细菌固定方法
革兰氏染色技术关键操作步骤
革兰氏染色技术关键操作步骤革兰氏染色技术（Gram staining）是微生物学中常用的染色方法，利用这种方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
它是由丹麦细菌学家Christian Gram于1884年发明的，被广泛应用于细菌的鉴定和分类。
革兰氏染色技术的关键操作步骤包括以下几个方面：一、准备细菌培养物在进行革兰氏染色之前，首先需要准备细菌培养物。
通常使用处于对数生长期的细菌培养物，用无菌技术从培养物中取一小滴液体，均匀涂抹在玻璃片上，制备细菌涂片。
二、固定细菌涂片细菌涂片需要进行固定，以保持细菌的形态特征。
常用的固定剂是甲醇或乙醇，将涂片逐渐浸入固定剂中，浸泡数分钟至数十分钟，然后取出晾干。
三、染色1. 注碘液处理在固定的细菌涂片上滴加碘液，覆盖整个涂片。
碘液可以使细菌细胞内的格拉氏阳性菌染成紫色。
2. 酒精洗涤用酒精溶液冲洗细菌涂片，直至涂片上的紫色不再出现，一般持续几秒至十几秒钟。
这一步是关键的洗涤步骤，通过酒精的洗涤，可以去除革兰氏阴性菌的多余染色。
3. 闪碱洗涤用闪碱洗涤涂片，一般可以持续几秒至十几秒钟。
闪碱的作用是去除细菌涂片上的酒精和碘溶液，同时使革兰氏阳性菌继续保持紫色。
4. 洗涤与干燥最后用清水冲洗细菌涂片，使其干燥。
四、观察与解读完成染色步骤后，可以使用显微镜观察细菌涂片。
革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色。
观察细菌的形态、大小、排列方式等特征，进一步判断和鉴定细菌。
总结与回顾：革兰氏染色技术是微生物学中常用的染色方法，它可以通过染色结果将细菌分为两大类：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏染色的关键操作步骤包括准备细菌培养物、固定细菌涂片、染色、观察与解读。
其中，注碘液处理、酒精洗涤和闪碱洗涤是整个染色过程中的核心步骤，通过这些步骤的操作，可以使革兰氏阳性菌保持紫色，革兰氏阴性菌去除多余染色。
对于细菌的鉴定和分类来说，革兰氏染色技术是一个简单、快速且有效的方法。
培养观察细菌的简易方法
培养观察细菌的简易方法一、牙垢中的细菌用消毒牙签，在自己牙齿缝里挑下一些碎屑，放在洁净载玻片上的水滴中，调匀，制成涂片。
待涂片干燥后，在酒精灯火焰上徐徐来回掠过3～4次，细菌外面的一些胶质粘着在载玻片上，使细菌固定、稍冷，加一滴亚甲基蓝溶液，染色1～2分钟后，用清水冲洗，然后盖上盖玻片。
置显微镜下，先用低倍镜观察，再换高倍镜，可观察到杆菌、弧菌、球菌等。
若使用油镜观察，效果更清楚明显。
二、粪池里的细菌在粪池用吸管吸取一滴沤过的粪混合液上层液体，滴在洁净的载玻片上，盖上盖玻片。
置显微镜下观察，先用低倍镜，后用高倍镜。
可见到活的螺旋菌及杆菌。
注意在观察时光线应暗些，效果好。
三、酸莱、酸奶中的细菌取酸菜液上部的白色薄膜或酸奶澄清液，制成临时装片，放在高倍镜下观察，可看到乳酸杆菌。
四、根瘤菌的观察取豆科植物[大豆、蚕豆、花生]的根瘤用刀片切开，用针挑取一小块内容物，放在载玻片上的水滴中，制成涂片，晾干后，用酒精灯火焰烘烤固定，然后滴一滴亚甲基蓝溶液，染色2～3分钟，清水冲洗，盖上盖玻片，吸干后，用500倍高倍镜观察，可见到短杆状根瘤菌。
五、枯草杆菌的培养和观察把25克新鲜干草切成小段，放在盛200毫升清水烧杯中，加热煮沸15分钟，待溶液呈暗褐色时，倒入烧瓶，放在黑暗、20～30℃的温暖环境中。
2～3天后，液体混浊，表面形成薄膜。
