MMFSCNJ出口食品中沙门氏菌辛酯酶荧光检验方法
食品中沙门氏菌快速检测方法的研究
食品中沙门氏菌快速检测方法的研究作者：刘宇来源：《科学与财富》2016年第23期摘要：沙门氏菌（Salmonella）是一种常见的病原菌，作为温血和冷血动物的肠道菌，分布范围十分广泛，它经污染食品传播，能在人类肠道中迅速繁殖，侵入肠粘膜组织，产生肠毒素，导致发热、腹痛、腹泻等全身症状，严重者出现败血症，由沙门氏菌引起的食物中毒一直占世界食物中毒病例前列。
近年来，沙门氏菌食物中毒和动物感染沙门氏菌十分严重。
由肠炎沙门氏菌引起人的急性胃肠炎在世界各国有增加的趋势，已成为国际公共卫生的一个重要课题。
本文主要针对食品中沙门氏菌快速检测方法进行分析和讨论。
关键词：食品；沙门氏菌；快速检测；检测方法近些年来，为了控制和预防某些细菌感染，在饲料添加剂及治疗中常盲目使用一些抗菌药物，导致产生许多耐药菌株，像沙门氏菌就属于此类细菌。
一般情况下，在肉类食品、奶制品以及蛋制品中出现沙门氏菌污染的情况较多，而这些均是人们日常生活中食用较多的食品种类，因此，必须要加大对食品致病菌安全检测工作的力度，寻找更加敏感和准确的沙门氏菌检测剂。
1 食品中沙门氏菌快速检测重要性沙门氏菌是肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于环境或寄居于人和动物肠道内，绝大多数对人和动物具有致病性，对营养要求不高，耐胆盐，对外界的抵抗力较强。
感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品，可使人发生食物中毒。
带菌者，或是感染沙门菌人的粪便会在一定程度上污染食物，导致人体食物中毒。
沙门菌极易导致人体发生细菌性食物中毒，主要表现有败血症、肠胃炎以及肠伤寒等，而且具有一定的传染性，可以通过消化道致病。
沙门菌就从数量上来说是世界上比较常见的细菌种类之一，在我国，食物中毒问题中首要的也是由于沙门菌而产生的中毒问题，人类受到细菌感染的主要的来源也是受到沙门菌污染的相关食品，如：肉和奶等，因此食品、医疗卫生以及商检等部门对沙门菌的检测是相当严格。
沙门氏菌中毒常常是大面积的，致病速度快，给人类健康带来极大威胁。
MMFSCNJ出口酱油检验规程
M M F S C N J出口酱油检验规程The pony was revised in January 2021MM_FS_CNJ_0381出口酱油检验规程MM_FS_CNJ_0381出口酱油检验规程1.适用范围本方法适用于出口酱油的检验。
对外贸易合同、信用证及法律、法规有规定要求的，按规定检验，无上述规定的按本标准检验。
2.定义检验批：在同一时间，按同一工艺生产，规格相同、品质均匀、标志一致并具有同样质量证明书的产品构成的批。
原始样品：从一个检验批中单个容器内所取的产品。
试验样品：根据检验工作的需要将原始样品混匀后制得的供检测用样品。
恶性杂质：蚊、蝇、虫、玻璃碎屑、橡胶、塑料、漆片、头发、指甲、金属物及其他污秽物。
安全卫生项目：微生物、重金属、恶性杂质等。
3.试样的抽取.抽样原则按检验批在不同部位抽取代表性样品。
.抽样方法100件以下抽取6件，100件以上按全批总数量平方根二分之一计算抽样数量。
n ＝√—N ／2 (1)式中：n ——抽样数量（取整数，小数部分向上修约）；N ——全批总数量。
瓶装酱油每箱抽样1～2瓶，每批抽样不得少于6瓶（每瓶以500mL 计，下同），其中4瓶用于检验，留样2瓶备用。
散装酱油每批采集混合样不少于3000mL （或3kg ），分装于三个磨口瓶中（微生物抽样容器及用具均需灭菌）。
.标注抽样后必须立即在样品上标注品名、批号、生产日期、生产单位、抽样人员及抽样日期。
4.过程简述.感官检验检验场所条件应有符合卫生要求的感官检验室，室内应光线充足，通风良好，清洁、卫生、无异味；检验台应光滑平整，易于清洗、消毒、耐腐蚀，保持清洁卫生；比色管：50mL；白色瓷皿；玻璃棒。
色泽体态检验分别吸取10～15mL样液置于50mL比色管中，摇匀后在白色背景上观察，液体应透明、澄清、无沉淀、无霉花浮膜。
