生化实验技术讲座共52页
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常见的生化与分子生物学技术PPT课件
电泳技术有多种方式，但一般根据有无支持物将 其分为无支持物的自由电泳和有支持物的区带电 泳两大类。区带电泳包括以滤纸作为支持物的纸 电泳、以醋酸纤维素等薄膜为支持物的薄层电泳， 以及与凝胶（例如琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶）为 支持物的凝胶电泳。
等电聚焦凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、 二维电泳、脉冲场凝胶电泳。
等速电泳：需专用电泳仪，当电泳达到平衡后，各组分的区带 相随并形成清晰的界面，并以等速移动。
等电聚焦：具有不同等电点的两性电解质载体在电场中自动形 成pH梯度，使被分离物移动至各自等电点pH处聚集成很窄的区 带，且分辨率较高。（表面看与区带电泳相似，但原理不同）
DNA的琼脂糖凝胶电泳：
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要依据它们的相对分子 质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。
盐析法：有机溶剂沉淀法；等电点沉淀法；非离子 多聚体沉淀法；生成盐复合物沉淀法；热变性沉淀 法；酸碱变性沉淀法等 。
吸附法：将干葡聚糖凝胶加入提取液中，由于凝胶 吸水，提取液的体积可缩小三倍左右。
超过滤法：把提取液装入过滤装置， 在空气或氮气的压力下，使小分子物 质通过半透膜，大分子物质留在膜内。
• 膜分离与常规膜的分分离离技基术相本比技术
– 具有无相变化、能耗低、过程简单、不污染环境等优 点
– 特别适用于生物物质、酶制剂及同分异构体等的分离。
2021/5/3
膜纵切面模式图
28
以分离应用领域过程分类 微滤(micro-filtration, MF) 超滤(untra-filtration, UF) 反渗透(reverse osmosis, RO) 透析(Dialysis, DS) 电透析(electro-dialysis, ED) 纳米膜分离(NF) 亲和过滤(affinity filtration, AF) 渗透气化(pervaporation, PV
等电聚焦凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、 二维电泳、脉冲场凝胶电泳。
等速电泳：需专用电泳仪，当电泳达到平衡后，各组分的区带 相随并形成清晰的界面，并以等速移动。
等电聚焦：具有不同等电点的两性电解质载体在电场中自动形 成pH梯度，使被分离物移动至各自等电点pH处聚集成很窄的区 带，且分辨率较高。（表面看与区带电泳相似，但原理不同）
DNA的琼脂糖凝胶电泳：
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要依据它们的相对分子 质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。
盐析法：有机溶剂沉淀法；等电点沉淀法；非离子 多聚体沉淀法；生成盐复合物沉淀法；热变性沉淀 法；酸碱变性沉淀法等 。
吸附法：将干葡聚糖凝胶加入提取液中，由于凝胶 吸水，提取液的体积可缩小三倍左右。
超过滤法：把提取液装入过滤装置， 在空气或氮气的压力下，使小分子物 质通过半透膜，大分子物质留在膜内。
• 膜分离与常规膜的分分离离技基术相本比技术
– 具有无相变化、能耗低、过程简单、不污染环境等优 点
– 特别适用于生物物质、酶制剂及同分异构体等的分离。
2021/5/3
膜纵切面模式图
28
以分离应用领域过程分类 微滤(micro-filtration, MF) 超滤(untra-filtration, UF) 反渗透(reverse osmosis, RO) 透析(Dialysis, DS) 电透析(electro-dialysis, ED) 纳米膜分离(NF) 亲和过滤(affinity filtration, AF) 渗透气化(pervaporation, PV
检验科生化培训课件
检验科生化培训课件检验科生化培训课件的重要性在医学领域，检验科生化是非常重要的一个学科，它涉及到人体生化指标的检测与分析。
而对于从事检验科工作的医学生和医护人员来说，掌握生化检验的基本知识和技能是至关重要的。
为了提高学生的学习效果和工作能力，许多医学院校和医疗机构都会提供生化培训课件。
