茉莉酸甲酯与二氢茉莉酮酸甲酯对悬浮培养的甘草细胞生长和黄酮积累的影响
盐胁迫对黄花蒿生长及其挥发性成分的影响
盐胁迫对黄花蒿生长及其挥发性成分的影响郁霄;潘魏松;田浩;王剑文【摘要】对黄花蒿植株进行NaCl盐胁迫(2～8 g/L)处理一个月,分析植株生长、光合作用和抗氧化生理指标,考察盐胁迫对青蒿素合成及挥发性成分累积的影响.NaCl盐胁迫可抑制黄花蒿植株的生长,引起叶片氧化损伤,同时降低叶片净光合速率和蒸腾速率.但盐胁迫诱导青蒿素含量提高44.3％,且主要挥发性代谢物成分如邻苯二甲酸二异丁酯、白菖油萜、脱氧青蒿素、α-萜品醇的相对含量增加.盐胁迫是提高黄花蒿植株药用价值的栽培调节方法.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2015(027)009【总页数】6页(P1539-1543,1575)【关键词】黄花蒿;盐胁迫;生理活性;挥发性成分【作者】郁霄;潘魏松;田浩;王剑文【作者单位】苏州大学医学部药学院,苏州215123;苏州大学医学部药学院,苏州215123;苏州大学医学部药学院,苏州215123;云南省农业科学院药用植物研究所,昆明620205;苏州大学医学部药学院,苏州215123【正文语种】中文【中图分类】R915黄花蒿(Artemisia annua L.)是抗疟药物——青蒿素的资源植物。
除青蒿素外，黄花蒿还含有重要的挥发性成分，其中以单萜和倍半萜为主，主要包括樟脑、l，8-桉树脑、石竹烯、莰烯、蒎烯和大根香叶烯等化合物［1］。
这些成分具有显著的抗植物病原菌［2］、驱虫、止咳平喘、消炎抗菌等药理活性［3］。
黄花蒿挥发性物质的诱导已见报道，如UV-B 辐照处理黄花蒿幼苗3 h，诱导黄花蒿挥发油产量提高1.2倍［4］。
施加1.2 mmol/L 纳米银处理黄花蒿，可诱导单萜物质的合成，且在100 μmol/L 茉莉酸甲酯共同作用下，青蒿酮相对含量提高了2.05 倍［5］。
关于黄花蒿不同生长阶段(生长期、开花前期、开花期及开花后期)地上部分的挥发油产量及组成变化已有报道［6］。
黄花蒿生态适应性极广，是荒地先锋植物，在盐碱地也多见生长［3］。
茉莉酸甲酯对杜氏盐藻β-胡萝卜素含量的影响
绿 素含 量． 究结果表 明： ＭｅＡ 浓度（０ ５０ｇ ｌ 对 盐藻 的生 长无显 著 的影 响，高 ＭｅＡ 研 低 Ｊ ５－ ０ ｍｏ・ ） Ｌ Ｊ 浓 度（０ ０ ２ ０ ｍｏ・ 对 盐藻 的 生长有 显著 的抑制 作 用．盐 藻 ｐ胡 萝 卜 １ ０￣ ０ ０ ｇ ｌ ） Ｌ 一 素及 叶绿 素含 量 随着 ＭｅＡ 浓度的 升 高，呈现先 升 高后 降低 的趋 势 ， ０ ｍｏ・ ＭｅＡ 处理 盐 藻时其 ｐ胡萝 卜 Ｊ １０ ｐ ｌ Ｌ Ｊ 一 素含 量 最 高， ０ ｍｏ・。 ＭｅＡ 处理 盐藻 时其 叶绿素含 量 最 高．方差 分析 结果表 明 ： Ｊ 对盐 藻的 生 ２０ ｇ ｌ Ｌ Ｊ ＭｅＡ 长、 类胡萝 卜紊及 叶绿 素含 量有 极显 著影 响（＞ ．１， Ｊ Ｊ ０ ）ＭｅＡ是 诱 导盐 藻次 生代 谢 产物积 累的一 个 ｐ ０
前 人 研 究 结 果 表 明 ［９ ５１ 莉 酸 甲￣ （ ｔｙ －，茉 Ｍｅ ｌ ｈ Ｊｓ ｎｔ ａｍｏ ａｅ ，ＭｅＡ Ｉ够 在植 物 的抗 逆反 应 中诱导 植 Ｊ ）。 ￣ ‘
水湖 、 盐池中生活的单细胞绿藻， 在分类上属绿藻 门、绿藻纲 、团藻 目、盐藻科 、杜氏藻属Ｉ 杜 氏 Ｊ Ｊ ．
第一作者：朱 颖 （ ９ ２ ，女， １８ 一） 浙江桐乡人， 在读硕士研究生， 主要研究方向： 藻类生物技术． － ｉ ａｅ７ １ ６ ． ｍ Ｅｍａ：ｃｒ２ ＠１３ ｏ ｌ ｔ ’ 通讯作者：龚一富 （ ９ ３ ，男，重庆开县人， １７ 一） 博士／ 副教授， 主要研究方向：植物分子生物学 Ｅｍａ ：ｏ ｇｉ ＠１３ ｏ － ｉ ｇ ｎｙｆ ６ ． ｍ ｌ ｕ ｃ
花色苷的生物合成及其影响因素研究进展
