细胞培养中的黑胶虫问题
昆虫细胞感染实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本研究旨在通过昆虫细胞感染实验，探究杆状病毒感染昆虫细胞的过程及其动力学特征，为杆状病毒表达系统的优化提供理论依据。
二、实验材料1. 实验细胞：Sf9细胞2. 实验病毒：苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）3. 实验仪器：细胞培养箱、显微镜、流式细胞仪、离心机、移液器、培养皿等4. 实验试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、多聚甲醛、SYBR Green核酸染料等三、实验方法1. 细胞培养：将Sf9细胞接种于培养皿中，放入细胞培养箱中培养，细胞密度控制在1×10^5～1×10^6个细胞/毫升。
2. 病毒制备：将AcMNPV接种于Sf9细胞中，待病毒感染细胞后，收集病毒颗粒，进行病毒滴度测定。
3. 病毒感染：将制备好的病毒颗粒以一定MOI（病毒颗粒数与细胞总数的比值）感染Sf9细胞，观察细胞感染过程及病毒滴度变化。
4. 病毒滴度测定：采用流式细胞仪对感染后的Sf9细胞进行检测，计算病毒滴度。
5. 动力学分析：观察不同时间点病毒滴度的变化，分析病毒感染动力学特征。
四、实验结果1. 病毒制备：成功制备了AcMNPV病毒颗粒，病毒滴度达到1×10^8 PFU/毫升。
2. 病毒感染：在MOI为10的情况下，感染后的Sf9细胞出现明显的病变，细胞出现固缩、变形、脱落等现象。
3. 病毒滴度测定：在感染后不同时间点，病毒滴度逐渐上升，在感染后12小时达到峰值，随后逐渐下降。
4. 动力学分析：病毒感染动力学曲线呈现S型，符合经典病毒感染动力学模型。
五、实验讨论1. 实验结果表明，AcMNPV能够有效感染Sf9细胞，病毒滴度在感染后12小时达到峰值，随后逐渐下降。
2. 实验中采用的MOI为10，能够保证细胞充分感染，为后续研究提供可靠的数据支持。
3. 通过动力学分析，可以进一步优化病毒感染条件，提高重组蛋白的表达效率。
4. 本研究为杆状病毒表达系统的优化提供了理论依据，有助于推动杆状病毒表达系统在生物制药领域的应用。
真菌细胞的例子
真菌细胞的例子
细胞污染大展观- 真菌篇
VivaCell
天气渐热
实验人最头疼的事情又来了
- 细胞污染-
夏季是污染频发的时间
那么如何判断污染及预防污染呢？
今天我们一起来看看吧~
细胞污染可以分为四大类：细菌污染、真菌污染、支原体污染及黑胶虫污染。
真菌污染
肉眼观察特点：
◆真菌污染最短3天才能长出椭圆形的霉斑。
◆霉斑往往会漂浮在培养液表面，随着时间逐步扩大。
显微镜下观察特点：
念珠菌
◆有些真菌呈类似棉花絮状的漂浮物。
◆若是念珠菌会呈卵圆状，在细胞周边生长。
根霉菌
◆早期并不会使得培养基变黄变浑浊，但在显微镜下可观察到菌丝体。
真菌形成的菌丝呈丝状，管状，树枝状，串珠状。
酵母菌
◆酵母菌等，当其行出芽生殖时可从一大一小的连体结构识别。
◆细胞被污染后，仍可生长，长时间细胞的活力状态会变差。
◆梅雨季时的污染率会提高。
◆呈卵圆状酵母菌增殖到一定规模，形成团簇状的真菌群。
真菌的克星-抗生素
接下来为大家展示几个经典的真菌污染案例：- 根霉菌-
- 酵母菌-
- 念珠菌-。
如何挽救细胞污染
在讨论之前，大家首先要有一个概念，即洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。
所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。
尽量减少进入培养体系细菌的数量。
所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！1）.将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。
转烧瓶口。
2）.继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。
3）.继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。
4）.重复步骤3再洗。
5）.重复步骤3再洗。
6）.加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
7）.加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
