MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法
MM_FS_CNJ_0335出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验
MM_FS_CNJ_0335
出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法
1.适用范围
本方法适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验。其他食品可参照使用。
2.样品制备及增菌培养
.肉类
如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或在2～5℃不超过18h解冻。若不能及时检验，应置于－15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4℃冰箱保存。
以无菌操作，称取剪碎后的瘦肉样品25g，置于灭菌均质杯内，加入25mL缓冲胨水增菌液，以8000～10000r／min均质1min，移入盛有200mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液，调pH至±，于37℃水浴培养4h（以增菌液达到37℃时算起），进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内，摇匀，于42±1℃培养20±2h，进行选择性增菌。必要时，同时另称取25g剪碎的瘦肉样品，加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液，同样进行均质。其后，移入盛有200ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。
.蛋品
冰蛋品（冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄）
.按解冻和保存样品。
.以无菌操作称取样品25g，置于盛有225mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的500mL广口瓶内混合均匀，如pH低于，用灭菌1mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。
干蛋品（鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉）
以无菌操作将样品碾碎后，称取25g加入盛有225mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内（瓶内事先盛有直径3～4mm的玻璃珠约50粒），振荡10min，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养20～24h，进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的250mL 玻璃瓶内，混匀，于42±1℃培养20±2h，进行选择性增菌。
3.分离培养
.将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环分别挑取1环，分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个（必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用），于37℃培养24±2h。
.观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落，如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。
沙门氏菌属的菌落特征见表1。
表1.沙门氏菌属菌落特征
.筛选试验
每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落，分别用接种针接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶琼脂一管，接种后无须灭菌接种针，直接再接种三糖铁琼脂一管于37℃培养24±2h。
挑取菌落后的琼脂平板，应置于4～8℃至少保留24h，以备必要时复查。
按表2或表3结果进行判断。
注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸，——阴性反应；＋／——阳性或阴性反应。
注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸；－阴性反应；＋／－－阳性或阴性反应。.生化试验
将符合表2或表3可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物，按表4进行生化试验（表中赖氨酸脱羧酶试验或尿素酶试验的结果见结果，不再另做）。
注：＋－阳性反应；－－阴性反应；d－反应不定。
所有生化试验管均于37℃培养24±2h。
生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按进行。
.血清学试验
检查培养物有无自凝性
在洁净的玻片上加一滴生理盐水，将待试培养物混合于生理盐水滴内，使成为均一性的混蚀悬液，将玻片轻轻摇动30～60s，在黑色背景下观察反应（最好用放大镜观察）。如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物，即认为有自凝性。反之无自凝性。
检查“O”抗原
对无自凝性的培养物，按照的程度进行试验，但以多价“O”血清代替生理盐水，在2min内判断结果。如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验。如为阴性结果，必要时，可结合结果按进行试验，再以多价和单价“O”血清进行试验。
检查“Vi”抗原
按照的程序进行，但以“Vi”血清代替生理盐水。
.根据和试验结果，按照表5进行判定。表5.沙门氏菌属生化试验与血清学试验
注：1 丙二酸钠试验阴性，卫矛醇试验反应不定的菌株，按上述1～6类别结果进行判断。
2 丙二酸钠试验阳性，卫矛醇试验阴性的菌株，按上述7～12类别结果进行判断。
3 如以上生化项目仍不能判定时，可按P·R·爱德华，W·H·爱文：《肠杆菌科的鉴定》（1978中译本），扩大必要的生化试验。结合血清学作综合判定。
5.报告结果
.报告阳性结果：“发现沙门氏菌”或“发现亚利桑那菌”或“发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
.报告阴性结果：“未发现沙门氏菌”或“未发现亚利桑那菌”或“未发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
6.培养基
.营养肉汤（NB）
蛋白胨
酵母膏
氯化钠
葡萄糖
蒸馏水
将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，分装试管（12mm×100mm），每管约3mL高压灭菌121℃，15min。
.营养琼脂（NA）
蛋白胨
酵母膏
氯化钠
葡萄糖
琼.脂
蒸馏水
将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，分装试管（12mm×100mm），每管约3mL，高压灭菌121℃，15min。
.缓冲胨水增菌液（BP）
蛋白胨
氯化钠
磷酸氢二钠（含12个结晶水）
磷酸二氢钾
蒸馏水
将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±高压灭菌121℃，15min，临用时，以无菌操作分装灭菌玻璃瓶，每瓶200mL 或225mL。
.亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）
蛋白胨
乳糖
磷酸氢二钠（含12个结晶水）
亚硒酸氢钠
L-胱氨酸
蒸馏水
除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸5min至完全溶解，冷至55℃以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1g／1 L-胱氨酸溶液……胱氨酸溶液10mL（称取胱氨酸，加1 mol／L氢氧化钠溶液15mL，使溶解，再加灭菌蒸馏水至100mL即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调至±，以无菌操作分装灭菌玻璃瓶内，每瓶100mL或200mL。.四硫磺酸盐煌绿增菌液（TTB）
基础液
蛋白胨
牛肉膏
氯化钠
碳酸钙
蒸馏水
除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，再加入碳酸钙，调至±高压灭菌121℃，20min。
硫代硫酸钠溶液
硫代硫酸钠（含5个结晶水）
