琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法
RNA的琼脂糖凝胶电泳
RNA的琼脂糖凝胶电泳(图）一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。
二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。
非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA 条带也能分开，但无法判断其分子量。
只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。
因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。
在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。
三、实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。
电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。
琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。
四、实验步骤（1）用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
（2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。
在实验台上再加入5μl 1×TAE 电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
（3）打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。
在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
RNA的变性琼脂糖凝胶检测试剂：（1）MOPS缓冲液（10*）:0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸（MOPS）(Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/ L EDTA。
（2）上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。
（3）甲醛。
（4）去离子甲酰胺。
v电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲洗——乙醇干燥——3% H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。
操作：（1）将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。
（2）配制琼脂糖凝胶。
①称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml 锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。
质粒的提取及琼脂糖凝胶电泳实验报告
质粒的提取及琼脂糖凝胶电泳实验报告质粒DNA的提取及其琼脂糖凝胶电泳实验报告及思考题Word 文档下载推荐.docx•上传人：t***•文档编号：•上传时间：2022-04-19•格式：DOCX•页数：6•大小：18.31KB另外还有的试剂是：胰RNA酶、DNAMarker、硼酸、Gelview 试剂（2）实验材料：含有pUC19质粒的大肠杆菌等。
3．实验原理：1）质粒DNA的提取：（1）关于质粒：质粒是一类存在于几乎所有细菌中染色体之外（细胞质中）呈游离状态的双链、闭环的DNA分子。
质粒通常携带有染色体上所不存在的能够表达产生抗生素、耐受重金属等重要性状的基因。
细菌质粒的大小范围从1kb至200kb以上不等，且拥有自己的复制起始位点，可不依赖于染色体而进行独立自主复制。
一些小的质粒利用宿主细胞的酶进行复制，而较大的质粒则自身携有复制与编码的有关酶。
（2）一般分离质粒DNA的方法都包括3个步骤：①培养细菌，使质粒DNA大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒DNA。
分离制备质粒DNA的方法很多，其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法、羟基磷灰石层析法等。
在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。
（3）碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理：碱裂解法提取质粒DNA 是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA。
在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。
当加入pH4.8乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确；而线性的染色体DNA 的两条互补链彼此已完全分开，因复性较缓慢且不准确而相互缠绕形成不溶性网状结构。
生物化学经典实验DNA琼脂糖凝胶电泳的原理、步骤、试剂配制、结果分析分析
凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml
铺
胶
凝胶凝固后取出梳子
加电泳缓冲液
准备样品
点
样
电
泳
注意观察溴酚蓝染液的迁移
紫外灯下观察电泳结果
照
相
DNA琼脂糖凝胶电泳
实验原理
琼脂糖为链状多糖 →绳状琼脂糖束→大网孔型凝
胶 ——分离、鉴定、纯化DNA
在 pH 值为 8.0～8.3 时，核酸分子碱基几乎不解
离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时 向正极移动。
采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，在分
子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分
子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片 段检测其大小的目的。
实验原理
当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium
bromide, EB)染色, 在紫外光下至少可以检出110ng的DNA条带, 从而可以确定DNA片段在凝胶 中的位置。
此外, 还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA
条带, 用于以后的克隆操作。
状DNA>开环DNA
DNA片段越长，泳动速度越慢
在低电压时，泳动速度与电场强度成正比
不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围
琼脂糖浓度（W/V,%） 分离范围（kb）
0.3
0.6 0.7 0.9 1.2
5-60
1-20 0.8-10 0.5-7 0.4-6
1.5
2.0
0.2-4
0.1-3
DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。
胶浓（%） 0.6 溴酚蓝 b 0.15kb
2kb
1.6kb
操作步骤
琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB 凝胶板的制备：加梳子，倒胶 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。
二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。
非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。
只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。
因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。
在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。
三、实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。
电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。
琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。
四、实验步骤（1）用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
（2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。
在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
（3）打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。
在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
RNA的变性琼脂糖凝胶检测试剂：（1）MOPS缓冲液（10*）:0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。
（2）上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。
（3）甲醛。
（4）去离子甲酰胺。
v电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。
操作：（1）将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。
（2）配制琼脂糖凝胶。
①称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml 锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳原理和操作
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳原理和操作血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生化分离和分析技术，主要用于血清中脂蛋白的分析。
其原理是利用琼脂糖凝胶电泳的分离特性，将血清中的脂蛋白按照分子大小进行分离，从而获得脂蛋白的电泳图谱。
琼脂糖凝胶是由琼脂糖溶液制备而成的凝胶。
琼脂糖分子之间通过氢键结合，在溶液中形成网状结构，能够阻碍大分子的迁移，使分子在凝胶中按照分子大小逐渐分离。
根据琼脂糖凝胶的浓度和凝胶体积，可以调整分离脂蛋白的范围和分辨率。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下：1. 样品制备：将要分析的血清样品进行离心，将清除过量脂蛋白颗粒。
取适量样品于离心管中，加入适量凝胶缓冲液，混匀。
2. 制备凝胶：根据所需的凝胶浓度，称取相应质量的琼脂糖溶解于电泳缓冲液中，并加热至溶解。
待溶液温度降至室温后，加入凝胶稳定剂并混匀。
3. 填充凝胶孔：将凝胶溶液倒入电泳池，待凝胶凝固后，用专用的样品载体或者微量移液器将样品填充到凝胶孔中。
注意不要将样品液面超过凝胶表面。
4. 电泳分离：将电泳池连接电源，设定合适的电泳条件，如电压和电流。
在电泳过程中，离子在电场作用下沿着琼脂糖凝胶的移动方向迁移，分离出不同迁移速度的脂蛋白组分。
5. 染色和观察：电泳结束后，取出凝胶，进行染色和观察。
目前常用的染色方法有银染、共伴染色和乳化状胶体金染色等。
在染色后，可以使用分子影像仪或者专用的凝胶分析系统进行图像捕捉和分析。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳可以用于分析血清中各种脂蛋白的分布和比例，如低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）等。
通过分析脂蛋白的电泳图谱，可以得到脂蛋白的相对含量和分子大小的分布情况，进一步了解脂质代谢的状态以及与某些疾病的关联。
总之，血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生化分离和分析技术，主要用于血清脂蛋白的分离和分析。
通过其原理和操作步骤的了解，我们可以更好地利用该技术进行实验和数据解读，为脂质相关疾病的研究提供有力的支持。
RNA琼脂糖凝胶电泳实验原理、试剂配制方法及操作流程
本实验的主要目的是掌握RNA琼脂糖凝胶电泳的操作技术，总结了RNARNA琼脂糖凝胶电泳的原理、实验材料、试剂及器具、操作步骤及注意事项。
一、实验目的学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。
二、实验原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。
在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。
只有在变性情况下，RNA分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。
判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。
完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带，且28s rRNA的亮度应为18s rRNA的两倍。
三、材料、试剂及器具1、材料总RNA提取物。
2、试剂(1)0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。
(2)10x电泳缓冲液。
吗啉代丙烷磺酸(MOPS) 0.4mol/L(pH 7.0)NaAc 0.1mol/L乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L(3)50mL变性琼脂糖凝胶(1%)(4)10x电泳缓冲液5 mL琼脂糖0.5 g0.1%DEPC水36.5 mL加热溶解，稍冷却，加入8.5 mL 37%甲醛。
(5)上样缓冲液：50%甘油，1mmmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4%二甲苯蓝。
(6)甲酰胺(去离子)。
