【革兰染色和血浆凝固酶实验】血浆凝固酶可以
金黄色葡萄球菌的检查
金黄色葡萄球菌的检查同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。
金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。
本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。
看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。
所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。
金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样：在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。
增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。
接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。
以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。
当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。
若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。
1. 革兰染色镜检革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。
排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。
2. 血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。
检查时，轻轻将试管倾斜（动作勿大），仔细观察，阴性对照管血浆应流动自如，阳性对照管血浆应凝固状，若试验管液血浆凝固为血浆凝固酶试验阳性；否则为阴性。
本科微生物学
概述第十二章细菌的形态与结构一、单项选择题1．属于非细胞型微生物的是（）A. 真菌B. 细菌C. 病毒D. 支原体E. 立克次体2. 有关原核细胞型微生物错误的是( )A. 无核质B.无核膜、核仁C.缺乏细胞器D.具有胞浆膜E.可具备细胞壁3．用来测量细菌大小的单位是（）A. cmB. mmC. μmD. nmE. pm4．不属于细菌基本结构的（）A. 细胞壁B. 细胞膜C. 中介体D. 核质E. 芽胞5．革兰阳性菌特有的成分是（）A. 肽聚糖B. 磷壁酸C. 脂蛋白D. 脂多糖E. 外膜6．细菌细胞壁的主要成分是（）A. 外膜B. 脂多糖C. 脂蛋白D. 磷壁酸E. 肽聚糖7．维持细菌固有形态的结构是（）A. 细胞壁B. 细胞膜C. 细胞质D. 荚膜E. 鞭毛8．溶菌酶对G+菌的作用机制是通过( )A. 破坏磷壁酸B. 损伤细胞膜C. 抑制菌体蛋白合成D. 裂解肽聚糖的聚糖骨架E. 抑制肽聚糖四肽侧链与五肽桥的联结9．青霉素、头孢菌素导致细菌死亡的机制是（）A. 破坏磷壁酸B. 损伤细胞膜C. 抑制菌体蛋白合成D. 裂解肽聚糖的聚糖骨架E. 抑制肽聚糖四肽侧链与五肽桥的联结10．有关质粒的特点，错误的是（）A. 为细菌染色体以外的遗传物质B. 是细菌生命活动中不可缺少的C. 可自我复制并传代D. 可自行丢失E. 也可从一个细菌转移至另一细菌11．细菌的特殊结构不包括（）A. 菌毛B. 鞭毛C. 芽胞D. 质粒E. 荚膜12．对外界抵抗力最强的细菌结构是（）A. 荚膜B. 芽胞C. 鞭毛D. 核糖体E. 中介体13．与细菌致病力无关的是（）A. 芽胞B. 荚膜C. 鞭毛D. 质粒E. 普通菌毛14．有关荚膜描述，错误的是（）A. 具有抗吞噬作用B. 一般在机体内形成C. 可增强细菌对热的抵抗力D. 具有免疫原性，可用于鉴别细菌E. 化学成分或为多糖，或为多肽等15．有关菌毛描述，错误的是（）A. 多见于G-菌B. 是细菌的运动器官C. 有普通菌毛和性菌毛之分D. 性菌毛能传递遗传物质E. 普通菌毛与细菌粘附有关16．缺乏下列何种结构细菌在一定条件下仍可存活（）A. 核质B. 细胞质C. 细胞膜D. 细胞壁E. 以上均可二、名词解释1、微生物2、质粒3、芽胞三、填空题1．测量细菌大小的单位是___________。