首先，生化培训课件能够帮助学生系统地学习生化检验的理论知识。
生化检验涉及到许多复杂的生化原理和技术方法，对于初学者来说可能会感到困惑。
而通过生化培训课件，学生可以通过图文并茂的展示方式，系统地了解生化检验的基本原理，从而更好地理解和掌握相关知识。
其次，生化培训课件能够帮助学生进行实验操作的模拟和演练。
在生化检验中，实验操作是非常重要的一环，它直接关系到检验结果的准确性和可靠性。
通过生化培训课件，学生可以在虚拟实验室中进行实验操作的模拟和演练，熟悉各种仪器的使用方法和实验步骤，提高实验操作的熟练度。
此外，生化培训课件还能够帮助学生学习和掌握生化检验中常见的仪器设备和试剂的使用方法。
生化检验中使用的仪器设备和试剂种类繁多，每一种都有其特定的使用方法和注意事项。
通过生化培训课件，学生可以了解不同仪器设备和试剂的基本原理和使用方法，提前熟悉和掌握相关知识，减少在实际工作中出现错误的可能性。
此外，生化培训课件还可以帮助学生了解生化检验的临床应用。
生化检验是临床医学中非常重要的一项技术，它可以帮助医生判断患者体内是否存在某些疾病或异常情况。
通过生化培训课件，学生可以了解各种生化指标的临床意义和应用范围，了解生化检验在疾病诊断和治疗中的作用，从而更好地理解和应用生化检验知识。
最后，生化培训课件还可以帮助学生进行自主学习和复习。
生化检验是一个知识面非常广泛的学科，学生需要不断地进行自主学习和复习，才能够更好地掌握相关知识。
通过生化培训课件，学生可以随时随地进行学习和复习，巩固和加深对生化检验知识的理解和记忆。
总之，检验科生化培训课件在医学教育和医疗实践中起着重要的作用。
《生化检验技术基础》PPT课件
深绿 绿色带蓝 蓝色带绿
紫蓝 青紫 深紫 深红 桔红 深黄 绿色带黄 Ultra-violet
精选ppt
可见
9
（3）光学因素的影响
散射是向空间各个方向，而使透射光 减弱。反射可使光能损失，当光线通过 两种不同介质时，则发生反射。当样本 溶液与空白溶液的折射率有较大差异时， 导致吸收值的偏差。
（4）非平行光通过吸收池时，由于光线 的倾斜使厚度L增大而影响测量值。
精选ppt
6
2．影响因素
（1）化学因素的影响
溶液中溶质可因浓度的改变而发生离 解、缔合，与溶剂间的作用等原因而出 现偏离比尔定律的现象。由化学因素引 起的偏离，有时可控制溶液条件设法减 免。此外，能产生荧光的物质也可导致 偏离比尔定律。
精选ppt
7
（2）非单色光的影响
比尔定律的一个重要条件是单色光， 但在比色分析中常有不同波长的光同时 存在。这就使吸光度发生改变，从而偏 离比尔定律。
生化检验技术基础 与进展
上海长征医院实验诊断科
于嘉屏
精选ppt
1
一、比色分析
1．比色分析理论――Beer-Lambert 定律
A = lg（I0/I）＝KCL 或 I＝I0×10-KCL
I0：入射光强度 I：透过光强度 K：常数 C：溶液浓度 L：溶液的厚度
精选ppt
2
（1）郎伯定律
I0
It
l
L
精选ppt
4
透光率（transmittance，T，透射率） T＝I / I0
吸光度（absorbance，A） 光密度（eptical density，D或OD）
A＝lg I0/I＝-lgT T＝10-A＝10-KCL A＝KCL 当L用cm，C用mol/L表示，则K即称之为 摩尔吸光系数，用ε表示。 当C＝1mol/L，L＝1cm，则ε＝A。
紫蓝 青紫 深紫 深红 桔红 深黄 绿色带黄 Ultra-violet
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可见
9
（3）光学因素的影响
散射是向空间各个方向，而使透射光 减弱。反射可使光能损失，当光线通过 两种不同介质时，则发生反射。当样本 溶液与空白溶液的折射率有较大差异时， 导致吸收值的偏差。
（4）非平行光通过吸收池时，由于光线 的倾斜使厚度L增大而影响测量值。
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6
2．影响因素
（1）化学因素的影响
溶液中溶质可因浓度的改变而发生离 解、缔合，与溶剂间的作用等原因而出 现偏离比尔定律的现象。由化学因素引 起的偏离，有时可控制溶液条件设法减 免。此外，能产生荧光的物质也可导致 偏离比尔定律。
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7
（2）非单色光的影响
比尔定律的一个重要条件是单色光， 但在比色分析中常有不同波长的光同时 存在。这就使吸光度发生改变，从而偏 离比尔定律。
