中药多糖有效部位研究中相对分子质量及分布研究相关问题探讨_李计萍
四君子汤中多糖的提取和含量测定
四君子汤中多糖的提取和含量测定摘要：目的：提取四君子汤中的多糖，并进行含量测定。
方法：采用热水法提取、乙醇沉淀制备总多糖；蒽酮-硫酸法测定多糖含量。
结果：总多糖中多糖的含量为61.44%。
结论：四君子汤中多糖的含量为4.97%。
关键词：四君子汤；多糖；提取；含量测定四君子汤出自宋代《太平惠民和剂局方》，由人参、白术、茯苓、炙甘草组成，具有益气健脾之功效，主治脾胃气虚证。
研究报道四君子多糖具有显著的免疫调节作用，可用于肿瘤等的辅助治疗［1~3］。
本文采用蒽酮-硫酸法对四君子汤水煎剂中多糖的含量进行了测定。
1 仪器与试药WFZ-UV-2102 PC型紫外-可见分光光度计（尤尼柯中国上海仪器有限公司），RE-52C旋转蒸发器（河南巩义市英峪予华仪器厂），LXJ-Ⅱ离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），ZKXF-1型电热真空干燥箱（上海树立仪器仪表有限公司）。
四君子汤药材(济南建联中药有限公司)。
葡聚糖4万（中国医药集团上海化学试剂公司），蒽酮（上海五联化工厂）。
2 方法与结果2.1 四君子总多糖的提取精密称取四君子汤34g（人参10g，白术9g，茯苓9g，甘草6g），投入到15倍量的沸水中0.5h，以灭活共存酶，浸泡过夜，95℃提取3次，每次3h，六层纱布过滤，滤液合并，50℃减压浓缩至30mL，离心，弃去残渣，上清液加四倍量无水乙醇，沉淀过夜，离心，收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，将沉淀置于有五氧化二磷的真空干燥箱中，50℃真空干燥24h，得四君子总多糖样品2.75 g。
精密称取四君子总多糖样品20mg，定容于250mL的容量瓶中，为供试品溶液A，供多糖的含量测定用。
2.2 标准曲线的测定采用蒽酮－硫酸法［4］测定多糖含量。
葡聚糖标准品溶液的配制：精密称取干燥至恒重的葡聚糖25mg，加适量蒸馏水溶解，转移至250mL容量瓶中，加水至刻度，即得0.1g/L的葡聚糖标准品溶液。
蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶解于100mL浓硫酸中，当日配制使用。
中药质量控制的研究策略和色谱技术
。但在体外实验中有活性
的成分， 并不一定是在体内发挥药效的物质， 因此血 清药理学与血清药物化学的方法被用于追踪进入体 内的活性 化 合 物。 王 喜 军 定中药药效物质基础。 ! ! "# 生物色谱法 & & 生物色谱是将生物分子间相互作用原理与色谱 过程相结合的色谱 技 术， 根据具有生物功能的分子 或细胞膜与中药有 效 成 分 特 异 性 结 合 的 原 理， 并以 色谱的方式筛选和分析中药有效成分的一种研究方 法。生物色谱法包 括 分 子 生 物 色 谱 法、 生物膜色谱 法和细胞 生 物 色 谱 法［ ’ ］。 分 子 生 物 色 谱 法 中 常 用 的固定相包括血 浆 蛋 白、 酶、 受 体、 抗体等生物大分 子。生物膜色谱法是以生物膜或模拟生物膜为固定 相， 如 细 胞 膜 色 谱（ $&$ ）和 固 定 化 磷 脂 色 谱 （ ’#$ ） 。细胞生物色谱法 是 以 活 细 胞 为 固 定 相。 在 生物色谱法中， 中药提取物随流动相流经固定相时， 中药的有效成分与特定的生物大分子或细胞的受体 特异性结合， 产生 保 留， 因 此 可 不 经 分 离 步 骤， 直接 在特定的色谱模型上完成活性成分的筛选。邹汉法 研究组以人血浆中两种主要的载体蛋白— — —人血清 白蛋白 （ !() ） 和 ! * 酸性糖蛋白为固 定 相， 采用分子 生物色 谱 法 筛 选 和 分 析 多 种 中 药 的 活 性 成 分［ ( ］。 他们以固定化 !() 从 当归乙醇提 取 液 中观 察 到 #$ 个主要的色谱峰， 其中阿魏酸和藁本内酯是当归的 主要活性成分［ ) * + ］； 同样从茵陈蒿中得到 ’ 个主要 色谱峰和几个小峰， 并鉴定其中 ! 个组分为茵陈色 原酮和 ( ， ) * 二 甲 氧 基 香 豆 素［ , ］。 所 研 究 的 中 药 中 的已知有 效 成 分 在 分 子 生 物 色 谱 中 都 有 明 确 的 保 留， 可见该方法 的 可 行 性。 贺 浪 冲 等 最 早 将 细 胞 膜 色谱法用于 中 药 活 性 成 分 的 研 究
中药多糖与肠道菌群相互作用研究进展
