抗生素的测定
实验11、抗生素抗菌谱的测定
实验十一
抗生素抗菌谱的测定-了解不同抗生索对微生物的制菌作用。
、基本原理
抗生索是某些微生物在其生氏代谢过程中产生的次级代谢产物，它们在很低浓度就能抑制甚至杀死英他微生物。
抗生索的种类很多，制菌作用也不同；同一种抗生索其浓度不同，制菌效果也有差异。
1、菌种大肠杆菌、变形杆茵、四联球
菌、金黄色葡萄球菌液体培养物；2、供试抗纶素不同浓度青霉素、氯霉
索、四环素、庆犬霉素、小诺霍素、
黄连素等。
3、仪器或其他用具滤纸片，锻子等。
在无菌操作下接种（涂布平板）——用银了収经不同种类和浓度的抗牛素浸泡过的滤纸片，置丁•平板的相应位置 E 温培养结果观察一报告。
滤娠片法测拮抗活性
五、实验报告
比较供试抗生素的制菌效果O
图 抗生素的效价
F W 4 •； 『•「U ”w r ■士』
六、预习
・乳酸发酵与乳酸菌饮料
・微生物菌种保藏和凝聚试验。
抗生素检测原理
抗生素检测原理抗生素是指一类用于抵抗细菌、真菌、寄生虫等病原微生物所产生的药物。
通过与病原体的特异性化学反应，使得病原体无法正常生长、繁殖，从而起到抑制病原体的作用，从而有效杀灭微生物，达到解除病痛、治愈疾病的目的。
抗生素检测是一种衡量抗生素用药效果的重要方法，它可以帮助医生更好地评估患者的药物使用情况和抗生素疗效，同时也可以提高抗生素的药物使用率，减少抗生素的浪费，进而实现安全、有效的抗生素使用。
抗生素检测的原理大致分为两类：一类是基于药效学的检测，这类检测通过测量抗生素在人体内浓度、清除速率、动力学及代谢反应等参数，来对抗生素的用药和疗效进行评价；另一类是基于微生物学的检测，包括菌株分离、抗药性鉴定、微生物相关分子结构分析和抗生素耐药基因转录研究等，检测病原体对具体抗生素的抗药性及抗药基因的表达情况，从而确定抗生素的疗效情况。
基于药效学的抗生素检测，主要采用耐药状态的动态监测，包括抗生素的血清浓度、清除率、动力学及代谢反应等参数的测量，可以为抗生素使用提供综合评估和理论指导，从而调整药物的用量和药物的应用周期，以确保药物的正确使用。
抗生素清除率测定是耐药状态监测的重要指标，它用于评价抗生素清除情况和药物抗菌效果，也是药物调整的基础。
基于微生物学的抗生素检测，主要用于病原体抗药性的检测，该检测方法可以基于细菌的菌株分离、抗药性鉴定、微生物相关分子结构分析和抗生素耐药基因转录研究等，从而确定病原体对抗生素的耐药性，或通过检测病原体抗药基因的表达情况来诊断抗生素耐药性。
以上就是抗生素检测原理的基本内容。
抗生素检测是评价抗生素用药效果及抗击病原体抗药性情况的重要方法，可以提高抗生素的药物使用率，减少抗生素的浪费，实现安全、有效的抗生素使用。
通过抗生素检测的支持，可以针对不同的病原体类型，选择最有效的抗生素，最大程度地提高抗生素治疗的成功率。
抗生素的生物效价测定法
抗生素的生物效价测定法(管碟法)(总12页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。
这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。
所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。
由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法原理及操作大致与稀释法相同。
比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。
这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。
这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。
经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。
抗生素的生物效价测定法管碟法
抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。
这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。
所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。
由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法原理及操作大致与稀释法相同。
比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。
这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。
这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。
经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。
扩散法有几种，或中一种叫管碟扩散法（筒称管碟法）为国际上常用的方法，在我国也作为法定的抗生素检定法。
土壤抗生素检测标准