生化检验技术基础 与进展
上海长征医院实验诊断科
于嘉屏
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1
一、比色分析
1．比色分析理论――Beer-Lambert 定律
A = lg（I0/I）＝KCL 或 I＝I0×10-KCL
I0：入射光强度 I：透过光强度 K：常数 C：溶液浓度 L：溶液的厚度
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2
（1）郎伯定律
I0
It
l
L
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4
透光率（transmittance，T，透射率） T＝I / I0
吸光度（absorbance，A） 光密度（eptical density，D或OD）
A＝lg I0/I＝-lgT T＝10-A＝10-KCL A＝KCL 当L用cm，C用mol/L表示，则K即称之为 摩尔吸光系数，用ε表示。 当C＝1mol/L，L＝1cm，则ε＝A。
常见的生化与分子生物学技术大串讲PPT课件
☺ 离心方法是根据分子的特征密度来分离大分子。如果一 种颗粒的密度大于其介质溶液的密度，那么这种颗粒有 可能通过溶液发生沉降。颗粒沉降的速度与颗粒与介质 溶液之间的密度之差成正比。任何一种颗粒在离心力作 用下通过溶液发生沉降。
☺ 差速离心和密度梯度离心
9
10
层析
层析法又被称为色谱。所有的层析系统都由两相组成： 一个是固定相，它可以是固体物质，也可以是固定在 固体物质上的成分；另一个是由可以流动的物质组成 的流动相，如水和各种溶剂。当待分离样品随着流动 相通过固定相时，各组份在理化性质上的差别使得各 自与两相发生相互作用（如吸附、溶解或结合等）的 能力不同，最终导致它们在两相中的分配不同，而且 随着流动相向前移动，各组份会不断地在两相中进行 再分配。与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相 移动时受到的阻力就越小，向前移动的速度越快；反 之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越 慢。经过分部收集流出液，可得到样品中所含的各单 一组份据有无支持物将其 分为无支持物的自由电泳和有支持物的区带电泳两 大类。区带电泳包括以滤纸作为支持物的纸电泳、 以醋酸纤维素等薄膜为支持物的薄层电泳，以及与 凝胶（例如琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶）为支持物的 凝胶电泳。
等电聚焦凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、二
维电泳、脉冲场凝胶电泳。
纯度、大小或pI的测定。
18
19
蛋白质纯度的鉴定
（1）电泳法：如聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦和毛细 管电泳等，纯净的蛋白质电泳的结果应该是一条带。 如果使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，则应该特别小心， 因为SDS能够破坏蛋白质的四级结构，如果一种蛋白质 由不同的亚基组成，则会出现几条带。此外，电泳法 检测蛋白质的纯度时，应取分布在蛋白质等电点两侧 的两个不同的pH 值分别进行检测，这样得出的结论才 更可靠；
☺ 差速离心和密度梯度离心
9
10
层析
层析法又被称为色谱。所有的层析系统都由两相组成： 一个是固定相，它可以是固体物质，也可以是固定在 固体物质上的成分；另一个是由可以流动的物质组成 的流动相，如水和各种溶剂。当待分离样品随着流动 相通过固定相时，各组份在理化性质上的差别使得各 自与两相发生相互作用（如吸附、溶解或结合等）的 能力不同，最终导致它们在两相中的分配不同，而且 随着流动相向前移动，各组份会不断地在两相中进行 再分配。与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相 移动时受到的阻力就越小，向前移动的速度越快；反 之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越 慢。经过分部收集流出液，可得到样品中所含的各单 一组份据有无支持物将其 分为无支持物的自由电泳和有支持物的区带电泳两 大类。区带电泳包括以滤纸作为支持物的纸电泳、 以醋酸纤维素等薄膜为支持物的薄层电泳，以及与 凝胶（例如琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶）为支持物的 凝胶电泳。
