植物组织中脯氨酸含量的测定

植物组织中脯氨酸含量的测定

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一实验目的

1、了解植物组织在逆境中积累脯氨酸的意义。

2、掌握脯氨酸的测定方法。

二实验原理

脯氨酸普遍存在于植物体中,正常的花粉中含量最多,可达干重的1~3%，而在不育的花粉中含量却很低。因而有人把它作为花粉育性指标。植物在遭受水分、盐分和温度等逆境胁迫时,体内脯氨酸含量可以增加几倍到几百倍，故可把它作为植物抗性的指标。

本法根据在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应产生稳定的红色产物，此产物在515nm 波长有一最大吸收峰。可用分光光度计测定。而酸性和中性氨基酸不能与茚三酮反应形成红色产物,一些碱性氨基酸如Lys对测定有干扰，可以用人造沸石吸附除去这些氨基酸后再进行测定，该法有专一性。

三、实验材料：

黄豆Giy c in e max豆目豆科大豆属

四实验步骤

1、标准曲线的绘制

用浓度为100μg/ml的脯氨酸标准溶液，依次稀释成浓度为0、5、10、15、20、25、30μg/ml的的脯氨酸溶液各10ml。分别取标准溶液2ml,加冰醋酸2ml,茚三酮试剂2ml,摇匀。放入100℃水浴中显色15分钟,冷却后在515nm比色测定,以浓度0为空白对照,将测定结果以脯氯酸浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标作标准曲线

标准曲线：C（μg/ml）=47.8A515nm+0.02

2、植物样品液的提取及测定

取对照或处理植物材料各1g，加入研钵中，加入10ml5%乙酸研磨成匀浆，再加20ml 蒸馏水混合均匀后，过滤并定容到50ml，取滤液8ml，加0.8g人造沸石振荡5分钟，将上层液离心(3000rpm)10分钟，上清液即样品提取液。

3、显色与比色

取2ml样品提取液，加冰醋酸2ml，茚三酮试剂2ml，摇匀，放入100℃水浴中显色15分钟，冷却后在515nm比色测定，从标准曲线上查出对照和处理材料的提取液中的脯氨酸浓度。（测定3次）

另外取2ml蒸馏水做试剂空白，重复上述操作。

C（μg/ml）=47.8（A515nm–A0）+0.02

五、计算：

组织中脯氨酸含量（μg/g）=C*V

其中：

C：从标准曲线上查出的提取液中脯氨酸的浓度（μg/ml）；

V：每克植物材料制备的脯氨酸提取液的体积（ml）。50ml

实验数据：

A515nm=

1.20 1.21 1.20平均值：1.233

A0=

1.19 1.18 1.20平均值1.19

数据处理：

C（μg/ml）=47.8（A515nm–A0）+0.02

=47.8（1.233-1.19）+0.02

=2.0754μg/ml

所以，组织中脯氨酸含量（μg/g）=C*V

=2.0754*（2/50）

=51.885μg/g

六、小结：

通过本次实验，我了解了植物组织在逆境中积累脯氨酸的意义，掌握了脯氨酸的测定方法。在实验中，我组测定了黄豆芽的脯氨酸含量，对植物组织中脯氨酸的含量测定有了基本掌握，总体上达到了本次实验的目的与要求。