用吸管吸取浮在上层的液体，制成临时涂片，放在高倍镜下观察，可看到连成线的枯草杆菌。
若将培养液放在低温处1～2天，再取出制成临时涂片，用600倍或更高倍数的显微镜观察还能看到枯草杆菌的芽孢。
微生物学实验细菌细胞的生化反应实验一、实验目的了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法。
二、实验原理各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。
糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。
细菌制作标本的方法
细菌制作标本的方法
哇塞，细菌制作标本，这可是个很有意思的事情呢！
细菌制作标本，其实并不复杂啦。
首先呢，要准备好所需的材料和工具，比如干净的载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯等等。
然后就开始操作啦！用接种环挑取适量的细菌培养物，均匀地涂抹在载玻片上，动作要轻柔哦，可别把细菌都弄跑啦！接着呢，把载玻片放在酒精灯火焰上快速通过几次进行固定，这一步很关键呢，可不能马虎呀！之后就可以进行染色啦，根据需要选择合适的染色剂，让细菌更好地显现出来。
最后把盖玻片轻轻盖上，一个细菌标本就大致完成啦！在这个过程中，要注意保持操作环境的清洁，避免其他细菌的污染，不然就前功尽弃啦！还有哦，使用酒精灯的时候一定要小心，别烫到自己呀！
那在这个过程中安全性和稳定性咋样呢？嘿嘿，只要严格按照操作步骤来，一般是不会有啥大问题的啦。
当然啦，在操作的时候要做好防护措施，比如戴手套、口罩之类的，毕竟细菌这玩意儿还是有点小危险的嘛。
而且，整个过程都要稳稳当当的，不能毛毛躁躁的，这样才能保证标本制作的质量呀。
细菌制作标本的应用场景那可多啦！可以用于教学呀，让学生们更直观地了解细菌的形态和结构。
还可以用于科研呢，帮助科学家们研究细菌的特性和功能。
它的优势也很明显呀，成本不高，操作也相对简单，而且能够很好地保存细菌的特征呢。
我就知道一个实际案例哦，有个学校的生物老师，通过制作细菌标本，让学生们对细菌有了更深刻的认识，学生们都觉得好有趣呀，学习生物的兴趣也大大提高了呢！这不就是很好的实际应用效果嘛。
细菌制作标本真的是个很有意义的事情呀，它能让我们更好地了解这些小小的生物呢！。
激光共聚焦荧光显微镜细菌染色方法
激光共聚焦荧光显微镜细菌染色方法
激光共聚焦荧光显微镜细菌染色方法包括以下步骤：
1.细胞固定：将细菌细胞固定在载玻片上，常用的固定剂包括甲醇、乙醇等。
2.细胞染色：选择适当的荧光染料对细菌细胞进行染色，常用的荧光染料包括DAPI、SYTO9等。
3.细胞膜通透性处理：对于革兰氏阴性细菌，可以使用LPS染色液对细胞膜进行染色；对于革兰氏阳性细菌，可以使用吖啶橙染色液对细胞膜进行染色。
4.激光扫描共聚焦显微镜观察：将染色的细菌细胞置于激光扫描共聚焦显微镜下，调整焦距和扫描速度，观察细菌的形态和荧光标记情况。
需要注意的是，不同的细菌和荧光染料可能需要不同的染色方法和条件，因此在进行激光共聚焦荧光显微镜细菌染色时，需要根据具体情况进行优化和调整。
固定化光合细菌研究与应用
收稿日期:2006-06-24作者简介:朱铁群,1957年生,男,汉族,副教授,硕士,主要从事微生物与水污染防治的教学与研究。
固定化光合细菌研究与应用朱铁群,雷庆铎,李卫忠,孙 蕾(华北水利水电学院,河南郑州 450011)摘要:介绍了光合细菌的种类和基本特性,总结了固定光合细菌的材料、方法和固定化光合细菌的活性,以及在养殖水净化、有机废水处理和生物制氢等方面的应用性研究成果。
