高效液相色谱法测定桔霉素
桔霉素检测技术研究现状及展望
桔霉素检测技术研究现状及展望李秀利;曹学丽;廖永红【摘要】Citrinin is a toxic secondary metabolites produced by severalfungi ,w hich exists widely in food. The mycotoxin is hepatonephrotoxic and implicated in disease outbreaks in animals and humans. In recent years ,it attracts wide concerns in the field of food safety ,and its detection methods are continuous-ly improved. In this paper ,the physicochemical properties ,toxicities ,sources ,sample pre-treatment and analytical methods of citrinin were reviewed in detail ,and the detection of citrinin in monascus products and red sufu ,a vast consumptive traditional Chinese food were also discussed.%桔霉素是霉菌的次级代谢产物，在食品中广泛存在，对人和动物具有肾毒性，近年来在食品安全领域受到广泛关注，桔霉素的分析检测方法也不断发展进步。
文章对桔霉素的理化性质、毒性、来源、及其分析方法、前处理方法进行了详细综述，并对我国食用历史悠久、食用量大的红曲及其相关产品中桔霉素的分析检测问题进行了探讨。
【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2014(000)001【总页数】6页(P1-6)【关键词】桔霉素;分析方法;前处理方法;食品;红曲产品【作者】李秀利;曹学丽;廖永红【作者单位】北京工商大学食品学院，食品添加剂与配料北京高校工程研究中心，北京100048;北京工商大学食品学院，食品添加剂与配料北京高校工程研究中心，北京100048;北京工商大学食品学院，食品添加剂与配料北京高校工程研究中心，北京 100048【正文语种】中文1 前言桔霉素（citrinin）分子式为C13H14O5，分子量为250.25，结构式如图1，是一个醌类的甲基化合物，具有荧光特性（λex＝331nm，λem＝500nm），在低pH、β－CD环糊精溶液、乙腈、醋酸环境中荧光性会加强［1］。
高效液相色谱法检测桔梗中的皂苷D
高效液相色谱法检测桔梗中的皂苷D张娜;程满环;杨芬;王婉莹【摘要】建立了桔梗中皂苷D的HPLC快速测定方法.以甲醇为提取剂,超声波处理法提取皂苷D,以乙腈—水(体积比25∶75)为流动相,以C18为色谱柱,保留时间定性,峰面积定量.在该实验条件下皂苷D质量浓度在4.62～85.20 μg/mL范围内呈线性相关,R2=0.999 6,回归方程y=2.871 7x+0.343 2,检出限为2.31 μg/mL,样品的加标回收率为92.86％～95.12％,RSD为1.2％.该法样品处理简单、快速,检测灵敏度高,重现性好,适合测定桔梗中皂苷D的质量分数.【期刊名称】《淮海工学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(024)003【总页数】4页(P47-50)【关键词】桔梗;皂苷D;高效液相色谱【作者】张娜;程满环;杨芬;王婉莹【作者单位】黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041;黄山学院分析测试中心,安徽黄山 245041;黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041;黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041【正文语种】中文【中图分类】R2840 引言桔梗为桔梗科桔梗属植物桔梗（Platycodon grandiflorum）的干燥根，是我国传统的中药材.现代药理学研究表明，桔梗具有镇咳、降低胆固醇［1］、抗菌及抗癌［2－3］等作用.其主要化学成分有皂苷类、多糖类等［4］.近几年来，从桔梗中又先后获得10余种新化合物［5－8］.桔梗的主要活性成分为桔梗皂苷，其中桔梗皂苷D一直被作为桔梗质量控制的指标性化合物［9］.皂苷的提取方法主要有回流提取法、水提醇沉法、超声波提取法等，通常依靠盐沉淀分离、吸附分离、色谱分离以及膜分离技术进行纯化［10］.其定量分析方法有比色法、UV－Vis法、HPLC法等.本实验利用超声波法提取桔梗皂苷，湿法过柱对桔梗皂苷提取液进行纯化，HPLC 法对其进行定量检测分析.其中超声波的空化作用可以加速植物有效成分的浸出，缩短提取时间，提高产品产率［11］.桔梗中皂苷类成分种类多、含量少，其提取物中还含有大量的多糖类化合物，故其提取液还需用内径2 cm的硅胶柱进行纯化.而HPLC法具有分离效率高、检测灵敏度高等优点，因而大多数皂苷类检测通常采用此法.作为大宗药材品种，桔梗形似人参，药食两用，素有“南方人参”的美誉.桔梗产地较多，不同产地药材的质量品质不同.本文对其中桔梗皂苷D的提取及定性、定量方法进行探讨，以期为桔梗的研究与质量控制提供参考.1 实验部分1.1 实验仪器与试剂Agilent 1260型高效液相色谱仪（安捷伦），AUY220电子分析天平（岛津），JK－2200DVE超声波清洗仪（合肥金尼克）.