基因表达的检测的几种方法
rt-pcr检测基因表达水平的原理
rt-pcr检测基因表达水平的原理RT-PCR（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）是一种常用的分子生物学技术，用于检测基因表达水平。
其原理是通过逆转录将RNA转化为cDNA，并利用聚合酶链式反应（PCR）扩增目标基因的序列，最终定量检测目标基因的表达水平。
下面将详细介绍RT-PCR的原理。
1.逆转录（Reverse Transcription）逆转录是RT-PCR的第一步，主要是将目标基因的RNA转化为互补的DNA，即cDNA。
逆转录反应需要逆转录酶（Reverse Transcriptase）和引物（Primers）的参与。
首先，待检测的RNA通过加热来解旋成为单链。
然后，在逆转录反应中，引物（Primers）结合在RNA的末端，提供一个起始点。
逆转录酶（Reverse Transcriptase）将引物作为模板，合成互补的DNA链。
引物一般选择Oligo-dT引物，它可以与RNA的多聚腺苷酸尾端结合，从而引导逆转录酶合成cDNA链。
此外，逆转录反应还需要dNTP（脱氧核苷酸三磷酸盐）和逆转录缓冲液等辅助物资。
2. PCR扩增（Polymerase Chain Reaction）逆转录后得到的cDNA是目标基因的复制物。
为了增加检测敏感性，需进一步扩增cDNA序列。
在PCR扩增过程中，引物（Primers）的作用是选择目标基因的特异序列，通过引物与目标序列的互补配对，使DNA聚合酶（DNA Polymerase）能够在相应的温度下在该位置合成新的DNA链。
PCR扩增需要参与的物质有DNA聚合酶、引物、dNTP、缓冲液和模板DNA。
引物是PCR反应中的关键，其中一对引物的设计应使其能够选择性地与目标基因序列的两个位点互补，从而能够在接下来的扩增反应中产生目标DNA片段。
PCR反应一般包括三个步骤：变性、退火和扩增。
首先，通过高温（通常为94℃至96℃）变性步骤将目标DNA链分离为两个单链。
生物节律基因检测方法
生物节律基因检测方法生物节律是生物体内部生理和行为上的周期性变化，这些变化由基因控制，并与地球的昼夜节律密切相关。
随着科学技术的发展，生物节律基因检测方法已逐渐成为研究的热点。
本文将为您详细介绍生物节律基因检测的相关方法。
一、概述生物节律基因检测旨在揭示生物体内部节律性变化的遗传机制，为生物节律调控、疾病预防与治疗提供科学依据。
目前，研究人员已开发出多种生物节律基因检测方法，主要包括以下几种：1.基因敲除与基因敲入技术2.基因表达谱分析3.基因突变检测4.蛋白质组学分析5.生物信息学方法二、具体检测方法1.基因敲除与基因敲入技术基因敲除技术通过破坏目标基因，观察生物体节律性变化，从而揭示基因在生物节律调控中的作用。
基因敲入技术则是在生物体内引入外源基因，研究其功能。
这两种技术均可用于生物节律基因的研究。
2.基因表达谱分析基因表达谱分析是通过检测生物体在不同时间点的基因表达水平，分析基因表达与生物节律的关系。
这种方法的优点是能同时研究多个基因的表达变化，有助于揭示生物节律调控网络的复杂性。
3.基因突变检测基因突变检测是针对已知生物节律基因的突变进行检测，分析突变对生物节律的影响。
这种方法有助于发现新的生物节律基因及突变类型。
4.蛋白质组学分析蛋白质组学分析是通过研究生物体在不同时间点的蛋白质表达变化，揭示生物节律调控的分子机制。
这种方法的优点是能直接反映蛋白质水平的变化，有助于发现新的生物节律调控因子。
5.生物信息学方法生物信息学方法是通过构建生物节律基因调控网络，预测生物节律基因的功能和相互作用。
这种方法可以在大规模基因组数据中挖掘生物节律基因，为实验研究提供线索。
三、总结生物节律基因检测方法的研究为揭示生物节律的遗传机制提供了有力手段。
随着科学技术的不断发展，更多高效、准确的检测方法将被开发出来，为生物节律调控及相关疾病的研究提供有力支持。
四 目的基因的检测与表达产物的测定
2021/6/16
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基因工程的概念
基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。通俗 的说就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取 出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 定向的改造生物的遗传性状。