［J］.内蒙古中医药，2014，33（1）：31-32.［15］ 龚年金，梁欢.越婢加术汤加减治疗急性加重期慢性阻塞性肺疾病临床研究［J］.中医学报，2017，32（9）：1609-1612.［16］ 何春凝.麻杏石甘汤加减治疗慢性阻塞性肺疾病急性发作（AECOPD）的疗效探讨［J］.世界最新医学信息文摘，2017，17（22）：82，85.［17］ 王建军.加味千金苇茎汤对急性加重期慢阻肺的临床价值［J］.光明中医，2016，31（23）：3453-3454.［18］ 罗丹.桂枝加厚朴杏子汤合玉屏风散联合西药治疗慢阻肺缓解期随机平行对照研究［J］.实用中医内科杂志，2013，27（8）：82-84.［19］ 倪烨，王丽新.加味小青龙汤治疗慢性阻塞性肺病急性发作机理探讨［J］.亚太传统医药，2016，12（19）：136-138.［20］ 赵婧彤.加味苓甘五味姜辛汤合肾气丸治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期（寒饮停肺，脾肾阳虚）的临床研究［D］.长春中医药大学，2010.［21］ 高振，李风森，徐丹，等.小青龙汤治疗慢性阻塞性肺疾病发作期临床疗效的Meta分析（2016年更新版）［J］.中华中医药杂志，2017，32（2）：721-730.［22］ 余白桦，张丹芳，陈瑞发，等.苓甘五味姜辛汤加味治疗慢性阻塞性肺疾病临床研究［J］.河南中医，2016，36（5）：768-770.［23］ 夏自银.加味麻辛附子汤对慢阻肺急性加重期（肺肾阳虚型）患者SAA、hsCRP及PCT干预的临床观察［D］.云南中医学院，2017.［24］ 马力群，王琦.王琦教授运用消癥通络法治疗慢性阻塞性肺疾病临证经验［J］.临床医药文献电子杂志，2016，3（59）：11896-11897.［25］ 柯诗文，朱伟，刘良徛.国医大师洪广祥教授温清并用治疗慢性阻塞性肺疾病浅析［J］.中华中医药杂志，2018，33（5）：1965-1967.［26］ 王燕青，王宁，胡海波，等.真武汤合麻杏甘石汤治疗慢性阻塞性肺疾病合并Ⅱ型呼吸衰竭的研究［J］.中国中医急症，2014，23（2）：256-257.［27］ 满国玉.真武汤合麻杏甘石汤治疗慢性阻塞性肺病合并Ⅱ型呼吸衰竭的研究［J］.中西医结合心血管病电子杂志，2018，6（12）：129，132.［28］ 罗红涛，漆成军.和解少阳法治疗慢阻肺的临床研究［J］.中国医学创新，2013，10（4）：141-142.［收稿日期］2019-10-30多糖又称多聚糖，是中药重要成分，也是中药的有效成分［1］，随着深入研究，已有300多种多糖被提取出来。
猪苓药用多糖含量测定
猪苓药用多糖含量测定苏靖【摘要】目的:测定猪苓药用植物多糖的含量,为猪苓质量控制和资源开发提供科学依据.方法:以葡萄糖为对照品,采用硫酸-蒽酮比色法测定猪苓药用植物可溶性多糖和粗多糖的含量.结果不同生长发育阶段的猪苓含量差异较显著,总多糖最高含量是最低含量地3倍.结论:测定方法简单、准确、快速.以多糖含量为指标,的质量最优.【期刊名称】《内蒙古中医药》【年(卷),期】2012(031)016【总页数】1页(P43)【关键词】猪苓;多糖;含量测定【作者】苏靖【作者单位】上海亿谷医药药材有限公司 201321【正文语种】中文【中图分类】R927.2猪苓是我国常用中草药，来源于真菌门担子菌亚门多孔菌科。
菌核入药，能利水渗湿。
多糖有抗癌功效，用于治疗风湿病、水肿、肺癌、胃癌等症。
猪苓药材资源丰富，我国许多省区分布，主产山西与陕西。
由于不同的生长发育阶段，表面有白色、灰色和黑色三种颜色，俗称白苓、灰苓和黑苓。
药理研究表明猪苓药材具有等功效，多糖是发挥药效学物质基础之一。
本研究采用硫酸-蒽酮比色法测定不同生长发育阶段的的猪苓可溶性多糖和粗多糖的含量，为猪苓药材临床用药、质量控制及资源开发提供科学依据。
1 仪器与试药1.1 仪器：Uv-3010紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）FA-1104电子分析天平（上海天平仪器厂）KQ-250E型超声振荡清洗仪（昆山市才超声仪器有限公司）SartoriusCP225D型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。
1.2 药料：猪苓由上海童涵春堂饮片有限公司提供。
1.3 试剂：浓硫酸（莱阳市康德化工有限公司）、无水乙醇（天津市富宇精细化工有限公司）、葡萄糖（天津市广成化学试剂有限公司）、蒸馏水均为分析纯。
2.3.2 精密度试验：取标准品溶液重复测定5次，吸光度的RSD为0.2%（n=5），表明仪器精密度良好。
2.3.3 稳定性试验：精密吸取猪苓可溶性多糖提取液1.0ml，按照”2.2”项下操作，分别于 0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h，2.5h，3h，3.5h，4h 测定吸光度，RSD为0.59%，结果表明本方法测定的样品在4h内稳定（粗多糖稳定性试验照上述操作，RSD为2.58%，结果表明本方法测定样品在4小时内稳定）。