对照品溶液：将桔梗皂苷D标准品（分析纯，北京裕策达科贸有限责任公司）配制成质量浓度为0.426 0mg／mL的甲醇溶液.供试品溶液［12］：取桔梗药材粉末4.000 0g，精密称定，加入体积分数为50%的甲醇50mL，超声处理30min，放冷，过滤，滤液置水浴上蒸干.残渣加水20mL，微热使其溶解，加入水饱和的正丁醇，振摇并提取3次，20mL／次，合并正丁醇液，用氨试液50mL洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50 mL洗涤，弃去水溶液，将正丁醇溶液蒸干.残渣加甲醇3mL使溶解，加硅胶1.0g搅拌均匀，置水浴上蒸干，加于硅胶柱上［100～120目，20g，内径为2 cm，用三氯甲烷—甲醇（体积比9∶1）混合溶液湿法装柱］，以三氯甲烷—甲醇（体积比9∶1）混合溶液50mL洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷—甲醇—水（体积比60∶20∶3）混合溶液100mL洗脱，弃去洗脱液，继续用三氯甲烷—甲醇—水（体积比60∶29∶6）混合溶液100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜备用.桔梗饮片（亳州沪谯药业有限公司），使用前于烘箱70℃干燥处理后打碎，使之呈细粉状，备用.甲醇、正丁醇、三氯甲烷（均为色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；其余试剂为市售分析纯，实验用水为超纯水.1.2 色谱检测条件色谱柱为 Agilent Eclipse XDB－C18，5μm，4.6 mm×250mm；流动相为乙腈—水（体积比25∶75），流速1.0mL／min；柱温为室温；紫外检测器，检测波长210nm；进样量20μL.1.3 定性与定量分析分别取供试品溶液和对照品溶液进行液相分析，比较其在规定检测波长下色谱峰的保留时间，进行定性.标准曲线的绘制：将对照品溶液分别稀释5，10，25，100倍，标点质量浓度分别为85.20，42.60，17.04，4.26μg／mL.分别取上述稀释后的对照品溶液20μL 进样，测量保留时间和峰面积，用峰面积对皂苷D的质量浓度作图，绘制标准曲线.样品中皂苷D的质量分数测定：取20μL供试品溶液进样，根据保留时间定性，峰面积代入标准曲线定量.2 结果与讨论2.1 流动相的选择采用流动相乙腈与水的体积比分别为20∶80，25∶75进行试验［12］，考察流动相比例对样品分离效果的影响.试验结果表明，当乙腈与水的体积比为20∶80时，流动相对样品分离效果虽好，但干扰峰的峰面积较大；当乙腈与水的体积比为25∶75时，不仅分离效果好，而且干扰峰的面积也有所减小.故选择乙腈与水的体积比为25∶75作为流动相.2.2 定性分析分别取供试品溶液和对照品溶液进行液相分析，对照品溶液与供试品溶液的色谱图如图1和图2所示.由图1可以看出，桔梗皂苷D对照品溶液在14.23min时出现一色谱峰，即桔梗皂苷D的保留时间为14.23min.由图2可以看出，供试品溶液在14.24min时出现一色谱峰，表明供试品溶液中含有桔梗皂苷D.图1 对照品溶液色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of standard solution图2 供试品溶液色谱图Fig.2 HPLC chromatogram of sample solution2.3 定量分析2.3.1 标准曲线的绘制将不同质量浓度的皂苷D对照品溶液进样，测其峰面积，以峰面积对质量浓度作图，绘制标准曲线，结果如图3所示.求得回归方程为y＝2.871 7x＋0.343 2，线性相关系数R2为0.999 6.图3 皂苷D的标准曲线图Fig.3 Standard curve for determination of platycodin D结果表明，皂苷D质量浓度在4.26～85.20 μg／mL范围具有良好的线性关系.2.3.2 样品的测定在试验的最佳条件下测定供试品溶液的峰面积，得样品峰面积分别为215.2，215.8，213.2，均值为214.7.计算得样品所对应的供试品溶液中皂苷D质量浓度为74.64μg／mL.2.3.3 检测结果的换算根据桔梗取样质量及样品处理过程中定容的体积，计算出桔梗样品中皂苷D的质量分数.计算公式为式中：X为样品中皂苷D的质量分数（mg／kg），C为样品测定液中查标准曲线得到的相当于标准的质量浓度（μg／mL），V 为样品定容体积（mL），m 为桔梗的取样量（g）.经计算得桔梗中皂苷D的质量分数为93.3mg／kg.2.4 精密度试验精密吸取“1.1”项下对照品溶液各20μL，连续进样6次，测其峰面积，计算RSD.得试验的相对标准偏差为0.15%，说明本方法精密度较好.2.5 稳定性试验精密吸取“1.1”项下供试品溶液20μL，于2，4，6，8，12，24h后测定，记录峰面积，计算 RSD.得试验的相对标准偏差为0.935%，表明本方法稳定性较好. 2.6 重复性试验精密称取6份桔梗粉末各4.000 0g，按“1.1”项下制备供试品溶液并稀释10倍，按“1.2”项下进样，测定，记录峰面积，计算RSD.得试验的相对标准偏差为2.12%，表明本试验方法重复性较好.2.7 加标回收率试验将已测定的样品精密称取3份，每份4.000 0 g，按“1.1”项下制备原供试品溶液，各取0.50mL，各精密加入适量的对照品溶液0.50mL，制成加标后的供试品溶液，按“1.2”项下进样，测定，记录峰面积，结果如表1所示.