并基于固定化技术可以提高光合细菌的活性和单位体积生物量、在适当条件下固定化光合细菌能够保持优势生长、固定化光合细菌法工艺条件的可控性及其应用效果,揭示了其技术应用的可行性。
关键词:光合细菌;固定化;应用中图分类号:S917.1 文献标识码:A 文章编号:1003-1278(2006)06-0004-04 光合细菌泛指可以利用光能作为能量来源的原核生物,包括绿硫细菌、绿色非硫细菌、紫硫细菌、紫色非硫细菌和蓝细菌,其中紫色非硫细菌是应用于水产养殖、有机废水处理和利用有机废水生物制氢的主要类群,所以光合细菌有时也特指紫色非硫细菌。
依据《伯杰氏系统细菌学手册》(第2版),紫色非硫细菌分为6个属,约30多种。
紫色非硫细菌在选择能源方面非常灵活:正常情况下,以光能有机异养型进行厌氧生长;缺少光时,大多数以化能有机异养型进行好氧生长;也有一些种类进行发酵和厌氧生长。
氧气可以抑制细菌叶绿素和类胡萝卜素生成,因此在黑暗中的好氧培养物是无色的。
紫色非硫细菌只能吸收利用小分子有机物,生长在低硫化物水平的环境,较高水平的硫化物对其有毒害作用[1]。
光合细菌在净化养殖水,处理高浓度有机废水(尤其是含硫酸盐的高浓度有机废水),以及生物制氢等方面具有其它微生物无法替代的优势[2～4]。
但是,光合细菌的菌体较小,自然沉降困难,在应用中不可避免地产生菌体流失和固液分离2个问题[5]。
为了解决这2个问题,就需要不断地培养和添加新鲜菌体,还需要进行固液分离的处理工作,由此造成处理工艺流程复杂,增加处理成本。
细菌活菌亚甲蓝染色原理
细菌活菌亚甲蓝染色原理
亚甲蓝染色法是一种常用的细菌染色方法，它可以使细菌的染色体染上蓝色，同时可以区分细菌活菌与死菌。
该染色法的原理是利用亚甲蓝对细菌细胞壁和染色体的亲和力，使细菌染上蓝色。
在进行亚甲蓝染色前，需要先将菌液平铺于玻璃片上，晾干后进行固定。
固定的方法有多种，如火焰法、甲醛固定法等。
然后将亚甲蓝溶液滴于细菌上，静置2-3分钟后用水轻轻冲洗几遍，使多余的染料洗掉。
最后用纸巾将玻璃片吸干，即可观察到染色结果。
在染色结果中，活菌的染色体呈现出深蓝色，而死菌则呈现出浅蓝色或无色。
这是因为亚甲蓝对细胞膜和染色体的亲和力较弱，只有在活菌中才能充分渗透并染色。
而死菌细胞膜已经破裂，亚甲蓝无法渗透到细胞内部染色体上。
细菌活菌亚甲蓝染色法是一种简单、快速、易于操作的染色方法，可以用于鉴定细菌的形态、大小和排列方式，同时也是一种常用的生物学实验技术。
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细菌单染色注意事项
细菌单染色注意事项
1．涂片取两块干净的载玻片，各滴一小滴生理盐水于载玻片中央，用无菌操作，分别挑取金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌于二载玻片的水滴中，调匀并涂成薄膜。
注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。
2．干燥于室温中自然干燥。
3．固定涂片面向上，于火焰上通过2—3次，使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。
但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。
4．染色放标本于水平位置，滴加染色液于涂片薄膜上，染色时间长短随不同染色液而定。
吕氏碱性美兰染色液约染2-3分钟，石炭酸复红染色液约染1-2分钟。
5．水洗染色时间到后，用自来水冲洗，直至冲下之水无色时为止。