供体 细胞
目的 基因
受体 获得新 细胞 性状
2021/6/16
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用 未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是
未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱
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（1）从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA）。 （2）将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上
抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 （3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有
筛选 含有 目的 基因 的受 体细 胞
目的 基因 在受 体细 胞中 是否 转录
是否 翻译 出相 应的 蛋白 质
获得新 性状 7
1.检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键。 ——DNA分子杂交
检测方法是：采用DNA分子杂交技术。先将转基因生物 的基因组提取出来；把目的基因的DNA片段用放射性同 位素作标记做成探针；使探针与基因组DNA杂交，如果 出现杂交带，就表明目的基因已插入染色体DNA中。
（kanr）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因
的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗
虫棉的技术流程。
“汉水丑生 的生物 同行” 超级群大 型公益 活动： 历年高考题PPT版制 作。本课件为公益作 品，版权所有，未经 允许不得擅自修改或 用于任何形式的商业 用途。2012年1月 15日， 汉水丑生标记。
检测dna的方法
检测dna的方法DNA检测是一种常见的生物技术方法，它可以用于确定个体的遗传信息、亲子鉴定、疾病诊断等多个领域。
本文将介绍几种常见的DNA检测方法，包括PCR法、基因芯片技术和基因测序技术。
首先，PCR法是一种常用的DNA检测方法。
PCR全称为聚合酶链式反应，它是一种体外扩增DNA的技术。
通过PCR法可以在短时间内扩增出目标DNA片段，从而进行进一步的检测和分析。
PCR法的原理是通过酶的作用，将DNA片段进行多次循环的复制，最终得到大量的目标DNA。
PCR法的优点是操作简便、快速高效，适用于对DNA进行扩增和检测。
其次，基因芯片技术是一种高通量的DNA检测方法。
基因芯片是一种微阵列技术，它可以同时检测上千种基因的表达情况。
基因芯片技术的原理是将DNA片段固定在芯片上，通过杂交反应来检测样本中的DNA序列。
基因芯片技术可以广泛应用于基因表达分析、基因型鉴定等领域，具有高通量、高灵敏度和高特异性的特点。
最后，基因测序技术是一种精准的DNA检测方法。
基因测序是指对DNA序列进行逐个碱基的测定和分析，从而得到DNA的完整序列信息。
基因测序技术的发展为我们提供了更加精准和全面的DNA 检测手段，可以用于基因突变的检测、疾病基因的筛查等领域。
随着新一代测序技术的发展，基因测序的成本和时间成本不断降低，使得基因测序技术在医学、生物学等领域得到了广泛的应用。
综上所述，PCR法、基因芯片技术和基因测序技术是几种常见的DNA检测方法，它们各自具有不同的特点和应用范围。
随着生物技术的不断发展，我们相信会有更多更精准的DNA检测方法出现，为人类健康和生活质量的提高提供更多的可能性。
DNA检测方法的不断创新和完善，将为我们带来更多的惊喜和希望。
PCR分为几类
PCR分为几类PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，可以在体外迅速扩增DNA 片段。
PCR的应用广泛，可以用于基因检测、疾病诊断、遗传学研究等领域。