花色苷的生物合成及其影响因素研究进展徐僡; 郑远静; 高方平; 李欲轲; 孙威【期刊名称】《《江苏农业学报》》【年(卷),期】2019(035)005【总页数】8页(P1246-1253)【关键词】花色苷; 生物合成; 内在因素; 外在因素【作者】徐僡; 郑远静; 高方平; 李欲轲; 孙威【作者单位】贵州师范大学生命科学学院植物生理与发育调控重点实验室贵州贵阳 550025; 西南喀斯特山地生物多样性保护重点实验室贵州贵阳 550025【正文语种】中文【中图分类】Q946.83类黄酮、类胡萝卜素、甜菜碱是影响植物颜色形成的三大类主要色素，前两者广泛分布在各种植物中，而甜菜碱只存在于石竹目植物中，并且不能与类黄酮化合物共存。
类黄酮是植物呈色的主要物质之一，广泛存在于高等陆生植物中，根据其化学结构的不同可分为黄酮类、黄烷酮、黄酮醇、花色苷等，其中花色苷是使植物呈现出五彩斑斓色彩的主要物质[1-2]。
花色苷除能赋予植物丰富的色彩外，还能作为渗透调节物质帮助植物适应和抵御不良环境。
例如，甜樱桃在受到干旱胁迫时，其体内矢车菊-3-O-葡萄糖苷和矢车菊-3-O-芸香糖苷2种花色苷的含量会显著增高，表明甜樱桃可通过提高花色苷含量增强其抗旱能力[3]；又如，在高盐胁迫下，甘蓝型油菜可通过调节体内花色苷含量，提高植株的耐盐性[4]。
除此之外，植物繁殖器官中的花色苷还可作为一种视觉信号吸引传粉者和种子传播者，提高植物延续后代的能力[5]。
所以花色苷不仅可以使植物呈现出丰富的颜色，还能提高植物抵抗逆境胁迫的能力，同时吸引传粉者和种子传播者提高植物育性。
很多研究结果证明，花色苷由于其较强的抗氧化能力而具有多种药理作用[6]。
对蓝莓花色苷的研究结果显示，蓝莓花色苷能够显著降低人视网膜色素上皮细胞的损伤，抑制细胞凋亡[7]；而金银花花色苷则可以有效杀伤荷瘤小鼠体内的肿瘤细胞，抑制肿瘤生长，改善荷瘤小鼠的生存状态[8]；同样Mazewski等的研究结果表明，植物花色苷提取物可降低抗凋亡蛋白的表达，进而诱导结肠癌细胞凋亡[9]。
茉莉酸和茉莉酸甲酯生物合成及其调控机制
茉莉酸和茉莉酸甲酯生物合成及其调控机制李清清;李大鹏;李德全【摘要】近年来茉莉酸类物质作为重要的信号分子引起了广泛的关注.从茉莉酸的生物合成入手,概述了茉莉酸类物质作为信号分子在植物胁迫响应及生长发育中作用的研究进展.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2010(000)001【总页数】6页(P53-57,62)【关键词】茉莉酸类;脂氧合酶途径;代谢;胁迫响应【作者】李清清;李大鹏;李德全【作者单位】山东农业大学生命科学学院,作物生物学国家重点实验室,泰安271018;山东农业大学生命科学学院,作物生物学国家重点实验室,泰安271018;山东农业大学生命科学学院,作物生物学国家重点实验室,泰安271018【正文语种】中文大量研究表明小分子物质在植物对胁迫响应以及生长发育中有重要的意义,如茉莉酸类(jasmonates,JA s),主要包括茉莉酸(jasmonic acid,JA)和茉莉酸甲酯(methyle jasmonate,MeJA)。
当植物受到生物(如昆虫、真菌激发子等)和非生物(如干旱、高盐和低温等)胁迫时,他们作为信号分子会诱导相关抗逆基因的表达,从而增强植物的抗逆性。
1962年,Demole等首次从素馨花中发现并提取出茉莉酸甲酯,经过多年的研究发现茉莉酸类物质的结构与其生物活性有着密切的联系。
如图1所示,茉莉酸及其衍生物茉莉酸甲酯都具有环戊烷酮结构。
由于 C-3和 C-7是手性碳原子,因此它们具有 4种旋光异构体,分别为(3S,7R)-JA[(+)-7-iso-JA],(3R,7S)-JA[(-)-JA],(3R,7R)-JA[(-)-7-iso-JA],(3S,7S)-JA[(+)-JA]。
其中后 2种是人工合成的,并且当 C3是 R 构型时活性最强[1,2]。
通过生物碱的构成[3],根的卷须盘绕[3],茎块的形成以及基因的表达[5]等试验得出:(1)茉莉酸的侧链戊烯基是主要的活性结构,C-11和 C-12的羟基化或降解都会影响其生物活性。
外源茉莉酸甲酯处理对采后猕猴桃果实品质和抗氧化酶活性的影响