蒸馏水加至
高压灭菌121℃，20min。
碘溶液
碘片
碘化钾
蒸馏水加至
将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中，再投入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解为止，然后加蒸馏水至规定的总量，贮存于褐色瓶内，塞紧瓶盖备用。
煌绿水溶液
煌.绿
蒸馏水
溶解后，存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。
牛胆盐溶液
牛胆盐
蒸馏水
加热煮沸至完全溶解，高压灭菌121℃，20min。
制备
基础液
硫代硫酸钠溶液
碘溶液
煌绿水溶液
牛胆盐溶液
临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。最后分装于灭菌玻璃瓶内，每瓶100mL或225mL。.亚硫酸铋琼脂（BS）
蛋白胨
牛肉膏
葡萄糖
硫酸亚铁
磷酸氢二钠
煌绿或5g／L水溶液5mL
柠檬酸铋铵
亚硫酸钠
琼脂
蒸馏水
将前三种成分加入300mL蒸馏水（制作基础液），硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20mL和30mL蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20mL和30mL 蒸馏水中，琼脂加入600mL蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，静置约30min，加热煮沸至完全溶解。冷至80℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调至±，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50～55℃。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿，每皿约20mL。
本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，新配制的培养基呈玉白色不透明，贮于室温暗处，超过48h会降低其选择性，本培养基宜于当天制备，第二天使用。
.胆硫乳琼脂（胆盐.硫化氢.乳糖琼脂.DHL）
蛋白胨
牛肉膏
乳糖
蔗糖
牛胆盐
硫代硫酸钠
柠檬酸钠
柠檬酸铁铵
中性红或5g／L水溶液6mL
琼.脂
蒸馏水
除中性红和琼脂外，将其他成分加入400mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±。另将琼脂加入600mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解。将两种溶液混合后，再加入5g／L中性红水溶液6mL，搅拌均匀，冷至50～55℃，倾注平皿，每皿约20mL。本培养基不需高压灭菌，也不再进行任何加热。制成的平板为橙黄色。
.亚利桑那菌琼脂（SA）
蛋白胨
酵母膏
牛胆盐
蔗糖
丙二酸钠
卫矛醇
葡萄糖
氯化钠
硫代硫酸钠
柠檬酸铁铵
酚红或5g／L溶液8mL
琼脂
蒸馏水
除酚红和琼脂外，将其他成分加入400mL蒸馏水中，搅拌均匀，加热煮沸至完全溶解，调至±。
将琼脂加入600mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，冷至约90℃，将上述溶液加入琼脂中，摇匀，再加入酚红指示剂，混匀，冷至50～55℃，倾注平皿，每皿约20mL。
本培养基不需高压灭菌，制成的平板为透明桔红色。
.三糖铁琼脂（TSI）
蛋白胨
牛肉膏
乳糖
蔗糖
葡萄糖
硫酸亚铁铵（含6个结晶水）
酚红或5g／L溶液5mL
氯化钠
硫代硫酸钠
琼脂
蒸馏水
除酚红和琼脂外，将其他成分加入400mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±。另将琼脂加入600mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解。
将上述两溶液混合均匀后，再加入酚红指示剂，混匀，分装试管（12mm×100mm），每管约2～4mL，高压灭菌121℃10min或115℃ 15min，灭菌后置成高层斜面，呈桔红色。
.赖氨酸脱羧酶培养基（LD）
酵母膏
葡萄糖
L-赖氨酸
溴甲酚紫或8g／L溶液2mL
蒸馏水
除溴甲酚紫外，将其他成分加入蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，加入溴甲酚紫，混匀，分装试管（12mm×100mm），每管1～，高压灭菌121℃，15min。
试验与判断：接种待试菌，于37℃培养24±2h。阳性反应为紫色，阴性为黄色。
.尿素酶琼脂（U）
蛋白胨
葡萄糖
尿素
氯化钠
磷酸二氢钾
酚红或5g／L溶液
琼脂
蒸馏水
除酚红和尿素外，将其他成分加入蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至pH7±，高压灭菌121℃，15min，冷至50～55.，以无菌操作加入尿素20g（400g／L已经除菌过滤的尿素溶液50mL）和5g／L酚红溶液，混匀，分装灭菌试管（12mm×100mm），每管2～3mL，置成斜面。
试验与判断：大量接种待试菌于37℃培养24±2h，强阳性反应为深红色，弱阳性为粉红色，阴性为黄色或不变色。
半固体琼脂（VP）
制备
蛋白胨
酵母膏
葡萄糖
氯化钠
琼.脂
蒸馏水
将各成分加入蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，分装试管（12mm×100mm），每管1～，高压灭菌121℃，10min，灭菌后立即取出冷却备用。
试验判断
.配制试剂
甲液：
α-萘酚
无水乙醇溶液
乙液：
氢氧化钾
肌酸
蒸馏水
先将氢氧化钾溶于水中，再加入肌酸。
甲液和乙液保存于4℃冰箱内，可使用2个月。
.试验
接种幼嫩待试菌，于37℃培养24±2h，将甲液（约6滴）加入试管中，摇
混均匀，再加乙液（约3滴），再摇混均匀。
.判断
阳性反应立即或在15min内呈现红色，阴性为铜色。阴性结果在1h后再做一次检查。有些试管在数小时后红色会逐渐消失，此仍作阳性反应。
.吲哚培养基（1）：
制备
蛋白胨
氯化钠
DL-色氨酸
蒸馏水1000mL
除DL-色氨酸外，将其他成分加入蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min。另将DL-色氨酸加入约4mL 1mol／L氢氧化钠溶液中，待溶解后，再将两液进行混合并加热煮沸至完全溶解，调至±，分装试管（12mm×100mm），每管1～，高压灭菌121℃，15min。
试验与判断
.配制试剂
柯凡克试剂：
对二甲氨基苯甲醛
戊醇
浓盐酸
将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中，缓慢搅拌加入盐酸，加热至60℃，呈深黄色，静置6～7h，变成黄色即可使用。试液宜小量配制，不用时保存于4℃冰箱内。久存后试液变成褐色不可使用。
.试验
接种待试菌，于37℃培养24±2h，滴加柯凡克试剂。
.判断
阳性反应出现红色环；阴性为黄棕色环。
.氰化钾培养基（KCN）
制备
蛋白胨
氯化钠
磷酸二氢钾
磷酸氢二钠
硝酸钾（无亚硝酸盐）
5g／L氰化钾溶液
蒸馏水
将蛋白胨、氯化钠和硝酸钾加入900mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，高压灭菌121℃，15min，取出置于4℃冰箱内进行冷却。
将磷酸二氢钾、磷酸氢二钠溶于100mL蒸馏水，高压灭菌121℃，15min，取出进行冷却。
在冷却后的上述培养液900mL中，以无菌操作加入磷酸缓冲液100mL和5g ／L氰化钾溶液（必须用冷却的灭菌蒸馏水配制）10mL，摇混均匀（氰化钾的最终浓度为／L）。并立即分装灭菌试管（12mm×100mm），每管约1～，同时加入
约灭菌石蜡油封盖。在4℃冰箱中可保存7d。
试验与判断
.配制试剂
甲液：
氨基苯磺酸
5mol／L乙酸
乙液：
α-萘胺
5mol／L乙酸
.试验
在三糖铁琼脂斜面上挑取少量菌苔，先接种于吲哚培养基中，混匀（使其浓度近似于37℃，24h肉汤培养物）然后烧灼接种环，再沾取吲哚培养基少许接种于氰化钾培养基中，于37℃培养24±2h。培养之后，先观察培养液有无混浊，然后在每支氰化钾培养物试管内滴加甲液1滴，然后再滴加乙液1滴，摇匀。.判断
强阳性反应为鲜红色，弱阳性为粉红色，在30～60min内，强阳性可转为暗褐色。阴性无变化（加试剂前，培养液出现混浊，即有细菌生长，亦为阳性反应）。.丙二酸钠培养基（M）
酵母膏
硫酸铵
磷酸氢二钾
磷酸二氢钾
氯化钠
丙二酸钠
葡萄糖
溴麝香草酚蓝或5g／L溶液5mL
蒸馏水
除溴麝香草酚蓝外，将其他成分加入蒸馏水中搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，加入溴麝香草酚蓝，再混匀，分装试管（12mm×100mm），每管1～，高压灭菌115℃，10min。