8）.再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。
9）.加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。
置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。
10）.24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗.11).24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。
以上是对于细菌污染（常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）；若为霉菌或者真菌污染，加入两性霉素B清洗和培养，终浓度一般为2.5μg/ml（在30μg/ml时会有细胞毒性）。
另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。
其它操作同；若为支原体或者黑胶虫污染，因为这个太难处理，所以我基本上都是重新弄细胞了。
细胞实验中常见问题
细胞实验中常见问题
一、细胞培养问题
1.1 细胞生长缓慢或停止生长：可能原因是营养物质不足、血清质量不佳、培养箱温度不稳定或CO2浓度不正确等。
1.2 细胞形态异常：可能是由于培养基问题、营养不足、感染或污染等原因。
1.3 细胞结块：可能是由于细胞密度过大或血清用量过多等原因。
二、细胞活性检测问题
2.1 实验结果不一致或不准确：可能是由于试剂问题、操作误差或实验条件不稳定等原因。
2.2 假阳性或假阴性结果：可能是由于抗体交叉反应、实验操作不当或细胞状态不佳等原因。
三、细胞转染问题
3.1 转染效率低：可能是由于转染方法不正确、转染试剂选择不当或细胞状态不佳等原因。
3.2 细胞毒性：可能是由于转染试剂用量过多或转染条件不适应等原因。
四、细胞计数与消化问题
4.1 细胞黏附性强，不易消化：可能是由于细胞类型或状态不适应于消化方法等原因
4.2 细胞碎片多，影响计数：可能是由于消化过度或消化不充分等原因。
五、细胞标记与染色问题
5.1 染色不均匀或不显色：可能是由于染色时间过短或过长、抗体浓度不当或细胞状态不佳等原因。
5.2 非特异性染色问题：可能是由于抗体交叉反应或抗体纯度不佳等原因。
六、细胞分型与鉴定问题
6.1 分型结果不准确：可能是由于抗体选择不当、操作误差或细胞状态不稳定等原因。
6.2 鉴别困难：可能是由于细胞分化程度高、抗原表达量低或鉴别方法不敏感等原因。
七、细胞感染与病毒问题
7.1 细菌污染：可能是由于培养基或细胞株本身带菌等原因。
7.2 支原体污染：可能是由于培养环境不洁净、操作过程中污染等原因。
黑虫的养殖方法和注意事项
黑虫的养殖方法和注意事项摘要：黑虫因其特殊的食性和可供养殖的成本低廉，被越来越多的人选作养殖对象。
本文将详细介绍黑虫的养殖方法和注意事项，为有意尝试养殖黑虫的人士提供参考和指导。
正文：第一部分：黑虫的选种与繁殖养殖黑虫时，首先需要考虑的是使用健康、强壮、品种纯正的种虫。
建议选择品相较好的成虫放入虫箱，让它们自主繁殖。
需要注意的是，不同品种的黑虫之间不能混养，以防止杂交损失纯度。
第二部分：饲料和环境黑虫的食性专一，主要以霉菌和腐殖质为食。
为了满足它们的需求，可以将脏活农村土壤进行堆肥发酵，待发酵好后作为黑虫的主要饲料。
同时，也可添加一些植物根系和其他的食物残渣作为辅助饲料。
在保持适当湿度的基础上，定期对虫箱进行通风换气，以提供适宜的环境温度和气氛。
第三部分：养殖容器与密度黑虫可以利用各类坑穴、虫箱等容器进行养殖。
为了确保养殖效果，这些容器应保持干燥、透气、无毒的状态。
亦可使用长方形水泥槽或塑料盒等，只要能够容纳一定数量的虫子，并且方便管理和饲喂即可。
在选择容器时，需注意不同品种的容器大小略有差异。
有虫体尺寸小的品种适合使用容器较浅的虫槽，而容器较深的虫慷适合用于虫体尺寸较大的品种。
第四部分：黑虫疾病防控在黑虫养殖的过程中，疾病是常见的问题。
预防疾病的首要任务是保持养殖环境的清洁和干燥。
以及，避免通过新鲜食材传播细菌和病毒，定期检查虫体是否患病以及是否夹杂其他异物，如发现异常情况，及时采取措施进行治疗或隔离，以防止疾病传播。
第五部分：销售和应用当黑虫养殖达到一定规模时，可以考虑出售或应用。
传统上，黑虫在饲养昆虫、水果蔬菜采摘后的农田、养鱼等方面发挥了重要作用。
通过与养殖场和农民合作，可将养殖的黑虫出售给有需要的人，也可利用剩余虫体回收废弃物。
