定人血清或血浆中葡糖糖的含量。
【检验原理】葡糖糖被葡萄糖氧化酶氧化后生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，与4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠缩合，生成醌系色素，通过测定此反应的吸光度可求得葡糖糖的含量。
D-2葡萄糖氧化酶D-葡萄糖醛酮+H2O22 H2O2 + 4-APP ++ H3O+POD醌系色素+ 5H2O【主要组成成份】试剂1（R1）：磷酸盐缓冲液100 mmol/L抗环血酸氧化酶4700 U/L葡糖糖氧化酶4000 U/L试剂2（R2）：磷酸盐缓冲液100 mmol/L过氧化物酶6700U/L4-氨基安替比林0.7 mmol/L对羟基苯甲酸钠 1.3 mmol/L校准品：葡萄糖溶液。
*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【试剂准备】R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂【储存条件与有效期】未开启的试剂盒避光保存于无腐蚀性气味和通风良好的室内，在2℃~8℃有效期为一年。
实验八血糖的测定（葡萄糖氧化酶法）
实验十 血糖的测定血液中的葡萄糖称血糖。
正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。
血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。
其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。
因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。
血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。
下边介绍两种方法供选择。
一、葡萄糖氧化酶法【目的】1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。
2. 掌握血糖测定的临床意义。
【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。
后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。
其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。
反应式如下：2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物POD2H 2O2H 2O 2O 2葡萄糖+葡萄糖酸+GOD+【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。
2. 酶试剂称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。
血清葡萄糖的测定(GOD_POD法)
2020/4/6
实验试剂
器材
5ml移液管，50或100ul微量可调式移液管,721E型分光光度计，1比色皿， 37度恒温水 浴锅。
试剂
0.1磷酸盐缓冲液（Ph=7.0） 称取无水磷酸二氢钾5.3g，溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0,定容至1L 酶试剂 取过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶入磷酸 盐缓冲液80ml中，调节pH值至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置于4度 保存，可稳定存在3个月。 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg，溶入蒸馏水100ml中，用棕色瓶储存。 酶-酚混合试剂 将酶试剂及酚溶液等量混合，4度可放一个月。
3. 严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液， 然后在进行测定。
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2020/4/6
临床意义
生理性高血糖：可见于摄入高糖食物后，或紧张情绪肾上腺素分泌增加时。
病理学高血糖：1.糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患 者。2.内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进， 引起各种对抗胰岛素的激素分泌过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，现 已归入特异性糖尿病中。3.颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤，颅内出血，脑 膜炎等，引起血糖增高。4.脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻和高热等也可使血 糖轻度增高。
6
2020/4/6
实验操作
试剂 血清/μL 葡萄糖标准液/μL 蒸馏水/μL 酶酚混合试剂/μL
空白管 -
0.02 3.00
标准管 -
0.02 -
3.00
测定管 0.02 3.00
混匀，置于37°C水浴中，保温25min，在波长510nm处比色，以空白管 调零，读取标准管和测定管的吸光度。
葡萄糖氧化酶法测空腹血糖(标准管法)
葡萄糖氧化酶法测空腹血糖（标准管法）实验目的：1.了解自动生化分析仪的工作原理2.熟悉糖尿病相关生化的检测项目及检测方法3.掌握糖尿病相关生化检测项目的临床意义。
实验原理：葡萄糖氧化酶法测空腹血糖:葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者与苯酚及4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下产生红色化合物。
在505nm波长测定该红色化合物的吸光度，能计算出葡萄糖含量。
实验操作：1.将准备好的酶工作液（葡萄糖氧化酶和过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替比林）加入空白管、浓度标准管、测定管各3ml，再向标准管加20μl葡萄糖标准液（5.55mmol/L），再向测定管加入20μl血清。
2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟3.调节分光光度计波长505nm,透光度T至100%，将空白管酶工作液对光的吸收调节为0，再用空白管调“零”点测定其他各管的吸光度。
实验结果：分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品血糖值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.55分析讨论：酶酚混合液变成了红色是否还可以继续使用？不可以。
酶酚混合液应为无色，如酶酚混合液已经变为红色，说明试剂污染，不可使用。
思考题：1.高血糖对机体的影响有哪些？1)引起血管、神经并发症。
糖尿病患者长期高血糖会使血管、神经并发症发生和发展使病情加重。
2)β细胞功能衰竭。
长期高血糖对胰岛β细胞不断刺激，使其功能衰竭，胰岛素分泌更少。
3)电解质紊乱。
高血糖时大量排尿，从尿带走电解质，使电解质紊乱。
4)严重失水。
高血糖引起渗透性利尿，尿量增加，机体失水。
5)渗透压增高。
高血糖时，细胞外液渗透压增高,细胞内液向细胞外流动，导致细胞内失水。
当脑细胞失水时，可引起脑功能紊乱，临床上称高渗性昏迷。
6)全身乏力。
血糖过高，葡萄糖不能很好地被机体吸收利用而从尿中排出。
7)视力减退。
血糖升高时，眼睛视力往往减退。
2.糖尿病患者为何会出现尿糖阳性？糖尿病患者的血糖超过肾糖阈（8.96～10.08mmol/L）时，近端小管对葡萄糖的重吸收达到极限，尿中开始出现葡萄糖。
葡萄糖氧化酶法的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除葡萄糖氧化酶法的实验报告篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。
2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。
3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。
4．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。
5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。
6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。
2h以后方可使用。
7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2．手工操作法取试管3支，按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
【计算】【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。
血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)
血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）血糖是指血液中葡萄糖的含量。
葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。
这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。
一、实验原理血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。