根据PCR 的目的和方法不同，可以将其分为以下几类。
1. 标准PCR标准PCR是最基本的一种PCR方法，也是最常见的一种。
它包括三个主要步骤：变性、引物结合和扩增。
在变性步骤中，样本中的DNA被加热使其解旋成两条单链。
然后，在引物结合步骤中，两个特异性引物与目标DNA序列的两端结合。
最后，在扩增步骤中，DNA聚合酶通过引物在目标序列上进行扩增，生成大量目标DNA。
2. 实时定量PCR实时定量PCR是一种可以定量测定起始DNA数量的PCR方法。
与标准PCR不同，实时定量PCR在扩增过程中同时进行荧光信号检测。
这种PCR方法可以利用荧光染料或探针来监测PCR产物的数量，从而在扩增过程中实时定量目标DNA的起始数量。
实时定量PCR在基因表达分析、病原体检测和突变分析等方面有广泛的应用。
通过测定样品中特定基因的表达水平或病原体的数量，可以获得有关相应生物学过程或疾病状态的重要信息。
3. 反转录PCR（RT-PCR）反转录PCR是一种结合了逆转录和PCR的技术。
逆转录是将RNA转录为DNA的过程，通过反转录酶，目标RNA可以合成互补的DNA（cDNA）。
然后，使用PCR方法扩增cDNA，以便测定RNA的存在和定量。
RT-PCR广泛应用于基因表达研究和病毒检测等领域。
通过测定目标基因的mRNA 水平或检测病毒RNA的存在，可以了解基因表达的水平或病毒感染的情况。
4. 数字PCR数字PCR是一种精确测定DNA分子数量的PCR方法。
与传统PCR不同，数字PCR 将DNA分为许多微小的反应容器，并分别进行扩增。
通过计算阳性和阴性反应容器的数量，可以确定样品中DNA的精确浓度。
数字PCR在基因拷贝数分析、细胞自由DNA检测和胚胎植入前遗传诊断等方面有广泛的应用。
真核细胞常用几种基因表达检测方法比较论文
关于真核细胞常用几种基因表达检测方法的比较【摘要】目前国际上对真核细胞基因的表达调控机制研究的已经相当深入了，相对应得对基因表达的产物的检测也逐渐多了起来。
首先基因表达的最终产物分为rna和蛋白质。
所以所有的检测方法都是以此为基础进行的。
其中以rna为检测底物的方法有：rt-pcr，northern blot等。
以蛋白质为检测的底物的方法有：elesa，western blot，免疫组化等。
各种方法有其适用范围及优缺点，本文就其最新进展及常用方法作一个阐述及总结。
【关键词】rt-pcr；northern blot；elisa；western blot；免疫组化真核细胞比原核细胞复杂的多，基因表达调控机制也不一样。
以介绍常用的真核细胞基因表达的检测方法来引导读者更深层次的理解真核细胞基因表达的复杂性。
更加全面得理解真核细胞的复杂隔室结构与其基因表达的关系。
及解决一些实验过程中常见的错误。
1.以rna为底物的检测方法1.1 rt-pcrrt-pcr为反转录rcr（reverse transcription pcr）的缩写。
逆转录pcr，或者称反转录pcr（reverse transcription-pcr，rt-pcr），是聚合酶链式反应（pcr）的一种广泛应用的变形。
在rt-pcr中，一条rna链被逆转录成为互补dna，再以此为模板通过pcr进行dna扩增。
由一条rna单链转录为互补dna（cdna）称作“逆转录”，由依赖rna的dna聚合酶（逆转录酶）来完成。
随后，dna的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖rna的dna聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的pcr。
原先的rna模板被rna 酶h降解，留下互补dna。
rt-pcr的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的rna。
rt-pcr广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种rna的含量。
试剂为：oligo多聚体，相当于mrna引物，amv（m-mlv）：逆转录酶dntp：脱氧核苷酸，rnase：rna酶抑制剂，pcr buffer：rt-pcr缓冲液，mgcl2：2价镁离子。
检测目的基因的方法
检测目的基因的方法
目的基因的检测是分子生物学和遗传学研究中的重要内容之一，它可以帮助科
研人员了解基因的功能、表达及调控机制，对于疾病的诊断和治疗也具有重要意义。