临床微生物学检验模拟题含答案
临床微生物学检验模拟题含答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.不属于细菌合成代谢产物的是(2016 年中级师)A、细菌素B、热原质C、抗毒素D、抗生素E、色素正确答案：C2.某一脓标本,涂片革兰染色镜检:革兰阳性球菌,直径1μm 左右,呈单个、成对或短链排列;血琼脂平板分离培养:菌落表面光滑湿润,圆形,边缘整齐。
黄色,凸起,直径 1~1.5mm,菌落周围有完全透明的溶血环;菌落涂片革兰染色镜检:革兰阳性球菌,呈单个、双、短链和葡萄串状排列,以葡萄串状排列为主;生化试验:触酶阳性,血浆凝固酶(试管法)阳性,发酵葡萄糖产酸,发酵甘露醇产酸,对新生霉素敏感。
应报告(2019 年中级师)(2012 初级师)(2020初级士)A、家畜葡萄球菌生长B、表皮葡萄球菌生长C、腐生葡萄球菌生长D、中间型葡萄球菌生长E、金黄色葡萄球菌生长正确答案：E3.细菌通过分泌何种酶,将菌体外的多糖分解为单糖(2014 年初级士)A、胞外酶B、氧化酶C、过氧化物酶D、凝固酶E、胞内酶正确答案：A4.下列符合革兰阴性杆菌尿路感染的诊断标准是(2014 年中级师)A、106cfu/LB、105cfu/LC、108cfu/LD、107cfu/LE、104cfu/L正确答案：B5.为了破坏沙门菌属的表面 Vi 抗原,通常采用下列方法中的(2019 年中级师)A、加热56℃,5 分钟B、0.4%甲醛处理C、煮沸D、紫外灯照射 1 小时E、冷冻 1 小时正确答案：C6.革兰染色液中稀释复红的作用是(2011 年初级士)A、脱色B、媒染C、固定D、初染E、复染正确答案：E7.链球菌与葡萄球菌可用于属间初步鉴别的试验是(2012 年中级师)A、葡萄糖发酵试验B、触酶试验C、血浆凝固酶试验D、蔗糖氧化试验E、氧化酶试验正确答案：B8.对铜绿假单胞菌生化特征的描述,错误的是(2016 年初级师)A、不产生吲哚B、氧化酶阳性C、不利用枸橼酸盐D、氧化分解葡萄糖E、还原硝酸盐正确答案：C9.以神经毒素致病的细菌是(2018 年中级师)A、伤寒沙门菌B、肉毒杆菌C、霍乱弧菌D、脑膜炎奈瑟菌E、乙型溶血性链球菌正确答案：B10.关于结核分枝杆菌的特性,下列哪项是错误的(2019 年中级师)A、营养要求高B、专性需氧C、生长快,3~12h 能形成肉眼可见菌落D、CO2 可刺激生长E、菌落呈颗粒状正确答案：C11.甲基红试验阳性结果为(2015/2017 年初级士)A、蓝色B、黄色C、绿色D、红色E、黑色正确答案：D12.下列哪种嗜血杆菌生长时,既需要 X 因子,又需要 V 因子(2015 年初级士)A、副流感嗜血杆菌B、流感嗜血杆菌C、杜克嗜血杆菌D、埃及嗜血杆菌E、嗜沫嗜血杆菌正确答案：B13.患者女,70 岁,因急性支气管炎发作入院,抗生素治疗后症状缓解,7 天后出现腹泻,粪便革兰染色镜检发现大量革兰染色阳性球菌,其中含少量的革兰阴性杆菌,最可能的致病菌是(2020 年初级师)A、消化链球菌B、痢疾杆菌C、耐药性的金黄色葡萄球菌D、粪肠球菌E、霍乱弧菌正确答案：A14.下列不属于医院感染特点的是(2011 年中级师)A、医院感染加大患者、家庭、社会经济支出B、医院感染的发生与医院的建立相依并存C、医院感染造成患者住院日的延长D、医院感染的病原学诊断必须依据柯赫原则E、医院感染自身特点随医疗技术的发展而改变正确答案：D15.下列细菌中神奈川试验阳性的是(2014 年初级士)A、产单核李斯特菌B、副溶血性弧菌C、鼠疫耶尔森菌D、奇异变形杆菌E、铜绿假单胞菌正确答案：B16.患者男,36 岁。
血浆凝固酶实验实验报告
一、实验目的了解血浆凝固酶的基本原理，掌握血浆凝固酶的检测方法，通过实验验证葡萄球菌是否产生凝固酶，为临床诊断提供依据。
二、实验原理血浆凝固酶是一种能使含有枸橼酸钠或肝素等抗凝剂的入或兔血浆发生凝固的酶类物质。
多数致病性葡萄球菌能产生凝固酶，而非致病菌一般不产生。
凝固酶有结合凝固酶和游离凝固酶两种，其中结合凝固酶直接作用于血浆纤维蛋白原，使之变成纤维蛋白，将细菌凝聚在一起；游离凝固酶则需被血浆中的致活剂激活后，才能使纤维蛋白原变成固态纤维蛋白，从而使血浆凝固。
三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌2. 试剂：生理盐水、兔新鲜血浆、氯化钠、试管、接种环、显微镜、玻片、无菌棉签等四、实验方法1. 玻片法（1）取两张洁净玻片，分别滴加生理盐水。