外源茉莉酸甲酯处理对采后猕猴桃果实品质和抗氧化酶活性的影响盘柳依;赵显阳;陈明;付永琦;向妙莲;陈金印【摘要】为探究茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)对采后猕猴桃品质和抗氧化酶活性的影响,将采后‘金魁’猕猴桃果实用0.1 mmol/L MeJA进行熏蒸处理,测定在常温(25±1)℃贮藏过程中果实品质和抗氧化酶活性的变化.结果表明,与对照相比,经MeJA处理的猕猴桃果实腐烂率、失重率显著降低26.09％和20.79％,使可溶性固形物(TSS)含量维持在较高水平,延缓可滴定酸(TA)的降解速率,抑制呼吸强度的上升;同时促进总酚含量的积累与合成,降低丙二醛(M DA)含量;过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)以及超氧化物歧化酶(SOD)活性最大值依次显著高于对照34.73％、30.09％和2.70％,而对维生素C(Vc)、总糖(TSC)含量以及硬度的影响并不明显.综上所述,MeJA预处理能够有效保持‘金魁’猕猴桃果实品质,延长猕猴桃果实贮藏期.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2019(045)009【总页数】7页(P190-196)【关键词】猕猴桃;茉莉酸甲酯;贮藏品质;抗氧化酶活性【作者】盘柳依;赵显阳;陈明;付永琦;向妙莲;陈金印【作者单位】江西农业大学农学院,江西省果蔬采后处理关键技术与质量安全协同创新中心,江西省果蔬保鲜与无损检测重点实验室,江西南昌,330045;江西农业大学农学院,江西省果蔬采后处理关键技术与质量安全协同创新中心,江西省果蔬保鲜与无损检测重点实验室,江西南昌,330045;江西农业大学农学院,江西省果蔬采后处理关键技术与质量安全协同创新中心,江西省果蔬保鲜与无损检测重点实验室,江西南昌,330045;江西农业大学农学院,江西省果蔬采后处理关键技术与质量安全协同创新中心,江西省果蔬保鲜与无损检测重点实验室,江西南昌,330045;江西农业大学农学院,江西省果蔬采后处理关键技术与质量安全协同创新中心,江西省果蔬保鲜与无损检测重点实验室,江西南昌,330045;江西农业大学农学院,江西省果蔬采后处理关键技术与质量安全协同创新中心,江西省果蔬保鲜与无损检测重点实验室,江西南昌,330045;萍乡学院,江西萍乡,337055【正文语种】中文猕猴桃因风味独特，富含维生素C(VC)和膳食纤维等多种营养物质，对人体健康具有重要作用，深受广大消费者的青睐[1]。
二氢茉莉酮酸甲酯的合成工艺研究
中州大学大学二氢茉莉酮酸甲酯的合成工艺研究姓名专业指导教师摘要二氢茉莉酮酸甲酯是人工合成的类茉莉酮类化合物，本论文以正戊醛和环戊酮为基本原料，经缩合反应、异构化反应、Michael加成反应和选择性脱羧反应制备二氢茉莉酮酸甲酯，反应的总收率为50．9％。
正戊醛与环戊酮为原料，研究了不同类型催化剂对缩合反应特性的影响。
在y-A1203催化作用下，以间二甲苯为溶剂，反应温度为140。
C，反应时间为5 h，缩合产物2-亚戊基环戊酮得率为88．2％。
以2-亚戊基环戊酮为原料，经异构化得到2．戊基环戊烯酮，得率可达83．6％。
在催化剂作用下，应用正戊醛与环戊酮为基本原料，将缩合反应与异构化反应合为一步。
能直接得到同样高产率的2-戊基环戊烯酮。
控制反应温度为．5℃，无水甲醇用量为2-戊基环戊烯酮的26．1％，钠用量为2-戊基环戊烯酮质量的2．4％，反应时间1h，由2-戊基环戊烯酮合成了3(3-氧-2-戊基)环戊基丙二酸二甲酯，产率能达到83．5％。