另取定量样品15～20mL置于预先洗净烘干的白色瓷皿中，对光观察其色泽应鲜艳，并看其起泡、消泡、挂壁等情况，检查应无杂质。
MMFSCNJ出口禽肉中拉沙里菌素残留量检验方法
M M F S C N J出口禽肉中拉沙里菌素残留量检验方法集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]MM_FS_CNJ_0077出口禽肉拉沙里菌素残留量液相色谱法MM_FS_CNJ_0077出口禽肉中拉沙里菌素残留量检验方法1.适用范围本方法适用于出口鸡肉中拉沙里菌素残留量的检验。
2.原理概要样品中的拉沙里菌素经用乙腈提取，提取液用正己烷洗涤后，用配有荧光检测器的液相色谱仪测定，绘制标准曲线法定量。
3.主要试剂和仪器.主要试剂乙腈、正己烷、四氢呋喃、甲醇：重蒸馏；浓氨水；氮气；流动相A液：取四氢呋喃150mL、甲醇30mL、浓氨水10mL、正己烷810mL，在分液漏斗中充分混合，静置分层约1h，弃去下层。
B液：取四氢呋喃150mL、甲醇30mL、正己烷820mL，在量筒中充分混合。
取3份A液加1份B液，在棕色瓶中充分混合，作为流动相；流动相饱和的水：将100mL流动相与50mL水于250mL分液漏斗中混合，用力振摇40s，静置分层，移出下层待用。
现用现配；拉沙里菌素钠标准品：纯度≥99%；拉沙里菌素标准溶液：准确称取拉沙里菌素，用少量四氢呋喃溶解，并用四氢呋喃稀释，配成浓度为mL的标准储备液。
用流动相分别稀释成20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL的拉沙里菌素标准工作液。
.仪器液相色谱仪并配有荧光检测器；自动进样器或50μL微量进样器；全玻璃蒸馏装置；均质器：500mL均质杯；离心机；离心管：30mL，50mL，具塞，带刻度；250mL。
4.试样的抽取与制备.检验批以不超过2500件为一检验批。
同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。
.抽样数量批量，件最低抽样数，件1～25 126～100 5101～250 10251～500 15501～1000 171001～2500 20.抽样方法按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。
荧光pcr鉴定沙门氏菌流程
荧光pcr鉴定沙门氏菌流程今天咱们来了解一下荧光pcr鉴定沙门氏菌的流程呀。
沙门氏菌呢，就像一个小坏蛋，它要是跑到我们吃的东西里，会让我们生病的。
那怎么找到它呢？就可以用荧光pcr这个厉害的方法。
先得把要检测的东西准备好，比如说一块鸡肉。
这块鸡肉可能是从超市买回来的，我们想知道它有没有沙门氏菌。
把鸡肉弄成小小的一块一块的，就像我们吃鸡肉的时候把它撕成小条那样。
然后呢，要从这些鸡肉小块里把可能存在的细菌的东西提取出来。
这就好像是从沙子里把小宝石找出来一样。
这些细菌的东西是它们身体里很特别的部分，有了这个部分，我们才能进行后面的检测。
接下来呀，就到了荧光pcr这个神奇的步骤啦。
想象一下，我们有一个特别的小盒子，这个小盒子就像是一个小小的魔法屋。
把之前提取出来的细菌的东西放到这个小盒子里。
小盒子里有好多小小的东西，它们就像一个个小侦探。
这些小侦探会去找沙门氏菌的特别标记。
如果有沙门氏菌，小侦探们就会发出信号，就像小萤火虫在夜里发光一样。
我给你们讲个小故事吧。
有个小朋友吃了一个有点坏的鸡蛋，然后就肚子疼了。
医生怀疑是沙门氏菌在捣乱。
于是就用这个荧光pcr的方法来检测。
医生把鸡蛋的一点点东西按照这个流程来做。
当看到有荧光信号的时候，就知道真的是沙门氏菌在捣鬼了。
在这个过程里呀，那些小侦探们是很认真的。
它们如果发现了沙门氏菌的特别标记，就会越来越多的小侦探发出荧光，这样我们就能很清楚地知道有沙门氏菌了。
如果没有荧光，那就说明这个鸡肉或者其他检测的东西里没有沙门氏菌这个小坏蛋。
最后呢，我们根据有没有荧光就可以判断有没有沙门氏菌啦。