中药中多糖类成分研究概述
中药中多糖类成分研究概述崔宁;郭威;孙晓园;于宗渊【摘要】本文对中药中多糖类成分的提取、分离纯化、结构解析和药理作用等研究内容进行了综述,并指出了目前存在的问题及今后研究的主要方向.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2012(031)011【总页数】4页(P659-662)【关键词】中药;多糖;提取;分离纯化;结构分析;药理活性【作者】崔宁;郭威;孙晓园;于宗渊【作者单位】山东中医药大学药学院,山东,济南,250355;山东省中医药研究院,山东,济南,250014;山东大学校医院,山东,济南,250100;山东省中医药研究院,山东,济南,250014【正文语种】中文【中图分类】R284中药中多糖类成分具有广泛的药理活性，如调节机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、抗疲劳、抗糖尿病、降血脂、抗氧化、抗凝血、抗炎等［1］，因而受到了越来越多的重视。
为了对中药中多糖类成分的研究现状有一个较全面、深入的了解，系统查阅了有关文献，对中药中多糖类成分的提取、分离纯化、结构解析及活性测定等方面研究内容进行了综述，并在此基础上，指出了目前存在的问题及今后研究的主要方向。
1 多糖的提取从中药中提取多糖之前，一般先用石油醚、乙醚等有机溶剂处理药材，以去除脂溶性成分;后用95%乙醇去除单糖、苷类等小分子物质;对于色素含量较高的根、茎、叶、果实类药材，还需进行脱色处理［2］。
最常用的多糖提取方法为热水提取法。
即向预处理后的药材中加入一定量的蒸馏水，在加热回流或恒温条件下提取多糖。
为了提高多糖的提取率，一般采用两种改进方法，一种是向提取用水中加入酶类，如纤维素酶、蛋白酶等，使细胞壁损坏，获得更多胞内多糖［2］;另一种是采用弱碱水［3］或弱酸水［4］提取多糖，分别获得更多的酸性多糖与碱性多糖。
此外，还可采用超声波［5］或微波［6］提取法，增大物质分子的运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而提高多糖的浸出率。
在选定提取方法后，为了进一步提高多糖的提取效率，应进行工艺条件优化。
8种多糖的单糖组成、活性及其相关性分析
8种多糖的单糖组成、活性及其相关性分析倪力军;王媛媛;何婉瑛;张立国【期刊名称】《天津大学学报》【年(卷),期】2014(047)004【摘要】为探究多糖的结构与其体外抗氧化活性间的相关性,采用水提醇沉法提取了8种中药材中的多糖,用苯酚-硫酸法测定其多糖含量、用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化(PMP)-高效液相色谱法(HPLC)测定各多糖中的单糖组成及含量并对其进行主成分投影分析.以清除1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基为模型测定了8种多糖的体外抗氧化活性.用简单相关分析探究样品中各单糖之间及各单糖与体外抗氧化活性间的相关程度,采用典型相关分析研究单糖组成与体外抗氧化活性的整体相关性.结果表明8个样品在主成分空间分布离散,有较好的代表性;除葡萄糖(Glc)外,各单糖之间、单糖与体外抗氧化活性间的简单相关系数均较高,单糖组成与抗氧化活性的第一典型相关系数为0.844 4;多糖的单糖组成与体外抗氧化活性有较强相关性.【总页数】5页(P326-330)【作者】倪力军;王媛媛;何婉瑛;张立国【作者单位】华东理工大学化学与分子工程学院,上海200237;华东理工大学化学与分子工程学院,上海200237;华东理工大学化学与分子工程学院,上海200237;华东理工大学化学与分子工程学院,上海200237【正文语种】中文【中图分类】O657.7【相关文献】1.玉米芯多糖的微生物发酵工艺及其单糖组成和体外益生活性研究 [J], 刘玉辉; 王瑞芳; 安晓萍; 王园; 刘娜; 杨艳平; 齐景伟2.超声-微波协同提取柚子皮多糖工艺优化及单糖组成、结构和抗氧化活性分析 [J], 江飞凤;谭晓辉;胡鹏刚;潘雪梅;闫锦3.辣木叶粗多糖的制备·单糖组成及抗氧化活性研究 [J], 聂烁;吴佳怡;程乃雪;闻正顺;王文策4.液体发酵灵芝胞外多糖和胞内多糖的单糖组成及抗氧化活性 [J], 罗钦;徐军伟5.灵芝孢子多糖的提取工艺优化及单糖组成、抗氧化活性分析 [J], 江和栋;牛仙;万仁口;邓泽元;李红艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
黄连多糖药理作用研究进展