等电聚焦凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、二
维电泳、脉冲场凝胶电泳。
纯度、大小或pI的测定。
18
19
蛋白质纯度的鉴定
（1）电泳法：如聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦和毛细 管电泳等，纯净的蛋白质电泳的结果应该是一条带。 如果使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，则应该特别小心， 因为SDS能够破坏蛋白质的四级结构，如果一种蛋白质 由不同的亚基组成，则会出现几条带。此外，电泳法 检测蛋白质的纯度时，应取分布在蛋白质等电点两侧 的两个不同的pH 值分别进行检测，这样得出的结论才 更可靠；
生物化学实验技术PPT课件
特定DNA片段
农业生物学实验教学中心
耐热DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus)
(%)
100
酶 80 活 性 60
40
20
40 50 60 70 80 90 100
温度(℃)
Saiki（1988）将耐热DNA聚合酶引入PCR，使利用热变性解链DNA模板可行。
PCR反应循环
Taq
P2
Mg2+
2021/3/12
P1
dATP dCTP
dTTP
dGTP
农业生物学实验教学中心
PCR反应条件
1）PCR反应成分
（1）模板 单、双链DNA均可。 不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA
结合蛋白类。 DNA模板一般100ng /100L。 模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。
5’ 3’
SG SG SG
Emission
3’ 5’
SG
农业生物学实验教学中心
梯度PCR仪
实时荧光定量PCR仪
普通PCR仪
2021/3/12
农业生物学实验教学中心
一、实验目的
PCR示例
学习PCR分析的原理与技术。
2021/3/12
农业生物学实验教学中心
二、实验材料、仪器和试剂
1、材料：含1Kb插入片段的克隆载体
基因组DNA结构功能的研究
农业生物学实验教学中心
低浓度引物
高浓度引物
2)反向PCR (reverse PCR)
用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段， 对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。
未知序列
已知序列
《生物化学技术实验》PPT课件
完整版课件ppt
33
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34
■ 亲和层析作用机理：
(1) X
B A
Sample
(2)
Washing
A
B
配体
X
完整版课件ppt
(3)
Elution
A
B
35
亲和吸附剂的制备
• 分离纯化一定数量的游离配体 • 载体活化 • 配体与载体偶联
完整版课件ppt
36
完整版课件ppt
37
■ 亲和层析图谱：
酯键＞酰胺键＞肽键
完整版课件ppt
49
胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶(糜蛋白酶) 和弹性蛋白酶三种酶在理化性质和结构 上均十分接近，利用一般常用的提取分 离方法，很难将它们之间彼此彻底分开 。为了获得高纯度的胰蛋白酶制品，采 用亲和层折技术进一步纯化后，可达到 十分满意的效果。
完整版课件ppt
50
胰蛋白酶的天然抑制剂 -------鸡卵类粘蛋白(CHOM)
生物化学技术实验部分
(2010版)
完整版课件ppt
1
生物化学研究的核心任务： 阐明生命现象的分子机理。
完整版课件ppt
2
生物大分子物质制备的基本过程：
• 确定测定方法 • 材料的选择与处理 • 抽提 • 浓缩 • 纯化 • 有效成分纯度和性质的分析
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3
蛋白质的制备：
前处理
浓缩、粗分离
完整版课件ppt
59