注意冲洗水流不宜过急，过大，水由玻片上端流下，避免直接冲在涂片处。
冲洗后，将标本晾干或用吹风机吹干，待完全干燥后才可置油镜下观察。
6．镜检按实验程序进行显微镜观察。
细菌固定金属的作用机制
细菌固定金属的作用机制1.细菌表面的附着蛋白：许多细菌表面具有一种称为附着蛋白的分子。
这些附着蛋白可以结合金属离子，将其沉积在细菌表面的一层称为生物膜的结构中。
附着蛋白通过与金属离子之间的化学键结合，将金属固定在生物膜上。
这种机制对于固定多种金属，如铁、锰、铜和锌等，都起到了重要作用。
2.生物合成金属蛋白：有些细菌能够合成一种特殊的蛋白质，称为金属螯合蛋白。
这些蛋白质具有特定的结构，可以与金属离子形成稳定的络合物。
通过与金属离子的结合，金属螯合蛋白可以将金属转运到细菌内部的特定位置，或者将金属离子沉积在细菌的表面。
这个机制被广泛应用于细菌在环境中固定稀有金属如锰、钴等。
3.良性细菌和共生关系：一些细菌与其他生物形成共生关系，其中细菌能够通过不同的代谢途径固定金属离子。
例如，一些硫酸还原细菌与根瘤菌形成共生关系，后者固定氮气为植物提供氮源，而硫酸还原细菌则可以利用植物根系产生的有机物质，固定硫离子形成硫酸盐。
4.细菌生物膜：许多细菌能够形成生物膜，这是由一层或多层复合物组成的结构。
生物膜包括细菌本身的多糖和蛋白质等生物大分子，并且常常能够吸附金属离子。
这些金属离子可以通过化学反应与生物膜中的分子结合，从而实现金属固定的效果。
生物膜对金属离子的固定能力往往较强，因此被广泛应用于环境修复和废水处理等领域。
综上所述，细菌固定金属的作用机制多种多样，涉及到细菌表面的附着蛋白、金属螯合蛋白、共生关系以及细菌生物膜等。
这些机制使得细菌能够固定金属离子，将其转化为细菌能够利用的形式或者将金属离子沉积在细菌表面。
这些固定金属的能力使得细菌在环境修复以及废水处理等领域具有重要的应用价值。
复习思考题及答案1用光学显微镜观察细菌时为什么一般都需要
第四章复习思考题及答案1. 用光学显微镜观察细菌时, 为什么一般都需要先将细菌进行染色？制作细菌染色标本片时，为什么必须先对涂在载玻片上的细菌样品进行固定？固定时应注意什么问题？答：由于细菌细胞小且无色透明, 直接用光学显微镜观察时, 菌体和背景反差很小，难以看清细菌的形态, 更不易识别某些细胞结构, 因此，一般都需要先将细菌进行染色, 借助于颜色的反衬作用, 以提高观察样品不同部位的反差, 能更清楚地进行观察和研究。
此外，某些染色法还可用于鉴别不同类群的细菌, 故细菌的染色是工业微生物学实验中重要的基本技术。
染色前必须先对涂在载玻片上的细菌样品进行固定，固定的作用一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上, 一是增加菌体对染料的亲和力。
一般常用酒精灯火焰加热固定的方法，但应注意防止细胞膨胀和收缩，尽量保持细胞原形。
2. 革兰氏染色法包括哪几个基本步骤？你认为影响革兰氏染色结果正确性的关键环节是什么？答：革兰氏染色法的基本步骤是: 先用初染剂草酸铵结晶紫进行初染, 再用媒染剂碘液媒染,然后用脱色剂乙醇处理, 最后用复染剂石炭酸复红或番红进行复染。
经此法染色后, 若细菌不被酒精脱色，能保持结晶紫与碘的复合物而呈现蓝紫色，则该菌称为革兰氏阳性细菌(G+)；反之，若细菌能被酒精脱色，而被复红或番红复染成红色, 则称之为革兰氏阴性细菌(G-)。
被普遍采用的经Hucker氏改良的革兰氏染色法, 其操作步骤为：制片→初染→媒染→脱色→复染→干燥→观察。
影响革兰氏染色结果正确性的关键环节是用脱色剂乙醇处理, 为了保证革兰氏染色结果的正确性, 必须控制乙醇脱色时间, 尽量采用规范的染色方法。