尝试了用三甲氨磷为催化剂，无溶剂的Michael加成在200℃反应温度下，3(3-氧-2-戊基)环戊基丙二酸二甲酯先发生水解，再进行选择性脱羧，以82．6％的产率获得目标化合物二氢茉莉酮酸甲酯.关键词：环戊酮，2-戊基环戊烯酮，二氢茉莉酮酸甲酯，y-A1203，催化缩AbstractMethyl dihydrojasmonate is synthetic ketone belong to the type ofjasmine，which could be synthesized in total yield of 50．9％by a key intermediate 2-pentylidene cyclopentanone from a condensation of cyclopentanone and valeraldehyde，followed by isomerization，Michael addition and a selective decarboxylation．The characteristics of the condensation between cyclopentanone and valeraldehyde in different catalytic systems were studied．The 2-pentylidene cyclopentanone，a condensation intermediate，was obtained in a yield of 88．2％by using -A1203 as catalyst and m-xylene as solvent at 1 40℃and reaction time of 5h．Winl 2-pentylidene cyclopentanone as a precursor,2-pentyl cyclopentenone Was synthesized in 83．6％yield．It was also found that the compound could be directly formed in one pot by employing cyclopentanone and拧-valeraldehyde as raw materials in the presence of catalyst．Followed by Michael addition，83．5％yield of 3(3·OXO-2-pentyl)cyclopentyl dimethyl malonate Was obtained．using sodium alcoholate catalyst at一5"C．26．1％wt of methyl alcohol to 2-Pentyl cyclopentenone，2．4％wt of natrium to 2-Pentyl cyclopentenone，reaction time of l h．Similarly,a trimethylamino phosphorus catalyst was applied to the solvent-free Michael addition．Finally,methyl dihydrojasmonate Was synthesized through the hydrolyzation and selective decarboxylation of 3(3·OXO-2-pentyl)cyclopentyl dimethyl malonate，up to a yield of 82．6％．Keywords：cyclopentanone，2-pentyl cyclopentenone，methyl dihydrojasmonate，y-A1203，catalytic condensation,synthesis1引言1．1选题的背景及意义二氢茉莉酮酸甲酯是配制茉莉特征香气的主要化合物之一，在配制化妆品香精、食品香精及烟酒香精中，是不可缺少的。
植物次生代谢产物生产
瑞香狼毒细胞悬浮培养及黄酮积累的研究
摘要 ： 以瑞 香 狼 毒 顶 芽 、 叶片 和 茎 段 为 外植 体 ， 察不 同植 物 生 长 凋节 剂对 愈伤 组 织 诱 导 率 及 生 长 状 态 的影 响 。 由 考 疏 松 型 的 愈 伤组 织 建 立 稳 定 的瑞 香狼 毒细 胞 悬 浮 培 养 体 系 ， 用 正交 试验 法初 步 研 究 碳 源种 类 和 植 物 生 长 调 节 剂 采
