运脾颗粒的质量标准研究

・４８・　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａ１　ｏｆ　Ｉｎｆｏｒｍｔ　ｉｏｎ　ｏｎ　ＴＣＭ　Ｏｃｔ．２０１１　Ｖｏ１．１８　Ｎｏ．１０　・中药研究与开发・　运脾颗粒的质量标准研究　童鑫　，唐燕燕。　（１．南京医科大学附属南京市妇幼保健院，江苏南京２１０００４：２．南京中医药大学附属江苏省中医院，江苏南京２１００２９）　摘要：目的对运脾颗粒质量控制指标进行研究　方法对陈皮、当归、苍术、鸡内金分别进行薄层色谱鉴别，　同时以橙皮苷为指标成分，应用高效液相色谱法对其进行定量测定。结果定性鉴别简便易行；含量测定方法中橙皮　苷分离较好，橙皮苷柱效比较理想，其理论塔板数大于２　０００。加样回收率为１０１．７０％。结论本法重复性好、精密度　高，可用于该制剂的质量控制，并为运脾颗粒的深入研究提供了试验基础。　关键词：运脾颗粒；质量标准；高效液相色谱法；薄层色谱法　Ｄ０ｌ：１０．３９６９／ｊ．ｉ　ｓｓｎ．１　００５—５　３０４．２０１１．１　０．Ｏ１　８　中图分类号：Ｒ２８４．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５—５３０４（２０１１）１０—００４８．０３　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｏｆ　Ｙｕｎｐｉ　Ｇｒａｎｕｌｅｓ　ＴＯＮＧ　Ｘｉｎ＇，ＴＡＮＧ　Ｙａｎ－ｙａｈ２（１．Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｍａｔｅｒｎｉｔｙ　ａｎｄ　Ｃｈｉｌｄ　ＨｅａｌｔｈＣａｒｅＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＮａｎｊｉｎｇＭｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００４，Ｃｈｉｎａ￣２．ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＴＣＭ　Ａｆｆｉｌｉａ￣ｄ　ｔｏ　Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ　２１００２９，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｑｕ￣ｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｆｏｒ　Ｙｕｎｐｉ　ｇｒａｎｕｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｃｉｔｒｉ　Ｒｅｔｉｃｕｌａｔａｅ　Ｐｅｒｉｃａｒｐｉｕｍ，Ａｎｇｅｌｉｃａｅ　Ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｒａｄｉｘ，Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ａｎｄ　ＧａＵｉ　Ｇｉｇｅｒｉｉ　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ　Ｃｏｒｎｅｕｍ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＴＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ　ｉｎ　ｐｅｒｉｃａｒｐｉｕｍ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｓｉｍｐｌｅ．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ　ｗａｓ　ｉｄｅａｌ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｔｏ　ａ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｐｌａｔｅ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　２　０００．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１０　１．７０％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｓｔｕｄｙ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｙｕｎｐｉ　ｇｒａｎｕｌｅ；ｑｕａｌｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄ；ＨＰＬＣ；ＴＬＣ　运脾颗粒为临床经验方，主要由陈皮、当归、苍术、鸡内　金等组成，具有燥湿健脾、理气和胃之功效。适用于４，ＪＬ运化　失司所致脘腹胀满、消化不良、食欲不振、曰干甜腻等。方中　陈皮与补药配伍，能发挥补的作用；与泄药配伍，能发挥泄的作　用；与升散的药物配伍，能发挥升的作用：而与降逆的药物配　伍，能发挥降的作用。作为臣药来辅助君药，功效明显，又不会　