目前，常见的检测目的基因的方法包括PCR、基因克隆、基因组编辑等，下面将
对这些方法进行详细介绍。
首先，PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的目的基因检测方法。
它通过酶的
作用，在体外扩增目的基因的DNA片段，从而使得目的基因的检测变得更加容易
和快捷。
PCR技术具有高灵敏度、高特异性和高效率的特点，可以应用于基因突
变的检测、基因表达水平的分析等领域。
其次，基因克隆也是一种常见的目的基因检测方法。
它通过将目的基因插入到
质粒或者病毒载体中，然后将其导入到宿主细胞中，使得目的基因在宿主细胞中进行表达。
通过对表达产物的检测和分析，可以了解目的基因的功能及其在生物体内的作用机制。
另外，基因组编辑技术也是一种新兴的目的基因检测方法。
它通过人为地对基
因组进行改造，实现对目的基因的精准编辑和调控。
目前，常用的基因组编辑技术包括CRISPR/Cas9系统、TALENs系统等，这些技术可以实现对目的基因的特定
修饰，从而揭示其在生物体内的功能及调控机制。
综上所述，PCR、基因克隆和基因组编辑是目前常用的目的基因检测方法。
这
些方法各具特点，可以应用于不同的研究领域，为科研人员提供了强大的工具，帮助他们更好地了解目的基因的功能和作用机制。
随着生物技术的不断发展，相信会有更多更高效的目的基因检测方法被开发出来，为生命科学研究带来新的突破和进展。
鉴定目的基因的方法
鉴定目的基因的方法一、序列比对和分析序列比对和分析是鉴定目的基因的首要步骤。
通过将目的基因的序列与已知序列进行比对，可以确定目的基因的种类、来源和可能的相似性。
常用的序列比对和分析方法包括BLAST、Smith-Waterman算法、FASTA等。
这些方法可以确定目的基因与已知基因或蛋白质序列的相似性，从而初步鉴定目的基因。
二、功能验证功能验证是鉴定目的基因的重要手段。
通过将目的基因在细胞或生物体中进行表达，观察其表达产物是否具有预期的功能，可以进一步确定目的基因的功能。
常用的功能验证方法包括基因敲除、基因过表达、基因编辑等。
这些方法可以改变目的基因的表达水平或表达产物，从而观察其对细胞或生物体的影响。
三、表达水平检测表达水平检测可以反映目的基因在特定条件下的表达情况。
通过检测目的基因在不同条件下的表达水平，可以了解目的基因的表达调控机制，以及其在生物体中的重要作用。
常用的表达水平检测方法包括qPCR、Western blot、RNA-seq等。
四、进化树构建进化树构建可以反映目的基因在物种间的进化关系。
通过比较不同物种间的目的基因序列，可以构建进化树，从而了解目的基因的进化历程和可能的起源。
五、分子标记辅助鉴定分子标记辅助鉴定可以利用特定的分子标记来辅助鉴定目的基因。
这些分子标记可以是限制性片段长度多态性（RFLP）、可变数目串联重复（VNTR）等。
通过检测目的基因是否存在这些分子标记，可以进一步确定目的基因的种类和来源。
六、基因敲除或过表达基因敲除或过表达是鉴定目的基因功能的重要手段。
通过构建突变体或转基因植株，使目的基因不能正常表达或过量表达，可以观察其对生物体表型的影响，从而了解目的基因的功能。
常用的敲除或过表达方法包括CRISPR-Cas9技术、转录因子诱捕等。
七、蛋白质功能鉴定蛋白质功能鉴定可以通过分析目的基因表达产物的生化性质和功能，进一步确定目的基因的功能。
常用的蛋白质功能鉴定方法包括亲和层析、质谱分析、结晶学分析等。
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基因表达检测的最终技术目标是能确定所关注的任何组织、细胞的RNA的绝对表达量。可以先从样本中抽提RNA，再标记RNA，然后将这些标记物作探针与芯片杂交，就可得出原始样本中不同RNA的量。然而用于杂交的某个特定基因的RNA的量与在一个相应杂交反应中的信号强度之间的关系十分复杂，它取决于多种因素，包括标记方法、杂交条件、目的基因的特征和序列。所以芯片的方法最好用于检验两个或多个样本中的某种RNA的相对表达量。样本之间某个基因表达的差异性（包括表达的时间、空间特性及受干扰时的改变）是基因表达最重要的，而了解RNA的绝对表达丰度只为进一步的应用或多或少地起一些作用。