胰蛋白酶的BAEE单位定义为： 在下列实验条件下，引起每分钟光吸收值 A253nm增加0.001的酶量。 • 底物（BAEE）浓度为1mmol/L • 反应液为0.05mol/L Tris-HCl,pH7.6 • 光程1cm • 反应温度25℃ • 波长253nm • OD值递增0.001/min
生化实验绪论及蛋白质沉淀变性反应讲课文档
磺粉以防汞蒸气中毒，注意室内通风 。
第十页，共38页。
安全布告
有辐射性
生物危险品
警告标志
第十一页，共38页。
有毒的
刺激性有害的
腐蚀性的
高度可燃的
爆炸性的
危险化学药品标志
第十二页，共38页。
有氧化作用的
化学药品的质量标签
氯化钠 优级纯
第十三页，共38页。
化学药品的质量标签
氯化钠
分析纯
第十四页，共38页。
生化实验绪论及蛋白质沉淀变性反应
第一页，共38页。
生物化学实验室规则（2）
6、乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，远离火源操作及 放置。
7、所有废液、废弃物等，均收集在指定容器内，不得倒在水槽 内或到处乱仍。强酸和强碱不能直接倒在水槽中，应先稀释 ，然后倒入水槽，再用大量自来水冲洗水槽及下水道。
– 实验报告 – 平时操作、表现
姓名，班级，学号，课室 ，实验时间、 实验教师
第二十页，共38页。
实验内容及安排 ( 72学时 )
1、绪论、蛋白质沉淀、变性反应
9月26-27
2、蛋白质浓度测定—考马斯亮蓝法
10月10-11
3、 阳离子交换树脂层析分离氨基酸
10月17-18
4、血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
化学药品的质量标签
氯化钠
化学纯
第十五页，共38页。
实验室安全--避免烧伤和创伤
• 使用玻璃、金属器材时注意防止割伤及机械创伤。如发
生意外，找实验室工作人员(少量急用药物备用)。
• 浓酸、浓碱腐蚀性很强，必须极为小心地操作。用吸量
管量取这些试剂(包括有毒物)时，必须使用橡皮球，绝 对不能用口吸取。
第十页，共38页。
安全布告
有辐射性
生物危险品
警告标志
第十一页，共38页。
有毒的
刺激性有害的
腐蚀性的
高度可燃的
爆炸性的
危险化学药品标志
第十二页，共38页。
有氧化作用的
化学药品的质量标签
氯化钠 优级纯
第十三页，共38页。
化学药品的质量标签
氯化钠
分析纯
第十四页，共38页。
生化实验绪论及蛋白质沉淀变性反应
第一页，共38页。
生物化学实验室规则（2）
6、乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，远离火源操作及 放置。
7、所有废液、废弃物等，均收集在指定容器内，不得倒在水槽 内或到处乱仍。强酸和强碱不能直接倒在水槽中，应先稀释 ，然后倒入水槽，再用大量自来水冲洗水槽及下水道。
– 实验报告 – 平时操作、表现
姓名，班级，学号，课室 ，实验时间、 实验教师
第二十页，共38页。
实验内容及安排 ( 72学时 )
1、绪论、蛋白质沉淀、变性反应
9月26-27
2、蛋白质浓度测定—考马斯亮蓝法
10月10-11
3、 阳离子交换树脂层析分离氨基酸
10月17-18
4、血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
化学药品的质量标签
氯化钠
化学纯
第十五页，共38页。
实验室安全--避免烧伤和创伤
• 使用玻璃、金属器材时注意防止割伤及机械创伤。如发
生意外，找实验室工作人员(少量急用药物备用)。
• 浓酸、浓碱腐蚀性很强，必须极为小心地操作。用吸量
管量取这些试剂(包括有毒物)时，必须使用橡皮球，绝 对不能用口吸取。
生化检测技术原理ppt课件
分光光度法的校准
如何才能达到我们刚才的要求？
在不同实验室间、测量系统间，具有可比性 所有的实验室均使用统一的校准品进行校准
在不同时间检测，能够前后一致 定期对检测系统进行校准，确保任何时间都处于同一种“刻度”下
结果的准确性可靠 所使用的校准品的浓度真实、可靠！
分光光度法的校准
对于以上要求，Roche都可以做到！
分光光度法的分析类型
首先，我们Roche的检测系统包括哪些组成部分？
分光光度法的分析类型
接下来，检测系统中都存在哪些影响因素需要消除？
• 标本及容器（不同样本具有的不同本底吸光度）
二 • 仪器（比色杯的本底吸光度、不同比色杯之间的本底亦不同） 三 • 试剂（试剂具有的本底吸光度）
分光光度法的分析类型
Q：为什么朗伯比尔定律计算吸光度只适用于单色光？
在复色光的条件下，由于待 测物质在各个波段下吸光系 数ε的不同，造成相关曲线也 出现不同程度的偏离
分光光度法的工作原理
