4789.4沙门菌检验
饮料中沙门氏菌检测实验报告
饮料中沙门氏菌检测实验报告
自19世纪后期，沙门氏菌首次被鉴定为人类的一种病原以来，检测方法学都是建立在采取感染病人的粪便或血液作为临床病料的基础上。
此后的60年间，用于从饮料中分离沙门氏菌的方法实质上与那些用于临床病料的方法是相同的。
但由于沙门氏菌在污染饮料中含量较低以及饮料对检测的干扰给沙门氏菌的检测带来了一定的困难，同时饮料加工过程中的诸多因素的作用，使沙门氏菌受到了亚致死性的损伤或称“致伤”。
因此在选择培养基上直接培养“致伤”的沙门氏菌通常是以细菌死亡和试验失败而告终。
随着DNA和抗体技术的发展，近20年间出现了很多改进的方法，其中许多方法可以在48 h内检出沙门氏菌。
1 传统的培养方法(国标法 GB 4789.4-2010)
用于沙门氏菌分析的传统方法是食物样品分步增菌，以增加病原的可检出率，这种培养方法总体可分3个不同阶段或步骤。
第一步(预增菌)，将样品加到缓冲蛋白胨水中，进行前增菌，对未加工饮料无需前增菌。
然后接到TTB培养基或SC培养基上。
第二，是选择性增菌步骤，目前应用的主要有如下2种类型:亚硫酸铋琼脂平板、XLD 琼脂平板(或HE琼脂平板、WS琼脂平板或SS琼脂平板)。
由于没有任何一种培养基可以全面地保持所有饮料基质或各种沙门氏菌血清型，所以，较适当的做法就是使用两种培养基平行地进行试验。
第三步是分离步骤，即选择性培养物在含一种或多种抑制非沙门氏菌生长制剂的琼脂平板上划线培养，然后对平板上肉眼可见的特征性菌落
进行确认，并对该菌落分离物进行一系列生化试验和血清学检测，以作出鉴定。
传统沙门氏菌检测法全过程需时至少4,7 d，才能得出明确的诊断结果。
微生物检测系列之沙门氏菌检验技巧及详解
微生物检测系列之沙门氏菌检测过程详解及注意事项
严烨
沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌属肠道细 菌科，包括那些引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外，还 可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈无症状带菌 状态，也可表现为有临床症状的致死疾，它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生 产力。
所以将沙门氏菌检验规定为食品致病性菌种检验中的重要项目，它的检测过程一般包括 样品前增菌、选择性增菌、选择性平板分离划线、初步生化鉴定（确定可疑菌）、生化鉴定、 血清学鉴定及血清学分型（选做）共计 7 个步骤。整个步骤完全完成至少需要 7 天时间。下 面以样品检测示例对整个检测过程进行分析梳理。
食品中沙门氏菌的快速检验方法分析(观察型)
食品中沙门氏菌的快速检验方法分析（观察型）【摘要】目的：探讨食品中沙门氏菌的快速检验方法的效果。
方法：择沙门氏菌标准菌株人工污染的食品样本，参照GB 4789.4-2010标准，使用沙门氏菌快速检验板实施检测，分析总结沙门氏菌快速检验板的检测效果。
结果：沙门氏菌快速检验板对样本中浓度＜10CFU/ml的沙门氏菌也可进行检测。
沙门氏菌菌落在检验板上表现为紫红色，菌落显现明显。
阳性干扰试验显示沙门氏菌培养效果良好，数量上优势明显。
实施沙门氏菌快速检验板检测沙门氏菌敏感性为100.0%（32/32），特异性为94.4%（17/18），准确率为98.0%（49/50）。
结论：食品中实施沙门氏菌快速检验板检测过程操作简单、检验时间短，且检验效果显著。
【关键词】食品；沙门氏菌；快速检验方法沙门氏菌感染是当前食品感染的重要致病菌，也是当前引起细菌性食品中毒的重要因素。
沙门氏菌属于肠杆菌科，为革兰氏阴性肠道杆菌，其建筑类型较多，在蛋类制品、畜禽肉类制品中较为多见，人畜可共患。
当前报道显示因沙门氏菌感染引起的食物中毒事件发生率可达70%-80%，国内外对于沙门氏菌感染高度重视，不断提升食品中沙门氏菌感染的早期检验在防治食品中毒中具有重要意义[1]。
由于沙门氏菌血清型可达几千个，采取传统培养法鉴定过程操作繁复，检测时间较长，检测难度较大，实际运用受限[2]。
探索出新的快速检测技术是当前检测技术发展的主要趋势。
沙门氏菌快速检验板是当前沙门氏菌快速检验的新型方式，本研究对沙门氏菌快速检验板的检验效果进行了分析，现进行总结：1 材料与方法1.1 材料与仪器美国施都凯生化培养箱，OLYMPUS全自动生化鉴定仪，美国NUAIRE生物安全柜，山东浩中化工科技有限公司提供的BPW缓冲蛋白胨水，上海童耀生物科技有限公司提供的A-F多价血清及沙门氏菌快速检验板，美国3M沙门氏菌肉补充货、沙门氏菌显色培养基，梅里埃VITEK2阴性鉴定卡，上海远慕生物科技有限公司提供的平板计数琼脂等。