（2）用接种环取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌少许，分别与玻片上的生理盐水制成均匀的细菌悬液。
（3）观察有无自凝现象，若出现颗粒状凝集现象即为阳性。
2. 试管法（1）取两支试管，分别加入生理盐水和兔新鲜血浆4倍稀释。
（2）用接种环取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌少许，分别与试管中的生理盐水制成均匀的细菌悬液。
（3）观察有无凝固现象，若出现凝固即为阳性。
五、实验结果1. 玻片法：金黄色葡萄球菌出现颗粒状凝集现象，表皮葡萄球菌无凝集现象。
2. 试管法：金黄色葡萄球菌出现凝固现象，表皮葡萄球菌无凝固现象。
六、实验讨论通过本次实验，我们掌握了血浆凝固酶的检测方法，并验证了金黄色葡萄球菌具有致病性。
实验结果表明，金黄色葡萄球菌产生凝固酶，而表皮葡萄球菌不产生凝固酶。
凝固酶试验对于鉴别葡萄球菌有无致病性具有重要意义，有助于临床诊断和治疗。
七、实验结论1. 金黄色葡萄球菌具有致病性，能产生凝固酶。
2. 表皮葡萄球菌不具有致病性，不产生凝固酶。
3. 血浆凝固酶试验对于鉴别葡萄球菌有无致病性具有重要意义。
八、实验心得通过本次实验，我深刻认识到实验操作的重要性，以及理论知识与实践相结合的必要性。
金黄色葡萄球菌检测实验报告
金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。
本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。
二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。
2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。
3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。
2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。
临床样本：直接进行涂片或适当稀释。
2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。
3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。
4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。
观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。
5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。
7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。
五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。
在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。
微生物学实验设计_案例导入_皮肤化脓性病原菌的分离和鉴定
化脓性球菌的防治原则
注意个人卫生，要及时用消毒药物处理皮肤创伤（如碘酊）等 预防交叉感染，减少同带菌者或有相似症状的人有皮肤接触，
可疑体现在： （1）菌落周围出现溶血环 （2）菌落颜色为金黄色
生物化学反应鉴定： 甘露醇分解试验（+） 血浆凝固酶试验（+） 耐热核酸酶试验（+）
血清学检测SPA：协同凝集 试验（+）
引起皮肤化脓 性感染的细菌 为金黄色葡萄
球菌
致病性葡萄球菌的鉴定—血浆凝固酶实验
实验原理：许多病原性的葡萄球菌菌株在代谢过程中能产 生一种血浆凝固酶样物质，可使含有枸橼酸钠或肝素抗凝 剂的兔或人血清发生凝固，而非致病病株一般不产生此酶， 故凝固酶可作为鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。
勤洗手，勤洗澡，对于脸部的化脓，不要将其抓破或挤出，因 脸部的化脓位于危险三角区及其附近，极易引起颅内感染引起 严重后果 由于金黄色葡萄球菌易产生耐药性，治疗因根据药敏实验结果 针对性的选用窄谱抗生素，防止耐药性菌株扩散 对于反复发作的顽固性疖疮，宜采用自身菌苗进行人工自动免 疫，有一定疗效（原理是重建皮肤微生态平衡，粪菌移植也是 运用这个原理） 少熬夜，养成正常的作息习惯，多吃蔬菜水果，帮助机体恢复
