高产漆酶菌株的筛选及对染料的降解
漆酶的分离纯化及其应用研究
漆酶的分离纯化及其应用研究漆酶是一种生物催化剂，被广泛应用于漆木器、皮革、纺织品、造纸、食品等领域。
漆酶的分离纯化及其应用已经成为当前生物技术领域研究的热点之一。
一、漆酶的分离纯化方法漆酶在微生物中的合成量较少，因此，为了进行漆酶的高效生产和利用，需要对漆酶进行分离纯化。
常见的漆酶分离纯化方法有：超滤法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法等。
超滤法是通过超滤膜将酶与其他杂质分离，可以得到相对较为纯净的漆酶。
离子交换层析法是利用离子交换树脂将需要分离的物质分离出来。
凝胶过滤层析法则是利用化学性质不同的凝胶将需要分离的物质分离出来。
二、漆酶的应用研究漆酶的应用研究主要集中在以下几个领域：1.漆木器颜色、光泽度的成型漆木器的颜色和光泽度可以通过打磨、上光等方式达到，但这种方法比较费时费力，而且不够持久。
采用漆酶涂料，可以使漆木器的颜色和光泽度更加饱满，而且能够更持久地保持。
2.制作皮革中的保护剂对皮革进行漆酶处理，可以使皮革更加柔软、舒适，同时具有保护作用，可以延长皮革的使用寿命。
3.纺织品整理在染色后，使用漆酶整理纺织品，可以提高纺织品的匀染性和光泽度，使其更加柔软舒适。
4.造纸生产漆酶在造纸生产中也起着重要的作用。
已经有不少研究表明，使用漆酶可以比传统方法更加高效地从纸浆中分离木质素，使得纸张更加柔韧、实心、白度高。
5.食品加工漆酶被广泛应用于味精、酱油等食品加工领域。
将其添加到食品中可以改善食品口感和口感质量。
结语漆酶具有一定的生物技术优势，不仅能够提高生产效率和质量，而且还能够在生态保护方面发挥重要的作用。
不过，需要在其分离纯化和应用研究方面进一步深入探索，以更好地推动其应用。
降解菌的筛选原理
降解菌的筛选原理
筛选降解菌的基本原理如下:
1. 取样:从可能含有降解菌的环境中取样,如污染场地的土壤、废水等。
2. 富集培养:在包含目标污染物的培养基中首先富集降解该污染物的菌群。
3. 离纯培养:从富集得到的菌群中,进一步分离、纯化培养单个菌株。
4. 降解性测试:在包含污染物的最小培养基上,测试每个菌株的生长和降解能力。
5. 鉴定方法:对具有降解能力的菌株进行微生物学和生理生化鉴定。
6. 去除重复:对筛选得到的菌株进行同源性分析,去除重复的菌株。
7. 优选筛选:比较不同菌株的降解速率、范围等,选择降解能力最强的菌株。
8. 过程优化:优化筛选菌株的培养条件,提高其降解能力。
9. 降解机制研究:探究降解菌的代谢途径及关键酶的作用。
通过上述步骤,可以从环境样本中筛选获得对某种污染物具有良好降解能力的菌
株。
这些菌株可以用于环境修复。
高产漆酶白腐真菌的分离与鉴别
高产漆酶白腐真菌的分离与鉴别
龚国利，陈志宣，陈 松，王 娜，刘丽丽
（陕西科技大学 生命科学与工程学院，陕西 西安 ７１００２１）
摘 要 ：研 究 目 的 是 筛 选 高 产 漆 酶 的 白 腐 菌 株 ．通 过 愈 创 木 酚 培 养 基 和 鞣 酸 培 养 基 对 白 腐 菌 所 产漆酶的显色作用来筛选白 腐 真 菌，并 分 析 了 所 分 离 出 的 白 腐 菌 的 产 漆 酶 能 力．运 用 此 种 方 法，成功获得５株高产漆酶的白腐真菌，其中一株白 腐真 菌所产 漆酶 量达到了 ２１１．７ＩＵ／ｍＬ， 比普通白腐菌漆酶产量高出１．１２倍．最后，用光学显 微 镜 对 所 分 离 出 的 白 腐 真 菌 进 行 形 态 特 征 观 察 ，和 文 献 报 道 的 白 腐 菌 形 态 特 征 一 致 ． 关 键 词 ：白 腐 菌 ；漆 酶 ；分 离 中 图 法 分 类 号 ：Ｑ９３９．１１ 文 献 标 识 码 ：Ａ
把筛 选 出 的 高 产 漆 酶 的 白 腐 真 菌，接 种 到 ＰＤＡ 液体培养 基 中，在 摇 床 培 养 箱 中 培 养 ８～１４ 天 ，取 酶 液 进 行 酶 活 的 测 定 ．
酶活的测定方法如下所示． 粗酶液的制 备：取 适 量 培 养 液，用 六 层 纱 布 过 滤后，离心机离心（４ ０００ｒ／ｍｉｎ）１０ ｍｉｎ，取 上 清 液 即为粗酶液． 缓冲液 的 配 制：将 ４．５ｇ 丁 二 酸 加 入 ８００ ｍＬ 蒸馏水中，用 ＮａＯＨ 溶 液 调 其 ｐＨ 至 ４．５，用 蒸 馏