沙门氏菌检验标准操作规程
沙门氏菌检验标准操作规程1目的purpose规范888物料、产品的沙门氏菌检验操作，确保检验结果的可靠性。
2范围scope适用于888物料、产品的沙门氏菌检验工作。
3责任responsibility微生物检验员严格执行本规程，品质部负责人监督执行。
4程序procedure4.1定义和原理沙门氏菌广为存有于动物的肠道和内脏，以及被粪便污染的水和土壤中，就是细菌性食物中毒的主要病因。
本方法利用沙门氏菌呈圆形辛酸酯酶阳性，而氧化酶和脂肪酶均呈圆形阴性的特性，对物料、产品展开沙门氏菌检验。
4.2材料和设备4.2.1紫外灯：波长366nm，功率不小于6w。
4.2.2放大镜：3至4倍。
4.2.3毛细滴管。
4.2.4lx-b35l压力蒸汽杀菌锅。
4.2.5无菌的培养皿。
4.2.6无菌的注射环路。
4.3培养基和试剂4.3.1scdlp液体培养基：按《化妆品卫生规范》（2021版）或使用商品培养基干粉配制。
4.3.2四硫磺酸钠煌蓝（ttb）减菌液：按gb4789.4—2021第三章a.5酿制或采用商品试剂。
4.3.3ss琼脂培养基（含1%蔗糖）：牛肉浸膏(或牛肉粉)5.0g，蛋白胨5.0g，乳糖10.0g，蔗糖10.0g，胆盐no.38.5g，柠檬酸钠8.5g，硫代硫酸钠1.0g，柠檬酸铁1.0g，煌绿1.0g，中性红0.025g，琼脂13.5g，蒸馏水1000ml。
4.3.4he琼脂培养基：按gb4789.4—2021第三章a.5或采用商品培养基干粉酿制。
4.3.5玉米油维多利亚蓝琼脂培养基：灭菌后的基础培养基冷却至50℃左右，边摇边加入玉米油乳化液。
倾注平皿，制成平板。
基础培养基及玉米油乳化液配方如下：a）基础培养基：蛋白胨5g，酵母浸粉3g，氯化钠5g，琼脂13g，水900ml，ph7.8-8.0。
将各成分重新加入水中，冷却熔化。
调节ph7.8-8.0，116℃15min高压杀菌。
b）玉米油乳化液：玉米油100ml，0.1%维多利亚蓝水溶液100ml，0.5%琼脂溶液80ml，吐温801ml。
标准菌株-GB 4789 食品安全国家标准 食品微生物学检验 标准菌株清单
小肠结肠炎耶尔森氏菌Yersinia enterocolitica
CICC21669
GB 4789.9-2014空肠弯曲菌检验
空肠弯曲菌Campylobacter jejuni
CICC22936
GB 4789.10-2016
金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus
CICC2490
哈茨木霉Trichoderma harzianum
CICC41290
纸葡萄穗霉Stachybotrys chartarum
CICC2488
紫色红曲菌Monascus purpureus
CICC40269
GB/T 4789.27-2008
鲜乳中抗生素残留检验
嗜热链球菌Streptococcus thermophilus
CICC10385
大肠埃希氏菌DH5αEscherichia coli
（含肉毒梭菌typeE基因）
CICC10780
大肠埃希氏菌DH5αEscherichia coli
（含肉毒梭菌typeA基因）
CICC10783
大肠埃希氏菌DH5αEscherichia coli
（含肉毒梭菌typeB基因）
CICC10784
大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验
出血性大肠埃希氏菌O157:H7
Escherichia coliEHEC O157:H 7
CICC21530
GB 4789.38-2012大肠埃希氏菌计数
大肠埃希氏菌Escherichia coli
CICC10305
（=ATCC 25922）
(ATCC 25922)
培养基及试剂验证原始记录-沙门
培养基及试剂的验证原始记录
检测日期：至
检测项目：沙门菌培养基及试剂验证
检测方法名称及依据：GB 4789.4—2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》
仪器设备：恒温培养箱（编号JYSJY081）生物安全柜（编号JYSJY075）精密PH试纸仪器设备均已检定合格培养基：营养肉汤SC XLD TSI
试剂：蛋白胨水氰化钾赖氨酸硫化氢尿素微生物生化鉴定条诊断血清
