骨髓间充质干细胞形态
不同心脏病患者骨髓间充质干细胞培养结果的比较
不同心脏病患者骨髓间充质干细胞培养结果的比较王宇玫;夏云峰;张浩;李君;刘润梅;李良;张津津;翟红霞;殷亚昕【期刊名称】《感染、炎症、修复》【年(卷),期】2007(008)004【摘要】目的:研究不同原因所致心脏病患者机体内的骨髓间充质干细胞培养结果的差别.方法:分别采集并体外培养12例非冠心病和16例冠心病患者的骨髓间充质干细胞,观察其形态变化,对比分析其首次传代和每次传代时间、细胞增殖曲线和细胞表面标记的变化.结果:冠以病组中有4例无法体外培养出骨髓间充质干细胞.其余患者体外培养的骨髓间充质干细胞的形态无差异,均成梭形纤维状,早期呈克隆状生长;细胞的首次传代时间[冠心病组(16.7±7.2)d;非冠心病组(15.9±8.3)d]和生长曲线间也无明显差别;细胞表面标记分析显示CD54和CD106在非冠心病组的表达率分别为(19.08±0.97)%和(45.72±3.97)%,而它们在冠心病组的表达率则分别为(42.35±3.23)%和(65.90±4.33)%,非冠心病组明显低于冠心病组.结论:对于不同病因的心脏病患者,骨髓间充质干细胞在体外培养过程中其增殖上无明显差异,但是与功能相关的某些蛋白表达可能有所不同.【总页数】4页(P217-220)【作者】王宇玫;夏云峰;张浩;李君;刘润梅;李良;张津津;翟红霞;殷亚昕【作者单位】解放军总医院第一附属医院干部病房,北京,100037;解放军总医院第一附属医院干部病房,北京,100037;北京市阜外心血管病医院卫生部再生医学重点实验室,北京,100037;北京市阜外心血管病医院卫生部再生医学重点实验室,北京,100037;解放军总医院第一附属医院干部病房,北京,100037;解放军总医院第一附属医院干部病房,北京,100037;解放军总医院第一附属医院干部病房,北京,100037;解放军总医院第一附属医院干部病房,北京,100037;解放军总医院第一附属医院干部病房,北京,100037【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.不同种属骨髓间充质干细胞体外培养特性的比较研究 [J], 夏冰;王捷;郭立达;詹纯列;肖育华;杨传红2.人骨髓间充质干细胞体外不同分离与培养方法的比较 [J], 刘贤华;仝青英;白晓东3.不同胎牛血清、培养瓶体外培养大鼠骨髓间充质干细胞效果比较 [J], 何丁文;邬亚华;殷明;魏强强;殷嫦嫦4.不同分离方法与培养条件下大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖情况比较 [J], 王文;李静;王宗仁;张金洲;师长宏5.电离辐射及不同条件培养基诱发骨髓间充质干细胞基因组不稳定性的比较研究[J], 张利英;刘永琦;张苡铭;周妮娜;卢志伟;丁楠;华君瑞;李洋洋;周婷;刘颖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
临床研究用人间充质干细胞质量评价
临床研究用人间充质干细胞质量评价一、引言人间充质干细胞（MSCs）由于其多向分化潜能、免疫调节特性以及易于体外培养等特点，被广泛用于临床研究。
在众多疾病的治疗中，MSCs 都展现出了巨大的潜力。
然而，要确保其在临床研究中的有效性，首先需要对MSCs的质量进行严格控制和评价。
本文将探讨如何评价临床研究用MSCs的质量。
二、MSCs的质量评价标准1、细胞的纯度和活性：这是MSCs质量评价的核心指标。
纯度是指MSCs中目标细胞的比例，而活性则是指MSCs的增殖能力和分化能力。
2、细胞的遗传稳定性：通过基因测序等方法，可以检测MSCs是否存在基因突变，以及是否存在潜在的致癌风险。
3、细胞的免疫调节特性：MSCs具有免疫调节特性，可以通过抑制免疫反应来降低排斥反应的风险。
因此，评价MSCs的免疫调节特性也是非常重要的。
4、细胞的来源和生产过程：MSCs的来源和生产过程也会对其质量产生影响。
例如，来自患者的自身MSCs可能比来自捐献者的MSCs更适合用于治疗。
同时，生产过程中的质量控制，如无菌操作、细胞培养基的质量等，也会影响MSCs的质量。
三、MSCs质量评价的方法1、细胞形态观察：通过观察MSCs的形态，可以初步判断其是否具有正常的形态学特征。
2、生长曲线测定：通过绘制MSCs的生长曲线，可以评估其增殖能力。
3、细胞表面标志物检测：通过检测细胞表面标志物，可以确定MSCs 的纯度和活性。
4、染色体核型分析：通过染色体核型分析，可以评估MSCs的遗传稳定性。
5、免疫调节特性检测：通过检测MSCs对免疫反应的调节作用，可以评估其免疫调节特性。
6、生产过程质量控制：通过监控生产过程中的关键控制点，可以确保MSCs的生产过程符合质量标准。
四、结论人间充质干细胞（MSCs）在临床研究中的应用前景广阔，但其质量评价是关键环节。
通过对MSCs的纯度、活性、遗传稳定性、免疫调节特性以及生产过程的质量控制等多方面的评价，可以确保其满足临床研究的需求。
