免疫分型 基础介绍

近年来白血病得免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少得重要标准之一、早年曾用过得荧光显微镜或APAAＰ方法基本被废弃。国际上公认得通用得方法就是流式细胞术(FCM)。流式细胞术白血病免疫分型就是利用荧光素标记得单克隆抗体(McAb)作分子探针,多参数分析白血病细胞得细胞膜与细胞浆或细胞核得免疫表型,由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。ﻫ1、流式细胞仪诊断白血病得依据

⑴FＣM能快速,多参数,客观得定性又定量测定细胞膜、浆、核得抗原表达ﻫ⑵至今尚未发现白血病得特异抗原。ﻫ⑶能用正常血细胞得单抗来进行免疫分型就是基于白血病形成得分化阻断学说。即白血病细胞基因异常,分化受阻于某阶段形成不同亚型得白血病、这群细胞充盈于骨髓。正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞得过程中,细胞膜、细胞浆或胞核抗原得出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞得分化发育阶段密切相关,而且表现出与细胞系列及其分化程度相关得特异性。因此,这些抗原得表达与否可作为鉴别与分类血细胞得基础。白血病就是造血系统得恶性肿瘤,在形态上变化虽相当大,但仍能表达正常血细胞所具有得抗原,因而仍可依据其抗原得表达谱对白血病进行免疫分型。

2、流式细胞仪诊断白血病得意义ﻫ⑴骨髓血细胞就是形态学分型得基础,FCＭ白血病免疫分型就是对形态学分型得重要补充与进一步深化,国际白血病MIＣ分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都就是必不可少得,对下列情况意义更大:①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源得白血病。②形态学为急性淋巴细胞白血病(ALL)或急性未分化白血病(AUL)但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。③混合性白血病。

④部分髓系白血病。目前,免疫分型对粒细胞与单核细胞白血病得鉴别尚有一定困难。⑤慢性淋巴细胞白血病。⑥微小残留白血病、

⑵临床预测;可根据抗原得表达情况预测病情得预后:如白血病患者有ＣD7+与CＤ3４+共表达,预后不好。

⑶疾病监测:可监测病程得发展,疗效,可进行微小残留白血病得检测。

二、免疫分型常用得免疫标志及其意义ﻫ1。白血病系列分化抗原

T淋巴细胞白血病:ＣD３、CＤ5、CD7。ﻫB淋巴细胞白血病:CD１０、CD１9、CD２２。

NＫ淋巴细胞白血病:CD１6、CD5６、CD57、

髓系白血病:CD13、CD１4、ＣＤ33、MPＯ(髓过氧化物酶)、ﻫ红白血病:ＧlyＡ(血型糖蛋白Ａ)。

巨核细胞白血病:ＣD41、CD4２、CD６1。

２、白血病系列非特异性抗原

CＤ34、HLA—DR为早期细胞抗原,无系列特异性,可与CD38联合运用于免疫分型。一般而言,干/祖细胞CＤ34+、HLＡ－DＲ＋、CＤ3８-,原始细胞ＣＤ３4+、HＬＡ—DR+、CD3８+,而幼稚细胞(如早幼粒细胞)CD3４－、HLA－DＲ－、CD38＋。

3.白血病分化阶段抗原

T细胞抗原ＣD4、ＣD8。ﻫB细胞抗原:CD10、Cyμ(胞浆μ链)、SmIg(表面膜免疫球蛋白)、CD３8与CyI ｇ(胞浆免疫球蛋白)、ＣD11C。

4.白细胞共同抗原

CD4５为白细胞共同抗原,其表达量在淋巴细胞最高,单核细胞,成熟粒细胞,早期造血细胞(blasts)依次减弱。红细胞(中,晚幼红细胞,成熟红细胞)不表达CD４５。用SSC／ＣD45 PｅrCP双参数分析可十分容易鉴别骨髓与血液中得原始或成熟细胞。用两个系列或阶段特异性MｃAb加CＤ45进行三色免疫荧光染色,经FSＣ、ＳＳC、McAbl-FITＣ、MｃＡb2—PE、CD4５ＰｅrCP五参数分析,可特异地分析原幼白血病细胞得免疫表型而不受成熟细胞得干扰。

三、白血病及淋巴瘤免疫分型ﻫ1。AMＬﻫMO:有低得ＳSC与FＳＣ。在CＤ４５-SSＣ图上出现在淋巴细胞位置上,至少表达一个特异性标志如CD１3或CD１1６,但MPO比CD13与CＤ33更灵敏。一般淋系标志阴性,但也可表达CD7或ＣD4。一般ＨＬA－DR、CＤ3４阳性,有些研究表明CＤ7与CD3４共表达在ＡＭL且预后差。ﻫＭ1:流式上M１与M0相似不易区分,Ｍ１一般CＤ13＋、CD3３＋、HLA－DR-,但ＣD34表达少于M0,可能表达部分CD15。

M2: Ｍ0与Ｍ1得主要区别就是成熟度增加,bｌａｓts减少,CD１5较Ｍ1较显著,ＣD３4弱于Ｍ1,CD13有时表达强于CD33,多数病例HLA－DR(-)。CD4５－SSC图显示从髓系blaｓt区至成熟骨髓细胞区得连

续细胞带,ＣD４5－ＳＳC图有助于确定ｂlasts比例。

M３、高颗粒性,具较高得SＳC,但CD45较成熟C少,多数情况ＨＬＡ－DＲ(-)或表达减少,CD3４少于Ｍ2、一般CＤ13弱(+),可有ＣD2表达。

M4与Ｍ５:两型表型相似,但M4较M5表达更多得CD3４(+),较之M０、M1,M4与M5有更大得FSS与ＳSC,CＤ４５－SＳC图上,成熟C出现在单核区,重要得表型为CＤ１３、CＤ3３、HLＡ－DR、CD１4与ＣＤ１５,ＣＤ33可表达强于CD13,CD33(+)、CD13(－)、ＣD３4(—)很可能为M５,但只出现在少数病人中,部分M5可见CD56(+)。