一：样品处理：用接种针挑取一粒德尔卑沙门氏菌磁珠于营养肉汤中培养h，摇动培养过的样品混合物，分别移取1ml转种于5mlSC内培养h，然后按下表步骤操作。
二操作记录：
三结果报告：
检验者：复核者：。
沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验(三)
沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验（三）5.4.1 沙门氏菌分型鉴定按GB4789.4举行。
假如判定为时，应得出完整的血清学分型鉴定的结果。
5.4.2 致泻大肠埃希氏菌鉴定 5.4.2.1 按GB4789.6和GB4789.36举行。
分别的菌株应当同时被同样的几个噬菌体裂解后，用分型噬菌体实验，这些菌株应当具有相同的裂解模式，同时测定IRTD噬菌体的裂解状况。
5.4.2.2 ，应有肠毒素实验的证明。
5.4.2.3 侵袭性大肠埃希氏菌，典型的生化特性为：实验阴性、无动力、产气或不产气(O124血清型亦可以为有动力、不产气)，靛基质实验阳性。
可进一步做豚鼠角膜实验，结果应当为阳性，质粒电泳应证实具有120～140MdaI大质粒，PCR实验证实具有ipaC或ipaH基因。
5.4.2.4 产志贺毒素大肠埃希氏菌O157:H7,典型的生化特性为：乳糖、蔗糖产酸，产酸并多数产气，阴性，靛基质阳性，山梨醇迟缓发酵。
PCR实验证实具有产志贺毒素基因strl,stx2和溶血毒素基因hly。
IRTD的E-2噬菌体裂解实验，能被IRTD的E-2噬菌体裂解(裂解程度包括从CL到少数几个噬斑)。
对于产志贺毒素和溶血毒素其他血清型的大肠埃希氏菌，根据5.4.2.3的程序举行鉴定。
5.4.2.5 肠道致病性大肠埃希氏菌具有大肠埃希氏菌的典型生化特性，eαe基因(黏附屏蔽基因)的PCR实验为阳性。
产志贺毒素大肠埃希氏菌eαe实验也可为阳性。
EAF(黏附因子质粒基因)或物(菌毛捆绑形成基因)的PCR实验可进一步证明。
5.4.3 志贺氏菌分型鉴定 5.4.3.1 挑取上的培养物，按噬菌体裂解模式，选用相应的志贺氏菌分型因子血清，做玻片凝集实验。
血清学分型鉴定结果见表3。
表3 噬菌体实验的结果和志贺氏菌血清学分型鉴定的结果 5.4.3.2 如按噬菌体裂解模式结果为福氏志贺氏菌1～5型，先用福氏多价血清做凝集实验。
沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验(二)
沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验（二）5.1 前增菌、增菌和分别 5.1.1 的前增菌、增菌和分别按GB4789.4举行。
在食品格业从业人员的肠道沙门氏菌带菌检验时，采集的标本应增菌，不应前增菌。
食物中毒标本不应前增菌，所采集的标本同时做增菌和不增菌步骤。
5.1.2 志贺氏菌的增菌和分别按GB4789.5举行。
没有厌氧培养条件的试验室可以采纳BCT增菌液。
食物中毒患者的粪便标本同时做增菌和不增菌步骤。
5.1.3 的增菌和分别按GB4789.6和GB4789.36举行。
食物中毒标本同时做增菌和不增菌步骤。
5.2 噬菌体实验 5.2.1 培养基的预备养分琼脂平板(含琼脂1%～1.5%,为防止变形杆菌的扩散生长，可按0.02%量加入)，养分琼脂加热融化后，加入每个9cm平皿中20mL～25mL,放在水平台面上待其凝固。
翻转平板，在36℃±1℃培养箱内半开皿倒置约1h,或50℃±1℃培养箱内半开皿倒置约30min,以烘干培养基表面水分。
5.2.2 实验菌液的预备5.2.2.1 自挑选性琼脂平板上分离挑取2个以上典型或可疑菌落，检验时，挑取乳糖阴性产H2S或不产H2S的菌落，和乳糖阳性产H2S的菌落。
检验大肠埃希氏菌时挑取乳糖阳性或乳糖阴性的菌落。
检验志贺氏菌时挑取典型或可疑菌落分离接种TSL半固体和养分琼脂斜面各一管，置36℃±1℃培养20h～24h后选取三糖铁底层产酸、斜面产碱，不产H2S,不产气无动力的菌落。
下述两种办法可供制备实验菌液时选用。
5.2.2.2 办法一：将待检菌落接种于养分肉汤管内，于36℃±1℃培养14h～24h。
挑取此肉汤培养物1满环(约5uL),稀释于盛有1mL～2mL的养分肉汤管内，使成为1:200～1:400稀释菌液，含菌量约为1×106CFU∕mL。
5.2.2.3 办法二：用接种针在鉴别平板上挑取可疑菌落，稀释于盛有1mL～2mL养分肉汤管内，含菌量约为1×106CFU/mL。
沙门菌的检验技术
验
