DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
DNA 的粗提取与鉴定
一、实验原理：
1、析出DNA 的原理：DNA 在NaCL 溶液中的溶解度是随着NaCL 浓度的变化而变化的，当NaCL 的物质的量浓度为0.14mol/L 时，DNA 的溶解度最低，高于或低于这一浓度溶解度都会增高。
如图：
2、提纯DNA 的原理：
DNA 不溶于冷酒精，而细胞中某些物质可溶于冷酒精。
3、鉴定原理：DNA 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。
二、方法步骤：
材料准备：常用鸡血细胞液
柠檬酸钠(抗凝剂)+鸡血−−−→静置或离心
血浆(弃去)+鸡血细胞液。
如图：
说明：①柠檬酸钠防止血液凝固。
②弃去上清液，是因为DNA 存在于血细胞中，血浆很少(没有)。
③用鸟类血细胞是因为鸟类成熟红细胞含DNA ，而哺乳动物成熟红细胞不含DNA ，所以不能用。
④本实验还可以用菜花或动物肝脏等作实验材料。
第一次在2中，使DNA与蛋白质分离
①两次加入高浓度NaCL
第二次在5中，DNA再溶解
第一次在1中，使细胞吸水涨破
②两次加入蒸馏水
第二次在3中，降低DNA的溶解度
第一次在1中，取滤液(含核物质)
③三次过滤第二次在4中，取黏稠物质
第三次在6中，取滤液
说明：在第一、三次取滤液时，纱布1—2层，第二次取黏稠物时纱布应多层。
④5次搅拌均要求超一个方向，轻缓，防止DNA断裂。
(二
璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA。
DNA的粗提取和鉴定分析
加热 加热
4、植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。
植物细胞需要先用洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁 精等）溶解细胞膜。
•洗涤剂可以瓦解细胞膜的原因是： 洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱， 它们可使细胞膜破裂，蛋白质变性， 使蛋白质与DNA分离开来。利于DNA 的释放。
• 动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂） 破坏的，因为动物细胞膜外面没 有细胞壁的保护，放在清水中自 然的就会吸水而胀破，释放出其 中的DNA等物质。
3、方法与过程
1).制鸡血细胞液
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，
活鸡鲜血180mL
离心或静置沉淀。
血浆
血细胞 离心或静置后去掉上清液
2)实验方法步骤：
提取细胞核物质：利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。 血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得出含核DNA的溶液。
（3）生活在牧区的人们，采集羊、牛和马血比较方便，若他们按 实验要求完成实验步骤后，结果是 在实验中很难提取到DNA， 这是因为 哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，反靠，白细胞
和淋巴细胞中的少量DNA，在实验中很难提取到
但若改用动物肝脏做实验材料，实验可以顺利进行，这是因 为肝细胞中含有细胞核，并且肝组织容易。被破坏，有利于DNA的提取 （4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加 若使肝组织易分离，将肝细胞剪碎、研磨是一种简便易行的方法。程 序，使组织细胞更易分离。
关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较， 最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：
（新1陈）代鸡谢血旺中盛红，细因胞而含血有液完中整红的、细成胞形数的目细较胞多核，，可家以鸡提属供于丰鸟富类的，
DNA的粗提取与鉴定教案
DNA的粗提取与鉴定教案一、教学目标1. 理解DNA的粗提取与鉴定的基本原理。
2. 学会使用不同的方法进行DNA的粗提取。
3. 学会使用不同的方法进行DNA的鉴定。
4. 能够独立完成DNA的粗提取与鉴定实验。
二、教学重点与难点1. 教学重点：DNA的粗提取与鉴定的基本原理、方法与步骤。
2. 教学难点：DNA的鉴定方法。
三、教学准备1. 实验室器材：试管、移液器、玻璃棒、滤纸、离心机等。
2. 实验材料：鸡血细胞、植物细胞、细菌等。
3. 试剂：酒精、盐、洗涤剂等。
四、教学过程1. 引入：通过讲解DNA的发现历程，引发学生对DNA的兴趣。
2. 讲解：讲解DNA的粗提取与鉴定的基本原理、方法与步骤。
3. 实验操作：引导学生独立完成DNA的粗提取与鉴定实验。
4. 讨论与思考：引导学生思考DNA的粗提取与鉴定在实际应用中的意义。
五、教学评价1. 学生能够理解DNA的粗提取与鉴定的基本原理。
2. 学生能够独立完成DNA的粗提取与鉴定实验。
3. 学生能够理解DNA的鉴定方法及其应用。
六、实验原理1. DNA的溶解性：DNA和蛋白质、脂质等成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。
2. DNA的稳定性：DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。
七、实验材料与试剂1. 实验材料：鸡血细胞、植物细胞、细菌等。
2. 试剂：2mol/L NaCl溶液：用于提取DNA。
0.14mol/L NaCl溶液：用于进一步纯化DNA。
冰醋酸：用于进一步纯化DNA。
50%酒精溶液：用于鉴定DNA。
二苯胺试剂：用于鉴定DNA。
八、实验步骤1. DNA的粗提取：a. 将实验材料加入2mol/L NaCl溶液，充分搅拌后放置一段时间。
b. 收集上清液，加入等体积的0.14mol/L NaCl溶液，轻轻搅拌后放置一段时间。
c. 收集上清液，加入等体积的冰醋酸，轻轻搅拌后放置一段时间。
d. 收集上清液，加入等体积的50%酒精溶液，轻轻搅拌后放置一段时间。
DNA的粗提取与鉴定