试验与判断：接种大量幼嫩待试菌，于37℃培养24±2h，阳性反应为普蓝色；阴性不变色。
.卫矛醇半固体琼脂（D）
蛋白胨
酵母膏
卫矛醇
氯化钠
磷酸氢二钾
溴麝香草酚蓝或8g／L溶液10mL
琼.脂
蒸馏水
除溴麝香草酚蓝外，将其他成分加入蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，加入溴麝香草酚蓝，呈绿色，分装试管（12mm ×100mm），每管约1～，高压灭菌121℃，15min，灭菌后立即取出，冷却备用。
试验与判断：穿刺接种待试菌，于37℃培养24±2h，阳性反应为黄色阴性不变色。
注：新制备的培养基均应用已知阳性及阴性菌进行测试，以保证培养基质量。
7.来源：
SN0170－92
附录 A
肉类、蛋品类沙门氏菌属检验程度
（补充件）
A1.肉类沙门氏菌属检验程序：
↓↓
↓
注：1）可参照使用。
A2.蛋品类沙门氏属检验程序：
↓↓
注：1）可参照使用。
沙门氏菌快速检测方法
沙门氏菌快速检测方法 1试剂与仪器 1.1所用器具 三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针 1.2仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 1.3所用试剂和培养基 1.3.1缓冲蛋白胨水（BPW）培养基 称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15min，冷至常温。 1.3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。 将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。 2、操作步骤 2.1配制BPW培养基（第一天） 2.2培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min 后使用。（第一天） 2.3预增菌（第一天） 称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。 2.4配制TTB增菌液（第一天） 2.5增菌（第二天） 2.5.1接种和培养 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于9mLTTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～24h。 2.5.2培养现象 菌名菌号生长状况 TTB培养特征 静置后浑浊CMCC(B)50071 伤寒沙门氏菌良好 静置后浑浊良好鼠伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50115 静置后清亮不生长大肠埃希氏菌 ATCC25922
沙门氏菌的检验
沙门氏菌的检验 食品学院14食品质量与安全1班 刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君 2 2 2 2 摘要：本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。 关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定 前言 沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界范围内的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1仪器设备 均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃ 吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度或微量移液器及吸头
电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司； 手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，上海申安医疗器械厂 1.1.2试剂药品 鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI 生化鉴定卡 1.1.3培养基 蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基 1.2 实验方法 1.2.1培养基的制备 1.2.1.1培养基的配制步骤 蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约 10 min，煮沸溶解，调节 pH，高压灭菌 121 ℃，15 min。分装10瓶，每瓶90ml 四硫磺酸钠煌绿（TTB）：高压灭菌 121 ℃，15 min灭菌冷却后至30℃，每100ml 基础培养液加碘液2ml，煌绿液1ml 1.2.1.2配制培养基的注意事项 （1)按照说明书上的用量进行换算，称取准确分量的合成培养基粉末； （2）加热煮沸溶解培养基时，留意锅内水位的变化，水位下降可再添加适量的水，以免水分蒸发过多，导致后面分装不够量； （3）往试管中放小导管时，注意处理气泡。 1.2.2 沙门氏菌群检测 1.2.2.1沙门氏菌检测程序
沙门氏菌检验
沙门氏菌的检验 1．目的 规范沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。 2．消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是121℃（）下灭菌20min。 3．原理 沙门氏菌的检验分四个连续阶段： 4．操作步骤 准备工作 配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。 前增菌 在无菌环境下，称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中，然后放到36±1℃的恒温培养箱内进行前增菌4-6h; 增菌 在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取10ml前增菌液接种与100ml亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 分离培养 将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环挑取一环，划线于表面无凝结水的BS和SS琼脂平板各一个，于36±1℃培养18-24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。然后观察培养的平板（黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。 沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征 生化实验 用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培养基上，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 典型沙门氏菌培养物斜面显红色（碱性），底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑）。 三糖铁培养基变化表 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果
沙门氏菌的检验
