实验三 淀粉酶产生菌产酶条件的优化
实验三 淀粉酶产生菌产酶条件的优化
一、目的和要求
1.掌握紫外分光光度计的工作原理和操作方法
2. 掌握掌握用DNS法测淀粉酶活的方法，了解淀粉水解圈初筛原理。
3.掌握培养基的配置原则，熟悉用正交实验优化产酶培养基的方法
4.了解炭源、氮源、通气量、底物含量、温度、发酵初始pH值等理化因素对芽孢杆菌产酶的影响。
二实验原理
一般使用的培养基包括适合于代谢产物生成和菌体生成所需要的碳源、氮源、无机盐、PH和其他物质等以有利于最终代谢物的产生。研究各个成分对在终产物的影响采用单因素的方法实验处理和次数比较多，考虑不到所有成分的综合影响，需要采用数理统计的方法优化培养基的成分。正交试验设计可以以比较少的实验处理数来判断出培养基的成分的最佳组合。
由于 2 h 之内酶的稳定性较好, 使得酶活大小与水解圈直径大小呈正相关, 并且此方法灵敏度高, 酶活大于1 u/ mL 时即可进行比较。由于菌落水解圈法是一个常用的方法, 其他胞外水解酶产生菌的初筛可能也存在类似的现象, 因此尝试使用通过对比H/C大小来优化产酶条件.
淀粉酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分解a—1，4—葡萄糖苷键生成葡萄糖。碱性条件下，还原糖于3、5—二硝基水杨酸被还原为3—氨基—5—硝基水杨酸，还原糖则被氧化成糖酸及其他物质。在一定范围内，还原糖的量与棕色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光度值。查标准曲线计算，可求出菌液中还原糖的含量，从而求出淀粉酶的活力，优化产酶条件。
三实验材料：
蛋白胨、牛肉膏、可溶性淀粉、Nacl、无菌水、琼脂 、发酵液、 碘液
0.2mol/LpH6.8 PBS缓冲液
PBS母液的配制：
0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水
0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制：
先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的
Na2HPO4, 即可。
然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可，如：
0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可
葡萄糖标准液1mg/mL葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸试剂）DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸试剂）的制备：甲液，溶解6.9g苯酚于15.2mL 10%氢氧化钠中，并稀释至69mL，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。乙液，称取22.5g酒石酸钾钠，加到300mL 10%氢氧化钠溶液中，再加入880mL 1%的3,5二硝基水杨酸溶液将甲液与乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7-10天以后使用。
实验仪器
分光光度计 微量接种针 高压蒸汽灭菌锅 离心机 电子天平
四 实验步骤：
试验路线
设置条件梯度→发酵培养（设置条件剃度）→酶活测定→确定最佳培养条件
（1）培养基的配制
1 因素水平的设定
因素水平 牛肉膏 蛋白胨 可溶性淀粉 pH （g/100ml）
1 0.3g 0.5g 0.1g 6
2 0.5g 1.0g 0.2g 7
3 0.7g 1.5g 0.3g 8
配100ml,用1mol/lNaOH ,1mol/lHCl 的调pH
2正交试验表
列号 1 2 3 4 试验号
1 1 1 1 1
2 1 2 2 2
3 1 3 3 3
4 2 1 2 3
5 2 2 3 1
6 2 3 1 2
7 3 1 3 2
8 3 2 1 3
9 3 3 2 1
（2）参照正交表将上述9瓶培养基配配制好以后，每250mL三角瓶装入培养基100mL，于121℃下灭菌30min,冷却。