3. 放线菌、酵母菌和霉菌显微标本片的制作分别可采用哪些方法？各有什么特点？答：放线菌与细菌的单染色一样，可用石炭酸复红或吕氏美兰等染料着色后，在显微镜下观察其形态。
但为了观察放线菌在自然生长状态下的形态特征, 可应用各种培养、制片和观察方法, 其中印片法、插片法和玻璃纸法是三种常用的方法。
革兰氏染色关键步骤
革兰氏染色关键步骤革兰氏染色是一种广泛应用于微生物学研究中的染色方法，通过染色使细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类，这对于鉴定和分类细菌非常重要。
下面将详细介绍革兰氏染色的关键步骤。
一、准备工作1.1 培养基选择首先需要选择适合的培养基进行培养。
不同种类的细菌需要不同的培养基，例如大肠杆菌需要在LB培养基上生长。
1.2 细菌培养将选好的培养基加入试管中，接种适量的细菌，在恒温摇床上进行培养。
通常情况下，需要在24小时内达到足够数量的细菌。
二、制备干片2.1 净化玻璃片用肥皂水或其他清洁剂清洗玻璃片，并用去离子水冲洗干净。
然后用96%乙醇消毒玻璃片。
2.2 制备干片取出消毒好的玻璃片，在干燥无尘环境下放置至少30分钟。
然后用铅笔在玻璃片上标记编号。
三、染色步骤3.1 固定细菌将培养好的细菌取出，滴在制备好的玻璃片上。
然后用火焰将玻璃片加热，使细菌固定在玻璃片上。
3.2 染色将固定好的细菌涂上革兰紫染料，静置1分钟。
然后用去离子水冲洗干净。
3.3 醋酸洗涤将涂有革兰紫染料的细菌加入醋酸中浸泡30秒钟。
然后用去离子水冲洗干净。
3.4 染色再次涂上碘化钾溶液，静置1分钟。
然后用去离子水冲洗干净。
3.5 酒精洗涤将涂有碘化钾溶液的细菌加入95%乙醇中浸泡30秒钟，直到颜色变浅。
然后立即用去离子水冲洗干净。
3.6 洗涤和对比染色最后将细菌涂上对比染料（如苏丹红），静置1分钟。
然后用去离子水冲洗干净，并将玻璃片倒立在滤纸上晾干。
四、观察结果4.1 革兰阳性细菌革兰阳性细菌在染色后呈紫色或紫红色，因为它们的细胞壁含有大量的多糖和类脂质。
4.2 革兰阴性细菌革兰阴性细菌在染色后呈粉红色或红色，因为它们的细胞壁只含有一层较薄的多聚肽和脂质。
总结革兰氏染色是一种简单而有效的方法，用于鉴定和分类微生物。
通过以上步骤可以得到清晰可见的结果，从而为微生物学研究提供了重要依据。
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取出样品，滴加1 mL 2.5% 戊二醛固定30 min，然后依次用0.2 mol/L 无菌PBS溶液、无菌水对样品反复冲洗2～3次，最后用2 mL 无水甲醇进行脱水，通风放置直到无水甲醇挥发完毕，即得到固定细菌后的样品。
以上整个过程须在生物安全柜（超净工作台）上操作。
对处理后的样品，通过SEM（扫描电子显微镜）观察样品表面的细菌生长情况（SEM的操作参数：加速电压为5.0 kV，放大倍数在1,000～4,000x之间）。
注意：市售的戊二醛为浓度25％的水溶液，需放冰箱4℃左右遮光保存。
为了保持pH值，最好用PBS溶液稀释。
戊二醛一定毒性，操作时需做好保护措施，沾到皮肤后要马上用大量水冲洗。
如果需要更好的固定效果，可以用“梯度乙醇脱水法”代替无水甲醇，即依次用25％、50％、75％、100％的乙醇对样品依次脱水。
附图一：SEM观察到的金黄色葡萄球菌（S.aureus），放大倍数2,000
倍。
附图一：SEM观察到的大肠杆菌（E.coli），放大倍数2,200倍。
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。