骨髓间充质干细胞成骨分化的影响因素
骨髓间充质干细胞成骨分化的影响因素李庆帆【期刊名称】《《口腔颌面外科杂志》》【年(卷),期】2017(027)006【总页数】7页(P434-440)【关键词】骨髓间充质干细胞; 成骨分化; 骨再生【作者】李庆帆【作者单位】上海牙组织修复与再生工程技术中心同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院口腔种植科上海 200072【正文语种】中文【中图分类】R782由创伤、肿瘤或生理、病理性的骨吸收等因素所造成的骨缺损是颅颌面及整形外科常见的临床问题，严重影响患者的生活质量，所以修复骨缺损一直是研究的热点。
自体骨及异体骨已成功应用于临床，但这两种方法都存在创伤大、移植失败率高等缺点，限制了其应用。
随着组织工程理论和技术的飞速发展，以间充质干细胞为种子细胞进行骨再生具有来源广、成本低、创伤小，可避免免疫排斥反应等优势，具有很大的应用前景。
来源于骨髓的间充质干细胞即骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, BMSCs）是最早被发现的间充质干细胞，相比于其他组织来源更加丰富。
其具有自我更新和多向分化的潜能，可以向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、神经细胞等多种细胞分化[1-3]，在组织修复和再生中发挥重要作用。
所以，研究骨髓间充质干细胞成骨方向的分化具有重要意义。
本文主要从化学药物、细胞因子、物理刺激、氧浓度、中药及其提取物等方面对影响BMSCs成骨分化的相关研究做一综述，以促进BMSCs 在骨再生修复和组织工程骨中的进一步运用。
1 骨髓间充质干细胞的生物学特性骨髓间充质干细胞是最先由Friedenstein 于20 世纪六七十年代通过骨髓培养而获得的贴壁生长的细胞，并且是他首次发现该细胞具有向多种细胞系转化的潜能[4]。
之后，骨髓间充质干细胞的研究逐步深入，成为研究最多的种子细胞。
目前，骨髓间充质干细胞的分离方法主要有4 种：全骨髓贴壁法、密度梯度离心法、流式细胞仪法及免疫磁珠分选法[5]。
辛伐他汀刺激骨髓间充质干细胞的成骨分化
辛伐他汀刺激骨髓间充质干细胞的成骨分化邢磊;高静媛;汪晓旭;陈俞洁;迟博婧;田发明【摘要】背景:体外研究显示辛伐他汀有明确的刺激骨髓间充质干细胞成骨分化的作用,但机制不清.最新研究显示Hedgehog信号通路是骨髓间充质干细胞成骨分化的重要信号通路.目的:结合Hedgehog通路阻断剂环杷明的应用,观察辛伐他汀体外刺激大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用机制.方法:4周龄SPF级雌性SD 大鼠8只,分离出股骨和胫骨并去除干骺端,应用全骨髓贴壁培养法提取骨髓间充质干细胞.选取第2代骨髓间充质干细胞随机分成4组:①对照组:用成骨诱导培养基培养;②辛伐他汀组:用含有10-7 mol/L辛伐他汀的成骨诱导培养基培养;③辛伐他汀+阻断剂组:用含5μmol/L环杷明的完全培养基预先阻断2 h后,与辛伐他汀组同时加入含辛伐他汀的成骨诱导培养基培养;④阻断剂组:用含有5μmol/L环杷明的成骨诱导培养基培养.给药第7天行碱性磷酸酶染色,免疫荧光染色法和Western blot 检测Ⅰ型胶原、骨钙素的表达;给药第28天行茜素红钙染色.结果与结论:辛伐他汀组与对照组比较,碱性磷酸酶阳性着色细胞和钙结节增多,Ⅰ型胶原、骨钙素荧光强度和相应蛋白表达增高(P<0.05);除骨钙素荧光强度和蛋白表达外,其他指标在辛伐他汀+阻断剂组显著低于辛伐他汀组(P<0.05);阻断剂组各项指标均低于对照组(P<0.05).结果证实辛伐他汀通过刺激Hedgehog信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化,且不完全被环杷明阻断.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2019(023)025【总页数】6页(P3961-3966)【关键词】骨质疏松;骨髓间充质干细胞;辛伐他汀;环杷明;Ⅰ型胶原;骨钙素;成骨分化;河北省自然科学基金【作者】邢磊;高静媛;汪晓旭;陈俞洁;迟博婧;田发明【作者单位】华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学附属医院老年病科,河北省唐山市 063000;华北理工大学医学实验研究中心,河北省唐山市 063000【正文语种】中文【中图分类】R459.9;R394.20 引言 Introduction骨质疏松症是一种以骨量低下、骨组织微结构损坏为特征，最终导致骨脆性增加，容易发生骨折的全身性骨疾病[1-2]。
骨髓间充质干细胞在Matrigel凝胶支架上的生长与变化