（3）冷却后接种将实验一中纯化的菌株接入种子培养基摇瓶培养24h，2% 的接种量接种到发酵培养基，置于37℃培养箱进行培养36h。
（4）酶的提取：各取5ml发酵液在3000r/min的离心机中离心20min，取上清
1.淀粉水解圈法测酶活
（1）配制含2%淀粉 1.5%琼脂的固体筛选培养基于121℃下灭菌30min,冷却倒平板,厚度3mm。
（2）取18个淀粉平板 ，每个平板上用微量注射器垂直滴加三滴体积为5ul酶液。每种酶液做两个重复。37℃反应2h。
（3）滴加碘液后测量H/C大小，通过比较H/C大小筛选出最优产酶培养基。
（4）实验结果分析
滴加碘液后无明显水解圈，在滴加酶液处有水解小斑点，失败可能原因平板琼脂浓度过高酶液不能很好地渗透，反应时间过短等。
2.DNS法测酶活：
1. 绘制葡萄糖标准曲线，取25mL试管8支，按下表加入试剂。
项目 0 1 2 3 4 5 6
1mg/mL葡萄糖标准溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
1.2
相当于葡萄糖量/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8
3,5二硝基水杨酸试剂/mL 3 3 3 3 3 3 3
将各管溶液混合均匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即用流动自来水冷却至室温，摇匀。于540nm波长处，测定吸光值，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标做出标准曲线。
葡萄糖毫克数0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
540nm吸光度0 0.098 0.610 1.111 1.509 1.943 2.193
2. 测定：将2%可溶性淀粉，置于50℃水浴中预热，取9支试管中加入0.2mol/L pH6.8 PBS缓冲液0.5ml，酶液1ml，迅速放入沸水浴中5-10min，使酶失活，冷却。另外9支试管加入0.2mol/L pH6.8 PBS缓冲液0.5ml，酶液1ml。再向每支试管中加入预热可溶性淀粉0.5ml。
60℃反应20min.立即向每个试管中加入3mlDNS终止反应（为减小人为误差加一个对照管加一个试验管）沸水浴10min显色。以9支灭活酶试管作为空白对照，于540nm波长处，测定吸光值
实验数据
540nm(A-A0) 1 2 3 4 5 6 7 8 9
0.223 -1.014 -0.535 -0.811 -0.255 0.279 0.607 -0.389 0.529
酶活力 6.69 8.37 18.21 15.63
3. 淀粉酶活力计算：以1mL酶液在60℃、pH6.8的条件下，1h催化分解1%可溶性淀粉产生1mg葡萄糖的酶量为1个酶活力单位u/mg表示。
酶活力单位（U/mg）=
其中：U——样品淀粉酶活性，U/mg；
K——标准曲线斜率；k=1.9943
F——样品溶液反应前的总量，5ml；
S——样品测试量；表1中S＝1ml；
60——1小时为60min；
20——反应时间min。
实验结果分析
经正交试验分析，方案（7），（9）产酶活力较高方案（2）产酶活力最低。采取方案（7）培养基初始pH7.0，牛肉膏浓度0.7％，蛋白胨浓度0．5％，可溶性淀粉0.3％这种方案时产生的淀粉酶活力最高为优化的最佳产酶培养基方案。出现负值可能原因为该方案产酶活力较低，操作过程中存在误差，导致吸光度值为负值。
注意事项：
（1）接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器 皿上，以免造成污染；如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净
（2）凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内；
（3）配制可溶性淀粉溶液必须用沸水或煮沸的缓冲液进行配制，煮 沸溶解成透明或半透明的液体，否则不能与碘结合成紫兰色的复合物；
4 DNS配制一周后使用效果最好
5严格控制DNS测酶活法的反应时间，温度 K×（A－A0）×F