１ 材 料 和 方 法
１．１ 材 料
１．１．１ 样 品 采 集 从 不 同 环 境 的 地 表 上 采 集 土 壤 、腐 烂 的 树 枝 等
均匀分成三份，分 别 接 种 在 ＰＤＡ、ＭＥＡ、专 项 培 养 基 上 ．待 到 菌 株 长 出 ，反 复 转 接 纯 化 后 ，分 别 接 种 到 愈创木酚培养基和鞣酸培养基上． １．１．２ 培 养 基
一株产漆酶菌株的筛选鉴定和发酵条件的研究
关键词 ： 色木霉 ； 绿 愈创 木酚 ； 态学特征 ； 形 酶活 力
中图 分 类 号 ：９ ５ Ｑ ３ 文 献标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ８— ６ ２ ２０ ）３— ０ ０— ４ １０ ９３ （０ ８ ０ ０４ ０
刘 敏， 张 明
２ ０３ ） ３０６ （ 安徽 农 业 大学生命科 学 学院 ， 合肥
摘
要： 以愈创 木酚为底 物 ， 采用 平板 筛选法 筛选得到 一株 产漆酶 菌株 ＷＳ ． ， 态学特性表 明该 茵属 于绿 色木 １２ 形
霉。对产酶条件的初步研究结果表明 ， Ｉ ＷＳ 一 ２菌株 的产 酶高峰期 出现在接 种培 养后 的第 ４ 。与蔗 糖、 糖、 乳糖 ｄ 乳 半 和 可溶性淀粉相 比， 以葡萄糖 为碳 源时， 发酵上清液 的漆 酶活力明显要 高， 大值 达 ２０ ／ 。 以 Ｎ １ 最 ３Ｕ Ｌ Ｈ Ｃ 为氮源 ， 最 有利 于 ＷＳ － １２漆酶的产生 ， 酶活力最高可达到 ２ ４ ／ 。００ ｍｎｌＬ的愈创木 酚和 Ａ Ｔ 漆 ３Ｕ Ｌ ， １ ｒ ／ ｏ Ｂ Ｓ对 ＷＳ － Ｉ２产漆 酶有明
明 ， － ｉ： ｈ ｎｍ ｎ＠ ａａ．ｄ ． ｎ Ｅｍａ ｚａｇ ｉｇ ｈｕ ｅｕ ｃ 。 ｌ
基金项 目： 安徽省高校 “ 十五” 优秀人才计划（ 教秘人 １０４— ０ ） 【 ２０ １０
收 稿 日期 ：０７一 ４—２ ２０ ｏ ８
化变色圈的菌落进行分离纯化 。将分离菌株 分别接种
到筛选平板上 和 Ｐ Ａ平板 上 ，８Ｃ恒 温培养 ， 出筛 Ｄ ２￣ 选 选平板上 出现明显 氧化变色圈 的菌 株 ， 通过 Ｐ Ａ平 并 Ｄ
一株高效广谱染料降解细菌的分离鉴定及脱色特性研究[1]
![一株高效广谱染料降解细菌的分离鉴定及脱色特性研究[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/0128cf0976c66137ee0619e4.png)
中国生物工程杂志 China B i otechnol ogy,2010,30(6):70Ο76一株高效广谱染料降解细菌的分离鉴定及脱色特性研究3司美茹1,233 苏 涛1 杨 革1,2(1曲阜师范大学生命科学学院 曲阜 273165)(2山东大学微生物技术国家重点实验室 济南 250000)摘要 通过梯度驯化,从印染废水长期污染土壤中分离筛选出能以4种不同结构类型的染料(刚果红、美蓝、孔雀绿和活性艳蓝K N 2R )为唯一碳源的菌株X S MR ,根据其形态学特征和生理生化鉴定及16S r DNA 序列分析,初步鉴定为无色杆菌属(A chro m obacter s p.)的菌株。
菌株X S MR 对4种染料均具有强的脱色降解能力,且对染料脱色的同时,自身能够生长繁殖,培养24h 菌体干重超过不加染料的对照。
在振荡培养条件下对该菌株的脱色反应条件进行研究,结果表明,当刚果红、美蓝、孔雀绿及活性艳蓝K N 2R 的初始浓度分别小于200mg/L 、200mg/L 、150mg/L 及150mg/L 时,在pH7.5、温度35℃、接种量4%(V /V )条件下,接种菌株X S MR 脱色14h 对4种染料的脱色率均可达到98%以上。
通过对降解产物的紫外2可见光谱分析,进一步证明了菌株X S MR 能彻底降解染料。
菌株X S MR 对染料脱色的机理包括生物降解和菌株吸附两方面。
关键词 筛选 染料 生物降解 无色杆菌属 脱色中图分类号 Q932331收稿日期:2010201205 修回日期:20102042133微生物技术国家重点实验室开放基金项目33电子信箱:si m eiru1016@ 随着染料和印染工业的迅猛发展,染料的种类和数量不断增加。
在染料生产和使用过程中,大约有10%～20%的染料随着废水排放出去,对环境造成严重的污染[1]。
