血浆凝固酶试验详解
血浆凝固酶原理
血浆凝固酶原理嘿，朋友们！今天咱来聊聊血浆凝固酶这玩意儿。
你说血浆凝固酶像不像一个神奇的小魔法师呀？它在细菌的世界里可有着大作用呢！就好比咱生活中，有时候一些小小的举动就能引发大大的变化。
想象一下，细菌就像是一群调皮的小孩子，在我们身体这个大游乐场里玩耍。
而血浆凝固酶呢，就是它们手里的秘密武器。
它能让血浆变得像果冻一样凝固起来，厉害吧！这可不得了，这一凝固，就好像给细菌们搭建了一个小小的城堡，让它们有了安身立命的地方。
咱平常要是哪里受伤了，有细菌趁机跑进去，这血浆凝固酶可能就开始发挥作用啦。
它能快速地让血液凝固，把细菌围起来，免得它们到处乱跑、捣乱。
这是不是很神奇呀？你说这血浆凝固酶咋这么聪明呢？它知道啥时候该出手，啥时候该安静地待着。
就像咱人一样，知道在合适的场合做合适的事。
而且哦，不同的细菌拥有的血浆凝固酶还不太一样呢！有的特别厉害，能一下子就把血浆凝固得牢牢的；有的可能就稍微逊色一点啦。
这就好像不同的人有不同的本领一样，各有各的特色。
这血浆凝固酶虽然厉害，但咱也不能小瞧了其他的因素呀。
就像一场比赛，光靠一个队员可不行，得大家齐心协力才行。
在我们身体里，还有好多其他的免疫系统在努力工作呢，它们一起守护着我们的健康。
要是这血浆凝固酶出了问题，那可就麻烦啦！就好像一个团队里的核心人物掉链子，那整个团队的运作可能都会受影响呢。
所以呀，我们得好好了解它，知道它的脾气和习性。
你想想，如果我们能掌握血浆凝固酶的规律，那是不是就能更好地应对细菌的入侵啦？说不定还能研究出更好的办法来对付那些坏细菌呢！总之呢，血浆凝固酶这个小家伙，虽然不起眼，但作用可大着呢！我们可不能小瞧它呀！它就像隐藏在细菌世界里的神秘力量，等着我们去探索和发现呢！大家可都要记住它哦！。
项目9：常见病原菌的病原学检查
项目9：常见病原菌的病原学检查【目的要求】掌握常见病原菌的检查方法和结果观察。
【实验内容】一、 常见化脓性球菌的检查（一）化脓性球菌的病原生物学检测程序在临床上，一般化脓性感染的诊断并不困难，有时为了确定病原菌种，选择用药，特别是疑似败血症患者须与其它发热性疾病进行鉴别诊断时，方进行必要的微生物学检查。
本实验通过脓汁病原菌检查这一系统实验过程，初步掌握化脓性球菌的检查程序和鉴定方法。
脓汁中病原球菌的检查程序 脓 汁↓ 肉眼观察直接涂片 分离培养（血琼脂平板）↓革兰氏染色 菌落观察 革兰氏染色大小 溶血现象 - +肾形 成 对 排列【材料】①脓汁(取自可疑化脓性球菌感染病人)或血液(取自可疑为败血症病人)不溶血草绿色溶血环透明溶血环矛头状成对排列球形链状排列球形葡萄状排列菊糖发酵试验胆汁溶菌试验甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验②血琼脂平板③革兰氏染色液④家兔血清⑤去氧胆酸钠溶液(10％)⑥生理盐水⑦载物玻片，小试管等。
【方法】1．标本采集①一般用无菌棉棒(拭子)采取脓汁及病灶分泌物。
②取材如遇深部脓肿时，用碘酒及酒精棉球消毒患部皮肤，然后再以无菌棉拭子采取溃疡深处的分泌物。
③采取脓肿处的脓汁，如怀疑有厌氧菌，最好用注射器抽取脓汁立即送检。
④标本采取后应及时检查，如不能立即检验应置冰箱中保存，以防杂菌污染。
⑤对可疑为败血症的病人，按无菌操作采血5ml，立即注入葡萄糖肉汤培养基内增菌，12～18h后再作分离培养。
2．肉眼观察观察脓汁性状、色调、有无恶臭气味等，如脓汁带绿色时，可能有绿脓杆菌的感染，如有恶臭气味可能有厌氧菌感染。
3．染色镜检将脓汁直接涂片用革兰氏染色观察细菌形态、排列及染色性，在涂片上通常可见到革兰氏阳性暗紫色的球菌散在于蔷薇色的白细胞之间或其中。
4．分离培养将脓汁(或血液增菌材料)划线接种于血琼脂平板上，置37℃培养18—24h，观察划线上的菌落是一种或几种，有无溶血环，从菌落中选最适于钓菌的代表菌落观察，并用接种环取菌落的一部分作涂片，革兰氏染色，镜检，观察形态及染色性，结合菌落特点及涂片检查，即可初步识别。
血浆凝固酶的原理
血浆凝固酶的原理在人体内，血液凝固是一个复杂的生物化学过程。
当发生血管损伤时，机体便会启动一系列的反应来停止出血并修复受损的血管。
其中，血浆凝固酶是至关重要的一环。