具体反应式为：(1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2(2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2(3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物）其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。
二、实验材料1.血糖标准品：10mmol/L2.葡萄糖氧化酶3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH）4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管三、实验步骤1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。
2.实验组织：3个组别，每组3个试管。
A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。
注意，每组要做三个平行实验。
3.反应体系准备：①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。
②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。
③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。
⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。
⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。
4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。
第二章实验六血糖含量的测定_葡萄糖氧化法
（三）试剂 1．0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.0） 2．酶试剂 3．1 g/L酚试剂 4．酶-酚混合试剂 5．12 mmol/L苯甲酸钠溶液 6．100 mmol/L葡萄糖标准贮存液 7．5 mmol/L葡萄糖标准应用液 8．血清
三、实验步骤
取3支试管，按表14-1加入各试剂。
表14-1 血糖测定各试剂及用量
一、实验背景
血液中的糖主要是葡萄糖，称为血糖，其含量较恒定。正常 情况下，人空腹血糖值为3.9-6.1 mmol/L。血糖浓度的相对恒 定既可维持稳定的能源供给，满足机体各种生理状态下的能 量需求；又能保证机体不因进食导致血糖浓度过高，引起心 血管疾病等并发症的发生。因此，血糖的测定是临床生化的 常规检测项目。
5．GOD对β-D葡萄糖高度特异，但无水葡萄糖结晶属 于α型。部分α型葡萄糖溶于水后，发生变旋作用形成β型， 2小时后α与β型比例达成平衡，约各占36%和64%，因此 葡萄糖标准液需在葡萄糖溶解2小时后（最好过夜）才能 应用。
6．GOD-POD法由GOD催化的第一步反应特异性高， 而由POD催化的第二步指示反应是非特异性的，因标本 中尿酸、维生素C、谷胱甘肽、胆红素等还原物质可与 H2O2竞争色原受体，使测定结果偏低。由于尿液中尿酸 等干扰物质浓度过高，因而本法不适用于尿糖的测定。
葡萄糖氧化酶法测定血糖的反应原理为：葡萄糖氧化 酶（Glucose oxidase，GOD）能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸 和H2O2；后者在过氧化物酶（Peroxidase，POD）作用下， 被分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化 缩合生成红色的醌亚胺，即Trinder反应。
其颜色的深浅在480-550 nm波长内与血清中葡萄糖 的量成正比，在505 nm波长处测定吸光度，与标准管比 较可计算出血糖的浓度。
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葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖
【原理】
葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】
1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定
3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。
5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。
2h 以后方可使用。
7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】
1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2 ．手工操作法取试管
3 支，按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
【计算】
【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。
【临床意义】
1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。
2 ．病理性高血糖
(1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
(2) 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。
引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。
注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。
(3) 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
(4) 脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3 ．生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动。
4 ．病理性低血糖 ( 特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等 )
(1) 胰岛β 细胞增生或胰岛β 细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。
(2) 对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。
(3) 严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
【注意事项】
1 ．葡萄糖氧化酶对β - D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约 36% 为α 型，64% 为β 型。
葡萄糖的完全氧化需要α 型到β 型的变旋反应。
国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。
新配制的葡萄糖标准液主要是α 型，故须放置 2h 以上 ( 最好过夜 ) ，待变旋平衡后方可应用。
2 ．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。
因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。
3 ．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好。
取草酸钾 6g ，氟化钠 4g 。
加水溶解至 100ml 。
吸取 0.1ml 到试管内，在 80 ℃以下烤干使用，可使 2 ～
3ml 血液在 3 ～ 4 天内不凝固并抑制糖分解。
4 ．本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠。
5 ．严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。
【评价】线性范围至少可达 22.24mmol/L ，回收率 94% ～ 105% ，批内 CV 为0.7% ～ 2.0% 。
批间 CV 为 2% 左右，日间 CV 为 2% ～ 3% 。
葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较， 73 份标本葡萄糖氧化酶法均值为 8.31mmol/L ，已糖激酶法均值 8.21mmol/L ，相关系数为 0.998
6 ，回归方程 y=1.0026x － 2.29 。
本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。
误差往往发生在反应的第二步。
一些还原性物质如尿酸、维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。
然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达 10g/L ，黄疸标本胆红素浓度达342 μ mol /L ，维生素 C 小于 30mg/L ，均不影响测定结果。
氟化钠浓度达 2g/L 不干扰测定结果。
标本中含尿素浓度达 46.7mmol/L ，尿酸浓度达 2.95mmol/L ，肌酐浓度达 4.42mmol/L 。
半胱氨酸浓度达 3.30mmol/L ，甘油三酯浓度达 5.6mmol/L ，胆固醇 4.40 mmol/L ，对测定结果均无显著影响。
左旋多巴 100mg/L ，维生素 C 5mg/L 以上，谷胱甘肽 100mg/L 时，可引起负误差；半胱氨酸达 10mmol/L 时，产生相当 0.72mmol/L 葡萄糖的正误差。