3、器具(1)电泳系统(2)紫外透视仪四、操作步骤1、将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。
2、制胶：称取0.5g琼脂糖粉末，加入放有36.5mL的DEPC水的锥形瓶中，加热使琼脂糖完全溶解。
稍冷却后加入5mL的10x电泳缓冲液、8.5mL的甲醛。
然后在胶槽中灌制凝胶，插好梳子，水平放置待凝固后使用。
3、加样：在一个洁净的小离心管中混合以下试剂：电泳缓冲液(10x)2μl、甲醛3.5mL、甲酰胺10mL、RNA 样品3.5μl。
混匀，置60℃保温10min，冰上速冷。
琼脂糖凝胶电泳实验
琼脂糖凝胶电泳实验⼀、实验原理：琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA ⽚段的常⽤技术。
把DNA样品加⼊到⼀块包含电解质的多孔⽀持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分⼦的双螺旋⾻架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在⼀定的电场强度下，DNA分⼦的迁移速度取决于分⼦筛效应。
具有不同的相对分⼦质量的DNA⽚段泳动速度不⼀样，因⽽可依据DNA分⼦的⼤⼩来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分⼦质量的DNA，也可以分离相对分⼦质量相同，⽽构型不同的DNA分⼦。
在电泳过程中可以通过⽰踪染料或相对分⼦质量标准参照物和样品⼀起进⾏电泳⽽得到检测。
相对分⼦质量标准参照物相对可以提供⼀个⽤于确定DNA⽚段⼤⼩的标准。
在凝胶中加⼊少量溴化⼄锭(ethidium bromide, EB)或者ＥＢ类似物，其分⼦可插⼊DNA的碱基之间，形成⼀种络合物，在254～365nm波长紫外光照射下，呈桔红⾊荧光，因此也可对分离的DNA进⾏检测。
⼀般琼脂糖凝胶电泳适⽤于⼤⼩在0.2kb～50kb范围内的DNA⽚段。
三种不同构型分⼦进⾏电泳时的迁移速度⼤⼩顺序为：超螺旋DNA>线性DNA>开环DNA正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的⽤来进⾏⼤⽚段核酸的电泳，⾼浓度的⽤来进⾏⼩⽚段分析。
低浓度胶易碎，⼩⼼操作和使⽤质量好的琼脂糖是解决办法。
注意⾼浓度的胶可能使分⼦⼤⼩相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常⽤的缓冲液有TAE和TBE，⽽TBE⽐TAE有着更好的缓冲能⼒。
电泳时使⽤新制的缓冲液可以明显提⾼电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使⽤后，离⼦强度降低，PH 值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产⽣条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
Marker的选择DNA电泳⼀定要使⽤DNA Marker或已知⼤⼩的正对照DNA来估计DNA⽚段⼤⼩。
实验三-琼脂糖凝胶电泳检测DNA
在碱性环境下，不同的核酸分子由于具有相同的磷酸戊糖结构，几乎具有 相同的电荷密度，其电泳行为线性分子在凝胶中的迁移率与其所含碱基对数目 的对数值成反比。可以近似用于估算分子的大小。
鲁东大学 生命科学学院 School of Life Sciences
思考题
1.影响核酸在琼脂糖凝胶电泳中迁移速率的因素有哪些？
2.电泳中加入Loading buffer的作用是什么？
鲁东大学 生命科学学院 School of Life Sciences
鲁东大学 生命科学学院 School of Life Sciences
8、上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝胶的样品孔中。加样量一般10～ 30μl。
9、盖上电泳槽，接通电源，开始电泳。 开始电泳前，再次确认凝胶样品孔处于电场的负极。电泳条件：接通电泳槽与电 泳仪的电源，调节电压100V 30min,当溴酚蓝染料移动到距凝胶前沿1-2cm处，停 止电泳。
鲁东大学 生命科学学院 School of Life Sciences
注意事项
1. 倒胶时把握好胶的温度，不要高于60℃ ，否则温度太高会使 凝胶盘变形。 2. 胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，不要弄坏 点样孔。 3.点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡。 4.EB有毒，切勿用手接触，更不要污染环境，胶勿乱扔，紫外线 照射不宜太久。
鲁东大学 生命科学学院 School of Life Sci Nhomakorabeances
3. 溴化乙锭（EB）是一种吖啶类染料，它在紫外灯照射下能发射荧光，当DNA 样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分碱基对子中形成 荧光络合物，使DNA发射的荧光增强几十倍，电泳后就可直接紫外灯照射下检 测琼脂糖中的DNA。
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琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法
[实验原理]
电泳是现在用于分离和纯化DNA片段的最常用技术。包含电解质的多孔支持介质----“胶”
并把它置于静电场中。则DNA分子将向阳极移动，这是因为DNA分子沿其双螺旋骨架两侧
带有含负电荷的磷酸根残基。当DNA长度增加时，来自电场的驱动力和来自凝胶的阻力之
间的比率就会降低，不同长度的DNA片段就会表现出不同的迁移率。因而就可依据DNA分
子的大小来使其分离。该过程通过把示踪染料（Purple Loading Dye）或分子量标准参照物
(Ladder)和样品(DNA&RNA)一起进行电泳而得到检测。分子量标准参照物也可以提供一个用
于确定DNA片段大小的标准。
琼脂糖凝胶适用于分离大小在0.2-50Kb范围内的DNA片段。
[实验用品]
1.琼脂糖1.0%
1.0g琼脂糖+100ml电泳缓冲液(TAE),微波炉中火30秒至沸腾,熔化的琼脂物冷却至60℃时
可加入10mg/ml溴化乙锭10μl,充分混匀,将温热的凝胶倒入已置好梳子(鉴定胶用细密点的
梳子；回收胶用粗稀的梳子）的胶膜中在室温下放置30-45min后现进行电泳。
1.5%:琼脂糖1.5g。
2.电泳缓冲液
50×TAETris乙酸 Tris 242g终2 mol/L
乙酸 57.1ml 终1mol/L
0.5M EDTA200mlpH8.0终100mmol/L dH2O 补足至1000ml
使用时稀释1×TAE。
5×TBETris硼酸 Tris 54g 终445mmol/L
硼酸 27.5g 终445mmol/L
0.5M EDTA20mlpH8.0终10mmol/L dH2O 补足至1000ml
使用时稀释10倍成0.5倍如50ml贮存液+450ml水→500ml工作液。
[实验内容与方法]
1.移取适量的琼脂糖(如制备1%的琼脂糖胶液就移1g的琼脂糖溶于100ml TAE缓冲液中)微
波炉加热使其溶于TAE缓冲液中。熔化的琼脂物冷却至60℃时可加入10mg/ml溴化乙锭10
μl,充分混匀。
2.缓慢地将琼脂糖胶液注入一个带有“梳子”的胶床中(避免气泡产生)，若有气泡产生用塑
料移液管移去。
3.根据胶的大小让胶凝固20-60min.