沙门氏菌的检验 2.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，42 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5天平：感量0.1 g。 2.6 无菌锥形瓶:容量500 mL，250 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 2.8 无菌培养皿：直径90 mm。 2.9 无菌试管：3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。 2.10 无菌毛细管。 2.11 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 3 培养基和试剂 3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录A 中A.1。 3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录A 中A.2。 3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录A 中A.3。 3.4 亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录A 中A.4。 3.5 HE 琼脂：见附录A 中A.5。 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见附录A 中A.6。 3.8 三糖铁（TSI）琼脂：见附录A 中A.7。 3.9 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录A 中A.8。 3.10 尿素琼脂（pH 7.2）：见附录A 中A.9。 3.11 氰化钾（KCN）培养基：见附录A 中A.10。 3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录A 中A.11。 3.13 糖发酵管：见附录A 中A.12。 3.14 邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基：见附录A 中A.13。 3.15 半固体琼脂：见附录A 中A.14。 3.16 丙二酸钠培养基：见附录A 中A.15。 1 前增菌 称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW 的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均质 1 min～ 2 min，或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。 2 增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于42 ℃±1 ℃培养18 h～24h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC 内，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 3 分离 分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个BS 琼脂平板和一个XLD 琼脂平板（或HE 琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36 ℃±1 ℃分别培养18 h～24 h （XLD 琼脂平板、
MMFSCNJ出口食品中沙门氏菌辛酯酶荧光检验方法
MM_FS_CNJ_0348出口食品沙门氏菌（辛酯酶荧光） MM_FS_CNJ_0348 出口食品中沙门氏菌（辛酯酶荧光）检验方法 1.适用范围 本方法适用于出口肉品，蛋品沙门氏菌的检验，其他食品可参照使用。 2.定义 MUCAP：4－methylumbelliferyl－caprylate（4－甲基伞形酮辛）的缩写。 MUCAP试剂：用4－甲基伞形酮辛酯配成的试剂的缩写。 SS琼脂：沙门氏菌和志贺氏菌琼脂培养基。 HE琼脂：Hektoen Enteric琼脂培养基。 3.主要试剂和仪器 .主要试剂（包括培养基） 培养基与试剂按SN 0170第5章，另补充以下部分： SS琼脂培养基（含1％蔗糖）：见附录A1； HE琼脂培养基：见附录A2； MUCAP试剂：见附录A3； 氧化酶试纸：见附录A4； .仪器 紫外光灯：波长366nm，功率＞6W； 放大镜：3～4X； 毛细滴管。 4.样品制备及增菌培养 参照SN 0170进行。 5.分离培养 .将增菌培养液摇匀，挑取一接种环，划线接种于SS和HE琼脂培养基各一个，于36±1℃培养24±2h。 .观察各琼脂平板上有无可疑沙门氏菌菌落。如无可疑菌落，应再继续培养24±2h。沙门氏菌的菌落特征见表1。 .从培养的分离培养基上选可疑沙门氏菌菌落（尽量选较大，分离较好的单个菌落），用玻璃笔做好标记并编号。 .用毛细滴管吸取MUCAP试剂，加一滴于编号的菌落上，待一个平板的被检菌全部滴加试剂后，将平板拿至366nm紫外光灯下检视。发蓝色荧光的为MUCAP试验阳性，将阳性菌落号记录下来。 .用接种环挑取荧光反应阳性菌落，涂于氧化酶试纸上，观察涂菌点是否变蓝色。于10min内变蓝色为氧化酶试验阳性；不变色为阴性。 7.结果计算
沙门氏菌基本知识及检测方法
沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella 。本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。 根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。第一类群：专门对人致病。如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌(甲型、乙型、丙型)。第二类群：能引起人类食物中毒——食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。 一、沙门氏菌属的生物学特征： 1.形态染色特性：G-无芽孢杆菌。大小通常为 0.7～1.5μm × 2.0～5.0μm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。需氧或兼性厌氧菌，生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛，胆盐可促进其生长。 2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛；胆盐可促进其生长。 §普通琼脂：圆形、光滑、无色半透明、边缘整齐或不太整齐的中等大小(2 ～ 4mm)菌落。鸡白痢、鸡伤寒、猪副伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌等只能长成细小菌落。§麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂(EMB)：菌落无色半透明
沙门氏菌检验标准操作规程
1目的P URPOSE 规范888物料、产品的沙门氏菌检验操作，确保检验结果的可靠性。 2范围SCOPE 适用于888物料、产品的沙门氏菌检验工作。 3责任RESPONSIBILITY 微生物检验员严格执行本规程，品质部负责人监督执行。 4程序PROCEDURE 定义和原理 沙门氏菌广泛存在于动物的肠道和内脏，以及被粪便污染的水和土壤中，是细菌性食物中毒的主要病因。本方法利用沙门氏菌呈辛酸酯酶阳性，而氧化酶和脂肪酶均呈阴性的特性，对物料、产品进行沙门氏菌检验。 材料和设备 紫外灯：波长366nm，功率不小于6W。 放大镜：3至4倍。 毛细滴管。 LX-B35L压力蒸汽灭菌锅。 无菌的培养皿。 无菌的接种环。 培养基和试剂 SCDLP液体培养基：按《化妆品卫生规范》（2007版）或使用商品培养基干粉配制。 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：按—2010附录配制或使用商品试剂。 SS琼脂培养基（含1%蔗糖）：牛肉浸膏(或牛肉粉)，蛋白胨，乳糖，蔗糖，胆盐，柠檬酸钠，硫代硫酸钠，柠檬酸铁，煌绿，中性红，琼脂，蒸馏水1000mL。 HE琼脂培养基：按—2010附录或使用商品培养基干粉配制。 玉米油维多利亚蓝琼脂培养基：灭菌后的基础培养基冷却至50℃左右，边摇边加入玉米油乳化液。倾注平皿，制成平板。基础培养基及玉米油乳化液配方如下： a）基础培养基：蛋白胨5g，酵母浸粉3g，氯化钠5g，琼脂13g，水900mL，。将 各成分加入水中，加热溶解。调节，116℃15min高压灭菌。 b）玉米油乳化液：玉米油100mL，%维多利亚蓝水溶液100mL，%琼脂溶液80mL， 吐温801mL。玉米油加维多利亚蓝水溶液混合，边振动边在沸水中加热溶化。然后， 放入分液漏斗中，弃去蓝色水部分，再将着色的脂肪用水洗1-2次。将着色脂肪20mL 加入810mL琼脂溶液中，再加1mL吐温80，116℃15min高压灭菌。冷却后用超声 波乳化。
MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法