S×（20÷60）
6可溶性淀粉加入前先预热，否则不能很快达到反应温度。
高产淀粉酶菌株筛选
高产淀粉酶菌株筛选
淀粉酶是一种以淀粉为底物的酶，可以将淀粉水解为糊精、糊精、麦芽糊精等多种低聚糖。淀粉酶在食品工业、酿造工业、纺织工业等领域有广泛的应用。在淀粉酶生产过程中，高产酶菌株的选育十分重要。本篇文章将介绍高产淀粉酶菌株筛选的相关知识和方法。
1. 筛选菌种
在高产淀粉酶菌株筛选中，首先要选取一种基础菌株，并在培养基中加入抑制其他细菌生长的抗生素，以防止其它外来细菌的污染。另外，为了避免淀粉酶活性的干扰，还需要在培养基中加入淀粉水解产物。
2. 筛选培养基
淀粉酶生产的细菌在不同类型的培养基中的生长情况也不同。因此，在高产淀粉酶菌株筛选中，需要尝试不同成分和配比的培养基，找到最优的培养基。
3. 筛选条件
在高产淀粉酶菌株筛选中，不同的发酵条件都会影响细菌的生长和淀粉酶的产生。例如 pH 值、温度、搅拌速度、氧气供应等。因此，需要优化发酵条件，使其最大化淀粉酶产量。
4. 淀粉酶活性测定
确定淀粉酶的活性对于筛选高产淀粉酶菌株十分重要。一般采用碘液滴定或 Fehling
精制法来测定淀粉酶活性，选择最高活性的菌株作为高产淀粉酶菌株。
微生物菌株的选择是筛选高产淀粉酶菌株的核心工作，可通过筛选自然环境中的菌株，或采用一些基因工程技术筛选出高产酶活的工业微生物菌株。
淀粉酶检测方法是评估筛选结果的一个关键步骤，目前主要有碘液滴定和Fehling 精制法两种方法，需要选择准确、温和、操作简便的方法测定淀粉酶活性。
高产淀粉酶菌株筛选的研究具有广泛的应用前景。目前，在食品工业、酿造工业、制糖工业、制药工业、纺织工业等领域已经取得了较为显著的应用效果。高产淀粉酶菌株的筛选研究不仅是实现淀粉酶生产工艺的自动化，还能生产高附加值的淀粉水解产品，提高资源利用效率。 总之，无论是在工业生产还是在科学研究方面，高产淀粉酶菌株筛选都扮演着重要的角色。通过优化菌株选型，调整培养基成分和发酵条件，以及采用高效、准确的淀粉酶检测方法，可获得高产且高效的淀粉酶制剂，为产业生产和科学研究做出贡献。
淀粉酶产生菌的筛选注意事项
淀粉酶产生菌的筛选注意事项
淀粉酶是一种重要的酶类，在食品加工、制药和生物技术等领域有着广泛的应用。而淀粉酶产生菌则是淀粉酶发酵的关键微生物，因此筛选合适的淀粉酶产生菌对于淀粉酶的生产至关重要。下面将从以下几个方面介绍淀粉酶产生菌的筛选注意事项。
一、筛选前的准备工作
1. 确定筛选目标：在进行淀粉酶产生菌筛选之前，需要明确自己所需要的菌株特性，如产量、稳定性、适应性等。
2. 了解基础知识：在筛选之前需要对淀粉酶发酵过程中微生物代谢途径、营养需求等基础知识有一定了解，以便于更好地设计实验方案。
3. 准备培养基：根据所需菌株特性选择合适的培养基，并进行消毒和质量检测。
二、筛选方法选择
1. 传统方法：传统方法包括平板法、液体培养法等，这些方法简单易行，但筛选效率较低。
2. 高通量筛选：高通量筛选方法可以同时对大量菌株进行筛选，具有快速、高效的优点，但需要较高的设备和技术要求。
3. 分子生物学方法：分子生物学方法通过扩增和检测目标基因来确定淀粉酶产生菌，具有高灵敏度、高特异性和快速等优点。
三、菌株的来源选择
1. 野生菌株：采集自然环境中的微生物进行筛选，可以获得多样性较高的菌株，但需要进行适应性培养和改良。
2. 已知菌株：已知菌株包括文献报道的、已经商业化应用的等，在筛选时可以优先选择这些已知稳定可靠的菌株。
3. 自体分离：自体分离是指从淀粉酶发酵中分离出产酶微生物进行筛选，这种方法具有与发酵过程相适应、稳定性好等特点。
四、实验设计与操作注意事项
1. 设计合理实验方案：实验方案需要考虑到微生物营养需求、培养条件等因素，同时需要进行对照实验和重复实验以确保结果的可靠性。
2. 严格控制操作条件：操作过程中需要严格控制温度、pH值、氧气含量等因素，以确保微生物的正常生长和代谢。
3. 合理选择筛选指标：筛选指标需要与淀粉酶产生相关，如淀粉酶活力、淀粉酶产量等。
4. 筛选后的确认和评价：在筛选出淀粉酶产生菌后，需要进行进一步的确认和评价，包括菌株稳定性、代谢途径分析等。
淀粉酶产生菌的筛选
实验一淀粉酶产生菌的筛选
及酶活力测定
指导老师：辛树权
生命科学学院 08级生物技术（三）班 豆豆