4.当胶正凝固时，准备DNA样品，取适量的DNA如10μlDNA+2μl(6X)Purple Loading Dye混
合.(加样液中包含染料如溴酚蓝BPB)
5.胶凝之后轻轻移去梳子。将胶床放在电泳槽内,加样孔一侧靠近阴极黑末端,注入适量的TAE
缓冲液,通常缓冲液高于胶面1cm。或加溴化乙锭EB 至TAE缓冲液中并使之混匀EB的终浓
度是1μg/ml。EB也可加到胶中即将琼脂糖在微波炉加热然后冷却至60℃再加入EB。
6.加DNA样品及进行电泳使吸管与加样孔垂直使吸管尖端刚好在加样孔开口之下缓慢将
DNA样品加入加样孔中.
7.加样完毕后正确连接电泳槽和电源黑的连阴极红的连阳极在打开电源之前设定好电压和
时间电压150V, 时间10min.
8.通过检查加样孔附近的铂线来检测接线柱是否连接良好。若连接良好 负极附近的铂丝会
有气泡产生。
9.电泳过程要进行一个合适的霎时间。电泳时间的选择取决于胶的长度和电压的大小。胶越
长,电压越低,所需时间越长.然而使用高电压时,大的DNA片段的分辨率很低。
10.凝胶摄影
[注意事项]
1.TAE和TBE都是常用的缓冲液TBE相对于TAE而言有较高的缓冲量。
2.电泳中溴酚蓝和0.5Kb大小的DNA一起移动这可给泳动最快的DNA片段提供一个指征。
3.DNA的迁移依赖如下因素
DNA分子越小迁移越快。琼脂糖其浓度越低迁移越快。DNA的构象环状切口DNA比线状DNA
迁移快。两电极间每厘米的电压。电压越高 迁移越快。
所需加水的μl数.一般PCR反应中的引物终浓度为0.2~1.0μmol.L
3.根据胶的大小让胶凝固20-60min.
4.当胶正凝固时准备DNA样品并取适量的DNA如5μl加1μl加样缓冲液混合加样液中
包含染料如溴酚蓝BPB。
5.胶凝之后轻轻移去梳子。将胶床放在电泳槽内加样孔一侧靠近阴极黑末端注入适量
的TAE缓冲液通常缓冲液高于胶面1cm。
或加溴化乙锭EB 至TAE缓冲液中并使之混匀EB的终浓度是1μg/ml。EB也可加
到胶中即将琼脂糖在微波炉加热然后冷却至50℃再加入EB。
6.加DNA样品及进行电泳
使吸管与加样孔垂直使吸管尖端刚好在加样孔开口之下缓慢将DNA样品加入加样孔中
7.加样完毕后正确连接电泳槽和电源黑的连阴极红的连阳极在打开电源之前设
定好电压和时间电压150V, 时间10min.
8.通过检查加样孔附近的铂线来检测接线柱是否连接良好。若连接良好 负极附近的铂丝会
有气泡产生。
9.电泳过程要进行一个合适的霎时间。电泳时间的选择取决于胶的长度和电压的大小。胶越
长电压越低所需时间越长.然而使用高电压时大的DNA片段的分辨率很低。
10.凝胶摄影
[注意事项]
1.TAE和TBE都是常用的缓冲液TBE相对于TAE而言有较高的缓冲量。
2.电泳中溴酚蓝和0.5Kb大小的DNA一起移动这可给泳动最快的DNA片段提供一个指征。
3.DNA的迁移依赖如下因素
DNA分子越小迁移越快。琼脂糖其浓度越低迁移越快。DNA的构象环状切口DNA比
线状DNA迁移快。两电极间每厘米的电压。
电压越高迁移越快。
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