组培实验报告

月季植物组织培养实验报告

组员：张吉顺刘健喆刘建陈雪珂

一、引言：植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

利用细胞的全能性，将月季的芽利用植物组织培养技术培养成植株。实验一共包括两个过程：脱分化与再分化，脱分化是将月季外植体上的芽进行培养，培养2---3周长出新芽时便能进行再分化了，再分化是诱导生根的过程。随着生物技术的迅猛发展，对月季的植物组培的研究也是越来越深入，为月季的快繁与新品种的选育提供了新的途径

二、实验方法：1、MS培养基的配制

MS培养基储备液的配制：

MSⅠ号液50ml/L NH4NO3（mg）

16500

KNO3

19000

KH2PO4

1700

MgSO47H2O

3700

定容体积

500ml

MSⅡ号液50ml/L MnSO4H2O

（mg）

169

ZnSO47H2O

85

H3BO3

62

定容体积

500ml

MSШ号液50ml/L CaCl2(mg)

4400

定容体积

500ml

MSIV号液50ml/L CaCl2

6H2O(mg)

125

CuSO4 5H2O

125

Na2MO4

2H2O

12.5

KI

41.5

定容体积

500ml

MS V号液50ml/L 烟酸＆

VB2(mg)

25

VB1

5

甘氨酸

100

肌醇

5000

定容体积

500ml

MSVI号液50mL/L FeSO4

7H2O(mg)

278

Na2 EDTA

373

定容体积

500ml

按照上述配方，配制1L的MS培养基，注意加完上述母液，每L 培养基中加入0.5mg的6--BA，5--8g琼脂，30g蔗糖，PH调至5.6---5.8。加热使琼脂完全溶解后，将琼脂倒入50个培养瓶中，每个培养瓶大约20ml左右，并用封口膜封口2、灭菌：用报纸包好2把镊子、1把手术刀和5个培养皿，和培养基一起放入高压灭菌锅中灭菌，121摄氏度灭菌30分钟。

3、取材：在室外取下月季枝条，冲洗干净。将月季枝条上的刺刮掉，截取带有侧芽的幼嫩枝条，放入盛有蒸馏水的烧杯中。在超净工作台上，先用70%的酒精浸没并轻摇15秒进行预消毒，再用0.1％的HgCl2消毒10分钟。之后用蒸馏水冲洗3次。枝条截取成约5cm的带有侧芽的外植体（侧芽上端占总长三分之一，下端占总长度三分之二）

4、接种：将消毒之后的外植体插入灭菌之后的培养基中，注意所有操作应在超

净工作台上操作，并在火焰旁进行。注意手不能从培养皿正上方经过，应该绕过培养皿后方。在接种过程中玻璃瓶应当倒置，玻璃瓶口靠近酒精灯，用手指夹住封口膜，直到接入外植体后，盖上封口膜用绳子绑住瓶口。接种好之后放入培养室中培养。每隔3天观察一次，并记录褐化数及被污染数。

继代培养：初代培养2--3周后，便可进行继代培养。选择生芽比较好的20个外植体进行继代培养。配制MS培养基时，加入琼脂糖5--8g, 蔗糖30g，0.2mg的NAA.，调PH至5.6---5.8。用手术刀切切新生的侧芽接种到灭菌之后的MS培养基中，封口之后放入培养室中培养。每隔3天观察一次，并记录褐化数及污染数。

6、生根培养：继代培养2---3周之后，便可进行外植体的生根培养。培制1/2的MS培养基，即每种母液的量减少一半。加完母液之后，加入5--8g琼脂粉，30g 蔗糖，0.1mgNAA。调节PH至5.6至5.8。选择8个继代培养良好的外植体进行生根培养，接种到灭菌之后的1/2MS培养基中，封口之后放入培养室中培养。每隔3天观察一次，并记录褐化数及污染数。

三、数据处理及分析：

初代培养（50瓶）

天

数瓶数第1天第4天第7天第10

天

第13

天

第16

天

第19

天

第21

天

污染数0 2 2 3 5 6 6 6

褐化数0 1 1 1 2 3 3 3

出芽数0 10 15 26 33 39 41 41

污染率=6/50=12%

褐化率=3/50=6%

出芽率=41/50=82%

继代培养（20瓶）

天

数

瓶数

第1天第4天第7天第10天第13天第16天第19天

污染数0 1 2 2 3 3 3

褐化数0 1 1 1 1 1 1

正常数20 18 17 17 16 16 16

污染率=3/20=15%

褐化率=1/20=5%

正常数=16/20=80%

生根培养（8瓶）

天数

瓶数

第1天第4天第7天第10天第13天第16天第19天

污染数0 1 1 1 1 1 1

褐化数0 0 1 1 1 1 1