血浆凝固过程分为内源性和外源性两个途径，它们最终都会汇合于共同途径。
在这个过程中，血浆凝固酶发挥着重要的作用。
血浆凝固酶的形成与成熟是一个复杂的步骤。
首先，损伤组织释放血小板激活因子（platelet factor III，PF3）。
PF3与血浆蛋白因子Ⅶ（factor VII，FVII）结合，形成复合物。
接下来，这个复合物结合在血管壁和损伤组织的细胞膜上，同时与活化的血小板接触。
接触到细胞膜和活化血小板后，FVII经过酶切，变为活性酶蛋白酶Ⅶa（factor VIIa，FVIIa）。
FVIIa与浆膜因子（tissue factor，TF）结合，形成复合物TF-FVIIa。
这个复合物是血浆凝固酶的主要形式，也是凝血级联反应的起点。
TF-FVIIa复合物激活血浆中的因子Ⅹ（factor X，FX），FX经过酶切，转变为活性酶因子Ⅹa（factor Xa，FXa）。
这个反应需要辅助因子Ⅴ（factor V，FV），FV被另一种酶酶切后，变为活性酶酶因子Ⅴa （factor Va，FVa）。
FVa与FXa结合，形成新的复合物FXa-FVa。
FXa-FVa复合物进一步催化其他凝血酶前体，例如凝血因子Ⅱ（prothrombin，FII），将FII转变为血浆凝固酶（thrombin）。
血浆凝固酶是血液凝固过程中最重要的酶之一血浆凝固酶具有多重生物学功能。
首先，它能够直接作用于纤维蛋白原（fibrinogen），将其转化为纤维蛋白聚合物（fibrin）。
纤维蛋白聚合物是血栓的主要成分，能够牢固地连接红细胞、血小板和血浆中其他凝血蛋白，形成血栓。
其次，血浆凝固酶能够间接催化纤维蛋白酶原（plasminogen）的激活。
酶原系统通过调节纤维蛋白溶解酶（plasmin）的活化而参与凝血的限制与平衡。
金黄色葡萄球菌检测实验报告
金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。
本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。
二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。
2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。
3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。
2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。
临床样本：直接进行涂片或适当稀释。
2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。
3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。
4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。
观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。
5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。
7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。
五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。
在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。
金黄色葡萄球菌检验步骤
金黄色葡萄球菌检验步骤一.设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃ 。
2 冰箱：2 ℃ ~5 ℃ 。
3 恒温水浴箱：37 ℃±1 ℃ 。
4 天平：感量0.19 。
5 均质器。
6 振荡器。
7 无菌吸管：1 mL （具0.01mL 刻度）、10mL （具0.lmL 刻度）或微量移液器及吸头。
8 无菌锥形瓶：容量100 mL 、500 mL 。