了解一下分光光度法检测的完整流程（前分光）
3、单色平行光经过反应杯溶液
1、光源灯发出 全波段光线
2、单色器将全波段光线分 为不同波长的单色平行光
后分光模式进入比色杯时为全波段光线，出射之后再分为多束单波长光线各自检 测强度，所以方便仪器得到多个波长下的吸光度。
前分光模式进入比色杯时为单色光，要想实现多波长检测则需要两个单色器产生 不同波长光线，由切光器控制，交替的通过同一比色杯，不可连续监测。
在罗氏仪器上，待测物的12个波长的吸光度都被检测！！并选择设定中的2个波长 进行计算！
Roche通过每天开机时自动执行光密度检查，更新 比色杯的本底吸光度，之后在检测标本时均自动扣除。
Modular: <15500
生化检验ppt课件
皮肤表面 与生活习惯、健康情况、工作条件等不 同而变动。 夏天G+菌为主，冬天G-菌为主
（2）常存菌：
毛孔和皮脂腺内、菌种和数量变化小 表皮葡萄球菌为主
43 无菌术 8
（3）皮肤细菌的增多的情况： 隐蔽部位：脐、会阴、指（趾）甲下、浓厚 的毛发等。 有感染伤口者的皮肤 久住院病人 接触病人和沾污敷料用品后医护人员皮 肤。
43
无菌术
6
灭菌：杀灭一切活的微生物。 消毒：杀灭病原微生物和其他有害微生 物。 操作规则及管理制度：防止已经灭菌和 消毒的物品、已行无菌准备的手术人员 或手术区不再被污染所采取的措施。 即——无菌观念。在一切诊疗工作中贯 彻无菌术原则。
43
无菌术
7
（一）伤口沾污的来源 1、皮肤 （1）暂存菌：
43 无菌术 4
5、1877 年
Bergmann
（德国）蒸
汽灭菌，建立无菌术 6、无菌术尚在不断改进研究中：消毒剂 的研制、超滤空气装置、灭菌的超声波 装置、一次性防水手术单和手术服等。 但传统消毒方法仍有相当的效果。
43
无菌术
5
概念：
1、无菌术：医疗侵入性操作过程中为了 防止污染或感染，而针对微生物及感染 途径所采用的一系列预防措施。 内容：灭菌、消毒法、操作规则及管理 制度。
43 27
无菌术
消毒剂按杀灭微生物的范围分为： 高效：能杀灭一切微生物包括芽孢，如： 碘剂、甲醛、环氧乙烷等。 中效：不能杀灭芽孢，如：乙醇、甲酚 等。 低效：不能杀灭结核杆菌、细菌芽孢、 亲水性病毒等，如：新洁尔灭、洗必泰 等。
43
无菌术
28
（三）器械用品的消毒 1、方法多样，但具有如下条件； 能杀灭微生物 不仅达到物体表面，而且达到管腔内、 关节铰链等。 物品不受侵蚀，结构不破坏或变形，消 毒后仍然保持良好的性能等。 尽可能节省时间。
（2）常存菌：
毛孔和皮脂腺内、菌种和数量变化小 表皮葡萄球菌为主
43 无菌术 8
（3）皮肤细菌的增多的情况： 隐蔽部位：脐、会阴、指（趾）甲下、浓厚 的毛发等。 有感染伤口者的皮肤 久住院病人 接触病人和沾污敷料用品后医护人员皮 肤。
43
无菌术
6
灭菌：杀灭一切活的微生物。 消毒：杀灭病原微生物和其他有害微生 物。 操作规则及管理制度：防止已经灭菌和 消毒的物品、已行无菌准备的手术人员 或手术区不再被污染所采取的措施。 即——无菌观念。在一切诊疗工作中贯 彻无菌术原则。
43
无菌术
7
（一）伤口沾污的来源 1、皮肤 （1）暂存菌：
43 无菌术 4
5、1877 年
Bergmann
（德国）蒸
汽灭菌，建立无菌术 6、无菌术尚在不断改进研究中：消毒剂 的研制、超滤空气装置、灭菌的超声波 装置、一次性防水手术单和手术服等。 但传统消毒方法仍有相当的效果。
43
无菌术
5
概念：
1、无菌术：医疗侵入性操作过程中为了 防止污染或感染，而针对微生物及感染 途径所采用的一系列预防措施。 内容：灭菌、消毒法、操作规则及管理 制度。
43 27
无菌术
消毒剂按杀灭微生物的范围分为： 高效：能杀灭一切微生物包括芽孢，如： 碘剂、甲醛、环氧乙烷等。 中效：不能杀灭芽孢，如：乙醇、甲酚 等。 低效：不能杀灭结核杆菌、细菌芽孢、 亲水性病毒等，如：新洁尔灭、洗必泰 等。
43
无菌术
28
（三）器械用品的消毒 1、方法多样，但具有如下条件； 能杀灭微生物 不仅达到物体表面，而且达到管腔内、 关节铰链等。 物品不受侵蚀，结构不破坏或变形，消 毒后仍然保持良好的性能等。 尽可能节省时间。
生化技术 课件 第一章 生命大分子物质的制备(共87张PPT)
• 相似相溶
3)水解酶：
• 无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或 核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然 物质量的减少。