表1 加标回收率试验结果（n＝3）Table 1 Results of recovery tests（n＝3）样品编号本底值／（μg／mL）加入值／（μg／mL）测得值／（μg／mL）回收率／%平均回收率／%RSD／%1 37.32 10.65 47.45 95.12 2 37.32 21.30 57.10 92.86 94.18 1.20 3 37.32 42.60 77.60 94.55由以上结果可以看出，回收率为92.86%～95.12%，RSD为1.20%，说明本方法测定皂苷D的质量分数具有较高的准确度.3 结论（1）桔梗中皂苷D在高效液相色谱法下分离效率高，检测灵敏度好；本实验测得桔梗中皂苷D的质量分数为93.3mg／kg.（2）通过对桔梗中皂苷D稳定性的探讨，可以看出桔梗皂苷D在24h内基本无变化，说明其稳定性良好.（3）准确度试验和精密度试验结果均良好，表明本文对皂苷D的测量结果准确、稳定、可靠、简捷.建立了一种测定桔梗中皂苷D的液相色谱方法，可作为实验室测定桔梗皂苷D的方法.【相关文献】［1］杨壮.桔梗总皂苷的提取和纯化工艺研究［D］.杭州：浙江大学，2007.［2］舒娈，高山林.桔梗研究进展［J］.中国野生植物资源，2012，20（2）：4－6.［3］ CHOI C Y，KIM J Y，KIM Y S，et al.Augmentation of macrophage functions by an aqueous extract isolated from Platycodon grandiflorum ［J］.Cancer Leters，2001，166（1）：17－25.［4］周秀娟.桔梗的质量研究［D］.合肥：安徽中医药大学，2013.［5］ FU Wenwei，SHIMIZU N，DOU Deqiang，et al.Five new triterpenoid saponins from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Chemical and Pharmaceutical Bulletin，2006，54（4）：557－560.［6］付文卫，候文彬，窦德强.桔梗中远志酸型皂苷的化学研究［J］.药学学报，2006，41（4）：358－360.［7］ FU Wenwei，DOU Deqiang，SHIMIZU N，et al.Studies on the chemical constituents from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Journal of Natural Medicines，2006，60（1）：68－72.［8］ HE Zhendan，QIAO Chunfeng，HAN Quanbin，et al.New triterpenoid saponins from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Tetrahedron，2005，61（8）：2211－2215.［9］李伟.桔梗皂苷类化学成分及药理活性研究［D］.长春：吉林农业大学，2007.［10］贺红军.茅莓总皂苷提取及纯化工艺研究［D］.重庆：重庆医科大学，2011.［11］纵伟，李翠翠，赵光远，等.桔梗皂苷超声提取工艺优化研究［J］.江苏农业科学，2012，40（6）：244－247.［12］李喜凤，刘素梅，李振国.RP－HPLC法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量［J］.中华中医药学刊，2008，26（2）：283－284.。
红曲米中桔霉素、淀粉、水分含量的快速测定
中国粮油学 报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｃｅ ｒ ｅ ａ ｌ ｓ ａ ｎ ｄ Ｏｉ ｌ ｓ Ａｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
Ｖ０ １ ． ３ ２． Ｎｏ． ６
成 分 的含 量多 少可 通 过 基 团 的 吸 收频 谱 表 征 。本 试
验 主要探 究 了近 红 外 光 谱 技 术 在 红 曲米 中 桔 霉 素 、 淀粉 及水 分含 量 快 速测 定 中 的应 用 。对 红 曲 米 中这 些 主要成 分 含量 的快 速 无 损 近 红外 光 谱 检 测 模 型 的
研究 的深 入 ， 发现 桔霉素 还具有 生殖 毒性 、 免 疫 毒
中单个 化 学键 ［ 含氢 基 团 ｘ—Ｈ（ Ｘ， Ｃ、 Ｎ、 ０） ］ 基频 振
动的倍频和合 频信息 ， 通过测量近红外 光谱范 围内
含 氢基 团 ｘ—Ｈ振 动 的倍 频 和 合频 吸 收信 息 来 对 样
品 中的 目标成 分进 行 快 速 无损 检测 。红 曲 米 中桔 霉 素、 淀 粉及 水分 的分 子结 构 多 由这些 基 团构 成 ， 这 些
些 指标 的定 性 和定 量 测 定 ， 主要 采 用 化 学 分 析 测 定
法 或高 效液 相色 谱 法 。这 些方 法 往 往 需要 对 样 品进
行 有机 溶剂 提取 等 前 处理 ， 需 要 耗 费 大量 化 学 试 剂 ， 且 每种 方法 只 能测 定 一个 指 标 ， 不 能 同 时 对 红 曲米
性、 致癌性 等 毒性
。在 我 国和 日本 ， 为 了避 免 桔
霉素的危害 ， 都对红 曲色素 中桔霉素 的含量 制定 了 限量 标准 。桔 霉 素 的存 在严 重 制 约 了我 国红 曲产 业 的 发展 。除桔 霉 素外 红 曲米 中 的淀 粉及 水 分 含 量 也
高效液相色谱法测定柑橘和土壤中残留的多菌灵.
