微生物实验一：显微镜的使用及细菌形态观察教学案例
微生物学显微镜油镜的使用和细菌形态的观察讲课文档
（二）、 革兰氏染色的工作原理
• 革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法。有芽 孢的杆菌和绝大多数球菌以及所有的放线菌和真菌 都呈革兰氏阳性反应；弧菌，螺旋体和大多数致病 性的无芽孢杆菌都呈现阴性反应。
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• 根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的结构 差异来达到染色的目的的。
• 先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的蓝紫色 ；
• 然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复合物 ，从而增强了染料与细菌的结合力。
• 然后再用乙醇脱色处理
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经典法，四步法 （p.30-32）
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• 由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、 壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫—碘不
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显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目 镜放大倍数
2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜辨
析物体（两端）两点之间距离的能 力，可用公式表示为：
D=0.61λ/n·Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间的 最短距离。
：可见光的波长（平均0.55m)
n: 物镜和被检标本间介质的折射
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操 作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌， 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应甩去细胞上 的残水，以免染色液被稀释。
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（7）复染：用番红液染1—2min,水洗。
（8）镜检：干燥后（室温下晾干），置油镜观察（先在低倍镜 ，然后在油镜下观察菌体细胞的形态）。革兰氏阴性菌呈红 色，革兰氏阳性菌呈紫色。
（1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平板上取一
实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
护的基本知识
使用油镜观察细菌的几种基本形态 用悬滴法在高倍镜或油镜下观察细菌的
运动
显微镜油镜使用的原理
普通光学显微镜 欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜
欧林巴斯（OLYMPUS）相差显微镜
普通光学显微镜Ⅰ
显微镜的构造 1.光学部分:接目镜 、
接物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它 使检视物放大,造成物象. 2.机械部分:镜座、镜 臂、镜筒、物镜转换器、 载物台、载物台转移器、 粗调节器、细调节器等部 件.它起着支持 调节 固定 等作用.
普通光学显微镜Ⅱ
显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
2. 打开主开关。 3. 移动电压调整旋，使亮度 适中。 4. 把标本固定在再物台上。 5. 放松粗调锁挡。 6. 用低倍物镜，旋转粗调和 微控制钮来进行对焦。 7. 调节双目镜筒间距和视度 差。 8. 再适当调节照明度。 9. 使焦点正确地对准标本。
11. 调节孔径光栏。 12. 依次用低、中、高倍镜 观察。 13. 油镜观察：与普通光学 显微镜方法一致。 14. 观察完毕，复原：先将 电压调节旋钮复原，关闭主 开关，切断电源，放开粗调 锁挡。油镜的处理与普通光 学显微镜方法一致。 15. 放入保存箱中。
实验程序III
细菌三种基本形态的观察：
菌落形态观察和个体形态观察，这里主要指 个体形态的观察。 1. 结合油镜的使用，观察三张细菌染色片（球 状菌、杆状菌、和螺旋状菌），边观察边绘图。 2. 看示范镜：观察双球菌、四联球菌察（示范）： 一般采用水浸片法、悬滴法、 半固体培养法，常用水浸法 和悬滴法来观察细菌的运动 性。 1. 水浸片法 2. 悬滴法
显微镜观察微生物形态的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除显微镜观察微生物形态的实验报告篇一：微生物实验报告：微生物形态观察实验一微生物形态观察一、实验目的1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用；2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构；3．练习手绘微生物图片。
二、实验原理1．细菌基本形态细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。
细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。
球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。
杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。
螺旋菌分为弧菌和螺菌。
除此之外，还有一些特殊形态的细菌。
2．细菌特殊结构细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。
鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。
菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。
芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。
3．真菌的结构特征菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。
可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。
根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。
为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。
比如吸器、假根、子实体。
4．放线菌的结构特征放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。
链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。
当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。
微生物实验
实验一光学显微镜的操作及细菌、放线菌和蓝细菌个体形态的观察一、实验目的(1)掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。
(2)观察细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态，学会生物图的绘制。
二、显微镜的结构、光学原理及其操作方法(一)显微镜的结构和光学原理显微镜是观察微观世界的重要工具。
随着现代科学技术的发展，显微镜的种类越来越多，用途也越来越广泛。
微生物学实验中最常用的是普通光学显微镜，其结构分为机械装置和光学系统两部分。
显微镜的结构如图－1所示。
A B图－1 显微镜的结构1．机械装置(1)镜筒：镜简上端装目镜，下端接转换器。
镜筒分单筒和双筒两种。
单筒有直立式(长度为160mm)和后倾斜式(倾斜45°)。
双筒全是倾斜式的，其中一个筒有屈光度调节装置，以备两眼视力不同者调节使用。
两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用!(2)转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个或5个孔。
不向规格的物镜分别安装在各孔上。
(3)载物台：载物台为方形(多数)和圆形的平台，中央有一光孔，孔的两侧各装1个夹片．载物台上还有移动器(其上有刻度标尺)，可纵向和横向移动。
移动器的作用是夹住和移动标本用。
(4)镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。
镜臂有固定式和活动式(可改变倾斜度)两种。
(5)镜座：镜座为马蹄形，支撑整台显微镜，其上有反光镜。
(6)调节器：调节器包括大、小螺旋调节器(调焦距)各一个。
可调节物镜和所需观察的物体之间的距离。
调节器有装在镜臂上方或下方的两种。
装在镜臂上方的是通过升降镜臂来调焦距，装在镜镜下方的是通过升降载物台来调焦距，新式显微镜多半装在镜臂的下方。
2．光学系统及其光学原理(1)目镜：一般的光学显微镜均备有2～3个(对)不同规格的目镜，例如，5倍(5×)、10倍(10×)和15倍(15×)，高级显微镜除了上述3种外，还有20倍(20×) 。