基因表达的检测有几种方法。经典的方法（仍然重要）是根据在细胞或生物体中所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。随着大分子分离技术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。随着重组DNA技术的运用，现在有可能检测．分析任何基因的转录产物。目前有好几种方法广泛应用于于研究特定RNA分子。这些方法包括原位杂交．NORTHERN凝胶分析．打点或印迹打点．S－1核酸酶分析和RNA酶保护研究。这里描述RT-PCR从RNA水平上检查基因表达的应用。 8 f3 f- |2 L) K) b7 ]- ~- | RT-PCR检测基因表达的问题讨论
关于RT-PCR技术方法的描述参见PCR技术应用进展，在此主要讨论它在应用中的问题。理论上1μL细胞质总RNA对稀有mRNA扩增是足够了（每个细胞有1个或几个拷贝）。1μL差不多相当于50－100，000个典型哺乳动物细胞的细胞质中所含RNA的数量，靶分子的数量通常大于50，000，因此扩增是很容易的。该方法所能检测的最低靶分子的数量可能与通常的DNAPCR相同；例如它能检测出单个RNA分子。当已知量的转录RNA（用T7RNA聚合酶体外合成）经一系列稀释，实验结果表明通过PCR的方法可检测出10个分子或低于10个分子，这是反映其灵敏度的一个实例。用此技术现已从不到1个philadelphia染色体阳性细胞株K562中检测到了白血病特异的MRNA的转录子。因此没必要分离polyA+RNA，RNA/PCR法有足够的灵敏度来满足绝大多数实验条件的需要。 7 H+ F& _* S6 W( a8 p: [, @- d, { 将PCR缓冲液同时用于反转录酶反应和PCR反应，可简化实验步骤。我们发现整个反应过程皆用PCR缓冲液的结果相当于或优于先用反转录缓冲液合成CDNA，然后PCR缓冲液进行PCR扩增循环。当然，值得注意的是PCR缓冲液并不最适合第一条DNA链的合成。我们对不同的缓冲液用于大片段DNA合成是否成功还没有进行过严格的研究。
反转录酶的选择似乎对实验方法成功与否并不十分重要。 BRL和BOEHRINGERMANNHEIM的MULV反转录酶进行全面的研究，但没有理由认为来源可靠的反转录酶不能适用于该方法。在研究中，我们仅使用了PERKINELMER/CETUS公司生产的TAQ聚合酶。
cDNA第一条链的合成可用不规则六聚体、寡聚(dT)或PCR下游引物来启动反应。如果用寡聚(dT)，一般每次反应加μL就够了。如果用下游寡核苷酸作为第一条链的起始引物，10-50pmol最为理想。反转录反应以后，加入适量的上游和下游引物进行PCR反应与用不规则六聚体方法一样。三种启动方法中无论用那一种最后得到的扩增产物都同样理想。而加入不规则六聚体似乎更容易得到前后一致的结果，且靶序列的合成量通常最多加入不规则六聚体方法一样。三种启动方法中无论用那一种最后得到的扩增产物都同样理想。而加入不规则六聚体似站更容易得到事一致的结果，且靶序列的合成量通常最多未发表)。第一条链合成完毕，不必加碱或RNA酶以除去RNA模板。95℃热处理使反转录酶失活，同时也使RNA-DNA杂合子变性。不必加碱或RNA酶以除去RNA模板。95℃热处理使反转录酶失活，同时也使RNA-DNA杂合子变性。残留的RNA模板似乎对PCR反应无干扰。 5 d' b L& Q' \ y 寻找使PCR反应产生良好扩增结果的最低浓度的寡核苷酸引物是十分重要的。我们发现过量的引物通常会产生许多妨碍随的 引物可得到非常清晰及5pmol浓度为后分析的额外扩增产物。． 有效的扩增产物。当然，最好是找到你要扩增的每个序列的最佳引物量。没有必要用全部的cDNA反应产物进行PCR扩增。可取等分量cDNA样品用几组不同的引物作PCR分析;例如:一份cDNA反应物可用于研究几种不同类型的RNA。cDNA反应物通常用PCR缓冲液衡释5倍。将cDNA的浓度隆低至，此浓度更适于Taq聚合酶。dNTP浓度不应超过，因为较高浓度的dDTP使Taq聚合酶的错误掺入或突变率增高。对于扩增来说，即使dNTP的浓度低到也不会出现问题。 ' R7 z) H' u1 ]( } 镁离子浓度对反应十分重要，因此应注意将镁的摩尔浓度保持恒定。有时核酸溶于含1mMEDTA的缓冲液中，EDTA可歼螯合大多数镁离子。通常，PCR反应中游离镁离子浓度应保持在2mM。