%" 结果与讨论
%7 !" 柑橘和土壤样品前处理方法的优化 ! ! 本文分别以甲醇、乙腈、盐酸溶液及乙腈与氢氧 化钠混合溶液作为 溶 剂，对 施 用 过 苯 菌 灵 农 药 的 柑 橘和土壤样品中多菌灵残留进行提取。研究发现在 弱 碱 性 条 件 下 ，多 菌 灵 更 易 于 进 入 有 机 相 ，相 对 回 收 率最高（ 见表 % ），故 本 文 确 定 采 用 碱 性 乙 腈 作 为 提 取溶剂。 ! ! 分别 采 用 :(H 分 散 固 相 萃 取（ I(:$ ）和 G9* 柱固相萃取（ (:$）两种方法对柑橘样品进行净化处 理，发现它们都 能 达 到 净 化 的 效 果，但 G9* !(:$ 柱 的 效 果 更 好；受 液 相 色 谱!紫 外 检 测 器 灵 敏 度 的 限 制，I(:$ 只能 吸 取 部 分 净 化 液 进 行 检 测，而 G9* ! (:$ 柱可以将全部净 化 液 进 行 浓 缩 后 用 于 检 测，得 到更低的检出限，因 此 可 以 视 样 品 中 多 菌 灵 的 残 留 量对两种净化方法进行选择。本文确定采用 G9* ! (:$ 柱对柑橘进行净化。 ! ! 相对柑橘样品，土壤样品的共提杂质少，对多菌 灵的分析不产生干 扰，只 需 利 用 多 菌 灵 和 共 提 杂 质 在酸性水溶液中不 同 的 溶 解 性 质，即 可 达 到 净 化 的 效果。
反相高效液相色谱法测定柑橘中磺胺二甲基嘧啶
反相高效液相色谱法测定柑橘中磺胺二甲基嘧啶摘要:建立了用反相高效液相色谱测定柑橘中磺胺二甲基嘧啶的方法｡结果表明,磺胺二甲基嘧啶能得到较好地分离,用外标法定量,在0.8~15.0 μg/mL范围内与峰面积成良好线性关系,相关系数为0.999 0,检测限为12.6 ng/mL,方法可用于柑橘中磺胺二甲基嘧啶的测定｡关键词:反相高效液相色谱;柑橘;磺胺二甲基嘧啶Determination of Sulfamethazine in Citrus by Reversed Phase High Performance Liquid ChromatographyAbstract: A reversed phase high performance liquid chromatography(RP-HPLC) method for the separation and determination of the sulfamethazine was developed. External standard method was used and the calibration curves showed good linearity over the range of 0.8~15.0 μg/mL(r=0.999 0) for sulfamethazine. The detection limit was 12.6 ng/mL for sulfamethazine. Finally this method was applied for separating and determining sulfamethazinnum in citrus.Key words: reversed phase high performance liquid chromatography(RP-HPLC); citrus; sulfamethazine随着现代医药科学的不断发展,在畜､禽､牧､水产及农产品等领域应用药物对动物进行预防疾病和治疗,以及促动物生长､提高饲料转化率等方面日益普遍｡磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine,SM2)是抗感染药剂,它是畜牧生产中应用最广泛的磺胺类药物之一｡磺胺二甲基嘧啶具有抗菌力强､毒性小､吸收迅速完全,在畜禽及农产品体内药效持续时间长等特点｡但过量的药物残留会损害人体健康,已发现磺胺二甲基嘧啶可诱发啮齿动物甲状腺增生或肿瘤[1]｡近年来也有将此药物用于蔬菜､水果中进行杀菌的报道｡目前,磺胺类药物常用的检测方法为HPLC法[2-11],主要用于动物性食品中的检测,但果蔬中磺胺二甲基嘧啶的检测尚未见报道｡本研究采用超声提取,反相高效液相色谱法测定了柑橘中磺胺二甲基嘧啶的残留量｡该方法简便､快速､前处理过程简单､重现性好､方法的准确度和灵敏度均符合农药残留检测要求,且费用较低,适合作为一种常规的残留检测方法｡1 材料与方法1.1 仪器LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司), 配备SPDM-20A检测器､SIL-20A自动进样器､CBM-20A系统控制器;电子天平(上海越平科学仪器有限公司);微孔过滤装置(北京莱伯泰科学仪器有限公司);SY3200超声波清洗器(上海声源超声波仪器设备有限公司);DHG-9070A型新型电热恒温鼓风干燥箱(宁波江南仪器厂);0412-1离心机(上海分析机械厂)｡1.2 试剂磺胺二甲基嘧啶(100 μg/mL,农业部环境保护科研检测所);无水硫酸钠;甲醇(分析纯);乙腈(色谱纯);去离子水｡所有溶液使用前均由0.45 μm孔径的滤膜过滤｡1.3 色谱条件检测波长:270 nm;色谱柱:Shim-pack VP-ODS(250 mm×4.6 mm, 日本岛津公司);流动相:甲醇∶乙腈∶水(含2%乙酸)=15∶15∶70;流速:0.6 mL/min;柱温:25 ℃;进样量:20 μL｡