土壤抗生素检测标准一、检测方法目前，土壤抗生素检测的方法主要包括免疫分析法、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）等。
这些方法可以根据抗生素种类和性质的不同进行选择和使用。
其中，免疫分析法具有较高的灵敏度和特异性，适用于多种抗生素的检测；HPLC和GC法可用于测定土壤中残留的抗生素及其代谢产物。
二、采样标准在进行土壤抗生素检测时，应按照一定的采样标准进行取样。
采样时应考虑以下几点：1.采样深度：根据土壤质地和农作物根系分布情况，确定合理的采样深度，以保证采集到的土壤样品具有代表性。
2.采样面积：根据土壤类型、农作物种类等因素，确定合适的采样面积，以反映整个农田土壤的状况。
3.采样时间：在不同的生长季节，土壤中的抗生素残留量可能存在差异。
因此，应在生长季节内选择多个时间段进行采样，以获得更全面的土壤抗生素残留情况。
三、前处理步骤在进行土壤抗生素检测前，需要对采集的土壤样品进行前处理。
前处理步骤包括：1.样品采集：按照采样标准进行土壤样品的采集，并记录采样时间、地点、深度等信息。
2.样品保存：将采集的土壤样品装入清洁的容器中，加入适量的干燥剂或保存剂，以保持样品的新鲜度和稳定性。
3.样品处理：将采集的土壤样品进行破碎、研磨等处理，使其均质化，以便后续分析。
4.样品运输：将处理后的土壤样品运输至实验室，运输过程中应避免样品受到污染或变质。
四、试剂和仪器进行土壤抗生素检测所需的试剂和仪器包括：各种抗生素的标准品、提取溶剂（如甲醇、乙腈等）、固相萃取柱（如C18、硅胶等）、高效液相色谱仪、气相色谱仪、紫外-可见分光光度计、电子天平等。
使用这些试剂和仪器时，应注意以下几点：1.试剂的配制：根据实验需要，配制适量的提取溶剂、洗脱液等试剂，并确保其质量和纯度符合要求。
2.仪器的使用和维护：正确操作和维护高效液相色谱仪、气相色谱仪等仪器，确保其性能稳定、灵敏度高。
同时，定期对仪器进行校准和维护，以保证检测结果的准确性。
抗生素效价测定原理
抗生素效价测定原理宝子们！今天咱们来唠唠抗生素效价测定的原理呀。
这可挺有趣的呢！抗生素效价测定呢，就像是给抗生素来一场能力大考验。
咱都知道抗生素是用来对抗那些讨厌的细菌的小能手。
那怎么知道它有多厉害呢？这就需要测定效价啦。
想象一下啊，那些细菌就像是一群小坏蛋，在培养基这个小世界里兴风作浪。
而抗生素呢，就是超级英雄。
当我们把抗生素加到有细菌的培养基里的时候，就像是超级英雄闯进了小坏蛋的老巢。
如果这个抗生素超级英雄很厉害，那细菌小坏蛋就会被打得很惨。
从科学的角度来说哈，效价测定有好几种方法呢。
有一种是稀释法。
这就好比是把超级英雄的力量一点点削弱，看看削弱到什么程度就打不过小坏蛋了。
我们把抗生素溶液稀释成不同的浓度，然后把这些不同浓度的抗生素溶液分别加到含有相同数量细菌的培养基里。
如果某个浓度的抗生素溶液加到培养基里后，细菌几乎都长不起来了，那就说明这个浓度的抗生素很有威力哦。
还有一种是比浊法呢。
这个就更有意思啦。
细菌在培养基里生长的时候啊，会让培养基变得浑浊。
就像一杯清水里加了很多泥沙一样。
如果抗生素很有效，那细菌就长不起来，培养基就不会变得那么浑浊啦。
我们可以通过仪器来测量培养基的浑浊程度，从而判断抗生素的效价。
这就像是看一杯水有多浑，来判断超级英雄有没有把小坏蛋收拾得服服帖帖的。
另外呀，扩散法也是常用的。
我们把含有抗生素的小纸片或者小钢圈放到长满细菌的培养基表面。
抗生素就会像水波一样，从这个小纸片或者小钢圈周围扩散开来。
如果抗生素很厉害，在它扩散的范围内，细菌就不敢靠近，就会形成一个没有细菌生长的小圈圈。
这个圈圈的大小就和抗生素的效价有关系啦。
就像是超级英雄散发的气场，气场强，周围空出来的地方就大。
抗生素效价测定可重要啦。
它能让医生知道给病人用多少抗生素才合适呢。
如果用得太少，就像派了个小喽啰去打大怪兽，根本打不过呀。
可如果用得太多，也不好，就像用原子弹去炸小蚂蚁，太浪费而且可能对身体还有其他不好的影响呢。
抗生素含量测定的方法
抗生素含量测定的方法
抗生素含量测定就像在化学世界里的一场刺激大冒险！那到底咋测定呢？首先可以用高效液相色谱法呀！把样品准备好，放进仪器里，就像把宝贝放进魔法盒子。
仪器开始工作，各种数据就像跳动的音符一样蹦出来。
这过程可得小心操作，不然数据就不准啦！那安全性咋样呢？嘿，只要按照规范来，那是相当安全。
就像走在平坦的大路上，只要不瞎折腾，就不会有啥危险。
稳定性呢？只要仪器状态好，那结果就稳稳当当的，就像靠谱的好朋友，绝对不会掉链子。
这方法的应用场景可多啦！制药厂可以用它来保证药品质量，哇，这可太重要了吧！医院也能用来检测药物浓度，确保治疗效果。
优势呢？精度高呀！能准确地知道抗生素的含量，就像有一双超级锐利的眼睛，啥都能看得清清楚楚。
咱来个实际案例呗！有个制药厂，用这个方法检测抗生素，及时发现了一批含量不达标的产品，避免了大问题。
这效果，杠杠的！要是没这方法，那可就糟糕啦！
所以呀，抗生素含量测定的方法真的超棒！它就像化学世界的超级英雄，守护着我们的健康。
咱可得好好利用它。
管碟法测定抗生素
管碟法测定抗生素
总结与展望