的重要 途径 。利 用植 物细胞悬 浮培养 生产 黄酮类化 合物 的研究报 道 已有 不少 。其 中 ， 袁宗 泉等口 报道 了细胞生 长期 、 丙氨酸 和放线 菌 一Ｄ对银 杏 （ ｉｋ ｏ ｉ ｂ ） 苯 Ｇ ｎ ｇ ｂｌ ａ 黄酮产 量的影 响 ； 德修等 口 ｊ ｏ 赵 报道 了不 同理 化因子对 水母
进行 了阐述 ； 罗建平 等 报道 了茉莉 酸 甲酯 、 杨酸 和一 氧 化氮 诱 导及 稀 土元 素对 怀 槐 （ ａ ｋａａ ｌｒｎ ｉ） 。 水 Ｍａ ｃｉ ｌｕｅ ｓ ￣ ｓ
悬 浮培养 细胞异黄 酮合成 的影 响及细胞 结构变 化 ； 崔兴 华等口 。报道 了黑暗培 养条 件下 甘薯 （ｐ ｍｏａｂ ｔｔｓ 悬 Ｉ ｏ ｅ ａａａ ） 浮细 胞黄酮类 物质 的积 累情 况 。尽 管上述 这些 报道为 其他植 物 细胞 培养 及 黄酮积 累 的研 究提 供参 考 ， 是每 种 但 植物 基 因型 及生长条 件等存 在差 异 ， 因而没有标 准 的培 养 条件来 适 合昕有 植 物 的细胞 培 养及 产 物积 累 。 由于 目
对 细 胞 生 长 和黄 酮 积 累 的 影 响 。结 果 表 明 ， 附加 了 ２ ４Ｄ １ ０ｍｇ ｌ ＮＡ ． ／ 在 ，一 ． ／ ＋ Ａ ０ １ｍｇ Ｌ的 ＭＳ培 养 基 上诱 导茎 段
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
茉莉酸甲酯与二氢茉莉酮酸甲酯对悬浮培养的甘草细胞生长和黄酮积累的影响杨英, 郑辉, 李赟, 季家兴, 余龙江*华中科技大学生命科学与技术学院, 武汉430074提要: 建立了稳定的甘草细胞悬浮培养体系, 在一个培养周期内, 细胞的生长曲线呈“S”型, 培养21 d 的干重、鲜重和黄酮产量都达到最高值。
甘草细胞悬浮培养体系中分别添加100 µmol·L -1二氢茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯时, 虽然对细胞生长有一定程度的抑制, 但细胞中甘草黄酮产量仍有提高。
添加二氢茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯的最适时间分别为细胞培养后的第5天和第10天。
关键词: 胀果甘草悬浮细胞; 甘草黄酮; 茉莉酸甲酯; 二氢茉莉酮酸甲酯Effects of Methyl Jasmonate and Methyl Dihydrojasmonate on the Cell Growth and Flavonoids Accumulation in Cell Suspension Culture of Glycyrrhiza inflata Bat.YANG Ying, ZHENG Hui, LI Yun, JI Jia-Xing, YU Long-Jiang *College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, ChinaAbstract: The effects of methyl jasmonate and methyl dihydrojasmonate on cell growth and flavonoids produc-tion in suspension cultures of Glycyrrhiza inflata Batal were investigated. Biomass accumulation and flavonoids production both exhibited “S” curve in one culture cycle, with the greatest values obtained on day 21. In addition, although the cell growth was restrained to some degree by the methyl dihydrojasmonate and methyl jasmonate treatment with the