1.4 样品溶液的配制标准储备液的配制:取1 mL磺胺二甲基嘧啶(100 μg/mL)的标准溶液置于25 mL 的容量瓶中,用25%甲醇定容至刻度,制成浓度为4 μg/mL的标准储备液｡标准使用液的配制:用4 μg/mL的标准储备液配制标准使用液系列,用流动相定容至刻度,使其成为一系列的标准使用液｡1.5 提取和净化准确称取经捣碎柑橘汁液10.000 0 g,置于50 mL棕色容量瓶中,加入30 mL提取液(0.1 mol/L的盐酸溶液∶甲醇=3∶7),将容量瓶置于超声波仪器中超声提取30 min,摇匀,用提取液定容至刻度｡再加入2 g无水硫酸钠,2 000 r/min离心2 min,取上清液过0.45 μm有机滤膜待测｡2 结果与分析2.1 吸收波长的选择利用二极管阵列检测器扫描磺胺二甲基嘧啶标准溶液,得到磺胺二甲基嘧啶的最大吸光度出现在270 nm处,且样品中杂质在该波长时对测定无影响,且色谱峰形较好｡因此,选择270 nm作为最适检测波长｡2.2 流速的影响随着流速增加,各峰的保留时间均减少,在0.4~0.8 mL/min均能很好分离,但流速在0.5 mL/min以下时,色谱峰逐渐扩展,检测灵敏度下降｡流p在选定的色谱条件下进行样品添加回收试验,取柑橘样品3份,按0.10､0.50和1.00 mg/kg 3个添加水平进行回收试验,计算回收率和相对标准偏差(表1)｡2.5 实际样品测定应用本方法对市场上购买的18个柑橘样品进行分析,结果表明, 6个样品中检出磺胺二甲基嘧啶, 含量在1.25~3.78 μg/kg之间｡柑橘样品色谱图见图2｡3 结论建立了符合农药残留分析要求的柑橘中的磺胺二甲基嘧啶残留的分析方法,本方法简单､快速,具有很高的灵敏度与精密度,重现性好,回收率稳定｡参考文献:[1] LITTEFIELD N A, GAYLOR D W, BLACKWELL B N, et al. Chronic toxicity/carcinogenicity studies of sulfamethazine in B6C3F1 mice[J]. Food Chem Tixicol,1989,27(7):45-54.[2] 邵俊杰,袁智能,聂洪勇,等. 肉中十种磺胺兽药残留量的同时测定方法[J].色谱,19931(6):373-375.[3] 李俊锁,李西旺,魏广智. 鸡肝组织中磺胺类药物多残留分析法[J]. 畜牧兽医学报,2002,33(5):468-472.[4] 熊芳,戴华,袁智能. 固相萃取高效液相色谱法测定动物肝中4种磺胺残留量[J].分析科学学报,2002,18(5):415-417.[5] AMOLD D,聂洪勇. 猪肉中4种磺胺类药物残留的快速HPLC测定法[J]. 分析测试通报,1992,11(3):56-59.[6] KRISTOF E M. Quantitative analysis of twelve sulfonmides in honey after acidic hydrolysis by high-performance liquid chromatography with post-column derivatization and fluorescence detection[J]. Journal of Chromatography A,2004,1047(1): 85-92.[7] 张素霞,李俊锁,钱传范. 猪肌肉组织中磺胺类药物的MSPD净化和HPLC 测定[J]. 畜牧兽医学报,1999,30(6):531-535.[8] JEN J F, LEE H L, LEE B N. Simultaneous determination of seven sulfonmide residues in swine waste water by high-performance liquid chromatography[J]. Journal of Chromatogr A, 1998, 793(2):378-382.[9] 张利环,张春善,韩河平. 高效液相色谱法测定肉鸭组织中磺胺二甲基嘧啶的残留量[J]. 中国抗生素杂志,2006,31(5):309-310.[10] 郭根和,苏德森. 高效液相色谱法测定对虾中五种磺胺类药物残留[J]. 现代科学仪器,2005(1):70-72[11] 吴翠琴,陈迪云,黄燕屏,等. 高效液相色谱法测定鸡蛋清和蛋黄中磺胺类药物残留[J]. 环境监测管理与技术,2010,22(3):43-45,64.。
化妆品中七种抗生素高效液相检测方法研究
化妆品中七种抗生素高效液相检测方法研究在化妆品中检测抗生素是保证产品质量和安全性的重要环节之一。
本研究针对化妆品中常见的七种抗生素（青霉素、红霉素、四环素、氯霉素、链霉素、庆大霉素和克林霉素）进行了高效液相检测方法的研究，以提高检测的准确性和效率。
我们收集了市面上常见的化妆品样品，并进行了样品制备。
将样品中的抗生素通过溶解、提取和浓缩等步骤进行预处理，以提高检测的灵敏度和准确性。
接下来，我们采用高效液相色谱仪（HPLC）结合紫外检测器对抗生素进行分析。
我们选用了一款C18反相色谱柱，通过优化流动相体系，包括溶液的浓度、pH和流速等参数，以提高分离的效果和分析的准确性。
我们还对紫外检测器的波长进行了优化，选择了抗生素的最大吸收峰作为检测波长。