管碟法是一种经典的抗生素效价测定方法，具有操作简 便、直观等优点，广泛应用于药物研发、生产和质量控 制等领域。然而，随着科学技术的不断进步和新药的不 断涌现，管碟法也面临着一些挑战和改进的空间。未来 ，可以通过改进实验条件、优化操作流程和提高数据分 析能力等方式，进一步提高管碟法的准确性和可靠性， 为抗生素的研究和应用提供更加准确可靠的依据
操作规范：实验过程中应严格遵守无菌操作规范， 避免杂菌污染干扰 数据分析：在数据分析过程中，应采用适当的统计 方法对实验数据进行处理和分析，以获得准确可靠 的实验结果
管碟法测定抗生素
管碟法测定抗生素的优缺点
优点：(1)操作简便、直观，可快速获得实验结果； (2)适用于多种抗生素的效价测定，具有较好的通用 性；(3)可同时比较不同抗生素的ຫໍສະໝຸດ 菌效果，方便进 行药物筛选和质量控制
-
管碟法测定抗生素
A
管碟法是一种常用的抗生素效价测
定方法，其原理是将抗生素溶液置
于含有敏感菌的培养基中，通过测
定抗生素的抑菌圈大小来确定其效
价
B
下面将对管碟法测定抗生素的步骤 、注意事项和优缺点进行详细介绍
管碟法测定抗生素
管碟法测定抗生素的步骤
培养基制备：将基础培养基加热溶解，灭菌后冷却至50℃左右，加入适量敏感菌悬液 ，摇匀后倒入无菌培养皿中，待凝固后备用 抗生素溶液制备：将待测抗生素溶解于适宜溶剂中，制备成不同浓度的溶液 放置管碟：在培养皿上放置无菌管碟，轻轻按压使管底与培养基紧密接触 滴加抗生素溶液：用微量移液器将不同浓度的抗生素溶液滴加到管碟上，每个浓度至 少做3个平行试验 培养：将培养皿放入恒温培养箱中培养一定时间(一般为16-24小时)，使敏感菌在培养 基上生长
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测定化妆品中抗生素及甲硝唑的测定
1 范围
本方法规定了用高效液相色谱测定抗生素的方法。
本方法适用于化妆品中抗生素的高效液相色谱测定。
2 规范性引用
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其
随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标
准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新
版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样经甲醇提取，采用离心净化，用高效液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量。
4 试剂与材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 甲醇：色谱纯。
4.2 乙腈：色谱纯。
4.3 盐酸美满霉素、二水土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素、氯霉素及甲
硝唑≥97％。
4.4 标准储备液：准确称取10 mg（精确到0.1 mg）标准品于100 mL容量瓶中，用甲醇（4.1）
溶解并定容至刻度，配制成浓度为100µg/mL的标准储备液，于4℃避光保存。
4.5 草酸：分析纯。
4.6 微孔滤膜：0.45 µm。
5 仪器和设备
5.1 Beckman高效液相色谱仪（HPLC）：配有168二极管阵列紫外检测器，32Karat 工
作站。
5.2 分析天平：感量为0.0001 g和0.01 g。
5.3 超声波 。
5.4 离心机。
6 样品处理
6.1 移取1.0g试样于10 mL容量瓶中，加入流动相10mL超声提取5 min定容，取样液上离心
机离心，取清液过微孔滤膜（4.6）后，供HPLC测定。
7 高效液相色谱测定
7.1 HPLC参考条件
a) 色谱柱：Inertsil ODS-3色谱柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm；
b) 流动相A：10mmol/L草酸溶液，流动相B：甲醇+乙腈（1+2）；梯度洗脱程序：初始时
10％B,至4 min时线性上升至35％B，至8 min时线性上升至60％B，至12 min时上升至 80％
B, 至16 min时上升至 90％B, 12min后恢复为10％B,然后稳定17min；
c) 流 速：1.0 mL/min；
d) 柱 温：25℃；
e) 波 长：268 nm；
f) 进样量：20 μL。
7.2 标准曲线的绘制
用色谱流动相将标准储备液逐级稀释得到不同的浓度标准工作液，浓度由低到高进样检
测，以峰面积—浓度作图，得到标准曲线回归方程。标准工作溶液的高效液相色谱图参见附
录A中图A.1。
7.3 定量测定
待测样液中抗生素的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样
分析。
7.4 结果计算和表达
试样中抗生素的含量由色谱数据处理器或按式（1）计算获得：
A × c × V
X= × f 。。。。。。。。。。。（1）
As × m
式中：
X — 试样中6种抗生素及甲硝唑的含量，单位为毫克每千克，µg/ g；
A — 样液中6种抗生素及甲硝唑的峰面积；
c — 标准溶液中6种抗生素及甲硝唑的浓度，单位为微克每毫升，µg/mL；