这样我们就能知道食物是不是安全的，就像给食物做了一个很严格的安全检查呢。
这样是不是就很容易理解荧光pcr鉴定沙门氏菌的流程啦？。
MMFSCNJ出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法
MM_FS_CNJ_03出口食品单核细胞增生李斯特氏菌斜射光镜MM_FS_CNJ_0344 出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法1. 适用范围本方法适用于牛乳、乳制品、水产品、肉及肉制品食品。
其他食品可参照采用。
2. 原理概要单核细胞增生李斯特氏菌是一种能引起人畜共患疾病的致病菌。
在胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TS2 YE、选择性培养基（MMA等平板上用45°角斜射光照射可观察到蓝色菌落；水解七叶苷并与柠檬酸铁铵反应产生黑色菌落。
3. 主要试剂和仪器. 主要试剂（包括培养基）胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤（TSB-YE （见B1）；胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TSA- YE （见B2）; 增菌培养液（EB （见B3 ；选择性培养基（MMA （见B4 ；牛津琼脂（见B5 ；改良缓冲蛋白胨水（MBP （见B6 ；7％羊血琼脂（见B7 ；糖发酵培养基（见B8 ；半固体琼脂；尿素琼脂；硝酸盐培养基；MR- VP培养基；三糖铁琼脂（TSI 。
胰酪蛋白胨（或胰蛋白胨；盐酸吖啶黄素；萘啶酮酸；复达新；甘氨酸酐；氯化锂；苯乙醇；放线菌酮；多粘菌素E；头孢双硫唑甲氧；磷霉素；柠檬酸铁铵；七叶苷；酚红；D—葡萄糖；D—甘露醇；哥伦比亚琼脂；酵母浸膏；牛肉浸膏。
. 仪器微生物学实验室常用设备；解剖镜；斜射灯；平面镜。
4. 过程简述. 样品如为冷冻食品，应于2〜5C解冻，且不超过18h,若不能及时检验，应置于 -15C保存。
非冷冻的易腐样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于4C 冰箱保存，在24h 之内检验。
. 前增菌和增菌前增菌：巴氏消毒乳、乳制品、冷冻水产品，冻肉及其它加工食品均应进行前增菌。
无菌操作称取25g样品，加入装有225mL改良缓冲蛋白胨水（MBP的均质杯内，高速均质1〜2min，制成1 : 10样品匀液，转入500ml T口瓶内；液体食品可用吸管吸取25mL样品，加入装有225mL改良缓冲蛋白胨水（MBP的广口内，充分振摇制成1 : 10样品匀液，于30C培养24、48h。
MMFSCNJ出口植物油色泽的检验方法
MM_FS_CNJ_0288出口植物油色泽罗维朋法重铬酸钾法MM_FS_CNJ_0288出口植物油色泽的检验方法1.适用范围本方法适用于出口植物油色泽的测定。
2.罗维朋法2.1.原理概要采用标准颜色玻片与油样的色泽进行比较，以所需各标准颜色玻片上标明数字的和表示。
2.2.仪器罗维朋比色计。
2.3.过程简述2.3.1.试验样品的制备按照ZB X 04007－86《出口植物油取样方法》取得平均样品，混匀后分取适量，在50℃下用干燥快速滤纸过滤，滤液澄清后供检验用。
2.3.2.测定将澄清透明的试样注入适当厚度的罗维朋比色槽，放入比色计内进行比色。
首先将黄色玻片固定，再配入红色玻片；直至玻片与试样色泽相同为止。
读取黄、红玻片数字，即为罗维朋色价。
同时记录比色槽的厚度。
如必须配入蓝色玻片时，应由最小值起依次加入，直至与试样色泽相同为止，读取黄、红、蓝玻片数字，并记录比色槽的厚度。
3.重铬酸钾法3.1.原理概要油样与不同浓度重铬酸钾-硫酸溶液比色，以每100ml硫酸（比重1.84）中重铬酸钾的克数表示色价。
3.2.仪器纳氏比色管；容量瓶：250ml；烧杯：50ml；分析天平。
3.3.试剂重铬酸钾：分析纯。
硫酸：比重1.84，不含还原性物质。