9 无菌培养皿：直径90 mm 。
10 注射器：0.5 mL 。
11 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
二、培养基和试剂1 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤2、7.5%氯化钠肉汤3 血琼脂平板4 Baird - Parker 琼脂平板5 脑心浸出液（BHI）肉汤6 兔血浆7 磷酸盐缓冲液8 营养琼脂斜面9 革兰氏染色液10 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中，121 ℃ 高压灭菌15 min 。
11 1 mol/L 氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠（NaOH ）溶于1 000 mL 蒸馏水中。
12 1 mol/L 盐酸（HCL ) : 37 ％浓盐酸90 mL ，加蒸馏水到1 000 mL 。
操作步骤5.1 样品的稀释5.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品至盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10 000r/min 均质1 min~2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min ~2 min ，制成1 : 10 的样品匀液。
5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品至盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 : 10 的样品匀液。
5.2 增菌和分离培养5.2.1 增菌培养：吸取5 mL 上述样品匀液，接种于50 mL 7.5 ％氯化钠肉汤或10 ％氯化钠胰酪胨大豆肉汤培养基内，36 ℃±1 ℃培养18h ~24h 。
血浆凝固酶原理和意义
血浆凝固酶原理和意义
血浆凝固酶原理是指在血液凝固过程中，血浆中的凝血酶原被酶促反应转化为凝血酶的过程。
在正常情况下，凝血酶原存在于血浆中，不具有凝血活性。
当血管受损时，外源性或内源性凝血系统被激活。
外源性激活途径是指通过血管壁的损伤，使得组织因子释放到血液中，与凝血因子VII结合，形成活化的复合物。
而内源性激活途径是指通过血液内部的因子激活。
在这两个途径中，既有凝血因子，又有凝血酶原。
凝血因子和凝血酶原之间形成了一条凝血酶原激活酶级联反应的路径。
具体来说，血浆中的凝血酶原与凝血因子Xa和因子Va结合，形成复合物凝血酶原复合物。
这个复合物进一步激活更多的凝血酶原，使之转化为凝血酶。
血浆凝固酶原的意义十分重要。
它是血液凝固系统的核心组分之一，参与了止血的生理过程。
在正常情况下，血浆凝固酶原的转化和凝血酶的形成是被精细调控的。
一旦该过程失控，就会导致凝血异常，如血栓形成或出血等疾病的发生。
血浆凝固酶原的变化也对某些疾病的诊断和治疗起到了重要的作用。
例如，血浆凝固酶原水平的异常增高可能与肝功能受损相关；而凝血酶原水平的降低可能与出血性疾病或凝血因子的缺乏有关。
因此，了解血浆凝固酶原的原理和意义对于深入理解血液凝固过程以及相关疾病的发生机制具有重要意义。
血液凝血功能分析报告
血液凝血功能分析报告一、介绍血液凝血功能分析报告是通过检测血液凝固机制的各项指标，以评估患者是否存在凝血异常或凝血功能障碍。
该报告通常被用于诊断和监测血液凝血系统疾病，帮助医生制定相应治疗方案。
以下是对血液凝血功能分析报告的详细解读。
二、指标解读1. 凝血酶原时间(PT)血浆凝固酶的形成所需时间，通常以秒为单位测量。
正常的凝血时间范围在11-14秒之间。
PT延长可能提示凝血因子缺陷或维生素K缺乏。
2. 活化部分凝血活酶时间(APTT)血浆中血液凝固酶形成的时间，通常以秒为单位测量。
正常的活化部分凝血活酶时间范围在25-40秒之间。
APTT延长可能表示凝血因子缺陷、血友病或者遗传性或获得性血液疾病。
3. 血小板计数血液中的血小板数量，正常范围在150-450×10^9/L之间。