结语：黑虫作为一种低成本且易于养殖的生物资源，具有广阔的发展前景。
通过正确的养殖方法和注意事项，可确保黑虫的成功养殖和质量提升，并为其应用领域提供更多发展机会。
细胞培养技术中的常见问题解答
细胞培养技术中的常见问题解答细胞培养技术是生物科学领域中重要的研究方法之一，广泛应用于细胞生物学、生物医学研究、药物开发等领域。
然而，细胞培养过程中常会遇到各种问题，这些问题的解答对于保证实验结果的可靠性和研究顺利进行至关重要。
本文将就细胞培养技术中的常见问题进行解答，希望对于读者在实验过程中的疑问起到一定的帮助。
Q1：为什么我的细胞无法附着在培养皿上？A：细胞无法附着的原因可能有多种。
首先，确保培养皿表面已经充分涂上了适当的基质，如凝胶体或胶原蛋白等。
其次，检查培养基的配方是否正确，是否缺乏必需的生长因子或氨基酸等。
同时，培养环境的温度、湿度和培养皿表面的处理都会影响细胞附着。
最后，细胞密度和接种时间也会影响细胞的附着能力。
如果问题仍然存在，可以尝试不同的培养条件以找到合适的附着条件。
Q2：为什么我的细胞生长缓慢？A：细胞生长缓慢可能源于多种因素。
一方面，细胞培养基的配方可能导致细胞生长受到限制。
检查培养基中是否缺乏必需的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等，并根据需要进行调整。
另一方面，细胞密度过高或过低也会影响细胞生长速度。
合理调整细胞密度以促进正常的生长。
此外，温度、CO2浓度、培养皿和培养箱的湿度等因素也会对细胞生长产生影响。
对这些条件进行优化，在适当的环境中培养细胞可以加快其生长速度。
Q3：我应该什么时候更换培养基？A：细胞生长到饱和状态之前应避免更换培养基。
通常，在细胞取代率达到80-90%时，即到达细胞生长的最佳时机进行培养基的更换。
更换培养基的目的是为了提供充足的营养物质和清除废弃物，以促进细胞的生长和健康。
然而，过于频繁的培养基更换也会带来损害细胞的风险，因此要根据实验的需要和细胞的生长状态来进行判断。
Q4：细胞是否可以冻存？A：冻存细胞是细胞培养技术中常见的方法之一。
冻存细胞可以长期保存，以备将来的培养和实验使用。
冻存细胞需要使用特定的冻存液来保护细胞，并通过特定的冷冻和解冻过程来确保细胞的完整性和生存率。
细胞培养中的常见问题及解决方法
细胞培养中的常见问题及解决方法细胞培养是现代生命科学研究中常用的实验技术之一，可以用于细胞增殖、分化、转染等研究。
然而，细胞培养过程中常常会出现一些问题，如细胞污染、细胞凋亡和细胞失活等。
本文将讨论细胞培养中的这些常见问题，并提出相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中的一大难题。
它可以由细菌、真菌或其他细胞类型的污染引起。
细胞污染会影响实验结果的准确性，并可能导致细胞系的丢失。
为了解决这个问题，我们可以采取以下措施：（1）经常检查细胞培养器具和培养基，确保其无菌；（2）使用抗生素或抗黴剂对培养基进行预处理，以减少污染的风险；（3）定期进行污染检测，例如细胞培养液和工作区的表面。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一部分，但在细胞培养中，过多的细胞凋亡会导致实验结果的误差。
为了减少细胞凋亡的发生，我们可以考虑以下措施：（1）优化培养条件，包括温度、CO2浓度和培养基配方等；（2）定期检查细胞形态和健康状况，及时处理出现凋亡现象的细胞；（3）使用细胞凋亡检测工具，如Annexin V-FITC/PI染色法，来评估细胞凋亡水平。
3. 细胞失活细胞失活现象在细胞培养中常常发生，可能是由于细胞老化、无营养补充或培养条件不佳等原因引起。
为了避免细胞失活的发生，我们可以尝试以下方法：（1）及时更换培养基，确保细胞获得充足的营养物质；（2）避免过度培养，及时传代细胞；（3）定期鉴定细胞的纯度和活力，并确保培养条件适当；（4）尝试使用细胞增殖激素或生长因子来促进细胞的增殖和存活。
细胞培养中的常见问题并不局限于上述三个，还有其他一些问题，例如细胞出现突变、细胞凝固等。
针对这些问题，我们可以进一步深入研究并寻找解决方法。
同时，注意维持实验室的清洁和规范操作也是解决这些问题的关键。
细胞培养在生命科学研究中发挥着重要作用。
了解并解决细胞培养中的常见问题，有助于提高实验结果的准确性和可重复性。
通过合理的实验设计、严谨的操作和科学的方法选择，我们可以克服这些问题，为细胞培养研究的进展做出贡献。
淋巴细胞转化实验(1)
扫描电镜法显示支原体，附于细胞表面众多的圆形颗粒为支原体
黑胶虫 污染
可以穿过滤膜.