染料从结构上可分为偶氮、蒽醌、杂环、三苯甲烷等,多是难以降解的芳香族化合物[2]。
漆酶高产菌株筛选及漆酶基因片段的克隆
Ｔｈ ａ ｃ ｆ Ｓ ｒ ｅ ｎｇ ｏ ｇ ｌＬａ ｃ ｓ ｔ ａ ｎ ｅ Ｒｅ ｒ ｈ ｏ ｃ ｅ ｎｉ ｆ Ｆｕ ａ ｃ ａ ｅ Ｓ ｒ ｉ
同培 养 基 对 漆 酶 产 生 菌 株 筛 选 条 件 进 行 研 究 ， 过 氧 通
于 担 子 菌 、 知 菌 和 子 囊 菌 中 ， 中最 主 要 的 生 产 者 是 半 其
担 子 菌 。 。漆 酶 （ ｃａ ｅ ） 一 种 含 铜 的 多 酚 氧 化 ］ Ｌａｃ ｓｓ 是
酶 ， 与 真 菌 的 发 育 、 态 发 生 过 程 相 关 ， 与 孢 子 的 它 形 参
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｌａ ｃ ｓ ｒ ｄ ｃ ｉ ｎ ｓ ｒ ｉ ｎ ｕ ａ ｉ ｎ ｃ ｎ ｉｉ ｎ ｅ ｅ ｓ ｕ ｉ ｄ ｂ ｉｆ ｒ ｎｔ ｓ ｂｓ ｒ ｔ ｏ ｃ ｎ ｒ — ｓ ｒ ｃ ： ｃ ａ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔｏ ｔ ａ ｎ ｉ ｃ ｂ ｔｏ ｏ ｄ ｔｏ ｓ ｗ ｒ ｔ ｄ ｅ ｙ ｄ ｆ ｅ ｅ ｕ ｔ ａ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ａ
（ ． Ｃｏ ｌ ｇ ｆ Ｆｏ ｅ ｔ ｙ ｕ ｃ ｎ ｃ ｅ ｅ ｙ ｃ ｕ ， ５ ０ ０； １ ｌｅ ｅ ｏ ｒ ｓ ｒ ｏ ｒ ｅ ａ ｄ ｓ ｉｎｃ ， ｉ ｈ ｎ １ ３ ０
２ Ｃｏｌｇ ｆＲｅ ｏ ｒ ｅ ａ ｄ Ｅｎ ｉｏ ｍ ｅ ｔ ｌｓ ｉｎ ｅ Ｎｏ ｔ ｅ ｓ ｒｃ ｌｕ ａ ． ｌ ｅｏ ｓ ｕ ｃ ｎ ｖ ｒ ｎ ｎ ａ ｃｅ ｃ ， ｒｈ ａ ｔＡｇ ｉｕｔ ｒ ｌＵｎｉｅ ｓｔ Ｈａ ｂｎ ， ５ ０ ０） ｅ ｖ ｒｉｙ， ｒ ｉ １ ０ ３
双孢菇漆酶酶学性质及染料脱色初探
治理方面的作用显得越来越重要 ， 成为酶工程 与环境 保 护交叉领域研究的热点［ 。双孢菇 （ ｇ ｒ ｕ ｓｏｕ ） ３ ］ Ａ ａｉ ｓ ｉ ｒ ｓ ｇ ｂｐ 是世界范围 内栽培 的一种大型食用 菌， 课题组 曾通过 对 其液体深层发酵的优化研究发现其高产 漆酶 ， 现进一 步 对双孢菇漆酶的酶学性 质及其 对几种 染料 的脱 色性 能 进行 了比较研究 ， 以期 为双孢菇 漆酶的应用提供基础 理 论依据 。
加入适 当稀释 的粗酶液 ０ ５ｍ ，５ ． Ｌ ２ ℃保温 ５ｒ ｎ ７２ ｉ，５Ｅ ａ 型紫外可见分光光度计测 ５ ５ｎ ９ Ｉ ｎ处光密度 （ Ｄ值） 酶 ０ ， 活力 以样品与底物反应 ５ｍｉ 后 光密度 的改 变值 表示 ， ｎ 以每分钟光密度增加 ０ ０ 为 １ ．１ 个酶活力单位 （ ／ ） ｕ ｍＬ 。
１２ １ 酶液 ．．
培养 ８ｄ后的菌液 ， 取样 ， ００ｒｍｉ ４ ０ ／ ｎ离
心， 上清液 即为粗酶液 ， 于～４ ℃冰箱保存备用 。 １２２ 酶活力测定¨ ０ １ｍ ｌＬ ｐ ． ．． ］ ． ｏ／ 、Ｈ ４６的醋酸缓冲 液 ３５ｍ 加入 ３３ ｍｏ／ ． Ｌ， ．６ ｍ ｌ Ｌ的邻联 甲苯胺 ０５ｍ 再 ． Ｌ，
材 １ Ｏ余 部。
５ ￣ 、Ｈ ． ５ Ｃ）ｐ ４ ６的醋酸 缓 冲液 中保 存 １ ５ｈ 在最适 ｐ ． ， Ｈ 和最适温度下测定酶活力 ， 结果如 图 ３ 所示 。可知双孢 菇漆 酶 的最 适 保 存 温 度 是 ２ 。 ５ ℃时 酶 活 力 迅 速 ５ Ｃ，５ 下降 。
基 金项 目： 山东大 学威 海分校 科研 资助 项 目（ ＯＯＯ 。 Ａ ９ ｌ）
Ｒ、 ， ＡⅥ 的脱 色率 达到 ７ 。 ９
关键词 ： 双孢菇 ； 漆酶 ； 酶学性质 ； 脱色 中图分类号 ： ４． ９ 文献标识码 ： 文章编号 ：０１ ０ ０ （０ ０１ 一Ｏ８ 一Ｏ Ｓ６ ６１ Ａ １０ － ０ ９２１ ）４ １２ ２
Trametes_hirsuta_漆酶的分离纯化及其对活性染料脱色研究