同组人：xx xxx
摘要：自然界是微生物的大本营，实验室微生物几乎都是从自然界中选育出来的。 我们从学校的花坛中采集一些土壤样本，拿到实验室中，进行淀粉产生菌的筛选。 利用土壤制成菌液，将其涂抹在牛肉膏蛋白胨培养基上进行纯化，再用淀粉培养基培养，最后通过淀粉透明圈的大小来判断淀粉产生菌产淀粉的能力。再使用分光光度计精确测量淀粉酶的酶活力。
关键词：淀粉酶；分离；纯化；透明圈；酶活力；摇瓶；分光光度计
一、实验目的：
1、学习从土壤中分离微生物的方法；
2、学习淀粉酶产生菌的筛选方法
3、了解分光光度计法测定酶活力的原理及方法。
二、实验原理：
土壤中含有大量的微生物，将土壤稀释液涂在不同类型的培养基上，在适宜的环境中培养几天，细菌或者是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养集中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。故在淀粉培养基上长出的菌便是淀粉产生菌。在培养基上滴碘液，淀粉被分解掉的部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断菌种产淀粉的能力。 淀粉酶是指一类能催化分解淀粉分子中糖苷键的酶的总称，主要包括α－淀粉酶和β-淀粉酶等，α-淀粉酶可从淀粉分子内部切断淀粉的α-1,4糖苷键，形成麦芽糖、含有6个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖，是淀粉的粘度下降，因此又称为液化型淀粉酶。淀粉遇碘呈蓝色。这种淀粉-碘复合物在660nm处有较大的吸收峰，可用分光光度计测定。随着酶的不断分作用，淀粉长链被切断，生成小分子的糊精，使其对碘的蓝色反应逐渐消失，因此可以根据一定时间内蓝色消失的程度为指标来测定α-淀粉酶的活力。
三、实验器材及试剂：
1.、材料：长春师范学院家属楼前小菜园
淀粉酶生产工艺
淀粉酶生产工艺
淀粉酶作为一种重要的工业酶，广泛应用于食品、医药、饲料、糖化、纺织、皮革等领域。下面将主要介绍淀粉酶的生产工艺。
淀粉酶的生产工艺通常分为两个步骤：种子培养和发酵生产。
1. 种子培养
淀粉酶的种子一般由菌丝体制备而得，种子菌株的选取非常重要。首先，从土壤、植物、食品中分离得到淀粉酶产生菌株，并经过传代培养筛选出优良菌株。然后，选择合适的培养基进行菌株的预培养，以获得高活性和高产量的种子菌株。培养基的选择要考虑到菌株的特性和经济性。在种子培养过程中，通常采用摇瓶培养或容器培养的方式，控制好温度、pH值和氧气供应等条件，优化菌株的生长。
2. 发酵生产
种子培养完成后，将种子菌株接种到大型发酵罐中进行发酵生产。发酵过程需要控制好发酵温度、pH值、氧气供应和添加剂的投放等条件。
温度：淀粉酶的产生通常在30-50°C之间，具体温度要根据菌株的特性来确定。温度过高或过低都会影响酶活性和产量。
pH值：淀粉酶一般在中性或微酸性环境下活性最高，一般在
pH 5.0-7.0 的范围内进行发酵。
氧气供应：氧气供应对淀粉酶的产生有重要影响，因为淀粉酶属于需要氧气的好氧菌株。因此，在发酵过程中需要控制好氧气的供应，提供充足的氧气以促进酶的产生。
添加剂：为了提高淀粉酶的产量和稳定性，常常会在发酵过程中添加一些助产剂或诱导剂，如优质动物蛋白、磷酸盐和氨基酸等。这些添加剂能够提供菌株合成淀粉酶所需的营养物质，增加产酶能力。
发酵时间一般为24-72小时，根据菌株的生长速率和淀粉酶产量进行调整。发酵过程中，可以通过监测酶活性和生物量的变化来掌握发酵的进程和产酶情况。
在发酵结束后，可通过离心、超滤等技术手段将淀粉酶提取和分离出来，经过加工和精制，最终得到纯净的淀粉酶产品。
综上所述，淀粉酶的生产工艺主要包括菌株的培养和发酵生产两个步骤。通过控制好培养条件和发酵参数，能够提高淀粉酶的产量和质量，达到产业化生产的要求。
产淀粉酶的芽孢杆菌的分离和筛选
从土壤中分离和筛选产淀粉酶活性的芽孢杆菌及部分鉴定
试验
一、实验目的
1、 通过本实验的学习，学习掌握从环境中分离产淀粉酶菌株以及菌株初步鉴定
的方法；
2、 巩固微生物分离纯化、细菌生理生化鉴定，对所学习过的微生物学实验方法进 行综合技能训练；
3、 培养综合利用微生物学、生物化学等相关知识，自行设计、实施并判断实验 结果的能力。