和ＥＲＢｍＲＮＡ的表达，推测大豆甙元有ＥＲ调节剂的作用。本实　验选择雌、孕激素受体，均以阴性的人子宫内膜癌细胞系　ＨＥＣ－ＩＢ细胞为研究对象，采用质粒转染和报告基因检测的方　法，研究了不同浓度大豆甙元对ＨＥＣ一１Ｂ细胞雌激素受体ＥＲ　ａ　和ＥＲ　Ｂ的表达的影响。结果显示：大豆甙元浓度为２０×１０　ｍｏｌ／Ｌ　时已可显著诱导报告基因ｌｕｃ的表达，其诱导作用在８０×　１０　ｍｏｌ／Ｌ时达到最高值，其后逐渐下降，但其诱导报告基因　ｌｕｃ的表达升高强度不及Ｅ　；也可以看出，大豆甙元通过ＥＲ　Ｂ　介导的报告基因表达水平的升高程度高于通过ＥＲ　ｎ介导的报　告基因表达水平。本实验结果同时提示：在高浓度＆干预下，　大豆甙元可降低ＥＲｏ和ＥＲ　的表达，在低浓度Ｅ　干预下，大豆　甙元可上调ＥＲｄ和职　的表达。基于上述认识，我们推测：大　豆甙元可通过调节子宫内膜癌细胞ＥＲ　ａ和ＥＲ　Ｂ的表达，进而　调整ＥＲ　Ｑ／ＥＲ　Ｂ比例，从而抑制子宫内膜癌细胞的增殖，这与　临床运用孕酮抑制子宫内膜癌细胞生长机理部分一致。　参考文献：　［１］Ｂａｒｄｉｎ　Ａ，Ｂｏｕ１ｌｅ　Ｎ。Ｌａｚｅｎｎｅｃ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｌｏｓｓ　ｏｆ　ＥＲ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　

ａｓ　ａ　ｃｏｍｍｏｎ　ｓｔｅｐ　ｉｎ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｔｕｍｏｒ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉ０ｎ［Ｊ】．　Ｅｎｄｏｃｒ　Ｒｅｌａｔ　Ｃａｎｃｅｒ，２００４，１　１（３）：５３７２，５５１Ｉ．　［２］Ｗｉｌｄｅｒ儿，Ｓｈａｊａｈａｎ　Ｓ，Ｋｈａｔｔ　Ｎｌｔ，ｅｔ　ａ１．Ｔａ￣ｏｘｉｆｅｎ－ａｓｓｏｅｉａｔｅｄ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ　ｔｕｍｏｒｓ：ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ—ａ．ｅｓｔｒｏｇｅｎ—Ｂ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｏ：ａ　ｃａｓｅ　ｃｏｎ　ｔｒｏｌ　ｌｅｄ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ　０ｎｃｏｌｏｇｙ，２００４，９２：５５３—５５８．　［３］Ｂａｒｄｉｎ　Ａ，Ｂｏｕ１ｌｅ　Ｎ，Ｌａｚｅｎｎｅｃ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｌｏｓｓ　ｏｆ　ＥＲ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｃｏｍｍｏｎ　ｓｔｅｐ　ｉｎ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｔｕｍｏｒ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．　Ｅｎｄｏｃｒ　Ｒｅｌａｔ　Ｃａｎｃｅｒ，２００４，１　１（３）：５３７２—５５１１．　［４Ｊ　Ｓａｅｇｕｓ　ＡＭ，０ｋａｙｓａｕ　Ｉ．Ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ　ａｎｄ　ｂｅｔａ　ｉｎ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｄ　ｓｔａｔｕｓ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ［Ｊ］．Ｊｐｎ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２０００，９（５）：５１０—５１８．　［５］高敏，曹远奎，薛晓鸥．大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其机　制的研究［Ｊ］．