山东农业大学学报(自然科学版),2024,55(1):076-083Journal of Shandong Agricultural University ( Natural Science Edition )VOL.55 NO.1 2024 doi:10.3969/j.issn.1000-2324.2024.01.011Trametes hirsuta漆酶的分离纯化及其对活性染料脱色研究刘飞，李治宏，张仕豪，刘璇，郑晓晴，焦若若，朱友双*济宁医学院生物科学学院，山东日照 276800摘要：漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，在生物检测、工业染料脱色、有机农药降解、纸浆漂白及食品饮料等领域具有广泛的应用价值。
本研究使用实验室自主筛选鉴定的漆酶高产菌株粗毛栓菌（Trametes hirsuta），液态发酵后，培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose FF 阴离子交换层析分离纯化，酶活总得率57.2%，纯化倍数6.0倍，比活力为758.5 U/mg，漆酶的分子量约为50 kDa。
利用粗毛栓菌粗酶液分别对结晶紫、溴酚蓝、孔雀石绿、詹姆斯绿B进行脱色，同时研究了染料浓度、脱色温度、pH和NaCl对溴酚蓝和孔雀石绿脱色率的影响。
结果表明，溴酚蓝和孔雀石绿浓度分别为40 mg/L 和50 mg/L时脱色率较高；在脱色温度为50 ℃时，漆酶对溴酚蓝和孔雀石绿的脱色率较高，最高脱色率分别为68.51%和83.06%；溴酚蓝在pH 3.5时脱色率最高达到72.61%，而孔雀石绿的脱色率在pH 4.5时最高达到83.49%；NaCl对Trametes hirsuta漆酶催化染料脱色有一定的抑制作用。
本研究表明Trametes hirsuta漆酶在染料脱色中具有较大的应用前景，在工业废水的处理中具有良好的应用潜力。
关键词：粗毛栓菌；漆酶；分离纯化；染料脱色中图法分类号：Q939.5文献标识码： A文章编号：1000-2324（2024）01-0076-08 Isolation and Purification of Laccase from Trametes hirsuta and Its Application in Reactive Dye DecolorizationLIU Fei, LI Zhi-hong, ZHANG Shi-hao, LIU Xuan, ZHENG Xiao-qing,JIAO Ruo-ruo, ZHU You-shuang*School of Biological Science/Jining Medical University, Rizhao 276800, ChinaAbstract: Laccase is a copper-containing polyphenol oxidase with a wide range of application, including bio-detection, industrial dye decolorization, organic pesticide degradation, pulp bleaching, and the food and beverage industries. We utilized a high-yield laccase strain of Tramete hirsuta identified in the laboratory. The laccase was separated and purified through ammonium sulfate precipitation and DEAE Sepharose FF anion exchange chromatography. The enzyme activity yield was 57.2%, with a purification fold of 6.0 and a specific activity of 758.5 U/mg. The molecular weight of laccase was about 50 kDa. The crude enzyme solution from Tramete hirsuta was used to decolorize crystal violet, bromophenol blue, malachite