骨髓间充质干细胞在Matrigel凝胶支架上的生长与变化张斌斌;高全文;李冰;黄沙;姚斌【摘要】背景:研究表明,Matrigel 作为一种细胞外基质复合物加入到细胞培养体系中,对细胞的增殖、分化、胶原分泌具有促进作用.目的:建立Matrigel复合骨髓间充质干细胞的三维培养模型,观察Matrigel三维培养条件下骨髓间充质干细胞的形态、增殖及存活情况.方法:全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,进行成骨、成脂诱导鉴定;CCK-8测定第3代骨髓间充质干细胞的生长曲线;选取生长状态良好的第2代骨髓间充质干细胞,与Matrigel混合形成细胞凝胶复合物,采用相差显微镜和苏木精-伊红染色观察骨髓间充质干细胞的形态及增殖情况,Live/Dead染色评价细胞活性.结果与结论:①全骨髓贴壁法分离培养的比格犬骨髓间充质干细胞具备向成骨、成脂细胞分化的能力;②骨髓间充质干细胞的生长曲线呈 S 形,符合正常细胞的生长特性;③相差显微镜下可见骨髓间充质干细胞在Matrigel中逐渐伸长相互交联,呈三维网状生长,增殖状态良好,随着时间延长(7 d后),基质胶逐渐变软塌陷, 14 d时仍可见少部分细胞网状交联生长;苏木精-伊红染色可见第4天时细胞胞质较大,第7天时细胞细长、相互交联;④三维培养第1,4,7天,骨髓间充质干细胞在Matrigel中活性百分比分别为92.57%,95.54%,97.37%,呈逐渐升高趋势;⑤结果表明,骨髓间充质干细胞在Matrigel中的增殖能力较强,活性较高.%BACKGROUND: Matrigel as an extracellular matrix complex can facilitate cell proliferation, differentiation and collagen secretion in a cell culture system. OBJECTIVE: To establish a three-dimensional culture model of Matrigel combined with bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and to observe the morphology, proliferation and survival of BMSCs in the Matrigel three-dimensional culture model. METHODS: BMSCs were isolated and culturedby the whole bone marrow adherent method, followed by osteogenic and adipogenic induction and identification. The growth curve of passage 3 BMSCs was determined through the CCK-8 experiment. Passage 2 BMSCs were combined with Matrigel, and the morphology and proliferation of BMSCs were observed by hematoxylin-eosin staining under a phase contrast microscope. The viability of the cells was evaluated by theLive/Dead staining. RESULTS AND CONCLUSION: (1) BMSCs cultured bythe whole bone marrow adherent method had the ability to differentiate into osteoblasts and adipocytes. (2) BMSCs exhibited an "S"-shaped growth curve, which was consistent with the growth characteristics of normal cells. (3) Under the phase contrast microscope, BMSCs cultured by the Matrigel model were extended and interconnected in a three-dimensional network growth state with good proliferation. The Matrigel gradually became soft and collapsed over time (7days) and a few cellswere still in a network growth after 14 days. Hematoxylin-eosin staining results showed that the cell cytoplasm was larger at 4 days and the cells became thinned and mutually cross-linked at 7 days. (4) The active percentage of BMSCs in the Matrigel model was 92.57%, 95.54% and 97.37% at 1, 4, 7 days of culture, respectively. To conclude, BMSCs cultured on the Matrigel has good proliferation and high viability.