.638 •第 44 卷第 3 期2021 年 3 月名访*料Drug Evaluation Research Vol. 44 No. 3 March 2021黄连多糖药理作用研究进展吉文岳h2,冯心池\邱峰1〃，李巍11. 天津中医药大学中药学院，天津3016172.天津中医药大学组分中药国家重点实验室，天津3016173.日本东邦大学药学部，日本千叶274-8510摘要：黄连多糖是毛茛科植物黄连、三角叶黄连和云连的药效成分之一，具有抗氧化、降血糖、减轻炎症反应和神经保 护等广泛的药理作用。
其抗氧化可能是通过提高机体抗氧化酶来发挥作用；其降血糖作用机制较多，包括抑制ct-淀粉酶、提高胰岛素敏感性和促进葡萄糖摄取；其抗炎作用可能与活化巨噬细胞和抑制炎症反应酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活 因子3 (J A K2/S T A T3)信号通路中p-J A K2、p-S T A T3的表达有关；可能通过抑制氨基末端激酶（J N K)介导的鼠嗜铬神经 瘤细胞（P C12)凋亡信号通路来发挥神经保护作用。
对近年来有关黄连多糖的药理作用等文献进行综述，为进一步研究和 应用提供参考。
关键词：黄连多糖；药理作用；抗氧化；降血糖；减轻炎症反应；神经保护中图分类号：R285.5 文献标志码：A文章编号：1674-6376 (2021) 03-0638-06D O I：10.7501/j.issn. 1674-6376.2021.03.027Research progress on pharm acological effects of C o p tis C h in en sis polysaccharideJI W e n y u e12,F E N G Xinchi1，Q I U F e n g12,LI W e i1，31. School of Chinese Materia Medica, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 301617, China2. State key laboratory of component-based traditional Chinese medicine, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 301617, China3. Faculty of Pharmaceutical Sciences, T o h o University, C h iba 274-8510, JapanAbstract: Coptis Chinensis polysaccharide is o ne of the effective components of Coptis chinensis Franch., C. deltoidea C.Y.C h e n g et Hsiao, and C. teeta Wall, in the Ranunculaceae family. I t has a wide range of pharmacological effects such as antioxidant, hypoglycemic, anti-inflammatory a nd neuroprotective effects. Relevant studies hav e found that i t s antioxidant m a y be exerted by increasing the body's antioxidant enzymes; i t s hypoglycemic has m a n y mechanisms, such as: inhibiting a-amylase, improving insulin sensitivity and promoting glucose uptake; its anti-inflammatory effect m a y be related to activation M a c r o phages are related to the expression of p-J A K2 and p-S T A T3 in the tyrosine kinase 2 / signal transduction a nd transcription activator 3(J A K2/S T A T3) signaling p a t hway that inhibits inflammation. For neuroprotection, studies have found that C C P m a y play a role b y inhibiting the J N K-m e d i a t e d apoptosis