3.4.色泽标准溶液的配制3.4.1.重铬酸钾标准溶液：称取在150℃烘至恒重的重铬酸钾2.5000g，准确至0.0002g，置于50ml小烧杯中，加少量硫酸溶解，移入250ml容量瓶中，再加硫酸稀释至刻度，摇匀。
3.4.2.色泽标准溶液：按下表所列的比例，取上述配成的重铬酸钾标准溶液和硫酸相混和，配制各号色泽标准。
3.5.过程简述3.5.1.试验样品的制备同1.2.1。
3.5.2.测定将各号色泽标准溶液和澄清的试样分盛于纳氏比色管中，其液层与试样层高度应一致，约25mm，肉眼比色，与试样色泽相同的色泽标准溶液浓度，即为试样的色价。
4.来源：ZB X 04010－86。
食品中沙门氏菌的快速检验方法
86·FOOD INDUSTRY分析 检测 陈文财 惠州市食品药品检验所食品中沙门氏菌的快速检验方法泛用于遗传病诊断和微生物检验中。
（我个人认为沙门不会用）荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检验法基于沙门氏菌ｆｉｍＹ基因序列，进行引物和探针的设计，利用基因重组技术对检测的定量标准品进行构建，可借助荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ法对沙门氏菌进行检测。
该方法操作简单、检验快速、适用范围广，在临床诊断、商品检验、食品卫生监管等领域均有运用。
多重ＰＣＲ快速检验法多重ＰＣＲ快速检验法基于质粒毒力基因ｓｐｖＣ、１６Ｓ ｒＲＮＡ、ｆｉｍＡ、致病基因ｉｎｖＢ序列设计引物，多重ＰＣＲ检测沙门氏菌株基因组ＤＮＡ，以此实现对沙门氏菌的快速检验。
多重ＰＣＲ快速检验法可对沙门氏菌的多种毒力因子进行鉴定，是沙门氏菌株检验和鉴定的新方法。
变性高效液相色谱检测法 变性高效液相色谱结合多重ＰＣＲ反应技术可对食品中的沙门氏菌进行快速检测。
该方法以ｆｉｍＹ基因为靶基因，选择引物可实现对多重ＰＣＲ体系的优化，由此可对沙门氏菌进行快速鉴别。
该方法的特异性、灵敏性较高，其扩增产物为２８４ｂｐ，可对沙门氏菌进行快速检验，并能进一步验证多重ＰＣＲ的特异性。
沙门氏菌是食物常见的病原菌，具有传播媒介多、途径繁复等特点，容易污染食品而危害人体健康。
另外，沙门氏菌是多种有紧密联系细菌的泛指，包括导致伤寒、胃肠及引起食物中毒的众多细菌。
文中提到的几种快速检验法与传统检验法相比，具有操作简单、特异性强、灵敏度高等特点。
但这些方法也存在各自缺陷，试纸快速检验法检验纯菌时，若目菌＞１０３ｃｆｕ／ｍｌ时，纸片菌斑密集，可导致假阴性反应的发生。
ＰＣＲ检验的特异型取决于所选扩增的靶序列，若为保守的特异片段，所选引物就会显示出特异型。
ＬＡＭＰ技术的产物复杂多样，引物设计要求较高，目标单链ＤＮＡ的分离困难，无法对扩增产物的序列进行分析；其在同一温度条件下采用多条引物扩增非特异性条带，可能会出现假阳性结果。
基于荧光PCR检验方法对食品中沙门氏菌检验的分析研究
基于荧光PCR检验方法对食品中沙门氏菌检验的分析研究作者：孔庆岩胥小荣庞婕王艳英苗育可来源：《食品安全导刊·中旬刊》2021年第09期摘要：目的：针对国家标准中沙门氏菌检验周期比较长的问题，探究利用PCR检测致病菌病源的方法。
方法：利用沙门氏菌特异性片段作为PCR扩增的靶序列，制作相应模板，进行实时荧光PCR扩增，找到最佳方案，选择30份食品采取实时荧光定量PCR检测方式进行检测，同时对同等份数食品运用传统方法的进行检测，随机分为研究组和参照组，对两组食品的食源性致病菌总检出率进行对比。
结果：利用PCR检测沙门氏菌正确率和国家标准相似，检验时效大幅缩短。
结论：利用实时荧光定量PCR技术检测食品中沙门菌，为食源性沙门菌污染的快速检验提供方法学支持。
关键词：食品安全;沙门氏菌;PCR食品安全是当今社会非常关注的话题，而食品安全多是由于食源性致病菌所致，沙门氏菌是近年来食源性致病菌最主要原因之一，所以快速有效的檢测方法有利于减少食品安全的事件的发生。