将PCRA循环次数减少，不可避免地产生许多非特异性的扩增产物。很容易将长度不同的DNA的扩增。即使基因组序列得到扩增，当引物与大小不同的外显子结合时，很容易将长度不同的MRNA与基因组的产物区别一来。如果不了解基因组的结构，选用与尵编码基因间隔300-400bp的引物，脊椎动物的外显子很少大于300-400bp，因此很容易从不同的外显子中导出引物。如果所研究的基因无内含子、或者研究完整原病毒RNA转录，为了获得有关PCR的结果有必要用DNA酶彻底处理RNA。只要有很少@9 9 污染，用此方法分析就会出现假阳性结果。DNA量的基因组． o- ]( v; U N# ]% r$ h ~9 |- L1 i7 ]( _+ `- h 实际应用举例 }/ W [1 T. m$ P0 F$ M+ x
基因表达检测 8 p. z L9 A' G7 J Q c8 q7 X 用该方法先后扩增，检测了许多不同类型的细胞、组织和器官的mRNA。当然，仅仅检测mRNA并没有新颖之处，它的新颖在于能对10-1000个细胞的RNA进行分析。所需起始物质比通常的低很多，这使得研究者能设计并进行以前看是不可能进行的实验。例如研究血细胞生成的研究人员经常用群体分析确定生长因子或环境对特殊细胞系发育的影响。经常部到的一个问题是:群体细胞产生的何种生长/分化因子会影响其本身的发育。现在可以确信，利用RNA/PCR技术能够对数百个群体的mRNA对任何与生长或分化有关的因子进行分析。而用常规的杂交或抗体检测方法来分析它们是极其因难、甚至是不可能的。RNA/PCR技术在研究转基因动物方面将非常有用。我们常常不仅要知道在动物体内转移的基因是否表达，而且要知道是在哪些细胞．组织或器官中表达。随着RNA/PCR检测灵敏度的提高，能够检测转基因动物的多个部位而不必为取样而将它处死。我们还可以列举许多这样的例子，但我们留给读者一些有关检测方面的设想。 4 ^$ i k2 N2 N, s( q 用于诊断的RNA序列的扩增' n. u6 Y& `! m: g( |/ Z j# i' V7 _. l f. h, e. M 在许多情况下，一个特异性的RNA分子可作为感染或遗传/癌疾病的诊断。在反转录病毒疾病领域中，检测与具有侵染活性密切相关的反转录病毒RNA基因组或特异转录子是否存在是非常重要的。现已对HIV-1病人，HTLV-1，2以及MoloneyMulV的细胞株进行了研究。也可以用RNA/PCR比较容易地检测出常见的感冒病毒即人鼻病毒。对RNA和DNA病毒的RNA转录子的分析有利于对病毒的潜伏期，复制期等生活周期进行研究。) T0 @% v7 C5 O7 z' _! ? - l$ W) p9 {+ p5 w) } 在某些类型的癌细胞中有新的mRNA表达。如慢性骨髓性白血病(CML)．某些急性淋巴白血病(ALL)和急性骨髓白血病(AML)，只在病人的白细胞中发现有嵌合的mRNA(BCR-ABL)。此嵌合mRNA是诊断此类疾病存在的良好依据。在许多肿瘤的治疗过程中，肿瘤细胞对化学治疗具有抗性。DNA水平的扩增并不一定导致表达的增加，但大量相应的mRNA的存在则使表达增加。DNA水平的扩增并不一定导致表达的增加，但大量相应的cDNA的存在则使表达增加。用RNA/PCR方法来分析复合抗药性(MDR)10基因和胸腺核苷酸合成酶(TS)基因，发现了这mRAN水平的增高.突变的RAS原癌基因的mRNA分析(见参考文献25综术述)在癌症的诊断 基因组分析DNA分析比常规的mRNA或预测方面具有诊断价值。． 有优越之处。由于没有内含子序列干扰mRNA的扩增，因此可以仅用一组引物就能够扩增H-，K-，和N-RAS三个mRNA序列，未发表)。这样便可以比较容易地检测出第12、13和61密码的突变，这些突变被认为是发生癌的原因。
癌症诱因的检测 3 j. s) S/ \' v' f; g 在下面将列举数个RNA/PCR扩增方法的主要应用。首先是对鼠鸟氨酸氨甲栈基转移酶mRNA进行亚克隆来确定缺失点突变的位置。同样，该方法可用于检测哺乳动物细胞mRNA转录后的剪接，研究与HLA疾病相关性因素，分析人HPRT突变，研究自身免疫与T细胞受体序列之间的关系，分析人碱性磷酸脂酶的突变，研究土拨鼠肝炎病毒引发的c-myc活性，确定刺桐丁蛋白的剪接变异，等等。6 p/ l$ I6 ~5 W' E5 ^; U9 a$ \
根据已发表的序列合成扩增mRNA的引物，我们发现用RNA/PCR是获取cDNA的最简便的方法。用在尵末端带有限制性内切酶位点的引物来扩增mRNA的一部分或全部编码区域。扩增后，PCR产物经合适的酶切并与适于表达的载体连接或制备成探针。按此方法可在一星期内完成从RNA样品到用于高效表达的修饰cDNA克隆.这比常规的合成/筛选cDNA库，亚克隆靶cDNA，区别主要