皮肤化脓性病原菌的分离与鉴定
案例导入
机械学院王斌同学皮肤表面有一化脓感染病灶， 经久不愈。请设计一个方案：从脓汁中分离、鉴定 化脓性病原菌，并提出防治原则。
分析原因
皮肤表面的正常细菌群：皮肤表面常见的细菌有类白喉杆菌、凝固酶 阴性葡萄球菌、丙酸杆菌、假单孢菌、分枝杆菌、变形杆菌、大肠埃 希菌、不动杆菌、克雷伯菌等
血浆凝固酶试验详解课件
需要注意的是，正常参考值只是一个大致的范围，个体差异和生理状态也可能影响 检测结果。
结果解读
结果解读需要结合患者的临床表 现和其他检查结果进行综合分析 ，不能仅凭单一检测结果做出诊
断。
如果血浆凝固酶试验结果异常， 可能提示患者存在血栓形成、血 管炎、肿瘤等疾病，需要进一步
目的
通过血浆凝固酶试验，可以判断 患者是否感染了具有致病性的凝 固酶阳性的葡萄球菌，为临床诊 断和治疗提供依据。
试验原理
原理概述
血浆凝固酶试验基于凝固酶的作用机制，通过观察血浆是否发生凝固来判断微 生物是否产生凝固酶。
具体过程
当葡萄球菌感染人体后，会释放出凝固酶，该酶能够使血浆中的纤维蛋白原转 变为纤维蛋白，从而使血浆发生凝固。通过观察血浆是否凝固，可以判断是否 存在葡萄球菌感染。
试验后处理
清洗器材
废弃物处理
使用清水和洗涤剂清洗所有使用过的 器材，确保无残留物。
按照实验室规定处理废弃物，确保安 全无害。
记录结果并分析
根据观察到的结果，记录试验数据并 进行相关分析，得出结论。
03
血浆凝固酶试验结果解读
正常参考值
正常参考值因实验室和检测方法的不同而有所差异，通常参考值范围在20-40秒之 间。
清洁工作台
使用消毒剂清洁工作台， 确保无菌环境。
准备样本
采集适量血液样本，分离 出血浆并妥善保存。
试验步骤
混合试剂和样本
将血浆和凝固酶试剂按照 规定的比例混合，确保充 分搅拌均匀。
开始计时
在混合物中插入搅拌器， 同时启动计时器。
观察并记录结果
观察混合物在规定时间内 的变化，记录是否出现凝 固现象。
血浆凝固酶试验
血浆凝固酶试验-实验操作同学们好，今天我们来学习《微生物检验技术》中的血浆凝固酶实验。
通过本次学习，我们要知道血浆凝固酶试验的基本原理，了解其临床意义，最重要的是学会血浆凝固酶试验的操作。
首先，血浆凝固酶是指能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或兔的血浆发生凝固的酶类物质。
致病性葡萄球菌大多能产生凝固酶，非致病性葡萄球菌不产生此酶。
实验原理，致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，附着于细菌菌体表面，促使血浆中纤维蛋白原降解为纤维蛋白，从而使血浆凝固。
实验材料，血浆、菌种、灭菌器、玻片、接种环。
实验操作：取一张洁净的载波片。
用记号笔在玻片上做两个圆形标记区域，并标记待检菌菌名。
点燃酒精灯或用灭菌器对接种环进行灭菌。
用灭菌的接种环取血浆置于标记的圈内。
接种环再次灭菌。
用灭菌的接种环取金黄色葡萄球菌置于左侧标记的圈内血浆并进行混匀。
接种环灭菌。
用灭菌的接种环取白色葡萄球菌，置于右侧标记的圈内血浆并进行混匀。
接种环灭菌。
判断实验结果。
如出现颗粒状凝集现象，即为血浆凝固酶试验阳性。
若没有立即发生凝集，可轻摇玻片加速反应，仍无凝集现象发生则判断为阴性。
注意事项，试验前可用生理盐水检测两种细菌有无自凝现象，以防假阳性结果出现。
取兔血浆和两种细菌时，都要将接种环进行灭菌并待其冷却。
试验结果应立即判读，放置时间过久会造成假阳性结果出现。
临床意义，致病性葡萄球菌可引起疖、痈、蜂窝组织炎等局部化脓性感染，也可引起骨髓炎、心内膜炎、关节炎、肺炎等全身化脓性感染。
致病性葡萄球菌还可产生毒素，引发食物中毒、肠炎、烫伤样皮肤综合症等。
在临床上，部分血浆凝固酶试验阴性的葡萄球菌也可引起社区和临床的广泛感染，如女性尿路感染、人工瓣膜心内膜病变。
腹膜透析的腹膜炎、血管移植物感染、人工关节感染等。
通过此试验，我们要掌握血浆凝固酶试验是判断葡萄球菌有无致病性的一个重要鉴别试验。
好，这节课就讲到这里，同学们下节课再见。
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葡萄球菌属检验方法及临床意义
葡萄球菌属检验方法及临床意义摘要】目的：探讨葡萄球菌属检验方法及临床意义。
方法：选取2014年2月至2016年1月期间，我所检查的葡萄球菌属感染患者31例，对其检验方法及临床意义进行回顾性的分析。