血小板计数过低可能导致凝血功能异常或出血倾向。
4. 凝血酶时间(TT)血浆中血液凝固完全形成所需时间，通常以秒为单位测量。
正常的凝血酶时间范围在15-20秒之间。
TT延长可能表明存在凝血因子异常。
5. D-二聚体含量体内产生血栓后，纤维蛋白进行降解所产生的D-二聚体水平。
高水平的D-二聚体可能提示存在血栓形成或纤维蛋白溶解异常。
6. 凝血酶原活动度(PTA)血浆中凝血酶原的活性百分比。
正常的凝血酶原活动度在70-120%之间。
PTA低于正常范围可能表明凝血因子活性下降。
7. 凝血酶时间比值(PT比值)在PTA检测中血浆样品与标准血浆的比率。
正常的PT比值为0.8-1.2。
PT比值超过1.2可能表示凝血酶原活动度下降。
三、结论根据以上血液凝血功能分析报告的结果显示，患者可能存在凝血功能异常及凝血因子缺陷。
建议进一步检查以确诊疾病类型，并根据具体情况制定个体化治疗方案。
请密切关注患者的病情变化，定期复查血液凝血功能指标。
冻干兔血浆
北京华越洋生物提供
冻干兔血浆
【包装规格】0.5ml×10支
【预期用途】
用于金黄色葡萄球菌的血浆凝固酶试验（GB、SN标准）。
【检验原理】
细菌生成血浆凝固酶后释放于血浆中，称为游离凝固酶，不直接作用到血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂（即凝固酶致活因子）激活后变成耐热的凝固酶样物质，此物质纤维蛋白原变为固态纤维蛋白，血浆因而凝固。
致病性葡萄球菌能产生凝固酶。
【主要组成成份】
冻干兔血浆、柠檬酸钠。
【储存条件及有效期】
1.2℃-25℃避光保存，环境湿度≤80%。
2.在储存条件下有效期为一年。
【样本要求】
样本的收集、储存、处理、运输应严格执行无菌操作，避免污染，
【检验方法】
方法1：按箭头方向掀开并撕下铝箔盖，每支西林瓶中加入0.5ml灭菌生理盐水轻微摇晃至完全溶解，然后加入0.3ml（SN)）或0.2ml-0.3ml（GB）肉汤培养物，充分混合后，置36℃±1℃培养。
方法2：按箭头方向掀开并撕下铝箔盖，每支西林瓶中加入0.8ml肉汤培养物轻微摇晃至完全溶解，置36℃±1℃培养。
【参考值（参考范围）】
本品的空白对照应无菌生长。
【检验结果的解释】
每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固（即倾斜或倒置时，呈现凝块）
北京华越洋生物提供 或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
微生物实验5
药物敏感性试验—纸片扩散法 将含有定量抗菌素的纸片，平贴在已经接种了试验细菌 的平板上。纸片中的抗菌素吸收培养基的水分，溶解后 不断向周围扩散，形成递减的梯度浓度。敏感细菌在纸 片周围的生长受到抑制，而形成没有细菌生长的抑菌圈 依抑菌圈的有无、大小来判断敏感性。 敏感：试验细菌所引起的感染，可以用常用剂量的某 种抗菌药物治愈。 耐药：试验细菌引起的感染，不能用该种抗菌药物治 愈。 ☆试验菌用量以对照琼脂平板表面生长的菌落呈密集或半 密集为宜。
载玻片1张
兔血浆各15ul
左侧血浆与黄色菌苔混合
右侧血浆与白色菌苔混合
半固体接种法P 半固体接种法P11
具有鞭毛能够真正运动的细菌，在半固体培基中, 能冲破低浓度琼脂的阻力，自接种部位向周围移 动扩散生长，培养基呈扩散云雾状混浊状态。 无鞭毛不能运动的细菌，只能沿着穿刺线生长 繁殖，穿刺线边缘清晰，周围培养基清澈透明。 方法：接种针斜面取菌，从半固体培养基中心，垂直刺 入，到达培养基底部4/5处，再循原来的路线，退出接 种针。 甲，乙→紫黑 。丙，丁→粉红。
甲→黄色菌液 黄色菌液 乙→白色菌液 白色菌液 丙→紫黑菌液 紫黑菌液 丁→粉红菌液 粉红菌液 6ul+6ul 灭菌 取样
纸片扩散法：菌液→ 密集涂布平板 → 标记:青、 链、庆 →贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片→ 按压→ 倒置培养18～24小时→ 观察结果。
青
青
链
庆
链
庆ห้องสมุดไป่ตู้
标记
贴抗菌素纸片
血浆凝固酶试验P17 血浆凝固酶试验