concentration of 100 µmol·L -1, the flavonoids accumulation was increased. Moreover,the optimum time for the addition of methyl dihydrojasmonate and methyl jasmonate was the 5th day and the 10th day during the cell culture, respectively.Key words: cell suspension cultures of Glycyrrhiza inflata ; flavonoids production; methyl jasmonate; methyl dihydrojasmonate收稿2008-06-16修定2008-07-22资助新疆建设兵团新疆昆仑神农股份有限公司提供经费。
*通讯作者(E -m a i l : Y u l j @h u s t.e d u.c n ; T e l : 027-********)。
采用细胞培养大规模生产甘草的有效成分已有报道, 如梁玉玲等(2000)用胀果甘草(Glycyrrhiza inflata )愈伤组织培养生产甘草酸; 杨世海等(2005)的乌拉尔甘草(G. uralensis )愈伤组织培养条件的探索以及杜旻等(2001)乌拉尔甘草毛状根培养体系的建立等。
但有关采用甘草细胞培养生产总黄酮的研究还未见有报道。
茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MJ)是一种小的信号分子, 具有广泛的生理作用(刘燕等2007), 它可以作为细胞信使, 参与到植物细胞的代谢过程中, 激活特定的防御相关基因表达, 引起细胞抗逆反应产物表达(宾金华和潘瑞炽1999)。
张进杰和徐茂军(2006)研究NO 和茉莉酸甲酯影响黄芩悬浮细胞生长及黄芩苷合成的结果表明, MJ 能增加黄芩苷的合成。
余龙江等(1999)的研究表明,茉莉酸甲酯有诱导紫杉醇生物合成的作用。
茉莉酸甲酯对植物培养物的次级代谢的诱导也引起人们的注意(于树宏和李玲2002; 徐亮胜等2005; 罗建平等2006), 但其对胀果甘草悬浮细胞合成甘草黄酮的研究尚未见报道。
二氢茉莉酮酸甲酯是MJ 的类似物, 在工业中可以作为一种香料, 但价格比MJ 便宜很多。
为此, 本文研究MJ 及其类似物二氢茉莉酮酸甲酯(methyl dihydrojasmonate)对甘草细胞生长和甘草黄酮积累的影响, 以期为甘草细胞规模化生产黄酮类化合物提供参考。
材料与方法实验材料为我们实验室保存的高产甘草黄酮的胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat.)细胞系。
其悬浮培养的培养基为MS+0.5 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 2,4-D, 3%蔗糖, 高压灭菌前将pH 调至5.8。
在光照强度为30 µmol·m-2·s-1条件下振荡培养, 光暗周期为12 h/12 h。
摇床转速为120 r·min-1, 培养温度为(25±1) ℃, 每20 d继代一次, 接种量为5%, 用250 mL三角瓶, 每瓶装80 mL培养基。
所有实验至少重复3次。
细胞培养一个周期(共20 d)后, 培养物以沙芯漏斗过滤, 用蒸馏水将残留的培养液冲洗干净, 再次抽滤, 称重, 得到细胞鲜重(FW), 然后将所得细胞置于50 ℃烘箱中烘干至恒重, 冷却后称得细胞干重(DW)。
不同浓度二氢茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯经过滤除菌后, 于细胞培养的不同时间添加到悬浮培养体系中。
细胞培养一个周期(共20 d)后, 测定细胞的干重。
测定甘草黄酮的含量时, 准确称取1 g 干燥至恒重的甘草细胞粉末, 过100目筛, 加入30倍量80%乙醇溶液超声提取1 h, 提取液减压浓缩至5 mL后, 用5 mL乙酸乙酯萃取3次, 合并萃取液, 然后用95%乙醇提取, 以3500×g离心5 min 后, 得到的上清液即为甘草黄酮液。