为了建立稳定的定量方法，我们通过制备不同浓度的标准曲线来确定抗生素的定量范围和灵敏度。
以青霉素为例，我们制备了一系列的青霉素标准溶液，并通过HPLC进行分析。
根据青霉素的峰面积与浓度之间的线性关系，建立了青霉素的标准曲线，并确定了其检测限和定量范围。
在优化了上述方法之后，我们对不同品牌的化妆品进行了抗生素的检测。
通过对样品中的抗生素进行处理，并进行HPLC分析，可以得到各个化妆品样品中抗生素的含量和种类等信息。
根据我们的研究结果，不同品牌的化妆品中普遍存在不同程度的抗生素污染。
青霉素和克林霉素是最常见的污染物，含量较高。
这说明了化妆品中存在严重的质量问题，需要加强对抗生素的监管和控制。
本研究建立了一种高效液相检测方法，能够快速准确地检测化妆品中的七种常见抗生素。
通过对市面上常见化妆品样品的检测，我们发现了抗生素污染的现象，并为进一步研究和监管提供了参考依据。
希望我们的研究能够为化妆品行业的品质监管提供一定的帮助。
桔霉素(Citrinin)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书
桔霉素(Citrinin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1 使用目的： 本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿样中桔霉素(Citrinin)残留的定量检测。
2 实验原理本试剂盒采用竞争 ELISA 方法，在微孔板包被有桔霉素(Citrinin)偶联抗原，加入桔霉 素(Citrinin)标准品或样品，游离桔霉素(Citrinin)与微孔条上预包被的桔霉素(Citrinin)偶联抗 原互相竞争抗桔霉素(Citrinin)抗体酶标记物，用 TMB 底物显色，加入终止液后颜色由蓝色 变为黄色，用酶标仪在 450nm 波长下进行检测，吸光值与样品中桔霉素(Citrinin)含量成反 比，通过标准曲线计算样品中桔霉素(Citrinin)的含量。
3 试剂盒组成 3.1 预包被的桔霉素(Citrinin)偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2 桔 霉 素 (Citrinin) 标 准 品 ： 6 瓶 （ 1ml/ 瓶 ）， 含 量 分 别 是 ： 0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml 3.3 抗桔霉素(Citrinin)抗体酶结合物：1 瓶（6ml）。
3.4 显色液 A：1 瓶（6ml）。
3.5 显色液 B：1 瓶（6ml）。
3.6 终止液：1 瓶（6ml），2M 硫酸。
3.7 样本稀释液：1 瓶（10×, 6ml），用于样品稀释用。
3.8 浓缩洗涤液：1 瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9 说明书一份。
4 需要而未提供的材料 4.1 设备 4.1.1波长450nm酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
桔霉素与红曲霉的安全性争议
桔霉素与红曲霉的安全性争议
张徐兰;吴天祥;李鹏
【期刊名称】《酿酒科技》
【年(卷),期】2007(000)001
【摘要】红曲霉能代谢生成天然红色素和多种生理活性物质而备受国际关注,但同时也发现其生长过程产生桔霉素.桔霉素是一种真菌毒素,作用的靶器官是肾脏,可以致畸、诱发肿瘤、突变等.红曲霉中桔霉素的发现使得我国的红曲产品的安全性引起争议.介绍了红曲中产生的桔霉素的理化性质、毒性、产生途径和检测方法等的研究现状,并就如何消除红曲中桔霉素提出了对策.
【总页数】3页(P81-83)
【作者】张徐兰;吴天祥;李鹏
【作者单位】贵州大学化学工程学院,贵州,贵阳,550003;贵州大学化学工程学院,贵州,贵阳,550003;莱阳农学院食品学院,山东,青岛,266003
【正文语种】中文
【中图分类】Q925.7;Q93-3
【相关文献】
1.红曲霉桔霉素的检测方法及红曲霉产桔霉素的判别方法 [J], 许赣荣;李凤琴;陈蕴;李玉伟;虞慧玲
2.红曲霉桔霉素的检测和控制方法研究进展 [J], 李培睿;张晓伟;曹依曼
3.不同温度对红曲霉液态发酵合成红曲黄色素及桔霉素的影响 [J], 况嘉铀;屈廷啟;韦胜;王伟平
4.低桔霉素红曲霉变异菌株筛选及其变异位点分析 [J], 桂艳玲;唐光甫;满海乔;赵杰宏
5.高效液相色谱法同时测定酱油中黄曲霉素B_1、棕曲霉毒素A和桔霉素 [J], 黄化成;赵尊行;李寅宾
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ｌ
２．３桔霉素标准曲线的测定 准确称取０．００１０ ｇ的桔霉素标准品，于１００
ｍＬ
容量瓶中，用甲醇溶解并定容，制成１０ ｍｇ／Ｌ的标准 储备液。将桔霉素的标准储备液稀释成质量浓度分别 为０．０５，０．１
０．５，１．０，５．０
ＸＤＢ Ｃ１８（５肛ｍ，
ｍｍ），以乙腈。水（磷酸调ｐＨ ２．５）为
６０００ 固３
Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ
ＸＤＢ－Ｃ，１８色谱柱
ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取上清液经０．４５肛ｍ滤膜过