4、 根据所学知识自主设计实验方案，在实验方案通过审核后组织实施，最终要 求获得产淀粉酶的菌株。
二、实验原理
1、 土壤中含有各种微生物，其中产淀粉酶的芽抱杆菌含量在不同土壤中含量也 不同，因此实验前进行预埋工作，能使土壤中产淀粉酶的细菌含量增加。待实 验前取样即可。
2、 在只用淀粉充当碳源的选择培养基中，只有能产生淀粉酶利用淀粉的菌体能 成为优势菌种。在淀粉选择培养基中，产淀粉酶的菌种可以得到富集及分离。
3、 芽抱是菌体生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，芽抱最主 要的特点就是抗性强，对高温、紫外线、干燥、电离辐射和很多有毒的化
学物质都有很强的抗性。它帮助菌体度过不良环境，在适宜的条件下可以重 新转变成为营养态细胞。细菌富集一段时间后，生长环境不利，会产生芽 抱，再在80-90 C温度下杀死菌体，可使芽抱得到富集。
4、 芽抱杆菌属的共同特征是：革兰氏阳性；接触酶阳性；水解淀粉； VP试验阳 性；不产生吲哚；苯甲氨酸不脱氨；分解酪素；不分解酪氨酸；不产生二羟丙酮； 营养体的最高生长温度大约从 25C到75C以上；最低生长温度大约5C到45C； 生长最低pH值，从一8到2左右；耐盐范围从低于2%勺NaCI到25%NaC；营养 明胶(22°C)
7天内液化1厘米或1厘米以上。枯草芽抱杆菌和地衣芽抱杆菌在 糖发酵试验用阿拉伯糖，木糖和甘露糖代替葡萄糖可产酸；作为营养生长的最低 限培养基是无维生素的，但含有葡萄糖、柠檬酸盐和一个氨态盐作为唯一的碳源 和氮源。
自然界中产淀粉酶菌株分离纯化及酶活测定.
自然界中产淀粉酶菌株分离
纯化及酶活测定
淀粉酶（Amylase ）又称糖化酶，是指能使淀粉和糖原水解成糊精、麦芽糖和葡萄糖的酶的总称。淀粉酶一般作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖元等α-1, 4-葡聚糖，水解α-1, 4-糖苷键的酶。根据作用的方式可分为α-淀粉酶（EC 3. 2. 1. 1.）与β-淀粉酶（EC 3. 2. 1. 2. ）。α-淀粉酶广泛分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物；β-淀粉酶与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α-1, 4-葡聚糖链。主要见于高等植物中（大麦、小麦、甘薯、大豆等），但也有报告在细菌、牛乳、霉菌中存在。
淀粉酶是一种用途极广的生物催化剂，广泛应用于造纸、食品、医药工业。如饴糖、啤酒、黄酒、葡萄糖、味精、抗生素等行业；用于高质量的丝绸、人造棉、化学纤维退浆；制成不同品种的工业酶、医用酶、诊断酶等；在洗涤剂工业中，作为洗涤剂酶与碱性蛋白酶、脂肪酶一起添加于洗衣粉中制成多酶洗衣粉等具有极广泛的用途。随着社会需求的增大，工业生产对淀粉酶的需求量越来越大，其在各领域应用广泛，急需寻找更高酶活的产酶菌株满足生产需要。
生淀粉酶是指对不经过蒸煮糊化的生淀粉颗粒能够表现出强水解活性的酶类。70年代由于两次石油危机，引起各国学者从节能和有效利用天然资源出发，重视对生淀粉酶的研究。研究大致分两个方面：一是探讨对生淀粉不经蒸煮，直接用于酒精发酵的可能性；另一则是从自然界中分离筛选能产生生淀粉酶的微生物，并进而研究生淀粉酶的酶学特性及其产生菌的徽生物学特性[1, 2]。除动物自身的消化道可分泌一些淀粉酶外，淀粉酶的另外两大来源是植物和微生物能产生生淀粉酶的微生物较多。Ueda [3, 4]，Mizokami [5]，Tamiguchi [6]，Kainuma [7]先后报道了Aspergillus awaraori，Rbizopus . sp．，Strepiococcus boris，Bacillus circulans，
高产淀粉酶菌株的分离与酶活性检测 2(1) 2
高产淀粉酶菌株的分离与酶活性检测
西南大学生命科学学院 2011级5班第3小组自主实验
摘要：土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。目的:从土壤中分离筛选高产淀粉酶菌株,方法:通过碘比色法比较水解圈的直径大小测酶活性高低,从而从土壤中分离筛选到高产淀粉酶的菌株