低倍镜下为黑色点状,高倍镜下可见黑点游动;培养液 一般不受影响;细胞增殖旺盛时可自然消失
处理:
更换血清;
增加细胞的接种密度，以提高细胞的生存率
淋巴细胞转化实验
2010.12.21
原理
淋巴细胞在体外培养时，受到刺激剂的刺激后可表 现为细胞体积增大、代谢旺盛、蛋白质和核酸合成 增加，即向淋巴母细胞转化和增殖。此现象称为淋 巴细胞转化现象（简称为淋转）。
❖ 实验后要求： 关闭超净台风机；用酒精纱布擦拭超净台台面，紫外线消毒。
细胞培养条件
合成培养基：根据体内细胞生存所需的物质种类和数量，用化学物质模拟 合成。 常用的培养基有RPMI-1640、DMEM、IMDM等。
血清：胎牛血清、新生牛血清、小牛血清。 抗菌素：抑制可能存在的细菌和霉菌的生长，而不影响细胞的生长。
← 血浆 ← ＰＢＭＣ
← 淋巴细胞分离液
← 红细胞、粒细 胞、血小板
实验流程 －－淋巴细胞转化实验
基本原理： 在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生
增殖；
有丝分裂原可作为多克隆刺激剂，使相应淋巴细 胞发生增殖。
实验流程 －－结果观察
形态计数法、MTT法、CCK-8法、同位素法。 （一）形态计数法：计数淋巴母细胞的比例，计算转 化百分率。
A组：置培养箱中培养66h,加入MTT溶液20ul/孔,继续培养 6hr后,去掉上清,加入DMSO100ul/孔,弃分混匀,测 OD570nm值.
B组：置培养箱中培养66h，制备流式标本，上机检测
细胞数/ml 4大格中细胞总数 ×104 ×稀释倍数
＝
细胞培养的常见问题及解决方案
问题三：细胞在什么时候传代最好？如何掌握 细胞生长密度？
• 有接触抑制的细胞，就要在它完全汇合前传代，即 80%密度，不然细胞就会引起分化。
• 刚拿到细胞株怎么办？
问题四：细胞消化时怎样掌握火候
• 细胞生长汇合密度为80%-100%时就要消化传代 • 消化液浓度：0.05%T+0.02%EDTA
• １、工作人员培养成良好的工作习惯 • 提前10分钟打开吹风机 • 工作人员操作前洗手，戴帽，戴口罩，手套 • 所用培养基等试剂从冰箱取出后用用75%酒精擦拭后再放工作台 • 试剂瓶开启后，要倾斜放在试管架上 • 操作过程中尽量减少谈话
问题二：怎样观察活细胞和死细胞
• １、活细胞 • 透明，饱满，清晰
为确定有无支原体污染可做如下检测： ①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油 镜观察．支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。 ②荧光染色法：荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258，可使支原体 内含有的DNA着色，染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上， 在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min， 然后用生理盐水漂洗．置于用生理盐水配浓度为50pg／ml的Hoechst 33258中染色 10min。染色后用蒸溜水洗1—2min．向细胞面滴加pH5．5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光 显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。 ③电镜检查；用扫描电镜方法简便快速．也可以利用透射电镜。 ④DNA分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高．但方法较为复杂
细胞培养的常见问题 及解决方案
• 动物实验 • 细胞培养
细胞污染简介(整理)
细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理你的培养液应该一两天内很快变混浊．刚开始小虫杆状成串，不怎么动，多了以后就不成串了，移动迅速，是这样吗？如果是，细菌培养液是被洋葱佰克霍尔德菌污染了。
洋葱佰克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，是植物病原菌，因引起洋葱患病而得名，是医院感染病原菌之一。
洋葱伯克霍尔德菌是一种广泛存在于土壤及水中，与医院感染密切相关的革兰阴性杆菌，尤其为免疫缺陷及肺囊性纤维化患者易感染细菌之一。
它可以在无糖的培养基中生长。
在医院环境中常可污染自来水、体温表、喷雾器、静脉导管、导尿管、静脉输液管等，造成院内传播，导致多种医院感染，如败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染、深部脓肿和眼结膜炎等，尤其采用导管植入进行治疗者，更容易引起感染。
洋葱伯克霍尔德菌对多种抗菌药具有天然的耐药性。
耐药现象严重，治疗可选择复方磺胺甲懒唑、哌拉西林,三唑巴坦、哌拉西林和头孢他啶等抗菌药物。
参考文献：洋葱伯克霍尔德菌86株的分布与耐药性尤荣开，等中国抗感染化疗杂志2003年2月28日第3卷第1期2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差.用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
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细胞培养中的黑胶虫问题
1.我们实验室最近一次的情况:
我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培
养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在
一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲
洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作
也出现这种问题，陆续对培养液，血清及胰酶进行培养也没发现问题。
同时培养箱也有本实验室保存的3t3细胞进行培养，生长快，很快铺满，仔细观察也可以见