signaling p a t hway in m o u s e p h e o c h r o m o c y t o m a cells (P C12). This article reviewed studies o n the extraction and purification, monosaccharide composition analysis, and pharmacological effects of Coptis Chinensis polysaccharide in recent years, and provided a perspective on further research and application of i t.K e y word s:Coptis Chinensis polysaccharide; pharmacological effects; antioxidant; hypoglycemic; anti-inflammatory; neuroprotective黄连多糖polysaccharide)来 源于毛莫科植物黄连c/z/weAwh F r a n c h.(味 连）、三角叶黄连C o p沿办C.Y.C h e n g et Hsiao.(雅连）和云连C o p治攸/a Wa l l.(云连）的干燥 根茎m。
柚皮多糖提取分级及分子质量的分布
柚皮多糖提取分级及分子质量的分布郭文;陶红;于立梅;赵瑞峰;冯志斌;梁慧【摘要】为了探讨柚皮多糖提取工艺和分级多糖分子质量差异,以蜜柚果皮为材料,采用正交试验优化了复合酶提取工艺,通过低温醇沉制备不同溶剂分级的柚皮多糖,并采用凝胶色谱研究了分级多糖分子质量分布差异.结果表明:复合酶提取柚皮多糖的优化工艺为,酶用量1.5％、酶解时间120 min、料液比1∶25、酶解温度50℃.柚皮多糖提取率为10.39 g/100 g柚粉,其中分级后a粗多糖为5.61 g/100 g柚粉,b粗多糖为1.94 g/100 g柚粉,c粗多糖为1.82 g/100 g柚粉,不同分级的柚皮粗多糖纯度也不同.不同分级的多糖分子质量测定表明:不同溶剂分级的多糖分子质量有显著差异,其中a粗多糖的峰①的重均分子质量Mw为24 100 Da,b粗多糖的峰①的重均分子质量Mw为11 700 Da,c粗多糖的峰①的重均分子质量Mw为2 130 Da.表明乙醇浓度越低,沉淀多糖的分子质量越大.%To discuss the extraction technology and classified polysaccharide molecular weight distribution,pomelo peel polysaccharide was extracted by enzyme extraction and organic solvent.Distribution of molecules weight was carried out by GPC chromatogram.The optimization of polysaccharides from pomelo peel by the enzyme extraction was:enzyme dosage1.5％,reaction time 120 min,solid to liquid ratio of 1 ∶ 25,enzymolysis temperature 50 ℃.The total polysaccharide content of pomelo peel was 10.39 g/100g powder.The crude polysaccharide was then separated into 3 grades based on its content:grade A was 5.6 g/100g powder,grade B was 1.9 g/100g powder and grade C was 1.8 g/100g powder.The purity of coarse polysaccharide of different grades was different.The molecularweight distribution tests showed that the lower the ethanol concentration,the higher the molecular weight.Polysaccharide(a) molecular weight in different grades were:24 100 Da in grade A,11 700 Da for grade B and 2 130 Da for grade C.