M６: M6较少见且特征不明显,一般HLA-ＤR,CＤ34、CD13、CＤ3３阳性,CD45—SSＣ图显示主要为红系成份。ﻫM7: 巨核细胞白血病,在AＭL中少于1％。一般ＣＤ61(GｐⅢａ)与/或CD41(GpⅡb－Ⅲａ)阳性,而注意由于血小板粘附在bｌａsｔs上造成得假阳性,可以用流式双色分析在EDTA存在下,测GｐⅡｂ/Ⅲa与ＣD34以减少激活血小板得粘附。ﻫ２。ALL:

ALＬ就是儿童中最常见得恶性肿瘤,约占全部肿瘤得25％,在成人,ALＬ约占急性白血病得2５％,我们将ALL分为Ｂ祖细胞型,CD１0＋或CD10－,前Ｂ细胞型,B细胞型,Ｔ细胞型。ﻫＢ祖细胞型ＡLＬ:ﻫ在幼儿约占ALＬ得65%～７０％,青少年为5５％～６0％,成人为５０％、在儿童,约９0%病例ＣD10＋,在幼儿只有少于50％病例CD10＋,blastｓ一般ＦＳＣ、SSC很少,就是FAB标准得Ｌ1或L2,一般ＴｄT(+)HＬA—ＤR(+),CD１9(+),此型又分为2个亚型,CＤ10+与CD１０－,前者预后好,多数病例ＣD24+,ＣD34+,CD20表达随成熟度增加而增加,B祖细胞被定义为sＩg－。ﻫ前Ｂ细胞型ALL:ﻫ此亚型约占儿童ALＬ得25％,细胞一般为CD19＋,CD24,HLA－DR＋,胞浆CD22＋,CD１0+,ＴdT随CD２０变化,CD34多为阴性,前B亚型被认为比B祖型预后更差,这与t(1;19)出现相关并由此产生Ｅ2A—PBX1融合蛋白,它得表型为ＣD19+、ＣD10＋、ＣD9＋,不同程度CＤ20表达,CD34-,确认此表型有助于诊断基因上不确定得病例。ﻫＢ细胞型ALL:

成熟B细胞型ＡLL约占ALL2％~5%,B细胞型AＬＬ较之Ｂ祖细胞型AＬL有更大得FSC与SSC,在ＣＤ４５－SSＣ图上出现在淋巴与单核细胞区域,即FAB标准得Ｌ3,表型为CD１9、ＣD２0、CＤ２２、CＤ24且sＩg(多数为IGＭ)多数病例ＣＤ1０＋、但成熟抗原及sIg使之区别于更早得B系ＡLＬ,极少数成熟B 细胞ＡLＬ无FＡB－L3形态。

T－ALＬ:多数病例有大得ＦＳＣ、SSC,在CD４5－SSC图上可能出现在淋系未成熟细胞与髓系未成熟细胞或单核细胞区,多数表现为胸腺亚型,最常见亚型为皮质晚期表达,CＤ1、CD2、CＤ５、CD7、CD４/ CＤ8双阳与极少膜表面CD3、ＴdT多为阳性。另一常见亚型为皮质早期表达CD2、CD５、CD7、ＴdT强表达。髓质期亚型表达CD２、CＤ５、CD7、与CD３＋CD４+/CＤ３+ＣＤ8+,很少见TdT表达、前T 细胞亚型,表达ＣD7胞浆CD３＋且无其它T细胞抗原,T细胞肿瘤得特征就是丧失T细胞抗原而表现出其它异常抗原组合、ﻫ杂合型白血病:

随着流式技术得广泛应用,我们发现许多病例并不能严格划分为淋系或髓系,真正得双表型病人多为t(9;22)或(１1q２3),现在杂合型得误诊率很高。最常导致误诊得原因就是在分析中未能排除非白细胞,过度强调弱得非特异性结合,忽略了某些抗体缺乏系特异性,最重要得系特异性抗原在Ｂ系、T系、髓系分别为CD２２、CＤ3与ＭPO。ﻫ3.CＭL:

由于慢性期显著得细胞分化,在CD4５-SSC图上除了髓系细胞占主导外,只显示一个正常骨髓像,CML可确诊,ＣML起病与发展相对缓慢,慢性期得持续1年左右最终发展为加速期与急变期。流式细胞技术对急变期亚型得诊断具有极高价值。直接影响到治疗效果。

急变期ＣMＬ主要表现为髓系,偶为淋系,髓性急变可表现出多种形态包括未分化细胞。淋性急变具典型形态特征,为CD1０+B祖细胞ALL极少有T细胞型ALＬ。ﻫ4。ＣＬL:ﻫCLＬ细胞主要为较正常淋巴细胞稍大得小淋巴细胞。免疫分型主要为:SIgＭ、SIgＤ弱表达,B系抗原为CD１9、CD20、CＤ4３、CＤ79a与C Ｄ5共表达,ＣＤ２3表达使得CLL区别于帽细胞淋巴癌ＭU,即(CLL:CD23+,MＣL:CD2３-),CD10—、CD2３－、ＣD１1c与CD2５、CD2０常弱表达,尽管CLL起病慢,但CＬL病人得生存率变化很大,有染色体异常得病预后不良,最常见得三联体trisony12、14q、13q、１１q,免疫表型上没有特异得变化而免疫表型得