MM_FS_CNJ_0335出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验 MM_FS_CNJ_0335 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法 1.适用范围 本方法适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验。其他食品可参照使用。 2.样品制备及增菌培养 .肉类 如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或在2～5℃不超过18h解冻。若不能及时检验，应置于－15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4℃冰箱保存。 以无菌操作，称取剪碎后的瘦肉样品25g，置于灭菌均质杯内，加入25mL缓冲胨水增菌液，以8000～10000r／min均质1min，移入盛有200mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液，调pH至±，于37℃水浴培养4h（以增菌液达到37℃时算起），进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内，摇匀，于42±1℃培养20±2h，进行选择性增菌。必要时，同时另称取25g剪碎的瘦肉样品，加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液，同样进行均质。其后，移入盛有200ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。 .蛋品 冰蛋品（冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄） .按解冻和保存样品。 .以无菌操作称取样品25g，置于盛有225mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的500mL广口瓶内混合均匀，如pH低于，用灭菌1mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。 干蛋品（鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉） 以无菌操作将样品碾碎后，称取25g加入盛有225mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内（瓶内事先盛有直径3～4mm的玻璃珠约50粒），振荡10min，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养20～24h，进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的250mL 玻璃瓶内，混匀，于42±1℃培养20±2h，进行选择性增菌。 3.分离培养 .将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环分别挑取1环，分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个（必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用），于37℃培养24±2h。 .观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落，如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。 沙门氏菌属的菌落特征见表1。 表1.沙门氏菌属菌落特征
食品中沙门氏菌检验操作规范(已完)
食品中沙门氏菌检验操作规范 1 检验依据 本方法参照GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。 2.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，42 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5 电子天平：感量0.1 g。 2.6 无菌锥形瓶:容量500 mL，250 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 2.8 无菌培养皿：直径90 mm。 2.9 无菌试管：3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。 2.10 无菌毛细管。 2.11 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 2.12 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂（按说明书配置或灭菌） 3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）； 3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液； 3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液； 3.4 亚硫酸铋（BS）琼脂； 3.5 HE 琼脂； 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂； 3.7 沙门氏菌属显色培养基； 3.8 三糖铁（TSI）琼脂； 3.9 蛋白胨水、靛基质试剂； 3.10 尿素琼脂（pH 7.2）； 3.11 氰化钾（KCN）培养基； 3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基； 3.13 糖发酵管； 3.14 邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基；
3.15 半固体琼脂； 3.16 丙二酸钠培养基； 3.17 沙门氏菌O 和H 诊断血清； 3.18 生化鉴定试剂盒。 4 检验程序 沙门氏菌检验程序见图1。 图1 沙门氏菌检验程序 5 操作步骤 5.1 前增菌 称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW 的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH 值，用1 mol/mL 无菌NaOH 或HCl 调pH 至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500 mL 锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。
沙门氏菌检测方法的研究进展
沙门氏菌检测方法的研究进展 摘要：沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌，而且，沙门氏菌的检验在食品检测中具有重要意义。建立一种快速而准确的检测方法一直是沙门氏菌检验研究的核心问题。本文通过查阅大量文献，详细阐明了沙门氏菌的各种快速检测方法的原理，对近年来沙门氏菌的检测进展进行了综述。认为，传统方法可以对沙门氏菌做出鉴定，但需要4~7 d的时间；以抗体为基础的ELISA方法和免疫荧光标记方法将检测时间缩短了一半，且灵敏性高和特异性强；以核酸为基础的PCR技术由于灵敏、简单、快速和特异已被广泛用于沙门氏菌检测。但是这些方法仍然存在一定的不足，需要进一步加以改进，关于食品中沙门氏菌的检测方法的研究还有待进一步深入。 关键词：沙门氏菌；检测；传统方法；免疫；分子
前言 沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人兽共患病之一，沙门氏菌属于肠杆菌科细菌，由此类细菌引起的各种动物的疾病称为沙门氏菌病。沙门氏菌在自然界有广泛的宿主，少数沙门氏菌对宿主有选择性，属于偏嗜性沙门氏菌，绝大多数对人和动物均适应，可寄居在哺乳类、爬行类、鸟类、昆虫及人的胃肠道中，种类繁多的家养和野生动物的感染率在1%—20%或者更高。故各种家禽、家畜在喂养、屠宰、运输、包装等加工处理过程中均有污染的机会。各种动物源性食物是引起沙门氏菌感染的最常见媒介物。除初生动物，人畜感染后一般呈无症状带菌状态,长期排菌，污染肉蛋产品，同时它们也可表现为有临床症状的致死疾病，可能加重病情或者增加死亡率，或者降低动物生产力等，对养殖业的经济效益影响较大，并严重影响人类健康。近年来，随着免疫学实验技术和分子生物学技术的发展，沙门氏菌检验技术的研究也有了新的研究进展。本文将近年来国内外关于沙门氏菌检验技术研究进展情况作以概述，供参考。 1 传统的检测方法（国标法） 常规检验技术基本特征与步骤:沙门氏菌常规检验技术具有以下3项特征：常规方法是编入国标方法或国际方法中的基本方法，是检验其他检测方法准确性、敏感性的参照；常规方法最终将能分离到细菌纯培养物；常规方法简单、准确、可重复性强、有一定的灵敏性。随着经济和技术的发展以及研究的深入，标准方法也处于不断进步，不断更新中。 常规检验包括以下5个基本步骤：前增菌和增菌；分离纯培养物；属和种的鉴定；血清学分型；菌型的判定和结果报告。在具体实践中用此方法检测畜产品中的沙门氏菌时，应注意根据不同的样品采取不同的检测步骤。 虽然该方法鉴定结果准确可靠，但由于沙门氏菌血清型繁多，生化特性各异，检验程序复杂，耗时长，至少需要4~7d才可得到准确的检测结果[1,2]。 2 免疫学标记检测方法 免疫标记技术就是将已知抗体或者抗原上标记上易显示的物质(标记分子)，通过检测标记物反映有无抗原抗体反应,从而间接检测出微量的抗原或者抗体。 所谓的标记分子是那些即使在超微量时也能通过特殊的方法将其检测出来，高敏感性的标记分子主要有突光素、酶、放射性同位素3种。免疫标记技术不仅大大提高了试验的敏感性，和光镜或电镜技术结合后，能对待检物质做精细定位，为临床研究和诊断提供了极大的方便。由此建立的沙门氏菌免疫学检测方法有多种，包括免疫酶标记技术，使用较多的如酶