关键词：土壤 淀粉酶 分离 水解圈 碘液
淀粉酶是催化淀粉水解的一类酶的总称，广泛存在于动物、植物和微生物中，是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。本实验从土壤中分离高产淀粉酶菌株并通过碘比色法比较水解圈的直径大小测酶活性高低。
一、实验材料
1.1、实验取材
从学校枯叶堆积处取土层下5-10cm处的土壤
1.2、培养基配方
淀粉培养基: 称取牛肉膏5 g、蛋白胨10 g、NaC l 5 g、可溶性淀粉2 g 溶于900 m l蒸馏水中, 再加入25 g琼脂粉并搅拌至充分溶解,
调pH 至7. 2, 最后加蒸馏水定容至1000 m ,l 高压蒸汽灭菌;
种子培养基( LB): 除不加琼脂粉外, 其它成分和淀粉培养基配置相同。
1.3、试剂与仪器 碘液、烧杯（500ml）、锥形瓶（250ml）、酒精灯、培养皿、涂布棒、移液枪、无菌枪头、试管、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、摇床培养箱、接种环、记号笔等
二、实验方法
2.1、样品稀释
称取酒曲样品10g溶于90mL 无菌水中,在37摄氏度摇床（200r/min）培养箱中培养2-3个小时，使菌体充分扩散到无菌水中。静置，取上清至富集培养基的锥形瓶中。在37摄氏度摇床（200r/min）培养箱中培养一天，使菌体富集。将富集后的菌液分别用无菌水梯度稀释至 1 ×10 ^-6倍。
2.2、分离
分别取10^-2 、10^-3、10^-4 、10^-5 、10^-6菌液0.2ml均匀涂布在10个淀粉培养基上，在37摄氏度培养箱培养2天，平板培养基表面便形成了若干菌落。
产淀粉酶菌株的筛选实验报告
产淀粉酶菌株的筛选实验报告
一、实验背景
淀粉酶是一种常见的酶，广泛存在于微生物和植物中。淀粉酶能够水解淀粉分子，将其分解成糖类分子，如葡萄糖、麦芽糖等。淀粉酶广泛应用于食品、医药、环保等领域中。制备高效的产淀粉酶菌株，对实现产业化生产具有重要意义。
二、实验目的
通过筛选不同菌株的淀粉酶产量，选出产淀粉酶效果较好的菌株，为后续工业化生产提供依据。
三、实验步骤及方法
1. 菌株的选取
本实验选取了3株常见的淀粉酶产生菌株，分别为Bacillus subtilis、Aspergillus
niger、Trichoderma reesei。
2. 菌株的培养
将3株菌株接种到琼脂培养基中，经过静置培养后，选取菌落较为圆润、生长状态良好的菌落，移植至含有淀粉质的液体培养基中，进行淀粉酶产量的筛选实验。
3.淀粉酶活性的测定
分别取3组接种液，以葡萄糖和淀粉为基质，分别加入菌液，进行淀粉酶活性测定。具体步骤如下：
(1)准备含1%淀粉质的液体培养基和0.5%葡萄糖液体培养基。
(2)将接种液投入含1%淀粉质的液体培养基中，加入0.1mol/L乙酸钠溶液，pH为5.6，放置于37℃水浴中反应30min，加入 1%伊红色溶液备用。
(3)将接种液投入含0.5%葡萄糖的液体培养基中，加入0.1mol/L乙酸钠溶液，pH为5.6，放置于37℃水浴中反应30min，加入1%伊红色溶液备用。
(4)通过比较加入菌液前后溶液颜色的深浅，计算出淀粉酶的酶活力。
4. 结果记录及分析
根据上述实验步骤，在不同的液体培养基中测定了3株菌株的淀粉酶活性，并记录结果如下表所示： 表1.不同菌株的淀粉酶活性
| 菌株名称 | 淀粉酶酶活力 |
| ------------------ | --------------- |
产淀粉酶细菌的筛选和选育 - 副本
微生物学实验报告
第二模块
产淀粉酶细菌的筛选和选育
学院：生命科学学院
班级：09级4班
姓名：**
学号：09090340 微生物实验报告 产淀粉酶菌的筛选和选育
第 2 页 共 16 页 产淀粉酶细菌的筛选和选育
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生命科学学院 09级4班
【摘要】从土壤中筛选、鉴定产淀粉酶菌株,并对菌株的分离筛选及诱变育种进行了研究。利用淀粉平板透明圈法，从土壤中初步筛选出10株产淀粉酶菌株,通过比较淀粉酶菌落大小(C) 和水解圈大小(H)的比值,筛选出1株产淀粉酶活力较强的菌株。依据菌种形态、生理生化特征 和16SrDNA序列分析，将其鉴定为短小芽孢杆菌（Bacillus