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)003【总页数】5页(P233-237)【关键词】柚皮;多糖;提取工艺;分子质量【作者】郭文;陶红;于立梅;赵瑞峰;冯志斌;梁慧【作者单位】广东中烟工业有限公司技术中心,广东广州,510620;广东中烟工业有限公司技术中心,广东广州,510620;仲恺农业工程学院轻工食品学院,广东广州,510225;广东中烟工业有限公司技术中心,广东广州,510620;广东中烟工业有限公司技术中心,广东广州,510620;仲恺农业工程学院轻工食品学院,广东广州,510225【正文语种】中文柚子属于芸香科柑橘，是大众化的水果之一，广东梅县柚子是广东省“三高”农业战略龙头产品，目前梅州金柚的栽培已近百年历史，全市总面积2.67万hm2，产量30万t以上，全省金柚产量高达40万t，是全国最大的金柚商品生产基地。
211134063_百合地黄汤多糖提取工艺优化及抗焦虑抑郁药效评价
百合地黄汤多糖提取工艺优化及抗焦虑抑郁药效评价Δ唐林 1＊，赵洪庆 2，杨蕙 3，刘检 3，何怡然 4，李莉 1，张水寒 5 #（1.湖南中医药大学第一附属医院制剂中心，长沙 410007；2.湖南中医药大学科技创新中心，长沙 410208；3.湖南中医药大学第一附属医院医学创新实验中心，长沙 410007；4.湖南中医药大学第一附属医院药学部，长沙 410007；5.湖南省中医药研究院，长沙 410208）中图分类号 R 284.2；R 965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）08-0923-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.08.06摘要 目的 优化百合地黄汤多糖提取工艺并初步评价其抗焦虑抑郁药效。
方法 在Plackett-Burman 实验基础上，以多糖得率与多糖含量的综合评分为评价指标，提取时间、加水量、醇沉浓度为考察因素，结合Box-Behnken 响应面法优化百合地黄汤多糖提取工艺并验证。
将40只ICR 小鼠分为对照组、文法拉辛组[阳性对照，13.5 mg/（kg ·d ）]和百合地黄汤多糖高、低剂量组[5.28、2.64 g/（kg ·d ），以生药量计]，每组10只（雌雄各半）。
药物组小鼠灌胃相应药液，对照组小鼠灌胃水10 mL/kg ，每天1次，连续7 d 。
采用高架十字迷宫实验、旷场实验、强迫游泳实验、悬尾实验评价最优工艺所制提取物对小鼠焦虑抑郁样行为的改善情况，并采用酶联免疫吸附测定法检测其对小鼠脑组织中神经递质水平的影响。
结果 百合地黄汤多糖的最优提取工艺为加25倍量水，提取1.5 h ，醇沉浓度70%。
3次验证实验的多糖得率、多糖含量平均值分别为33.10%、0.62 mg/mg ，与预测值（36.14%、0.65 mg/mg ）的相对偏差分别为8.40%、4.62%（RSD ＜2%，n ＝3）。
用GPC法测定硫酸多糖911的分子量和分子量分布
用GPC法测定硫酸多糖911的分子量和分子量分布X
赵 峡 苗 辉 范慧红1 管华诗(青岛海洋大学海洋药物与食品研究所,青岛,266003)(1卫生部药品生物制品检定所,北京,100050)
摘 要 实验采用GPC法测定了硫酸多糖911的分子量及分子量分布,经测定硫酸多糖911的重均分子量Mw为8500±500,其中Mw<10000的分子占总分子的百分比在70%以上,分子量分布宽度Mw/Mn为1.30±0.02。关键词 硫酸多糖911;高效凝胶渗透色谱(GPC);分子量;分子量分布中图法分类号 R282.77 文章编号 1001-1862(2000)04-623-04
硫酸多糖911是一种低分子量硫酸多糖药物,具有显著的抗病毒活性。大量文献报道[1～4],硫酸多糖药物的抗病毒活性与其分子量和分子量的分布直接相关,为此本文采用GPC
法对硫酸多糖911的分子量和分子量分布的测定进行研究[5,6],为科学制定硫酸多糖911的质量标准提供依据。
1 材料与仪器1.1实验材料 硫酸多糖911:青岛华海制药厂提供,批号:970505,970529,970608;葡聚糖2000,Sigma公司;葡聚糖标样(Dextran,分子量为1270,5220,11600,23800,48600),Fluka公司;叠氮华钠(NaN3),PharmaciaBiotech公司;Na2SO4,分析纯。1.2实验仪器 BIO-RAD高效液相色谱仪,1350型泵;1755型示差折光检测器;1801型紫外检测器,7125型进样阀;BIO-RAD色谱数据处理工作站;KQ-250D型超声脱气机;SHIMADZUGPC软件。