答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂， 再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的 破裂(细胞膜和核膜的破裂. )，从而释放出DNA
2、植物细胞
①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解 细胞膜 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
则溶于酒精，将DNA与蛋白质进一步分离。
（2） DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
① 蛋白酶——水解蛋白质，对DNA没有影响 ② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性 ③ 洗涤剂——瓦解细胞膜，但对DNA没有影响
瓦解细胞膜（破坏膜中的蛋白质分子）
（二）DNA的鉴定
②使DNA从溶液中析出： DNA不溶于酒精溶液， 但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利 用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的 DNA。
③ 鉴定：DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色， 因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
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二、实验设计
（一）实验材料的选取 从下列材料中选取2～3种
菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜； 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌
.
.
讨论： 为什么要加50mL的冷酒精？ 答：抑制核酸水解酶的活性，防止DNA降解 降低DNA分子的运动，使DNA易形成沉淀析出 低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断 裂
.
2. DNA的鉴定
⑴ 向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl 溶液5ml ⑵ 其中一支试管中加入DNA丝状物 ⑶ 各加入二苯胺试剂4ml ⑷ 混匀后，置于沸水浴中加热5min ⑸ 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化
选择性必修3 第10单元 微专题 DNA的粗提取与鉴定、DNA片段的扩增及电泳鉴定
解析：电泳是指带电分子在电场的作用下发生迁移的过程，A正 确；限制酶SalⅠ有三处切割位点，切割后产生4个DNA片段，因此泳道 ①中是用SalⅠ处理得到的酶切产物，B错误；限制酶SalⅠ有三处切割 位点，切割后产生4个DNA片段，限制酶XhoⅠ有2处切割位点，切割后 产生3个DNA片段，结合题图可知，若用XhoⅠ和SalⅠ两种酶同时处理 该DNA片段后电泳，可能存在相同长度的DNA片段，其泳道可能有5 条，C正确；不同生物的DNA切割后长度不同，切割后再进行电泳，可 以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定，D正确。
1 ． (2019·江 苏 卷 ) 下 列 关 于 DNA 粗 提 取 与 鉴 定 的 叙 述 ， 错 误 的 是
( A) A．用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量相近 B．DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂 C．预冷的酒精可用来进一步纯化粗提的DNA D．用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热
第三步：取6支试管，分别加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮
状物。
DNA检测：在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂，混合均匀后，
置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下
表。
材料保存温度 花菜 辣椒 蒜黄
20 ℃
＋＋ ＋ ＋＋＋
－20 ℃ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋＋
(注：“＋”越多表示蓝色越深)
分析上述实验过程，回答下列问题： (1)该探究性实验课题名称是_探__究__不__同__材__料__和__不__同__保__存__温__度__对__D__N_A__ _提__取__量__的__影__响______。 (2)第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少___D_N_A__断__裂______。 (3)根据实验结果，得出结论并分析。 ①结论1：与20 ℃相比，相同实验材料在－20 ℃条件下保存，DNA 的提取量较多。 结论2：_等__质__量__的__不__同__实__验__材__料__，__在__相__同__的__保__存__温__度__下__，__从__蒜__黄__提__ _取__的__D_N__A_量__最__多__________________________________。
dna的粗提取与鉴定
dna的粗提取与鉴定dna的粗提取与鉴定实验十一 DNA的粗提取与鉴定教学目的1、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法2、观察提取出来的DNA物质实验原理1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl/L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3、DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项1、步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液(5～10mL);体积分数为XX%的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺试剂;烧杯(100mL，1个，50mL， 500mL，各2个)，漏斗，试管(20mL，2个)，玻璃棒，滴管，量筒(100mL，1个)，纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