实验一 光学显微镜的使用与微生物观察
实验一光学显微镜的使用与微生物观察第一节普通光学显微镜的使用一、实验目的1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。
2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。
3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。
二、基本原理（一）普通光学显微镜的构造普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。
1、机械系统机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。
（1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。
（2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。
（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。
镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。
镜筒长度一般固定，通常是160mm。
有些显微镜的镜筒长度可以调节。
（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。
为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。
转动物镜转换器可以选用合适的物镜。
转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。
（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。
载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。
有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。
（6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。
粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。
图1-1 普通光学显微镜的构造1. 镜座2. 镜臂3. 镜筒4. 转换器5. 载物台6. 压片夹7. 标本移动器8. 粗调螺旋9. 细调螺旋10. 目镜11. 物镜12. 虹彩光阑（光圈）13. 聚光器14. 反光镜2、光学系统光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。
（1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。
实验一显微镜油镜的使用及微生物形态观察
【注意事项】
（1）当油镜头与标本片几乎接触时，不可再用粗调螺旋向上 移动载物台或下降油镜头，以免损坏玻片甚至压碎镜头。
（2）油镜头和玻片只能用擦镜纸擦拭，不能用手、棉布或其 他纸张擦拭。
（3）香柏油的用量以1-2滴、能浸到油镜头的中间部分为宜， 用量太多则浸染镜头，太少则视野变暗不便观察。
（4）切不可将高倍镜转动经过加有香柏油的区域。
（光照强度调节）
（镜臂）
（粗调节器） （细调节器） （载物台调节器）
二、实验原理（二）
2、油镜的工作原理
普通光学显微镜的物镜通常有低倍物镜（10×），高倍 物镜（40×），和油镜（100×）三种。
➢ 油镜的识别：油镜是三者中放大倍数最大的，因使用时必须 浸于香柏油内，故称油镜。油镜与其他物镜有以下区别：
22将光源灯亮度调至最低后关闭拔下电源插头然后把将光源灯亮度调至最低后关闭拔下电源插头然后把物镜转成八字或将最低放大倍数物镜转到工作位置物镜转成八字或将最低放大倍数物镜转到工作位置同时将载物台降到最低位置并降下聚光器最后盖上防同时将载物台降到最低位置并降下聚光器最后盖上防尘罩置于干燥处以防受潮
实验一
显微镜油镜的使用 及微生物形态观察
一、实验目的及要求
1、熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的 功能。
2、学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3、观察微生物的基本形态，学习绘图的基
本技术。
二、实验原理（一）
1、显微镜的基本结构
（目间距调节）
（目镜）
（镜体） （物镜转换器）
（物镜） （载物台） （聚光器） （孔径光栏；彩虹光圈） （镜座） （视野光栏）
（1）油镜一般是所有物镜中最长的； （2）油镜头上标有其放大倍数 “100×”； （3）不同厂家生产的显微镜，常在不同镜头上标有不同颜色
实验一显微镜的使用及细菌形态观察
人眼的分辨能力在0.2 mm左右，因此光学显微 镜的最大有效放大倍数（使用油镜）是1,000×到 1,500×。
奥林巴聚光器)升至最高 ②光圈打至最大 2.在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区
域，然后将油镜转到工作位置。 3.在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面 注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几 乎与标本相接。
用显微镜油镜观察操作方法
香柏油
乙醚乙醇 混合液
用显微镜油镜观察操作方法
4.然后用细调节器调节，在目镜下找到最合 适的观察点进行观察。 5.油镜使用后：上升镜筒，取下标本片。本 组同学都观察完毕后，用吸水纸将标本片 上的香柏油擦拭干净。
显微镜油镜观察操作方法
6.油镜观察完毕后要“三擦”： 首先用擦镜纸擦掉油镜头上的香柏油； 用擦镜纸蘸取少许乙醇乙醚混合液拭去油镜头 上的油渍； 再用擦镜纸拭净镜头上的乙醇乙醚混合液； 7.最后在载玻片上先滴上醇醚混合液，再用吸水 纸将香柏油、醇醚混合液擦拭干净。
画图注意事项
1.以圆圈表示视野； 2.注意菌体大小比例合适； 3.标出菌体颜色，显示典型排列方式； 4.特殊结构标出菌体和特殊结构所在位置。
大肠杆菌 （革兰氏阴性菌）
葡萄球菌（革兰氏阳性）
油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光线由反光 镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空 气与玻片的密度不同，使光线受到曲折， 发生散射，降低了视野的照明度。若中间 的介质是一层油（其折射率与玻片的相 近），则几乎不发生折射，增加了视野的 进光量，从而使物象更加清晰。
油镜使用的原理
香柏油与玻璃的折射率相近。很多原 来由于在透镜及载片表面的反射和折射而 损失的光线可以进入物镜，使照明亮度提 高，改善观察效果。
若中间的介质是一层油其折射率与玻片的相近其折射率与玻片的相近则几乎不发生折射增加了视野的进光量从而使物象更加清晰
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法一、显微镜的使用普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成，而当前使用的显微镜由一套透镜组成。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500—2000倍。
（一）显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。
1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件（1）镜座镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。
在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。
（2）镜筒镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。
从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。
因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。
镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。
因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。
（3）物镜转换器物镜转换器上可安装3—4个接物镜，一般是三个接物镜（低倍、高倍、油镜）。
Nikon显微镜装有四个物镜。
转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
（4）载物台载物台中央有一孔，为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。
（5）推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面座标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分，在第一次检查时，可记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找到原来标本的位置。
（6）粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件，老式显微镜粗螺旋向前扭，镜头下降接近标本。
新近出产的显微镜（如Nikon显微镜）镜检时，右手向前扭载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本脱离物镜。