甘草黄酮含量测定用比色法(张雪辉等2001), 即用甲醇稀释后, 再加0.5 mL 10% KOH溶液, 充分摇匀后显色5 min,用甲醇定容至10 mL, 摇匀后用Unico紫外可见分光光度计[Unico wfz UV-2100, 尤尼柯(上海)仪器有限公司]测定其波长410 nm处的吸收值, 以芦丁为标准样品。
结果与讨论1悬浮培养的甘草细胞的生长和黄酮的积累从图1可以看出, (1)甘草细胞悬浮培养的生长周期为25 d左右, 细胞的鲜重和干重增长的时间进程非常相似, 基本上呈现“S”型。
在培养的前6 d,细胞生长缓慢, 有明显的延迟期, 6 d之后, 生物量迅速增长, 即为对数生长期, 第21天的干重和鲜重都达到最高值, 分别为16.4 g·L-1和232.4 g·L-1, 为培养初期的5倍左右。
21 d后, 进入稳定期, 干重变化不大, 鲜重开始缓慢下降。
(2)前6 d, 总黄酮积累缓慢, 之后黄酮总产量迅速增加, 第21天达到最高, 为95.7 mg·L-1。
在随后的培养过程中, 黄酮的总产量略微下降。
甘草细胞生长的最佳周期为21 d, 在整个培养周期中, 黄酮积累和细胞生长是同步的。
2不同浓度二氢茉莉酮酸甲酯和MJ对甘草细胞生长和甘草黄酮产量的影响不同浓度的MJ和二氢茉莉酮酸甲酯在第10天加入培养基中, 培养后20 d收获细胞, 从图2可以见到, (1)在一定浓度二氢茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯的范围内, 随着两者浓度的增加, 甘草细胞的生物量下降, MJ抑制细胞生长比二氢茉莉酮酸甲酯强。
二氢茉莉酮酸甲酯浓度小于20 µmol·L-1时, 其对甘草细胞生长影响不大, 而当二氢茉莉酮酸甲酯和MJ的浓度为120 µmol·L-1时, 细胞褐化严重, 可能是大多数细胞已经死亡。
(2)在一定浓度二氢茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯的范围内, 随着二者浓度的增加, 甘草细胞中总黄酮产量也增加, 二者浓度均为100 µmol·L-1时, 甘草细胞中总黄酮产量最大。
两者浓度继续增大时, 甘草细胞的总黄酮产量都开始下降, 浓度达到120 µmol·L-1时, 甘草细胞的总黄酮产量明显低于不加二氢茉莉酮酸甲酯和MJ的。
这说明低浓度二氢茉莉酮酸甲酯和MJ均促进甘草黄酮的积累, 而高浓度的二氢茉莉酮酸甲酯和MJ 则有抑制作用。
图1 悬浮培养的甘草细胞生长和黄酮的积累Fig.1 Time curves of cell growth and flavonoids accumula-tion in suspension culture of Glycyrrhiza inflata Bat.3 不同时间添加二氢茉莉酮酸甲酯和MJ 对甘草细胞生长和甘草黄酮产量的影响为了寻找最佳的添加时间, 于细胞培养后0、5、10、15 d 加入浓度为100 µmol·L -1的二氢茉莉酮酸甲酯和MJ, 培养后20 d 收获细胞, 测定细胞的生物量和甘草黄酮产量的结果如图3所示, 培养开始时0 d 加入100 µmol·L -1二氢茉莉酮酸甲酯和MJ 对细胞的影响最大, 细胞褐化现象严重, 甘草细胞干重分别仅为不加二氢茉莉酮酸甲酯和MJ 的28.3%和35.5%, 总黄酮产量也显著比不加二氢茉莉酮酸甲酯和MJ 的低, 但于第5天加入浓度为100µmol·L -1二氢茉莉酮酸酯对细胞的生长几乎没有影响, 为不加的98.1%, 而在第10天加入MJ 对细胞的生长影响也最小, 为不加二氢茉莉酮酸甲酯和MJ 的89.6%。
第5天添加二氢茉莉酮酸甲酯对提高黄酮产量最有效, 为不加二氢茉莉酮酸甲酯和MJ 的1.45倍, 达到108.26 mg·L -1; 第10天加入MJ 能达到最好效果, 为不加二氢茉莉酮酸甲酯和MJ 的1.47倍, 达到110.26 mg·L -1。