糖发酵试验
不同细菌具有不同的糖分解酶，分解各种糖的代谢产物 也各不相同，有的产酸，有的产酸又产气。 糖发酵管：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖。 指示剂：溴甲酚紫，PH≥6.8为紫色，≤5.2为黄色。 原理：多糖→单糖→丙酮酸、酸性产物(产气)→pH↓ →指示剂呈酸性变色。 结果:变色无气泡“+” 、变色有气泡“⊕”、培养 基不变色“-”。 应用：观察细菌对糖的分解情况，常用于肠道杆菌鉴定。
血浆凝固酶标准操作程序
SOP_15-20 血浆凝固酶标准操作程序【目的】鉴定葡萄球菌【适用范围】葡萄球菌【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【试剂】人或家兔EDTA抗凝血浆【方法】葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。
试管法凝固酶试验称为游离的凝固酶，玻片法结合的凝固酶。
1.玻片法：取1滴蒸馏水于洁净的玻片上，用接种环挑取待检菌一环置于蒸馏水中，制成浓的菌悬液，无自凝现象。
然后加一环家兔（或人）血浆混合，10s内观察结果，出现明显细菌凝块为阳性，否则为阴性。
如超过 10s可出现假阳性，有10％一15％金黄色葡萄球菌呈假阴性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。
2 .试管法：用生理盐水将血浆4倍稀释，取0.5ml。
然后挑取3～5个菌落于稀释血浆中，成浓菌悬液。
置37℃水浴，3～4h后读取结果，凝固者为阳性。
若阴性，继续观察到24h，不凝固者为阴性。
试验应同时作阳性、阴性对照。
试管法葡萄球菌凝固酶试验阳性者，应见到明显的纤维蛋白凝胶块，出现羊毛状或纤维状沉淀物并非真正凝固，应判为阴性。
中间型葡萄球菌、猪葡萄球菌需要较长时间孵育，才可出现阳性。
玻片法注意点：10s内观察结果；必须制备浓厚的均匀菌悬液；用EDTA抗凝的兔血浆为最好；加血浆后不要再混搅，以免细菌凝块分散变小；生长在高盐培养基上的菌落可出现自凝或假阳性。
试管法注意点：某些金黄色葡萄球菌产生溶纤维蛋白酶，溶解纤维蛋白凝块；所用血浆缺乏纤维蛋白原；试验菌株不纯。
【意义】金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌血浆凝固酶阳性，猪葡萄球菌需要较长时间孵育，才可出现阳性。
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并标上预取菌的菌名 取兔血浆：用灭菌接种环分别取兔血浆3-4环于两 个标记区域中 取菌混悬：用灭菌接种环取少量表皮葡萄球菌与兔 血浆混匀，以同样的方法取金黄色葡萄球菌与另一 侧兔血浆混匀 结果观察
【结果判读】
ห้องสมุดไป่ตู้
如出现颗粒状凝集现象即为血浆凝固酶实验阳性。 如不立即发生凝集，可轻摇玻片加速反应，若仍 无凝集则为阴性。
【注意事项】
实验前可用生理盐水检测两种细菌有无自凝
现象，以防假阳性结果的出现
取兔血浆和两种细菌时都要将接种环灼烧灭
菌并待其冷却
实验结果应即使判读，放置时间过久会导致
假阳性的出现
激活，形成葡萄球菌凝血酶
使纤维蛋白原变为纤维蛋
维蛋白原变为纤维蛋白
引起细菌凝集
白，导致血浆凝固
采用试管法检测
采用玻片法检测
致病菌 纤维蛋白原受体 （结合凝固酶） 纤维蛋白原
【材料】
菌种：金黄色葡萄球菌（SA）
表皮葡萄球菌（SE）
兔血浆、生理盐水（备用） 玻片
【方法】
标记玻片：在玻片背面用标记笔划两个圆形区域，
四、血浆凝固酶试验
【目的原理】
血浆凝固酶 定义：是指能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人
或兔的血浆发生凝固的酶类物质。致病性葡萄球
菌大多能产生凝固酶，非致病葡萄球菌不产生此
酶。
作用：是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。
分类
游离型凝固酶
分泌至细菌体外 被血浆中凝固酶反应因子
结合型凝固酶
在菌体表面 与纤维蛋白原结合，使纤