实验五食品中沙门氏菌的检验
实验五食品中沙门氏菌的检验 、实验目的要求 1、了解食品的质量与沙门氏菌检验的意义。 2、掌握沙门氏菌的生物学特性。 3、掌握沙门氏菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 4、掌握沙门氏菌属血清学试方法。 5、掌握食品中沙门氏菌检验的方法和技术。 、原理 沙门菌属是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。种类繁多，少数只对人致病。其他对动物致病，偶尔可传染给人。主要引起人类伤寒，副伤寒以及食物中毒或败血症。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占首位或第二位。 食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤：1 前增菌；2 选择性增菌；3 选择性平板分离沙门氏菌；4 生化试验，鉴定到属；5 血清学分型鉴定。目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g 食品为标准分析单位。 三、试剂和仪器 一)最先准备的器材 规格名称数量 1、500ml 广口瓶 1 个 2、500ml 三角瓶 1 个 3、250ml 三角瓶8 个 4、15×150mm 试管18 支 5、13×130mm 试管30 支 6、1ml 移液管 5 支 7、10ml 移液管 2 支 8、直径为90 mm 平皿12 套 9、250ml 量筒 1 支 二)应灭菌的其它器材 剪刀1 把不锈钢汤匙 三)应准备的培养基和试剂 1. 缓冲蛋白胨水(BP) ： 2. 氯化镁孔雀绿(MM)增菌液： 3. 亚硒酸盐胱氨酸(SC) 增菌液： 4. 亚硫酸铋琼脂(BS) ：4 皿 5. SS琼脂：6 皿 用途 稀释样品制缓冲蛋白胨水制增菌 液、培养基制三糖铁培养基和 PH7.2 尿素制蛋白胨水等 制BS 、SS平板 1把称量纸适量 培养基总量所用容器 1瓶225ml/瓶500ml 三角瓶1瓶100ml/瓶250ml 三角瓶1瓶100ml/瓶250ml 三角瓶1瓶60ml /瓶250ml 三角瓶1瓶100ml/瓶250ml 三角瓶
沙门氏菌检验方法
沙门氏菌检验方法 关于GB 4789.04-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验解决方案 GB 4789.04-2010 沙门氏菌检验流程图 环凯针对标准的修改，扩充完善了微生物检测试剂，推出了成套的沙门氏菌检验解决方案，为生产企业提供方便。 功能阶段实验 序号 产品编号产品名称规格类别 前增菌1023130缓冲蛋白胨水（B PW）250g瓶（干粉）
CP0680缓冲蛋白胨水（B PW）225 mL×10袋盒（袋装）CP0290缓冲蛋白胨水（B PW）225 mL×6瓶盒（瓶装）CP0560A缓冲蛋白胨水（B PW）9 ml×20支盒（管装） 选择性增菌2 023030四硫磺酸钠煌绿增菌液基础（TTB）250g瓶（干粉）SR0040 四硫磺酸钠煌绿增菌液配套试剂 （碘液、煌绿各一支添加于100ml培养基） 2×5支/盒盒（西林瓶）CP0300四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）10 ml×20支盒（管装）3 023040亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）250g瓶（干粉）CP0050亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）10 ml×20支盒（管装） 选择性分离4023050亚硫酸铋琼脂（BS）（配送指示剂）250g瓶（干粉）5 023070HE琼脂培养基250g瓶（干粉）CP0110HE琼脂培养基90mm×20盒（平板） 6 029999木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂（XLD）250g瓶（干粉）029999P木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂（XLD） 300 mL/袋 ×10袋 盒（袋装） 颗粒培养基CP0180木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂（XLD）90mm×20盒（平板）7 CRM004沙门氏菌显色培养基1000 mL瓶（干粉）CP0560A沙门氏菌显色培养基平板90mm×20盒（平板）8HM42沙门氏菌乳胶凝集试剂盒50 tests套 生理生化 9 022080三糖铁琼脂（TSI）250g瓶（干粉）CP0080三糖铁斜面20支盒（管装）075750三糖铁20支盒（西林瓶） 10 022110蛋白胨水 (靛基质培养基，色氨酸肉汤)100g瓶（干粉）075240蛋白胨水 (靛基质培养基，色氨酸肉汤)20支盒（西林瓶）029230靛基质试剂10 mL×1支盒 11 023090尿素琼脂培养基基础100g瓶（干粉）02910040%无菌尿素溶液 2 mL×10支盒（西林瓶）075150尿素琼脂培养基20支盒（西林瓶）12 075330氰化钾生长实验管20支盒（西林瓶）075340氰化钾对照管20支盒（西林瓶）13 075280赖氨酸脱羧酶培养基20支盒（西林瓶）075290氨基酸脱羧酶对照培养基20支盒（西林瓶）029110无菌石蜡油10 mL×1支瓶14075090山梨醇20支盒（西林瓶）15075040甘露醇20支盒（西林瓶）16075180β-半乳糖苷 ONPG20支盒（西林瓶）17071740沙门氏菌生化鉴定试剂盒10种×10支盒（西林瓶）18075100卫矛醇20支盒（西林瓶）19075140水杨素20支盒（西林瓶）20075190丙二酸盐20支盒（西林瓶）
沙门氏菌检验(现用)
沙门氏菌的检验 1．目的 规沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。 2．消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是121℃（1.5MPa）下灭菌20min。3．原理 沙门氏菌的检验分四个连续阶段： 4．操作步骤 4.1 准备工作 配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。 4.2 前增菌 在无菌环境下，称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中，
然后放到36±1℃的恒温培养箱进行前增菌4-6h; 4.3 增菌 在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取10ml前增菌液接种与100ml亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 4.4 分离培养 将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环挑取一环，划线于表面无凝结水的BS和SS琼脂平板各一个，于36±1℃培养18-24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。然后观察培养的平板（黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。 沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征 4.5 生化实验 用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培养基上，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 典型沙门氏菌培养物斜面显红色（碱性），底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑）。 三糖铁培养基变化表
沙门氏菌快速检测方法
沙门氏菌快速检测方法文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