北京中医药大学学报：中医科学版，２０１０，３３（３）：１６２—１６５．　［６］薛晓鸥，魏丽惠．金雀黄素对子宫内膜癌细胞ＥＲａ和ＥＲ８ｍＲＮＡ水平的　调节［Ｊ］．北京大学学报，２００５，３７（３）：２７８—２７９．　（收稿日期：２０１０－１１－２５，编辑：华强）　２Ｏ１１年１　０月第１８卷第１　０期　中国中医药信息杂志　喧宾夺主。其主要成分橙皮苷具有维持血管的正常渗透压，　降低血管脆性，缩短出血时间，降低人体胆固醇含量，抗过敏　降血压，抑制口腔癌、食道癌、大肠癌等的癌变和抗病毒作　用。　。为了对其制剂进行质量控制，我们在确立制备工艺的基　础上，选取橙皮苷为指标成分，应用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）对　其进行定量测定，并采用薄层色谱法对其质量进行定性控制。　１仪器与试药　Ａｇｉ　ｌｅｎｔ　ｌ　１００　Ｓｅｒｉｅｓ高效液相色谱仪（Ｇ１３１４Ａ　ＶＷＤ检测　器，Ｇ１３１１Ａ泵，Ｇ１３１６Ａ柱温箱）；美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　Ｃ１８柱，美国Ｓｕｐｅｌｃｏ公司；Ｓａｔａｒｉｕｓ　ＢＰ１１００十万分子之一电　子分析天平，德国；９２９薄层制板器，重庆市南岸贝尔德仪器技　术，一：紫外分析仪，北京市六一仪器厂。　对照药材由南京中医药大学附属江苏省中医院中药库提　供，样品经朱育凤老师鉴定，陈皮为芸香科植物橘Ｃｉｔｒｕｓ　ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ　Ｂｌａｎｃｏ及其栽培变种的干燥成熟果皮。当归为伞　形科植物当归Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｏ１ｉｖ．）ＤｉｅｌＳ的干燥根。苍　术为菊科植物茅苍术Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｌａｎｃｅａ（Ｔｈｕｎｂ．）ＤＣ．或北　苍术Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（ＤＣ．）Ｋｏｉｄｚ．的干燥根茎。鸡内　金为雉科动物家鸡Ｇａｌ１ｕｓ　ｇａｌｌｕｓ　ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ　Ｂｒｉｓｓｏｎ的干　燥沙囊内壁。质量均符合２０１０年版《中华人民共和国药典》　相应药材项下的规定。　运脾颗粒，江苏省中医院制剂实验室提供。甲醇为色谱纯，　德国Ｍｅｒｃｋ公司；橙皮苷对照品，中国药品生物制品检定所提　供，分装号７２１—９９０９：薄层层析硅胶Ｇ（６０型），中国青岛海洋　化工集团公司（国家药典委员会监制），批号２００９１２０１：薄层层　析硅胶ＧＦ２５４，中国青岛海洋化工集团公司，批号２００９１２１７：其　他试剂均为分析纯。　２方法与结果　２．１定性鉴别　２．１．１陈皮取本品５　ｇ，研细，加甲醇２０ｍＬ，超声处理２０ｍｉｎ，　滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇２　ｍＬ溶解，作为供试品溶液。　将处方去陈皮，按相同工艺制成陈皮阴性制剂，取陈皮阴性制　剂５　ｇ，陈皮对照药材细粉２　ｇ。另取橙皮苷对照品，加甲醇制　成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品　溶液、对照品溶液、对照药材溶液及阴性对照溶液各５～ｌ０　Ｌ，　点于同一块硅胶Ｇ板上，以醋酸乙酯一甲醇一水（１００：１７：１３）为　展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，置紫外灯（３６５　ｎｍ）　下检视。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位　置上，显相同的黄色荧光斑点，阴性对照在相应部位未显斑点。　２．１．２　当归取本品１０　ｇ，研细，加乙醇５０　ｍＬ，超声处理３０　ｍｉｎ，　滤过，滤液浓缩至干，残渣加水１Ｏ　ｍＬ溶解，盐酸调ｐＨ至２，加热　回流３０ｍｉｎ，冷却，用乙醚萃取３次（２Ｏ、２０、１０ＩＩｌＬ），合并乙醚液，　用水洗２次，每次２０　ｍＩ．，弃水液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇１　ｍＬ　使溶解，作为供试品溶液。将处方去当归，按相同工艺制成当归　阴性制剂，取当归阴性制剂１０　ｇ，当归对照药材细粉２　ｇ。