2 实验方法2.1色谱条件 ShodexAsahipakGF-510HQ柱(300mm×7.6mm);流动相为2.84%的Na2SO4溶液,pH5.0;流速0.5mL/min;柱温35℃;进样量25uL;标样为已知分子量葡聚糖(分子量1270,5220,11600,23800,48600,Fluka公司);检测器为示差折光检测器与紫外检测器联用。
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多糖 ( polysaccharides)分布广泛 ,在高等植物 、 细菌 、真菌 、藻类及动物体内含量丰富 。随着人们对 多糖生物学功能认识的深入 ,各种天然产物提取的 生物活性多糖的研究再次成为人们关注的焦点 ,目 前已有 300多种多糖类化合物从天然产物中被分离 提取出来 ,其中从中药中提取的水溶性多糖较多 ,且 生物活性各不相同 。多糖的药理活性与其相对分子 质量 (MW )及其分布密切相关〔1〕,中国药典已将相 对分子质量及其分布列入多糖药物的质量标准 。但 现阶段有关多糖的中药新药申报资料中对相对分子 质量分布的研究资料较少 ,没有对此项工作在多糖 研究中的重要作用引起重视 ,即使是进行了申报也 仅仅按药典方法 ( HPGPC)测定一个相对分子质量 范围 ,而没有对测定方法 、色谱柱 、对照品的选择等 进行研究 ,没有针对有效性及临床研究结果说明确 定的相对分子质量分布范围为临床有效范围等等 。
药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2009, 29 (10)
色谱图表征多糖相对分子质量分布较为直观,若在 图上出现附加的小峰 ,则说明样品中含有杂质等 ,可 以更广泛的应用到多糖研究中 。 3 采用 HPGPC法测定时应关注的问题 3. 1 标准品选择对多糖相对分子质量测定的影响
为了考察选择不同结构类型标准品对相对分子 质量测定结果的影响 ,吕志华〔16〕等分别采用葡聚糖 和低分子肝素作标准品 ,测定了海洋硫酸多糖 (CCS)的相对分子质量及其分布 ,并对测定结果进 行了比较 。研究表明以不同标准品来测定海洋硫酸 多糖的相对分子质量及分布宽度时 ,结果差异很大 。 这是由于 CCS为低分子海洋硫酸多糖 ,其分子本身 带有电荷 ,在结构上与肝素极其类似 ,而葡聚糖为电 中性物质 ,结构上与 CCS相差较大 ,为了给出真实 的相对分子质量 ,应选择与被测样品相同的标准品 或结构相似或性质相近的标准品为好 ,否则误差较 大。
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中药多糖有效部位研究中相对分子质量及分布研究相关问题探讨 3
李计萍
(国家食品药品监督管理局药品审评中心 ,北京 100038)
摘要 :本文结合审评中发现的问题 ,对相对分子质量及其分布测定在中药多糖有效部位研究中的重要作用及应关注的问题进
多糖相对分子质量的测定没有一个绝对准确的 方法 ,不同方法往往会得出不同的相对分子质量 。 因此中国药典 2005年版二部附录对多糖相对分子 质量的测定方法做出了统一规定 [ 15 ] ,即采用 HPG2 PC方法 。尽管由于标准多糖和样品多糖结构上的 差异 ,凝胶柱对多糖可能产生的吸附作用 ,多糖在柱 上的扩散 、浓度 、粘度和测试温度的影响都可能引起 误差 ,但采用 HPGPC能同时测定相对分子质量和相 对分子质量分布 , HPGPC还具有操作简单 、快速 、灵 敏 、重复性好和样品用量少等特点 。
近年来已有人将凝胶渗透色谱法 ( GPC) 、高效 凝胶渗透色谱法 (HPGPC) 、小角激光散射法等用于 多糖相对分子质量的测定 。在实际应用中凝胶渗透 色谱法 ( GPC) 可和小角度激光散射仪 (LALLS) 联 机 、高效凝胶渗透色谱法 ( HPGPC)与多角激光光散 射仪联机 ,不需用对照品作对照即可测定 ,是目前测 定多糖相对分子质量及分布较理想的方法之 一 。 [ 8～14 ]
L I J i - p ing
( Center for D rug Evaluation, State Food and D rug Adm inistration, Beijing 100038, China)