沙门氏菌快速检测方法 1 试剂与仪器 1.1所用器具 三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针 1.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 1.3 所用试剂和培养基 1.3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）培养基 称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。1.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。 将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。 2、操作步骤 2.1 配制BPW培养基（第一天） 2.2 培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟, 关灯60 min后使用。（第一天） 2.3 预增菌（第一天） 称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm 下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。 2.4 配制TTB增菌液（第一天） 2.5 增菌（第二天） 2.5.1 接种和培养 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1mL，转种于9mL TTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～24h。
2.5.2 2.6 配制沙门氏菌显色培养基平板（第二天） 2.6.1 取瓶内干粉4.75g，用100mL蒸馏水溶解，可按比例扩大或者缩小。 2.6.2 混合加热至100℃，搅拌加热至完全溶解，冷却至50℃倒平板。 2.6.3 样品用画线或者涂布法接种，37℃培养24小时。 2.6.3 观察菌落颜色：（第三天）
沙门氏菌检验
沙门氏菌检验 范围1.本法适用于食品中沙门氏菌的检验。 2.设备和材料 处微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1冰箱：2℃～5℃。 2.2恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。 2.3均质器。 2.4振荡器。 2.5电子天平：感量0.1g。 2.6无菌锥形瓶：容量500mL，250mL。 2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 2.8无菌培养皿：直径90mm。 2.9无菌试管：3mm×50mm、10mm×75mm。 2.10无菌毛细管。 2.11pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.12全自动微生物生化鉴定系统。 3.培养基和试剂 3.1缓冲蛋白胨水（BPW）。 ）增菌液。TTB四硫磺酸钠煌绿（3.2．
3.3亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液。 3.4亚硫酸铋（BS）琼脂。 3.5HE琼脂。 3.6木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂。 3.7沙门氏菌属显色培养基。 3.8三糖铁（TSI）琼脂。 3.9蛋白胨水、靛基质试剂。 3.10尿素琼脂（pH7.2）。 3.11氰化钾（KCN）培养基。 3.12赖氨酸脱羧酶试验培养基。 3.13糖发酵管。 3.14邻硝基苯β-D-半乳糖苷（ONPG）培养基。 3.15半固体琼脂。 3.16丙二酸钠培养基。 3.17沙门氏菌O和H诊断血清。 3.18生化鉴定试剂盒。 4.检验程序 沙门氏菌检验程序见图1。
检样36℃±1℃，18h～ 24h 25g（mL）样品36℃±1～℃，℃±42118h24h ℃，18h～24h 1mL+SC10mL 1mL+TTB10mL 36℃±1℃，40h～48h 36℃±1℃，18h～24h 1沙门氏菌检验程序图操作步骤5. 前增菌5.1称取25g（mL）样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min 均质1min～2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2.无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8h～18h。
沙门氏菌检测
沙门氏菌检测 1 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1.1 冰箱：2℃～5℃。 1.2 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。 1.3 均质器。 1.4 振荡器。 1.5 电子天平：感量0.1g。 1.6 无菌锥形瓶:容量500ml，250ml。 1.7 无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。 1.8 无菌培养皿：直径90mm。 1.9 无菌试管：3mm×50mm、10mm×75mm。 1.10 无菌毛细管。 1.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 1.12 全自动微生物生化鉴定系统。 2 培养基和试剂 2.1 缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录中1。 2.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录中2。 2.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录中3。 2.4 亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录中4。 2.5 HE琼脂：见附录中5。 2.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见附录中6。 2.7 沙门氏菌属显色培养基。 2.8 三糖铁（TSI）琼脂：见附录中7。 2.9 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中8。 2.10 尿素琼脂（pH7.2）：见附录中9。 2.11 氰化钾（KCN）培养基：见附录中10。 2.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录中11。
2.13 糖发酵管：见附录中12。 2.14 邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培养基：见附录中13。 2.15 半固体琼脂：见附录中14。 2.16 丙二酸钠培养基：见附录中15。 2.17 沙门氏菌O和H诊断血清。 2.18 生化鉴定试剂盒。 3 操作方法 3.1 试验前准备 3.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量，避免操作中出入操作间。3.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30min。 3.1.3 操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。 3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。 3.2 前增菌 称取25g（ml）样品放入盛有225ml BPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置于盛有225ml BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH 值，用1mol/ml无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500ml锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8 h～18h。如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃～5℃不超过18h解冻。 3.3 增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1ml，转种于10ml TTB内，于42℃±1℃培养18 h～24h。同时，另取1ml，转种于10ml SC内，于36℃±1℃培养18h～24h。 3.4 分离 分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36℃±1℃分别培养18h～24h（XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或40h～48h
沙门氏菌检测方法