桔霉素０．５ ｍｇ／ｍＬ色谱图
滤后备用。 １．２．３液相色谱条件的确定 在柱温２８℃、自动进样２０肛Ｌ、洗脱流速
１
对比图１～图３可以看出，在流动相相同的情况 下，不同色谱柱其保留时间、峰面积及峰形等都存在差 异，其中ＳＨ ＩＭＡＤＺＵ
流动相检测标准品溶液，结果见图１～图３。
ＺＵ Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ—ＯＤＳ Ｃ１８（２５０ ｍｍＸ ４．６ ｍｍ）；Ａｇｉ— ｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８（４．６×２５０ ｍｍ，５ ｐｍ）ＰＳＨ一３ Ｃ
酸度计成都世纪方舟科技有限公司，冷冻高速离心 机（Ｂｅｃｋｍａｎ）；溶剂过滤器津腾玻璃有限公司；电子 天平赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；恒温振荡 器富华仪器有限公司。‘ １．１．４培养基
～５ ｍｇ／Ｌ范围内线性关系良好（Ｒ２—０．９９９６），平均保
留时间为１８．４８２ ｒａｉｎ，最低检测限为５／ｚｇ／Ｌ，平均加 标回收率为９８．１７％，ＲＳＤ＝１．８％。
参考文献： ［１－１贾波，周立平．红曲霉研究之现状及发展前景［Ｊ］．中国食品 添加剂，２００２（６）：３２－３５． ［２３钱志伟，杨丹丹．ＨＰＬＣ法测定酯化红曲霉发酵液中桔霉素 含量［Ｊ］．酿酒科技．２０１０（３）ｔ１０７－１０９． ［３］陈蕴，许赣荣．ＴＬＣ及ＨＰＬＣ测定红曲产品中的桔霉素［Ｊ］．
结论与讨论
采用ＳＨＩＭＡＤＺＵ
Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ—ＯＤＳ
ＣｌＢ色谱
（２５０ ｍｍ×４．６ Ｓｈｉｍ—ｐａｃｋ
ＶＰ—ＯＤＳ Ｃ１８
ｍＬ／ｍｉｎ、荧光检测波长Ｘｅｘ一３３１ ｎｍ和Ｘｅｍ＝
ｍｍ）的分离效果较好。 一７３—
万方数据
２０１１年第４期 总第３６卷
中国调味品
ＣＨＩＮＡ ＣＯＮＤＩＭＥＮＴ
分析检测
２．２流动相及其比例对分离效果的影响 由图１～图３可知，且以乙腈和水做流动相，桔霉 素峰的拖尾现象严重，影响分析结果的准确性。钱志 伟等采用色谱柱ＺＯＲＢＡＸ Ｅｃｌｉｐｓｅ
Ｉ
２０
ｌ
ｌＯ
方法对桔霉素的最低检出限为０．００５ ｍｇ／Ｌ，低于文献 冀ｌ桔霉素峰Ｉ ’■‘＿・。＿。＿・・。＿。。＾。＿＿＿＿一 ［７３报道。 ２．５重现性试验 将两个不同浓度的样品各进行３次平行试验，实 验结果见表ｌ。
衰１重现性实验结果
隳 一ｍ
Ｏ ｌＯ
；；八．一
—ｏ
，、
２０
ｎａｌｎ
图５
乙腈ｔ甲醇Ｉ水为７０
ｐＨ。
ｕＹ
Ｎ ∞
培养基均在１２１℃灭菌３０ ｍｉｎ。
１．２
篓萋
图２ ｍＬ
／Ｌ
７．５ １０．Ｏ ｍｍ
ｒ
方法
ＳＨＩＭＡＤＺＵ Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ—ＯＤＳ
１．２．１红曲霉的液态培养
２５０
ｍＬ三角瓶装５０ ｍＬ种子培养基，接种１
ｈ。２５０
ｃｌ。色谱柱桔霉素０．０５ ｍｇ／Ｌ色谱图
孢子悬液，３２℃，１８０ ｒ／ｍｉｎ摇床培养３０
红曲霉被广泛应用于食品酿造和中药已有几千年 的历史，其代谢过程中可以产生多种酶类、有机酸等初 级代谢产物，以及红曲色素等次级代谢产物，这其中包 括一些生理活性物质，如具有降血脂功能的Ｍｏｎａｃａ—
ｌｉｎ
物，这是由红曲霉本身的基因特性所决定的。由于红 陆霉发酵液中桔霉素的相对含量较低，因而建立一种 红曲霉发酵液中桔霉素灵敏、快速的检查方法非常有 必要。ＨＰＬＣ、ＴＬＣ、ＥＬＩＳＡ以及ＨＰＬＣ－ＭＳｒ２—５３方法 均可用于检测桔霉素，本文对＇ＨＰＬＣ测定桔霉素含量 进行了研究，结果表明该法灵敏度高、检测时间快速， 定性定量准确、可靠。 １
ｔｉｔａｎ ｗａｓ Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ－ｏＤＳ Ｃ１８（２５０ ｍｉｎ Ｘ ４．６ ｒａｍ），ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｗａｓ Ｖ
（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）Ｉ Ｖ（ｍｅｔｈａｎ０１）Ｉ Ｖ（ｗａｔｅｒ）ｉｓ ７０
ｌ
ｌＯ：２０。ｐＨ ２．５．Ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ
ｍｇ／Ｌ后进样，以峰面积为
５０（Ｖ：Ｖ）为流动相，在柱温２８℃、流速
纵坐标，桔霉素质量浓度为横坐标做标准曲线，结果见
图６。
ｍＬ／ｍｉｎ，于荧光检测波长Ｘｅｘ＝３３１ ｎｍ和ｘｅｍ＝ ｎｍ条件下对桔霉素获得了较好的分离效果和重
５００
现性，但其色谱图中桔霉素峰仍有拖尾现象。 一般来说，三元体系可以提高物质的分离度。常 用的流动相中，桔霉素在甲醇中的溶解性比在乙腈中 的高，分离效果好，但灵敏度不高。而乙腈可以增加荧 光检测的灵敏度，由此选择ＳＨＩＭＡＤＺＵ
由表２可知，该方法对于桔霉素的检测具有较高 的准确度。 ３
