微生物快速检测方法进展

微生物快速检测方法进展

【关键词】微生物；快速检测；应用进展

doi：10.3969/j.issn.1004-7484(x).2012.06.566 文章编号：1004-7484（2012）-06-1685-02

有些微生物是有益的，也有些微生物的存在可引起多种应变性疾病和传染性疾病，会对人身体健康产生不良的影响；还会使食品及原料腐烂和变质。在空气或液体中，对于微生物的采集，选择合适的试验仪器发挥着不可磨灭的作用。1 微生物检测的必要性

1.1 食品因含有微生物可依赖生长的营养成分，因此食品会受到微生物不同程度的污染。食品质量安全关系到人民群众的身体健康，生命安全及社会经济。为了食品的安全，人们的健康，微生物检测极其必要。

1.2 医院感染都和微生物有着极为密切的关系。加强医院的微生物检验与监测，对于预防和控制医院感染起着十分重要的作用。1.3 空气室内空气是微生物污染的重要传播途径。室内舒适的温度，湿度等环境条件以及相对密闭的室内更为各种有害微生物滋生创造了条件。只有有效地检测微生物的含量，才能采取有效地措施，保证人体健康不受外源入侵物的侵害。2 微生物快速检测方法及应用进展

2.1 即用型纸片法由3m公司研发的perrifilmtmplate系列微生物测试片能够对菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母进行分别计数。

运用快速检验制片对霉菌进行检验，具有操作便捷的优点，其操作环境仅需要维持在36℃即可，无需进行低温培养；这种检验方法还具有快速的优点，培养2天后就能够得到结果，远小于国家标准检验法的3-4天的检验时间，大大缩短了工作时间。纸片法和国家标准检验法在霉菌检验率上效果接近，结果明显可知。而制片荧光法的应用原理则是细菌产生的代谢酶或其他产物能够进行酶底物反应。这种方法只需要对大肠菌群、大肠杆菌中相关酶的活性进行检测，并将荧光产物置于365nm紫外光下进行观察即可。纸片检验法采用高压灭菌方法，能够减少实验准备以及操作步骤。但是纸片的缺点就是成本过高，因此实践中基层单位较少采用。

2.2 生物化学技术

2.2.1 pcr技术 pcr技术的原理就是体外酶促反应可以合成特异性dna片段，对其扩增物的识别就能够检测菌群。pcr技术具有灵敏度高的优点，甚至能够检测出细菌的拷贝基因，因此在检测过程中甚至可以不增加菌群数量就能够使用pcr技术进行筛选，能够大大提高筛选效率。但是pcr技术存在的缺点也很明显，即对tap酶具有抑制作用的成分如食物成分、增菌培养基成分或者其他微生物dna，会诱发检验结果呈现假阴性。pcr的操作过程也十分严格，即使有微量的外源性dna进入pcr，都会导致结果出现假阳性。甚至扩增过程中的装配误差也会影响结果的准确性。基于此，pcr技术的高要求也是基层单位排斥其使用的重要原因，且这样技术的经济

效益与社会效益见效慢，也影响了其在基层单位的推广使用。

2.2.2 基因探针技术基因探针技术的作用原理是同源序列的核酸链在一定条件下能够形成稳定的互补dna、rna或dna、dna链条，此时可以利用具备高度特异性片段制成的基因探针来对不同细菌

进行识别。基因探针具有减少因基因片段长度的多态性导致的分析条带数的增多，例如法国生物一梅里埃公司的gen、probe基因探针检测系统，对特定菌落进行分离并进行确证试验仅需要30分钟。这项技术的缺点是对目标菌以外的细菌无法检测识别。

2.3 选择、鉴定用培养基法这种方法的原理就是通过在培养集中介入特异性的生化反应底物、抗体、荧光暗影第五、酶反应底物等，能够对目标培养菌进行一次性选择与分离，例如生物一梅里埃公司的bp+rpf(兔血浆+纤维蛋白原)培养基对金黄色葡萄球菌的选择、鉴定可在24小时内完成。在merk公司的chro mocult coliform agar培养基中，大肠杆菌的颜色从墨绿色过渡到紫色，沙门菌的颜色从淡绿色过渡到蓝绿色，橙红色至红色的菌落是柠檬酸杆菌、克雷伯杆菌，其他的肠道菌则是无色的。这种方法对操作者要求较低，使用者经过短期培训就可以上岗，其发展前景十分可观，能带来良好的经济效益和社会效益。

2.4 免疫学技术免疫学技术的原理是利用抗原与抗体的特异性结合，加之免疫放大技术来对细菌进行鉴别。免疫学技术的特长是不需要分离增加的细菌，操作方法简便。免疫法的优点是灵敏度高，

抗原与抗体的结合反应时间较短，因此检验的时间跨度也较小。例如以免疫磁珠法对副溶血性弧菌能够快速、有效收集，还能够对特定环境与食品中的目标菌群进行高效率的检验。采用胶金体免疫法对金黄色葡萄球菌不仅能够进行快速、准确的鉴别，还能够对乙型肝炎的表面抗原进行快速检测。近年来，atp生物发光法在实践中越来越普及，主要用于食品加工设备的洁净度进行快速检测。这种方法配合体细胞清除技术，能够对细菌atp和体细胞tap进行快速检测。原理就是细菌atp的数量与细菌的数量成一定比例，atp生物发光法就是利用这个原理对肉类食品细菌的污染状况或者食品容器进行快速、高效的现场卫生学检查。微型自动荧光酶标分析法(mini vidas)的作用机制是抗原与抗体之间会出现特异反应，进而利用酶联荧光免疫分析技术对目标细菌进行检测与分离。因为荧光的强弱可以辅助设备对样品的阴阳性进行自动判断，这种方法鉴别沙门菌的灵敏度与准确度特别高。这种方法在实践中多用于出口冻肉的检验，能够有效提高通关的速率。

2.5 细菌直接计数法这种方法主要包括流式细胞仪(flow cytometry，fcm)和固相细胞计数(solid phase cytometry，spc)法。这种方法的原理就是利用激光作为发光源，光束在聚焦、调整后对样品流进行垂直照射，这样被荧光染色的细胞就能够产生散色光和激发荧光。光散射的信号能够标志细胞体积的大小，信号强度则是细胞膜表面抗原的轻度或者核内物质浓度的反应，基于此散射

光信号和荧光信号就能够对微生物的大小、数量、形状进行预估。这种方法的优点是灵敏度高，且可以对细菌的性质与数量同时鉴定。目前这项技术可以对细菌总数、致病性沙门菌、大肠埃希氏菌等进行检测。对特定细胞进行技术统计，就能够对不同细胞进行精确度较高的检测。进行过滤样品的操作之后，实验者可以存留的微生物进行荧光标记，用激光扫描仪就可以对其鉴别。这种方法的优点就是对生长速度慢的微生物能够进行快速检测，其检测速度能够远高于传统的平板计数法，缺点是成本较高，因此推广使用具有一定困难。