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)013【总页数】6页(P1993-1998)【关键词】干细胞;骨髓间充质干细胞;三维培养;Matrigel;细胞增殖;细胞活性;北京市自然科学基金【作者】张斌斌;高全文;李冰;黄沙;姚斌【作者单位】山西医科大学口腔医学系,山西省太原市 030001;解放军总医院第一附属医院烧伤整形科,北京市 100048;山西医科大学口腔医院,山西省太原市030001;解放军总医院基础医学研究所,北京市 100853;解放军总医院基础医学研究所,北京市 100853【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言 Introduction组织工程是应用细胞生物学和工程学的原理，培养出新的具有特定功能和形态的组织器官，达到修复组织器官和重建功能的目的[1-2]。
负载骨髓干细胞来源外泌体负载骨髓干细胞来源外泌体的3D水凝胶通过调节免疫促进损伤软骨的修复
由于缺乏血管、神经和淋巴组织，关节软骨自我修复的能力受到限制［1］。
一旦受损，就会导致关节肿胀和疼痛，加速骨关节炎的进展。
迄今为止，尽管目前已取得很多进展，但是完全再生透明软骨以及恢复其原有的A 3D hydrogel loaded with exosomes derived from bone marrow stem cells promotes cartilage repair in rats by modulating immunological microenvironmentGUAN Pengfei 1,CUI Ruiwen 2,WANG Qiyou 3,SUN Yongjian 41Department of Spine Surgery,Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangzhou 510630,China;2Department of Organ Transplantation,Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China;3Department of Spine Surgery,4Department of Pediatric Orthopedics,Center for Orthopedic Surgery,Third Affiliated Hospital of Southern Medical University,Guangzhou 510515,China摘要：目的分探究负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA 水凝胶对软骨损伤的修复情况。
方法首先利用超速离心法分离提取出骨髓干细胞上清液中的外泌体，并通过外泌体透射电镜、粒径分析以及Western blot 检测外泌体表面marker 。
人骨髓间充质干细胞的超微结构
由于它 可直 接 从 自体 骨 髓 腔 抽 吸 物 或 松 质 骨 获 得 ， 因此来 源 充足 ， 取材 方便 ， 伤 小 ， 免疫 排斥 反 应 ， 创 无 细胞 处 于 未分 化状 态 ， 殖 能力 强 ， 在 体外 大 量培 增 可 养扩 增 ， 因此 ＭＳ ｓ可 以 作 为 组 织 工 程 中构 建 这 些 Ｃ 组 织 的种 子细 胞 。本 室 自去 年 开 始 分 离 、 养 的 骨 培
肌 、 、 带 、 皮 、 肪 、 髓 基 质 和 神 经 腱 韧 真 脂 骨 ， 且 而
未贴 壁 细 胞 ， 后 每 ４ 换 液。传 代 培 养 时 ， 以 ｄ 用
００５ ．２ ％胰 蛋 白酶 （ ｉｏ公 司 进 口分 装 ） 化 ， 牛 Ｄｆ ｃ 消 胎 血清终止。 １ ２ 透 射 电 镜 样 品 制 备 收 集 培 养 的 第 ５代 人 ．
髓 间充 质 干细 胞并 对 其 细胞 膜 表 面 标 志 抗 原 、 胞 细
质 中蛋 白属 性 加 以 鉴 定 ， 用 动 物 体 内 实 验 证 实 利 Ｍ Ｃ 具 有 多 向分 化 的潜 能 。为 了更 全 面 地 了 解 Ｓｓ Ｍ Ｃ， Ｓ ｓ我们 利 用 透 射 电镜 和 扫 描 电 镜 进 行 Ｍ Ｃ Ｓ ｓ的