课时安排一课时课前准备制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血(约180mL)，用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。
静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。
也可以用离心机离心2 min(转速1000转/分)。
用吸管吸去上清液。
板书实验十一 DNA的粗提取与鉴定实验原理1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2、用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3、DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：1、提取鸡血细胞的细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min2、溶解细胞核内的DNA3、析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4、过滤：取黏稠物5、再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。
DNA的粗提取与鉴定教案
一、教学目标1. 理解DNA的粗提取与鉴定的基本原理。
2. 学会使用不同的方法对DNA进行粗提取。
3. 学会使用不同的方法对提取的DNA进行鉴定。
二、教学内容1. DNA的粗提取与鉴定的基本原理。
2. 实验材料的选择与处理。
3. DNA的提取与分离方法。
4. DNA的鉴定方法。
5. 实验结果的分析和解释。
三、教学步骤1. 介绍DNA的粗提取与鉴定的基本原理。
2. 讲解实验材料的选择与处理方法。
3. 演示DNA的提取与分离方法。
4. 演示DNA的鉴定方法。
5. 学生进行实验，观察实验结果。
四、教学方法1. 讲授法：讲解DNA的粗提取与鉴定的基本原理。
2. 演示法：演示实验操作和鉴定方法。
3. 实验法：学生进行实验操作，观察实验结果。
五、教学评价1. 学生能够理解DNA的粗提取与鉴定的基本原理。
2. 学生能够正确选择实验材料并进行处理。
3. 学生能够掌握DNA的提取与分离方法。
4. 学生能够掌握DNA的鉴定方法。
5. 学生能够分析和解释实验结果。
六、实验材料的选择与处理1. 实验材料：鱼鳞、鸡血、洋葱表皮等。
2. 材料的处理：将实验材料剪碎，放入研钵中，加入适量的洗涤剂和食盐，充分混合。
七、DNA的提取与分离1. 提取方法：利用洗涤剂和食盐破坏细胞膜，释放DNA，并通过酒精沉淀分离DNA。
2. 分离步骤：将混合物放入离心管中，离心后弃去上清液，加入酒精溶液，静置后弃去上清液，得到DNA沉淀。
八、DNA的鉴定1. 鉴定方法：二苯胺染色法。
2. 鉴定步骤：将提取的DNA溶解在2mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺试剂，沸水浴加热后观察颜色变化。
九、实验结果的分析和解释1. 分析和解释实验结果：观察DNA提取液的颜色变化，判断DNA 的提取效果。
观察DNA沉淀的形态和数量，判断DNA的分离效果。
观察二苯胺染色后的颜色变化，判断DNA的存在与否。
十、安全与环保1. 安全注意事项：在实验过程中，避免接触眼睛和皮肤，防止吸入有害气体。
dna的粗提取与鉴定知识点
dna的粗提取与鉴定知识点一、DNA的粗提取1.1 DNA的来源DNA是存在于生物体内的遗传物质，包括植物、动物、微生物等。
因此，进行DNA粗提取需要选择合适的样品，如血液、组织、细胞等。
1.2 DNA的粗提取方法常见的DNA粗提取方法有以下几种：（1）CTAB法：采用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与其他试剂配合，可以将细胞壁和细胞膜破坏，从而释放出DNA。
（2）酚/氯仿法：通过酚和氯仿相分离原理，将DNA分离出来。
（3）硅胶柱法：利用硅胶柱吸附原理，将杂质去除后得到纯净的DNA。
二、DNA的鉴定2.1 DNA鉴定的意义DNA鉴定是指通过对个体或物品中的DNA进行检测和比对，确定其身份或来源等信息。
在犯罪侦查、亲子关系确认、遗传疾病诊断等方面有着广泛应用。
2.2 DNA鉴定方法常见的DNA鉴定方法有以下几种：（1）PCR扩增：通过PCR技术扩增目标DNA片段，以便进行后续的分析和比对。
（2）电泳分离：将PCR扩增产物进行电泳分离，根据DNA片段大小的不同，形成不同的条带。
（3）序列比对：对比不同个体或物品中的DNA序列，确定其相似性和差异性。
三、DNA粗提取与鉴定注意事项3.1 样品处理样品处理是影响DNA粗提取和鉴定结果的重要因素。
在采集、保存、运输等方面需要注意避免污染、降解等情况发生。
3.2 实验操作实验操作需要严格控制温度、时间、试剂浓度等因素，以免影响DNA 粗提取和鉴定结果。
同时需要遵守实验室安全规范，保障个人安全和实验室环境卫生。
3.3 数据解读在进行DNA鉴定时，需要结合样品来源、亲缘关系等信息进行综合判断。
同时需要考虑概率统计学原理，在数据解读时避免过度解读或误判。
DNA粗提取和鉴定实验