BS XLD(或HE、显色培养基)
程
36 ℃±1 ℃，40h~48h
36 ℃±1 ℃，18h~24h
序
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA，靛基质，尿素（pH7.2），KCN
生化鉴定 试剂盒
或全自动 微生物
生化鉴定 系统+
A1 A2
甘露醇+、山梨醇+
反应
A3
结果 与左侧
描述
不符
ONPG-
沙门氏菌，血清学试验
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沙门氏菌分离培养基
l 亚硫酸铋琼脂（BS）：含有煌绿、亚硫酸铋 能抑制大肠埃希氏菌、变形杆菌和革兰氏阳 性菌的生长，但对伤寒、副伤寒等沙门氏菌 的生长无影响。伤寒杆菌及其他沙门氏菌能 利用葡萄糖将亚硫酸铋还原成硫酸铋，形成 黑色菌落周围绕有黑色和棕色的环，对光观 察可见有金属光泽。该培养基制备过程不宜 过分加热，以免降低其选择性，应在临用时 配制，超过48 h不宜使用。
基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
2、选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间， 样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增 殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。
3、选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基，抑制 非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的 识别。
4、生物化学筛选——排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门 氏菌培养物菌属的初步鉴定。
5、血清学技术——提供了培养物菌种的鉴定。
检样
沙
25g(ml)样品+225mlBPW
门
36℃±1 ℃，8h-18h
一起细菌性食物中毒的检验报告
一起细菌性食物中毒的检验报告目的对一起食物中毒进行实验室检验。
方法按照中华人民共和国卫生部颁布的《食品卫生微生物学检验方法》GB/T4789.4～2008进行。
结果在呕吐物中检出一株甲型副伤寒沙门氏菌。
结论本次食物中毒是由甲型副伤寒沙门氏菌引起的。
标签：沙门氏菌食物中毒实验室检验The Inspection Report on Bacterial Food PoisoningLI HongAnshan city TieXiOu hygiene epidemic station,liaoning 114012,China【Abstract】Objectivewith food poisoning lab tests.Methodsaccording to the health of the People’s Republic of China promulgated《the food hygiene inspection methods of microbiology》GB/T4789.4～2008.Resultsin the vomitus in an alpha paratyphoid salmonella.Conclusionthis is food poisoning caused by influenza paratyphoid salmonella.【Key Words】salmonella;food poisoning;lab tests2010年8月2日17点,7人在一酒店进餐,晚上11点李某首先出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻症状,由于自觉症状轻微,没有及时就医。
3日早上一同吃饭的5个人陆续出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻、发热、头疼、全身乏力为主要症状的病例,发病率为71.4%。
经实验室增菌培养,分离鉴定检出一株甲型副伤寒沙门氏菌。
1材料与方法1.1培养基肠道增菌肉汤,氯化镁孔雀绿增菌液(MM),亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC),GN 增菌液,亚硫酸铋琼脂(BS),SS琼脂,中国检验检疫科学研究所,北京陆桥技术有限责任公司生产,均在有效期内使用。