到少量的黑点。
后来还有从军科院过来的Hela细胞，没有使用我们的血清，直接吸出多余的培养液后，进
行培养，传代后用原来吸出的培养液进行培养，同样发现了问题。
可以发现如下的特点：
（1） 与细胞共生，细胞长的好或密度大的话，小黑点就少，反之则 多；
（2） 对抗生素无效；
（3） 可能通过培养箱空气进行污染；
（4） 单用培养液及血清培养没发现问题。
（5） 换掖冲洗后也无效。
以下是论坛里我找来的相关帖子内容
“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。
“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，
并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当
黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活
动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态
不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。
目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物，增殖缓慢但对细胞有损害，数量达到一
定程度可引起细胞死亡，其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染
在全世界细胞实验室中普遍存在，解决该问题是一个世界性难题
关于是什么的问题的讨论
A. 玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西（曾经有文献报道过）
B. 据说这是黑胶虫，又有人说是原生动物，好象也没个统一的说法
C. 据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有
类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。
D. 有人说是纳米级的细菌
其他的特点
（1）形态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米，
（2） 在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动（不规则的原地小距离抖动）。
（3） 细胞内好像也有存在，
（4） 但并不引起培养液混浊
（5） 时间稍长，细胞状态明显恶化，并最后死亡
大家的处理：
1.换好一点的血清（我觉着和血清的关系不大）。
2.如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不
太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞（从小鼠腹腔内取的巨噬细胞，这种细胞不分裂，
过一阵就死掉了，做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道）。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的
细胞很有效！还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。
3.换用进口的一次性塑料培养瓶。
4.建议清理无菌室所有物品，重新灭菌，用KMnO4熏蒸，按首次使用无菌室做，细胞重新复
苏，。
5. 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时
加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生
长也不会有大的影响。
6.有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。
杀灭黑胶虫的一种方法
估计养细胞者，很多人遇到过所谓的“黑胶虫”。最近养细胞，不幸的是，也中奖了，看到
培养瓶里仿佛一夜之间冒出来的密密麻麻的小黑东西，真是有苦难言，因为曾在园子里看过有关
“黑胶虫”的帖子，不好对付，没有有效的杀灭方法，据说有专杀培养基，但又有什么好的方法
可以消除实验室和培养箱内的污染呢？紫外照射、甲醛高锰酸钾熏蒸------这些方法不知其对
“黑胶虫”的确切效果，有些对人有毒害，有没有一种方法，即能杀死“黑胶虫”，对人的毒性
又较小呢？我想到了试试新洁尔灭（苯扎溴铵）是否可以，新洁尔灭是外用皮肤消毒剂，我们
实验室常规用来擦洗手及工作台面的。
首先说明这种东西在低倍下呈黑色点状，在高倍下呈杆状，确实是在不停地运动的，有些战
友不相信它会动，也有人不相信有这种所谓的“黑胶虫”，只要静下心来仔细盯住一点，你就会
能注意到它确实在运动，我也录了一段相，足以可以证明，太大，160多M。
题目：杀灭、处理黑胶虫的一种新方法
目的：找到一种高效且低或无毒的杀灭处理“黑胶虫”的方法。
方法：取有“黑胶虫”污染的六孔板，每孔内有2ml培养液，向有污染的孔内分别加入0.5ml、
1ml、2ml、3ml的新洁尔灭原液，边加边在倒置显微镜下观察。
结果：加入新洁尔灭时，培养液内逐渐变得有些混浊，且会有絮状的东西形成（肉眼看是白
色的），这实际上是由“黑胶虫”聚集而成（见下面的图），约2-3分钟后，“黑胶虫”慢慢停
止了运动。为了进一步观察其效果，把六孔板放入37度培养箱继续培养，第二天观察发现：有
些仍成团絮状但不会动；有些贴在瓶壁上也不会动；有些已由杆状变成了圆球状，象是发生了水
肿一样，更不会动了，估计“黑胶虫”已死亡。这几种剂量的新洁尔灭效果是一样的。
结论：新洁尔灭与水或培养基的比例为1：4时即可杀死“黑胶虫”（更低的浓度没有试，
当时杀虫心切，就想多用点，反正也不贵，一瓶新洁尔灭才7块多钱）。可以喷洒或擦洗用于实
验室或培养箱内消毒；若细胞不珍贵且不想要了，也可以用来杀灭其中的“黑胶虫”。若细胞珍
贵，不要轻易尝试，除非你不想要了；你试了，本人概不负责
以下无正文
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