Abstract: The object of this paper is to emphasize the importance of relative molecular m ass and molecular m ass distribution determ ination of polysaccharide in active fraction of traditional Chinese medicine on the basis of drug technical review experiences. Author briefly introduced the methods for relative molecular m ass and molecular m ass distribution determ ination, and suggested that the HPGPC m ethod was used for the determ ination. Finally some con2 siderations in the method selection and determ ination conditions were given. Key words: traditional Chinese medicine; active fraction; polysaccharide; relative molecular mass; molecular m ass d istribu tion
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产生的某些效应也有一定差异 。有文献报道多糖的 抑瘤活性与其相对分子质量有一定关系 。相对分子 质量越大 ,则分子体积越大 ,不利于多糖跨越多重细 胞膜障碍进入生物体内发挥生物活性 。如云芝菌丝 体提取物抑瘤活性与相对分子质量大小有关 ,一般 活性较强的多糖成分 ,相对分子质量在 5 ×103 ～3
下面结合审评中存在的问题及研究状况讨论如下 。 1 相对分子质量及其分布在中药多糖有效部位研 究中的重要作用 1. 1 中药多糖研究中相对分子质量研究的复杂性
目前 ,对多糖研究的层次与水平还远远落后于 蛋白质和核酸 ,主要反映在其结构与功能的关系上 。 这主要是由多糖结构的复杂性所决定的 ,仅一级结 构的确定就必须解决相对分子质量 、单糖的摩尔比 与糖基组成 、构型 、连结次序等问题 ,使其检测难度 增大 [ 2 ] 。
现阶段申报的多糖制品多为未经分离 、精制 、筛 选等优化工艺而制成的粗多糖制剂 ,不利于发挥多 糖的最佳功效 。粗多糖组成成分复杂 ,除主要含有 多糖的不同组分外 ,还含有蛋白质 、生物碱及其他水 溶性成分等 ,有些多糖与色素 、蛋白质结合 ,影响多 糖的构象变化 ,相应多糖的活性会受一定的影响 。 此外 ,不同来源的多糖作用不一 ,配伍后同样存在协 同作用 。所以 ,多糖的不同提取纯化工艺影响着多 糖的构成基础 ,从而对多糖的活性有一定程度的影 响 。姜素琴〔5〕等研究证明不同批号的云芝多糖其 相对分子质量及其分布有明显的差异 ,因此控制其 相对分子质量显得非常必要 。
2 相对分子质量及其分布测定方法研究现状 多糖的相对分子质量测定方法常有渗透压法 ,
蒸汽压渗透计法 ,端基法 ,粘度法 ,光散射法 ,超过滤 法 ,沉淀法 ,凝胶电泳法 ,凝胶色谱法 ,超离心分析法 等 。这些方法各有局限性 ,有的方法误差大 ,现已不 经常使用 。骆传环 [ 7 ] 采用蒸汽压渗透计法 (VPO ) 和超离心扫描法 (UCS)对柴胡多糖进行数均相对分 子质量 (MN )和重均相对分子质量 (MW )测定 ,并计 算其分散度 D。结果 :蒸汽压法测得柴胡多糖的 M n 为 8033,超离心法测得 MW 为 8990。MN 除以 MW 得到的分散度 D 为 0189,尚接近于 1,说明该多糖相 对分子质量分布范围较窄 ,因此计算出的平均相对 分子质量数据应有意义 。蒸汽压法的数据取决于高 分子物质自身的相对分子质量分布以及和标准品相 对分子质量数值之间的差距 。本实验因样品纯度较 高 ,有明确的相对分子质量范围 ,故测出数据较为可 靠 。超离心法是精确度较高的测定方法 ,且不必使 用标准品 ,但是仪器昂贵 ,操作复杂 ,花费时间长 ,不 易普及推广 。两法比较 ,蒸汽压法具有操作简便 、成 本低的优点 ,在样品相对分子质量分布较窄 、有标准 品的条件下 ,宜采用蒸汽压法 。
行了分析 ,建议采用 HPGPC方法进行测定 ,并与文献及其他方法进行比较研究 ,相互印证结果 。
关键词 :中药多糖 ;有效部位 ;相对分子质量 ;相对分子质量分布
中图分类号 : R917
文献标识码 : A
文章编号 : 0254 - 1793 (2009) 10 - 1768 - 04
D iscussion on rela tive m olecular ma ss and d istr ibution study of polysacchar ide in active fraction of trad itiona l Ch inese med ic ines3
×105 之间 。从细菌中分离的某种果聚多糖 ,相对 分子质量达到 211 ×105 时 ,抑瘤活性最强 。由此可 见不同的多糖产生生物学活性有其最佳相对分子质 量范围 [ 3 ] 。