沙门氏菌快速检测方法 1 试剂与仪器 1.1所用器具 三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针 1.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 1.3 所用试剂和培养基 1.3.1缓冲蛋白胨水（BPW）培养基 称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。 1.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。 将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。 2、操作步骤 2.1 配制BPW培养基（第一天） 2.2培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟, 关灯60 min后使用。（第一天） 2.3 预增菌（第一天） 称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。 2.4配制TTB增菌液（第一天） 2.5增菌（第二天） 2.5.1接种和培养 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于9mL TTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～24h。 2.5.2
2.6配制沙门氏菌显色培养基平板（第二天） 2.6.1 取瓶内干粉4.75g，用100mL蒸馏水溶解，可按比例扩大或者缩小。 2.6.2 混合加热至100℃，搅拌加热至完全溶解，冷却至50℃倒平板。2.6.3 样品用画线或者涂布法接种，37℃培养24小时。
MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法
M M F S C N J出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌 检验方法 The latest revision on November 22, 2020
MM_FS_CNJ_0335出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验 MM_FS_CNJ_0335 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法 1.适用范围 本方法适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验。其他食品可参照使用。 2.样品制备及增菌培养 .肉类 如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或在2～5℃不超过18h解冻。若不能及时检验，应置于－15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4℃冰箱保存。 以无菌操作，称取剪碎后的瘦肉样品25g，置于灭菌均质杯内，加入25mL缓冲胨水增菌液，以8000～10000r／min均质1min，移入盛有200mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液，调pH至±，于37℃水浴培养4h（以增菌液达到37℃时算起），进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内，摇匀，于42±1℃培养20±2h，进行选择性增菌。必要时，同时另称取 25g剪碎的瘦肉样品，加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液，同样进行均质。其后，移入盛有200ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。 .蛋品 冰蛋品（冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄） .按解冻和保存样品。 .以无菌操作称取样品25g，置于盛有225mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的500mL广口瓶内混合均匀，如pH低于，用灭菌1mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。 干蛋品（鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉） 以无菌操作将样品碾碎后，称取25g加入盛有225mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内（瓶内事先盛有直径3～4mm的玻璃珠约50粒），振荡10min，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养20～24h，进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的 250mL玻璃瓶内，混匀，于42±1℃培养20±2h，进行选择性增菌。 3.分离培养 .将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环分别挑取1环，分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个（必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用），于37℃培养24±2h。 .观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落，如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。 沙门氏菌属的菌落特征见表1。 表1.沙门氏菌属菌落特征
沙门氏菌检验
沙门氏菌检验1.范围 本法适用于食品中沙门氏菌的检验。 2.设备和材料 处微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1冰箱：2℃～5℃。 2.2恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。 2.3均质器。 2.4振荡器。 2.5电子天平：感量0.1g。 2.6无菌锥形瓶：容量500mL，250mL。 2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 2.8无菌培养皿：直径90mm。 2.9无菌试管：3mm×50mm、10mm×75mm。 2.10无菌毛细管。 2.11pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.12全自动微生物生化鉴定系统。 3.培养基和试剂 3.1缓冲蛋白胨水（BPW）。 3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液。
3.3亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液。 3.4亚硫酸铋（BS）琼脂。 3.5HE琼脂。 3.6木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂。 3.7沙门氏菌属显色培养基。 3.8三糖铁（TSI）琼脂。 3.9蛋白胨水、靛基质试剂。 3.10尿素琼脂（pH7.2）。 3.11氰化钾（KCN）培养基。 3.12赖氨酸脱羧酶试验培养基。 3.13糖发酵管。 3.14邻硝基苯β-D-半乳糖苷（ONPG）培养基。 3.15半固体琼脂。 3.16丙二酸钠培养基。 3.17沙门氏菌O和H诊断血清。 3.18生化鉴定试剂盒。 4.检验程序 沙门氏菌检验程序见图1。 42℃±1℃，18h～24h
36℃±1℃，40h～48h 36℃±1℃，18h～24h 图1沙门氏菌检验程序 5.操作步骤 5.1前增菌 称取25g（mL）样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2.无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8h～18h。 如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或2℃～5℃不超过18h解冻。 5.2增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mLTTB内，于42℃±1℃培养18h～24h。同时，另取1mL转种于10mLSC内，于36℃±1℃培养18h～24h。 5.3分离 分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。与36℃±1℃分别培养18h～24h（XLD平板、HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）或40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落，各个平板上的菌落特征见表1。