结果：经过实验室检验后，所有患者的样本中均存在葡萄球菌属，葡萄球菌属的实验室检验对病因的确定具有较高的指导意义。
结论：同人类疾病相关的葡萄球菌属主要有表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及头状葡萄球菌，其会导致化脓性感染及病毒性休克等。
【关键词】葡萄球菌属；检验方法；临床意义【中图分类号】R378.1 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）08-0088-02葡萄球菌属细菌为一类革兰氏阳性球菌，因其常堆集排列呈葡萄串状而取名葡萄球菌属[1]。
葡萄球菌自然界与人体中广泛的存在，其大多数是非致病菌，少数于人与动物皮肤黏膜内存在的菌株会致使多种化脓性的感染，例如菌血症、痈、疖、脓肿等，其还可导致烫伤样的皮肤综合征与毒性的休克综合征等[2]。
葡萄球菌为较为常见的化脓性球菌，同时也是医源性感染中较为常见的细菌。
1.资料与方法1.1 一般资料选取2014年2月至2016年1月期间，我所检查的葡萄球菌属感染患者31例，其中男性患者16例，女性患者15例，患者年龄15至75岁，平均（43.9±15.1）岁。
31例患者中皮肤软组织感染11例，内脏器官感染10例，全身感染8例，尿路感染2例。
1.2 标本采集根据患者发生感染的疾病的不同，可采集其伤口分泌物、脓汁、渗出液、血液、痰液、粪便及脑脊液等[3]。
因葡萄球菌广泛的分布在人体皮肤及黏膜上，因此在采集时需注意避免患者病灶周围的正常菌群的污染。
2.检验2.1 标本的直接检查取患者的痰、渗出物、脓汁及脑脊液在进行离心后取其沉渣进行涂片，经过革兰染色后进行镜检，若在检查后发现革兰阳性菌，即可初步报告为疑为葡萄球菌[4]。
因在正常情况下，关节穿刺液、脑脊液等为无菌的，当检查时发现细菌则具有重要的价值，其他的体液标本中在检查时发现炎性细胞同样具有参考价值。
医学微生物学 实验考试
单染色1、涂片：用接种环沾取细菌培养液，在玻片上涂成直径约为1.0cm 的菌膜。
（Tip:菌量不宜过多，以免标本过厚，影响染色结果）2、干燥：最好在室温中自然干燥，也可在远离火焰上方微微烘干，但切勿靠近火焰以免烤焦标本。
（注意：如烘干，以玻片不烫手为宜。
）3、固定：火焰固定。
将标本涂片在火焰外层内来回通过3次。
固定的作用一是杀死细菌，同时可改变对染料的通透性（因为活的细菌一般不让各种染料进入细胞内）。
再者使细菌与玻片粘附牢固，三是使细菌蛋白凝固后保持其固有的外形。
4、染色：滴加结晶紫、稀释复红或碱性美兰液1～2滴，使染液盖满涂膜，1～2分钟后，用细小流水洗去多余的染液，在空气中自然干燥或用吸水纸轻轻吸干（切忌拖、拉）。
5、镜检结果：用结晶紫染色的细菌葡萄球菌、大肠杆菌呈紫色；用复红染色者均为红色；用碱性美兰染色者均为蔚蓝色。
复染革兰染色法过程：初染：结晶紫1分钟媒染：碘液1分钟脱色：95%酒精半分钟复染：稀释复红半分钟每步染色完后均需水洗。
葡萄球菌的革兰染色变形杆菌的革兰染色链球菌的革兰染色紫碘酒红一一半半球阳杆阴阳紫阴红注：脑淋卡白抗孢除外过程1、涂片：用棉签或接种环沾取细菌培养液，在玻片上涂成直径约为1.0cm 的菌膜。
2、干燥：最好在室温中自然干燥，也可在远离火焰上方微微烘干。
但切勿靠近火焰以免烤焦标本。
3、固定：火焰固定。
4、革兰染色过程：初染：结晶紫1分钟媒染：碘液1分钟脱色：95%酒精半分钟复染：稀释复红半分钟5、镜检：球阳杆阴阳紫阴红化脓性球菌分离鉴定化脓性球菌主要有葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。
触酶实验原理：产生过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和氧分子-出现气泡。
操作步骤：在洁净玻片上滴一滴生理盐水，用接种环取少许细菌培养物与生理盐水中乳磨均匀，然后加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。
结果观察：有大量气泡产生者为阳性。
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【革兰染色和血浆凝固酶实验】血浆凝固酶
可以
革兰染色和血浆凝固酶实验实验目的：
掌握革兰染色法的原理以及实验步骤；
理解血浆凝固酶试验的原理；
掌握血浆凝固酶试验的操作方法以及结果判断。
试验仪器及试剂：