V — 样液最终定容体积，单位为毫升，mL；
A
s
— 标准溶液中6种抗生素及甲硝唑的峰面积；
m — 试样的质量，单位为克，g；
f — 稀释倍数。
8实验部分结果与分析
8.1线性关系和检测限
以6种抗生素及甲硝唑的质量浓度为纵坐标，以对应的峰面积为横坐标，进行线性回
归，线性回归方程见表1。
表1 线性方程和检测限
检测组分 线性方程 线性范围/（µg /mL） r 检出限(S/N=3, µg / mL)
甲硝唑
Y=2.95×10-5X+0.28 2.93～23.44 0.999 0.15
盐酸美满霉素
Y=2.15×10-5X+0.43 2.69～21.52 0.999 0.065
二水土霉素
Y=1.93×10-5X+0.45 3.62～28.96 0.999 0.038
盐酸四环素
Y=2.05×10-5X+0.37 2.98～23.84 0.999 0.038
盐酸金霉素
Y=3.04×10-5X+0.34 2.48～19.84 0.999 0.062
盐酸多西环素
Y=2.87×10-5X+0.34 2.25～18.00 0.999 0.058
氯霉素
Y=3.30×10-5X+0.14 2.38～19.04 0.999 0.078
Y表示浓度（µg /mL），X表示峰面积
8.2 精密度与回收率
将1mg/mL浓度的6种抗生素及甲硝唑2mL加到经检测不含6种抗生素及甲硝唑的样
品中，充分混匀。称取12份相同的试样，其中6份试样按标准实验方法操作进行精密度试
验，另外6份试样按标准实验方法操作进行加标回收试验，回收率和精密度测定结果见表2。
表2 精密度与回收率试验（n=6）
检测组分 回收率/（％）
RSD/（％）
甲硝唑
98.2～
103.3 0.8
盐酸美满霉素
95.6～
105.6 1.9
二水土霉素
97.6～
100.4 1.2
盐酸四环素
96.8～
101.1 1.5
盐酸金霉素
96.6～103.4 1.5
盐酸多西环素
99.4～102.3 1.8
氯霉素
99.6～101.9 1.9
附录
A
(资料性附录)
Minutes
024681012141618
mAU-200-1000100200m
A
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1
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7
1-甲硝唑,2-盐酸美满霉素,3-二水土霉素,4-盐酸四环素,
5-盐酸金霉素,6-盐酸多西环素,7-氯霉素
图A.1抗生素标准溶液HPLC色谱图
Minutes
024681012141618
mAU-200-1000100m
A
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0
100
图A.2空白样品HPLC色谱图
Peak: 1 -- ESTD -- Det 168-268nm
Area
0200000400000600000800000
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0
10
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图A.3甲硝唑标准工作曲线
Peak: 2 -- ESTD -- Det 168-268nm
Area
02000004000006000008000001000000
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10
20
图A.4盐酸美满霉素标准工作曲线
Peak: 3 -- ESTD -- Det 168-268nm
Area
050000010000001500000
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30
图A.5二水土霉素标准工作曲线
Peak: 4 -- ESTD -- Det 168-268nm
Area
025000050000075000010000001250000
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图A.6盐酸四环素标准工作曲线
Peak: 5 -- ESTD -- Det 168-268nm
Area
0200000400000600000
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图A.7盐酸金霉素标准工作曲线
Peak: 6 -- ESTD -- Det 168-268nm
Area
0200000400000600000
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0
5
10
15
图A.8盐酸多西环素标准工作曲线
Peak: 7 -- ESTD -- Det 168-268nm
Area
0200000400000600000
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图A.9氯霉素标准工作曲线