DNA的粗提取与鉴定实验一、实验原理①DNA主要存在于细胞核②DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的.当NaCl的物质的量浓度为 mol／L时,DNA的溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出.③DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA.⑷DNA遇二苯胺沸水浴会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂.二、实验材料和用具鸡血细胞液5~10ml；体积分数为95%的冷酒精溶液实验前置于冰箱内冷却24h；蒸馏水；质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的氯化纳溶液新教材不要求0、015的浓度了,都是用的2mol/L；二苯胺试剂；铁架台；镊子；水浴锅；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒100ml,一个；烧杯；1000ml,一个,50ml、100 ml 、500ml 各二个；试管20ml,二个；漏斗；试管夹；纱布.三、课前准备鸡血细胞液取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液抗凝剂100ml,置于500ml烧杯中.注入新鲜的鸡血约180ml,同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血.将烧杯中的血液置于冰箱内,精置一天,使血细胞自行沉淀.也可以将血液倒入离心管内,用1000r/min转每分的离心机离心2min,血细胞沉淀于离心管底部.实验时.用吸管除去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液.四、方法步骤①提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL,注入到50 mL烧杯中.向烧杯中加入蒸馏水20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌5 min,使血细胞加速破裂.然后,用放有1-2层纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000mL.取其滤液.②溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液40mL加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态 .③析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色.继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多.当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于 mol／L经验值：需加约570mL蒸馏水,且分多次加入.将溶液中的DNA与其他杂质分离,这一步骤是实验成败的关键.实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于DNA分子的附着和缠绕.④滤取含DNA的粘稠物用放有多层纱布的漏斗,过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中,含 DNA的粘稠物被留在纱布上,滤液丢弃.⑤将DNA的粘稠物再溶解取 1个 50 mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL.用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中,用玻璃棒不停地搅拌,约3分钟,使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中.⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液取1个100 mL烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液.取其滤液,DNA溶于滤液中.⑦提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中,加入等体积的、冷却的、体积分数为 95％的酒精溶液使用冷却的酒精,对DNA的凝集效果较佳,并用玻璃棒搅拌,溶液中会出现含杂质较少的白色丝状物.用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分.这种丝状物的主要成分就是DNA.⑧ DNA的鉴定取两支20 mL的试管,各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.然后,向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂.混合均匀后,将试管置于沸水中加热 5 min,待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化.五、讨论①两次使用蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第一步第二次：使 DNA黏稠物析出第三步②三次过滤第一次： DNA存在于滤液里第一步第二次： DNA被留在纱布上第四步第三次： DNA存在于滤液里第六步过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关,第二次要用其滤出的黏稠物有关,所以要使用多层纱布,第一次和第三次均要用其滤液,使用的纱布为1－2层③两次析出第一次：用 mol／L 的NaCI溶液含杂质多第三步第二次：用冷却的95％的酒精第七步④六次搅拌：第一、二、三、五、七、八步其中除第八步外,其余均要朝一个方向搅拌,在第三、五步搅动还要轻缓,玻璃棒不要直插烧杯底部,这样才能保证得到完整的DNA为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质答：用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质.因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质在NaCl溶液浓度低于 mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在 mol/L 时,DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大.。