无锡轻工大学学报，２００１，２０（３）：１６４—１６８． ［４］陈福生，邢淑婕．红曲产品中桔霉素含量的ＥＬＩＳＡ测定［Ｊ］． 食品科学，２００４，２５（８）：１６９－１７２． ［５３潘振球。马加力．液相色谱一串联质谱法检测食品中的桔霉 素［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００８，１８（１１）：２１９２—２２１５．
ｌ
１０
ｌ
２０
由图４和图５可知，固定乙腈的比例不变，改变甲 醇和水的比例时，当甲醇为２０％而水为１０％时，在
２５
ｍｉｎ之内没有桔霉素的洗脱峰出现ｆ而当甲醇降为
１０％而水增加为２０％时，在２０ ｍｉｎ之内出现了桔霉 素洗脱峰，这是因为甲醇比例增加会使保留时间较长， 而低ｐＨ的水有利于提高桔霉素的分离度和检测的灵 敏度。 由表１可以看出，该方法具有良好的重现性。 ２．６加样回收率试验 精密量取浓度分别为５，１０ ｍｇ／Ｌ的桔霉素标准
０．４５
５００
ｎｍ条件下，筛选合适的色谱柱、流动相及流动相
比例。 ２
结果与分析
成都市科龙化工试剂厂；桔霉素
２．１色谱柱的选择 分别采用Ｓａｐｐｈｉｒｅ Ｃ１８（５肛ｍ，４．６×２５０ ｒａｍ）；
ＳＨＩＭＡＤＺＵ Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ．一ＯＤＳ
４．６ ｍｍ）；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ
北京泰乐祺科技公司（纯度≥９８％）１
发酵液中平均加标回收率为９８．１７％，ＲＳＤ＝１．８％。 关键词：高效液相色谱；红曲霉；桔霉素；测定 中图分类号：ＴＳ２０１．２５ 文献标识码：Ｂ 文章编号；１０００—９９７３（２０１１）０４－－００７２－－０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｉｔｒｉｎｉｎ ｂｙ ＨＰＬＣ
ＬＩ ｇｈｉ—ｑｉａｎｇ。ＹＵＡＮ Ｙｏｎｇ－ｊ ｕｎ。，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏ—ｌｏｎｇ （Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｘｉｈｕａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００３９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｉｔｒｉｎｉｎ ｉｓ ｔａｂｌｉｓｈｅｄ
Ｋ、抑菌性物质、降血糖物质等［１］。１９９５年法国学
者Ｂｌａｎｃ发现某些红曲霉菌株代谢会产生对人畜有害
的真菌毒素——桔霉素，引起了人们对红曲霉中桔霉
素问题的关注。桔霉素有显著的肾脏毒性，并有致癌 性，而且还能引发基因突变。有研究表明，红曲霉产桔 霉素是普遍性的问题，桔霉素是红曲霉固有的代谢产
材料与方法
ｍＬ
三角瓶装５０ ｍＬ发酵培养基，接人５％的种子液，
３２ ７２，１５０
ｒ／ｍｉｎ恒温震荡培养８天。
１．２．２样品前处理‘６］ 发酵结束后，将发酵液和菌丝体转入组织捣碎机， 将菌丝体捣碎。准确吸取１０ ｍＬ处理后的发酵液，置 于５０ ｍＬ具塞试管中，加入２０ ｍＬ无水乙醇，６０℃恒 温水浴振荡加热１ ｈ，冷却至室温后，转入离心管中，
２０１１年第４期
中国调味品
ＣＨＩＮＡ ＣＯＮＤＩＭＥＮＴຫໍສະໝຸດ 分析检测总第３６卷
高效液相色谱法测定桔霉素
李志强，袁永俊’，张晓龙
（西华大学生物工程学院，成都６１００３９） 摘要：桔霉素是红曲霉的代谢产物，有显著地肾脏毒性。文章研究了ＨＰＬＣ法测定桔霉素，结果表明： 色谱柱ＳＨＩＭＡＤＺＵ
ｐＨ ２．５）为７０
１．１材料
收稿日期：２０１０—０９—２７
＊通讯作者
作者简介：李志强（１９８４一），男，山东人，硕士研究生，研究方向；食品生物技术．
一７２—
万方数据
２０１１年第４期 总第３６卷
中国调味品
ＣＨＩＮＡ ＣＯＮＤＩＭＥＮＴ
分析检测
１．１．１菌株 红曲霉ＡＳ ３．５３１：生物工程学院实验室保藏。 １．１．２试剂 甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），无水乙醇（分析 纯），磷酸（分析纯） 标准品
ｃｏｎｔｅｎｔ
ａｔ
２８℃，ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅｎ ｃｉｔｒｉｎｉｎ
ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ
ａ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ａｔ
ｋｅｘ＝３３１ ｎｍ ａｎｄ ｋｅｍ＝５００ ｎｍ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｉｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｔｒｉｎｉｎ ｆｒｏｍ ０．０５
ａ ａ
ｋｉｎｄ ｏｆ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｏｆ Ｍｏｎａｓｃｕｓ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｔｏｘｉｃ ｔｏ ｋｉｄｎｅｙ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ。ｗｅ