pumilus）。
【关键词】淀粉酶 分离 鉴定 诱变育种
淀粉酶是能催化淀粉水解转化成葡萄糖、麦芽糖及其它低聚糖的一类酶的总称[1] 。淀粉酶类大约占据了25 %的酶市场[2] ,在淀粉糖工业、食品工业、纺织工业、造纸工业以及酿酒行业中被广泛应用,几乎完全取代了淀粉加工中淀粉的化学水解[3]。淀粉酶家族包括α-淀粉酶、β-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。α- 淀粉酶为内切酶，以无规则的方式切开淀粉分子内部的α-1，4糖苷键，而使淀粉生成糊精和低聚糖，是一种钙离子依赖性酶。β-淀粉酶从非还原性末端顺次切下麦芽糖，为外切酶。葡萄糖淀粉酶是一种作用于α-1，4糖苷键的外切酶，从非还原糖末端切下葡萄糖分子。[4] 诱变育种已成为菌种选育研究中最常采用的研究手段，近年来，原生质体融合，代谢调控，基因工程等较为定向的诱变育种方法出现，但这些方法成功用在生产上的例子很少。而紫外诱变育种仍为最广泛采用的诱变育种方法，它不仅可以提高菌株的生产能力，而且还可以改进产品质量，扩大生产，微生物实验报告 产淀粉酶菌的筛选和选育
第 3 页 共 16 页 简化工艺；同时，它还具有速度快，收效显著和方法简便等优点，因此在科学实验和生产上都得到了广泛的应用。本试验应用淀粉平板透明圈法，筛选出了1株产淀粉酶较高的菌株，并对菌种的分离鉴定及紫外诱变育种进行了研究，探讨了该突变株的产酶最适培养条件，为生物工程和淀粉酶工程寻求了更为高效、经济的方法。
产耐酸陛α-淀粉酶菌株固态发酵条件的优化
食品工艺 食品研究与开发 ２ｏＯ７．ＶｏＬ２８．ＮＯ。ｏ９
产耐酸性 一淀粉酶菌株固态
发酵条件的优化 ９ｌ＝
刘永乐１ｌ２。李忠海’。俞健 。杨培华’
（１．中南林业科技大学绿色食品研究所，湖南长沙４００００４；２．长沙理工大学，湖南长沙，４１００７６）
摘要：对产耐酸性 一淀粉酶黑曲霉菌株ＡＳ—Ｙ的固态发酵条件进行了优化。经过单因素实验和正交试验，影响产 耐酸性 一淀粉酶的菌株产酶量的主要因素为含水量＞接种量＞附加氮源＞Ｃａ２￣。固体发酵条件中，水：麸皮为１：１，麸皮
量为１５ ｇ，接种量为４ ｍＬ，温度为３０℃～３２ ｏＣ。发酵培养基中，麸皮：硫酸铵为１：０．０５，ＣａＣ１２为０．０１ ｇｏ在上述最佳的
发酵条件下，确定其固体发酵时间为６Ｏ ｈ～７２ ｈ，酶活达到２８６．６４Ｕ／ｇ。
关键词：耐酸性 一淀粉酶；固态发酵；黑曲霉
Ｓ，ｒＵＤＩＥＳ ０Ｎ Ｓ０ＬＩＤ—Ｓ，Ｉ’ＡＴＥ ’ＥＲＭＥ ＴＡ ＩＩＯ Ｃ０ ＤＩＴ１０ Ｓ ｌＵＲ ＰＲ０ＤＵＣｌ Ｇ
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（１．Ｇｒｅｅｎ Ｆｏｏｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｅｎｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０００４，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｈａｎｇｓｈａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１００１５，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ａｃｉｄ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ仅一Ａｍｙｌａｓｅ ｂｙ Ａ ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ Ａ Ｓ－Ｙ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．
Ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｏａｈｏｇｏｎ￣ｔｅｓｔ，ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｂｒａｎ １ ５ ｇ，ａｍｍｏｎｉｕｍ