仪器：载玻片、特种铅笔、试管夹、酒精灯、打火机、接种环、染色盘、显微镜试剂：龙胆紫溶液、碘溶液、脱色液、沙黄溶液、生理盐水、蒸馏水、菌种、金黄色葡萄球菌培养物、EDTA抗凝兔血浆等实验原理：
革兰染色：细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。
经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物，乙醇能使它溶解，所以染色的前二步结果是一样的，但在G+细胞中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘的复合物分子太大，不能通过细胞壁，保持着紫色。
在G-细胞中，乙醇处理不但破坏了胞壁外膜，还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜，于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来，当再用衬托的染色液复染时，显现红色。
红
色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但被紫色盖没，红色显示不出来。
血浆凝固酶试验：致病的葡萄球菌可分泌游离型凝固酶到菌体外，游离型凝固酶能被血浆中的协同因子激活为凝酶样物质，将液态的纤维蛋白原转变为固态的纤维蛋白而使血浆凝固。
实验步骤：
革兰染色：1. 标记：用特种铅笔在载玻片上画一个小圈，用来大致确定菌液滴的位置。
2. 涂片：滴加一小滴无菌生理盐水与洁净载玻片上，用打火机点燃酒精灯灼烧接种环，待接种环冷却后在培养基中取细菌，然后将菌落或菌苔轻轻涂布散开（菌液标本可直接涂在载玻片上），涂片完成消毒接种环，熄灭酒精灯。
3. 干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰（火焰上方15cm左右，可用手背试温，要求以玻片背面触及手背皮肤热而不烫为宜）
4. 固定：用高温进行固定，即用夹子夹取载玻片一端，标本面朝上，在酒精的外焰快速来回移动3~4次，共约3~4秒，放置待冷却后染色
5. 染色：（1）初染：龙胆紫溶液染色10 s 后用蒸馏水冲洗，沥去水分（2）煤染：碘液染色10 s 后用蒸馏水冲洗，沥去水分（3）脱色：脱色剂脱色10-20 s 后用蒸馏水冲洗，沥去水分（4）复染与水洗：沙黄溶液染色10 s 后用蒸馏水冲洗，自然干燥后镜检
6.显微镜观察血浆凝固酶试验：1. 取一张载玻片做好标记，一侧滴加生理盐水作
为对照，一侧滴加兔血浆 2. 接种环灼烧消毒，待冷却后用接种环挑取金黄色葡萄球菌在生理盐水侧涂匀；
接种环灼烧消毒，待接种环冷却后再跳去金黄色葡萄球菌在兔血浆侧涂匀，5-10秒内观察结果实验结果：
实验分析：
革兰染色：1、涂片时动作要轻柔，使其薄而均匀，动作过大会改变细菌的排列形式 2、固定这一步骤能杀死细菌，固定细菌结构，保证菌体能牢固地黏附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉，并且能改变菌体对染料的通透性。
3、龙胆紫是碱性染料可与细菌的DNA 结合使细菌呈紫色
4、媒染剂的作用使增强染料与细菌的亲和力更好地加强染料与细菌的结合
5、脱色是革兰染色的关键步骤，目的是帮助染料从被染色的细菌中脱色，利用细菌对染料脱色的难易程度不同而将细菌加以区分；
革兰阳性细菌不易被脱色剂脱色，而革兰阴性菌则易被脱色 6、复染的目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色，以便与未脱色菌进行比较 7、革兰阳性菌经染色后呈紫色而革兰阴性菌呈红色，另外要注意，在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果，假阳性主要是由于脱色不完全，可能是由于涂片过厚,或者是结晶紫染色过度，导致脱色不完全。
假阴性可能是因为细胞固定过度，造成细胞壁通透性的改变，而出现假阴性结果;另外,细胞培养时间太长,可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶,也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结
果。
血浆凝固酶试验：1、血浆凝固酶是鉴定致病性葡萄球菌的重要指标。
2、运用玻片法血浆凝固酶试验可检测游离型凝固酶，使用EDTA 抗凝兔血浆试验效果最佳。
3、血浆凝固酶试验结果的判断:出现明显的凝聚颗粒为阳性、无凝集颗粒为阴性。