照薄　层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液、对照药材溶液及　阴性对照溶液各５～１０　ｐＬ，点于同一块硅胶ＧＦ２５４板上，以苯一　甲醇一冰醋酸（３０：３：１）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯　（２５４　ｎｍ）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置　上，显相同颜色的斑点，阴性对照在相应部位未显斑点。　２．１．３苍术取本品５　ｇ，研细，加乙醇２０ｍＬ，超声处理３０ｍｉｎ，　滤过，滤液浓缩至干，残渣加水１Ｏ　ｍＬ溶解，用水饱和的正丁醇　２Ｏ　ｍＬ分３次萃取（１０、５、５　ｍＬ），合并正丁醇液，用３０　ｍＬ正　丁醇饱和的水洗涤３次，每次１Ｏ　ｍＬ，正丁醇液提取液水浴蒸干，　残渣加甲醇１　ｍＬ溶解，作为供试品溶液。将处方去苍术按相同　工艺制成苍术阴性制剂取５　ｇ，苍术对照药材细粉２　ｇ。照薄层　色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液及阴性对照溶液　各５～１Ｏ　ｕＬ，分别点于同一块硅胶Ｇ板上，以苯一醋酸乙酯　（１８：１２）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（３６５　ｎｍ）下检　视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜　色的斑点，阴性对照在相应部位未显斑点。　２．１．４鸡内金取本品５　ｇ，研细，加乙醇２０『ＴｌＬ，超声处理３０　ｍｉｎ，　滤过，滤液浓缩至干，残渣加水ｌ０　ｍＬ溶解，用水饱和的正丁醇　２Ｏ　ｍＬ分３次萃取（１０、５、５　ｍＬ），合并正丁醇液，用３Ｏ　ｍＬ正　丁醇饱和的水洗涤３次，每次ｌ０　ｍＬ１正丁醇液提取液水浴蒸干，　残渣加甲醇１　ｍＬ溶解，作为供试品溶液。将处方去鸡内金按相　同工艺制成鸡内金阴性制剂５　ｇ，鸡内金对照药材细粉２　ｇ，照　薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液及阴性对照　溶液各５～１０　ｐＬ，分别点于同一块硅胶Ｇ板上，以正丁醇一冰醋　酸一水（８：２：１）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以１０％磷钼酸　溶液显色，１０５℃烘１０　ｍｉｎ，在日光下检视。供试品色谱中，在　与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点，阴性对　照在相应部位未显斑点。　２．２含量测定　２．２．１　色谱条件色谱柱：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　Ｃ　８柱（４．６　ｍｍ×２５　ｉｎｍ，　５　ｐｍ）。用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈一０．２％冰醋酸（２０：　８０）为流动相　；检测波长２８３　ｎｍ，柱温４５℃，流速０．８　ｍＬ／ｍｉｎ。　理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于２　０００。　２．２．２对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品８．４　ｍｇ，　置１００　ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。　２．２．３供试品溶液的制备精密称取本品４．０　ｇ，研细，置ｉ００ｍＬ　量瓶中，加甲醇１００　ｍＬ，分３次超声处理（４Ｏ、３Ｏ、３Ｏ），每次　２Ｏ　ｍｉｎ　，合并滤液，加甲醇至刻度定容于１００　ｍＬ容量瓶中，作　为供试品溶液。　２．２．４　阴性对照品溶液制备将处方去陈皮，按相同工艺制成　阴性对照品，照供试品溶液的制备项下方法制备阴性样品溶液。　２．２．５系统适用性试验　分取供试品溶液、对照品溶液和阴　性对照品溶液，按色谱条件项下，各进样ｌＯ　ｕＬ，结果显示供试　品溶液色谱峰中与相应的橙皮营对照品色谱一致，阴性样品溶　液色谱图在橙皮苷出峰位置上无干扰，色谱图见图ｌ。　２．２．６　线性关系　将已配好的对照品溶液，按上述色谱条件　下，分别精密吸取４、８、１２、１６、２０　ｕＬ进样，依法测定峰面积，　以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得　回归方程为：ｊ，＝２　５７２　５７５　一４３　７８２．２０，，＝０．９９９　９。结果　表明，橙皮苷在０．３３６～１．６８０　Ｐｇ范围内与峰面积积分值呈良　好的线性关系。