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第 ２ 卷 第 ４期 ｌ
２０ ０ ２年 ８月
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超 微 结 构观 察 。
分离小鼠骨髓间充质干细胞的方法
分离小鼠骨髓间充质干细胞的方法一、分离方法说明及图例A.Ⅰ.取新鲜抗凝血液或脐带血与羟乙基淀粉550（Cat#：HES-TBD550）按1:1比例混合，37℃反应5-10分钟（5ml以下样本反应5分钟，5ml以上样本反应10分钟）；Ⅱ.取新鲜抗凝骨髓，加入一份细胞洗涤液（Cat#：2010X1118），混匀后以400g（约1500转/分）离心5分钟，弃去上清。
沉淀与羟乙基淀粉550（Cat#：HES-TBD550）按1:1比例混合，37℃反应5-10分钟（5ml以下样本反应5分钟，5ml以上样本反应10分钟）；B.加入为步骤A中所得混合液1/2体积的全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）混匀20℃-30℃自然沉降20-30分钟，吸取上清备用；C.向步骤B中所得上清液中加入为其一倍以上体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）混匀，以500g（约1800转/分）离心15分钟（半径15cm水平转子），弃去上清保留沉淀细胞；D.向细胞沉淀中加入全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）调整细胞浓度为2×108—1×109个/ml，小心叠加于细胞分离液之液面上（混合液：分离液=2:1）；（本实验采用天津灏洋TBD生物实验室的分离液）E.以400g（约1500转/分）离心20分钟（半径15cm水平转子）；第三层；为透明分离液层。
第四层；为极少数红细胞层。
收集第二层细胞放入约为其5-10倍体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）中，充分混匀后以500g（约1800转/分）离心1 5分钟。
沉淀经反复洗涤2次既得所需干细胞。
F.为获得纯度更高的干细胞，在步骤E中离心完成后可吸取第二层干细胞层再与羟乙基淀粉550（Cat#：HES-TBD550）按1:1比例混匀，20℃-30℃自然沉降20-30分钟，收集上清加入细胞洗涤液500g（约1800转/分）离心15分钟。
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骨髓间充质干细胞形态
骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一类具有多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于人体的骨髓、脂肪组织、胎盘等多种组织中。
骨髓间充质干细胞形态多样，具有一定的可塑性，在治疗各种疾病和损伤中具有广泛的应用前景。
骨髓间充质干细胞主要通过形态学特征进行鉴定和分类。
在显微镜下观察，骨髓间充质干细胞呈现为纤维状或星状，细胞体积较大，胞质丰富，呈圆形或椭圆形，细胞核呈卵圆形或半圆形，染色质呈颗粒状分布。
此外，骨髓间充质干细胞胞浆内还可见到较为明显的内质网和线粒体，这些特征可以帮助鉴定和鉴别骨髓间充质干细胞。
骨髓间充质干细胞具有较高的增殖能力和自我更新能力。
它们可以通过对增殖和分化相关因子的调控，不断地进行自我更新和增殖，从而保持其细胞群体的稳定性。
同时，骨髓间充质干细胞还可以向多种细胞系分化，包括成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。
这种多向分化潜能为骨髓间充质干细胞在组织修复和再生中的应用提供了基础。
除了形态学特征外，骨髓间充质干细胞还具有一系列的免疫表型特征。
在表面标记物方面，骨髓间充质干细胞通常表达CD73、CD90、CD105等阳性标志物，同时不表达CD34、CD45等造血干细胞和免疫细胞表面标记物。
这些免疫表型特征有助于进一步确认骨髓间充
质干细胞的身份。
骨髓间充质干细胞不仅具有多向分化潜能，还具有广泛的免疫调节和抗炎作用。
这些特性使得骨髓间充质干细胞在临床上有着广泛的应用前景。
目前，骨髓间充质干细胞已被广泛应用于骨科、创伤、心血管疾病、免疫性疾病等多个领域。
在骨科领域，骨髓间充质干细胞可以通过向成骨细胞的分化，促进骨组织的修复和再生。
在创伤领域，骨髓间充质干细胞可以促进创伤部位的愈合，减少炎症反应和瘢痕形成。
在心血管疾病领域，骨髓间充质干细胞可以分化为心肌细胞，促进心肌组织的再生。
在免疫性疾病领域，骨髓间充质干细胞可以通过调节免疫反应，减轻炎症反应和免疫损伤。
骨髓间充质干细胞形态多样，具有多向分化潜能和免疫调节作用，广泛应用于临床治疗各种疾病和损伤。
进一步的研究将有助于揭示骨髓间充质干细胞的分子机制和应用潜力，为临床治疗提供更多的选择和可能性。