• 参加抑制剂或调节提取液的pH、离子强度或极性 等方法使相应的水解酶失去活性，防止它们对欲提 纯的蛋白质、酶及核酸的降解作用。
参加二异丙基氟磷酸〔DFP〕可以抑制或减慢自溶作 用；
• 所需的样品量少、操作简单、反响迅速、灵敏广泛用于物 质的含量测定。
• 紫外光谱法、可见光光谱法、荧光光谱法、浊度法
紫外光谱法
利用某些生物大分子具有吸收紫外光的性质而建立 的一种方法。将一定浓度的待测物溶液，通过某一特定 波长的紫外分光光度计，测定此溶液的消光值即可换算 出待测物的浓度。
1.测定核酸含量
注意温度的影响
二、物理法：
1.超声波法：此法是 借助超声波的振动 力破碎细胞壁和细 胞器。破碎微生物 细菌和酵母菌时， 时间要长久一些。
2.压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。 在1.77×108Pa～3.54×108Pa 的高压下使细胞悬 液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎 。
对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备； 在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
简便、灵敏、准确、快速、专一 参加碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性； 吸附层析、盐析、凝胶过滤、 芳香族氨基酸的紫外吸收 离子交换层析、亲和层析、 ⑷许多生物大分子在生物材料中的含量极微，别离纯化的步骤繁多，流程长。 生物大分子制备的一般过程： 蛋白质的变性、复性、沉淀和凝固 RNA纯品: OD260/OD280 = 2. 最适于生物大分子尤其是蛋白质和酶的浓缩或脱盐，并具有本钱低，操作方便，条件温和，能较好地保持生物大分子的活性，回收率高 等优点。
3)水解酶：
• 无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或 核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然 物质量的减少。
• 参加抑制剂或调节提取液的pH、离子强度或极性 等方法使相应的水解酶失去活性，防止它们对欲提 纯的蛋白质、酶及核酸的降解作用。
参加二异丙基氟磷酸〔DFP〕可以抑制或减慢自溶作 用；
• 所需的样品量少、操作简单、反响迅速、灵敏广泛用于物 质的含量测定。
• 紫外光谱法、可见光光谱法、荧光光谱法、浊度法
紫外光谱法
利用某些生物大分子具有吸收紫外光的性质而建立 的一种方法。将一定浓度的待测物溶液，通过某一特定 波长的紫外分光光度计，测定此溶液的消光值即可换算 出待测物的浓度。
1.测定核酸含量
注意温度的影响
二、物理法：
1.超声波法：此法是 借助超声波的振动 力破碎细胞壁和细 胞器。破碎微生物 细菌和酵母菌时， 时间要长久一些。
2.压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。 在1.77×108Pa～3.54×108Pa 的高压下使细胞悬 液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎 。
对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备； 在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
简便、灵敏、准确、快速、专一 参加碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性； 吸附层析、盐析、凝胶过滤、 芳香族氨基酸的紫外吸收 离子交换层析、亲和层析、 ⑷许多生物大分子在生物材料中的含量极微，别离纯化的步骤繁多，流程长。 生物大分子制备的一般过程： 蛋白质的变性、复性、沉淀和凝固 RNA纯品: OD260/OD280 = 2. 最适于生物大分子尤其是蛋白质和酶的浓缩或脱盐，并具有本钱低，操作方便，条件温和，能较好地保持生物大分子的活性，回收率高 等优点。
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39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
生化实验技术讲座
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。