荧光PCR法检测致病菌病源，以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快和全封闭反应等优点而成为分子生物学研究中的重要工具[1-2]。
传统的食品安全国家标准规定沙门氏菌的检验需要前增菌、二次增菌、平板分离、生化鉴定及血清学分析等步骤，培养时间长，出具实验结果需要至少5 d时间。
其他如以抗原-抗体反应为基础的检测方法，如免疫酶实验、免疫扩散法、乳胶凝集实验、免疫荧光法及酶联免疫吸附试验等，使得沙门菌的检测受到一些限制[3]。
因此，快速、准确、高效的检测方法是大势所趋，对快速及时发现致病菌，控制污染起到积极作用。
目前最成熟的技术就是实时定量PCR检测致病菌病源。
1 材料与方法1.1 材料与试剂检验食品：熟肉制品、糕点和餐饮常见食品等。
沙门氏阳性菌标准菌株：乙型副伤寒沙门氏菌;非沙门菌阳性标准菌株：金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌和大肠埃希氏菌O157：H7;细菌基因组DNA提取试剂盒（TIANGEN）;旋达R1致病菌生物检测系列“沙门氏菌核酸检验试剂盒”（双螺旋基因公司）。
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MM_FS_CNJ_0348出口食品沙门氏菌（辛酯酶荧光）
MM_FS_CNJ_0348
出口食品中沙门氏菌（辛酯酶荧光）检验方法
1.适用范围
本方法适用于出口肉品，蛋品沙门氏菌的检验，其他食品可参照使用。
2.定义
MUCAP：4－methylumbelliferyl－caprylate（4－甲基伞形酮辛）的缩写。
MUCAP试剂：用4－甲基伞形酮辛酯配成的试剂的缩写。
SS琼脂：沙门氏菌和志贺氏菌琼脂培养基。
HE琼脂：Hektoen Enteric琼脂培养基。
3.主要试剂和仪器
.主要试剂（包括培养基）
培养基与试剂按SN 0170第5章，另补充以下部分：
SS琼脂培养基（含1％蔗糖）：见附录A1；
HE琼脂培养基：见附录A2；
MUCAP试剂：见附录A3；
氧化酶试纸：见附录A4；
.仪器
紫外光灯：波长366nm，功率＞6W；
放大镜：3～4X；
毛细滴管。
4.样品制备及增菌培养
参照SN 0170进行。
5.分离培养
.将增菌培养液摇匀，挑取一接种环，划线接种于SS和HE琼脂培养基各一个，于36±1℃培养24±2h。
.观察各琼脂平板上有无可疑沙门氏菌菌落。
如无可疑菌落，应再继续培养24±2h。
沙门氏菌的菌落特征见表1。
.从培养的分离培养基上选可疑沙门氏菌菌落（尽量选较大，分离较好的单个菌落），用玻璃笔做好标记并编号。
.用毛细滴管吸取MUCAP试剂，加一滴于编号的菌落上，待一个平板的被检菌全部滴加试剂后，将平板拿至366nm紫外光灯下检视。
发蓝色荧光的为MUCAP试验阳性，将阳性菌落号记录下来。
.用接种环挑取荧光反应阳性菌落，涂于氧化酶试纸上，观察涂菌点是否变蓝色。
于10min内变蓝色为氧化酶试验阳性；不变色为阴性。
7.结果计算
试验阴性的样品，报告为“未检出沙门氏菌”。
试验阳性氧化酶试验阴性的样品，按SN 0170第四章继续进行生化和血清学试验，并根据试验结果报告。
8.来源：
SN 0332－94
附录 A
培养基和试剂
（补充件）
琼脂培养基（含1％蔗糖）
牛肉浸膏胆盐煌绿
蛋白胨柠檬酸钠中性红
乳糖硫代硫酸钠琼脂
蔗糖柠檬酸铁蒸馏水1000mL
将各成分溶于水，煮沸4～5min。
最终±。
冷至55～66℃，倾注平板。
琼脂培养基
月示.蛋白胨水杨素柠檬酸铁铵
酵母浸出物混合胆盐溴麝香草酚蓝
乳糖氯化钠酸性复红
蔗糖硫代硫酸钠琼脂
蒸馏水1000mL
将各成分溶于水，煮沸4～5min。
最终±。
冷至55～60℃，倾注平板。
试剂
按生产者提供的使用说明制备工作稀释液，贮于4℃冰箱备用。
A4.氧化酶试纸
氧化酶试液：
甲液：1％α萘酚乙醇液；乙液：1％二甲基对苯二胺草酸盐水溶液。
氧化酶试纸：
将甲液与乙液等量混合。
取定性滤纸＋，浸透混合液后，于70～80℃烘箱烘干。
剪成适当大小的纸条，密封于塑料袋或瓶中，贮于4℃冰箱备用。