green, and Janus green B. The effects of dye concentration, temperature, pH and NaCl on the decolorization rate of bromophenol blue and malachite green were also investigated. The decolorization rates were higher when the dye concentration was 40 mg/L for bromophenol blue and 50 mg/L for malachite green. The decolorization rates of laccase on bromophenol blue and malachite green were 68.51% and 83.06%, respectively, at the temperature of 50℃. Bromophenol blue exhibited the highest decolorization rate of 72.61% at pH 3.5, while malachite green showed the highest decolorization rate of 83.49% at pH 4.5. NaCl had an inhibitory effect on the dye decolorization catalyzed by Trametes hirsuta laccase. Our study showed Trametes hirsuta laccase has a great application potential in dye decolorization and industrial wastewater treatment.Keywords: Trametes hirsuta; laccase; isolation and purification; dye decolorization漆酶是一种古老的含铜多酚氧化还原酶，最早发现于日本漆树中(Rhusvernicifera)[1]，属于铜蓝氧化酶。
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高产漆酶菌株的筛选及对染料的降解
高产漆酶菌株的筛选及对染料的降解
染料污染是当前环境问题的一个重要方面。
染料通常由于其复杂
的结构和稳定性而难以降解，因此需要寻找新的方法来解决这个问题。
其中，利用微生物降解染料被认为是一种有效而环保的方法。
在微生物降解染料中，高产漆酶菌株的筛选起着至关重要的作用。
漆酶是一种能够催化染料降解的酶，能够将复杂的染料分子分解为较
简单的化合物。
因此，高产漆酶菌株能够产生更多的漆酶，从而提高
染料降解的效率。
高产漆酶菌株的筛选通常包括以下几个步骤：
1. 环境采样：从具有染料污染的环境中采集样品，例如污水处理厂、染料工厂等。
这些样品中可能存在着具有染料降解能力的微生物。
2. 样品处理：将采集的样品进行适当的处理，以分离出微生物。
3. 纯化培养：将分离出的微生物进行纯化培养，以获得单一的菌株。
4. 染料降解能力检测：将纯化培养的菌株接种到含有染料的培养
基中，并在适当的条件下进行培养。
通过检测染料浓度的变化，可以
确定该菌株的染料降解能力。
通过这些步骤，研究人员可以筛选出高产漆酶菌株。
然而，仅仅筛选出高产漆酶菌株是不够的，还需要考虑染料降解的效率和产物的安全性。
高产漆酶菌株在染料降解中的应用有着广泛的潜力。
染料废水是一个常见的环境问题，通过利用高产漆酶菌株进行微生物处理，不仅可以降低染料废水对环境的影响，还可以提高水处理的效率。
此外，高产漆酶菌株还可以应用于染料的可持续生产。
与传统的染料生产方法相比，通过利用高产漆酶菌株催化染料合成，可以大大减少对环境的影响，并能够实现可持续的染料生产。
总之，高产漆酶菌株的筛选是实现高效染料降解的关键步骤。
通过合适的筛选方法，可以找到具有较高漆酶产量和降解能力的菌株。
这对于解决染料污染问题、改善环境质量具有重要的意义。
因此，进一步研究和应用高产漆酶菌株的染料降解能力对于推动可持续发展和环保事业具有重要的指导意义。